HPLC法测定钩藤不同部位中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱含量

目的考察钩藤药材净钩、藤枝、带钩茎枝三种不同入药部位中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量,寻找钩藤新药源。方法采用HPLC法,以钩藤中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量为指标,测定钩藤药材净钩、藤枝、带钩茎枝中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量。色谱条件:C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水=63∶37(v/v,含0.002 mmol/L三乙胺,冰乙酸调pH 7.5)为流动相;流速1.1 mL/min;检测波长:254 nm。结果藤枝中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量略高于净钩、带钩茎枝。结论钩藤的藤枝具有潜在药用开发价值。     

钩藤中去氢毛钩藤碱及毛钩藤碱在大鼠尿液中的代谢物

为了阐明钩藤的主要成分缝籽嗪甲醚(GM)、去氢毛钩藤碱(HT)及毛钩藤碱(HS)的体内动态,对大鼠经口给予上述生物碱,探讨大鼠尿液中的代谢物。结果及讨论：经口给予HT及HS(50 mg/kg)后,以HPLC对大鼠尿液进行分析,分别检出3种代谢物。根据光谱数据对代谢物的化学结构进行分     

基于UHPLC-MS/MS的钩藤生物碱在大鼠体内的组织分布研究

目的 建立超高效液相串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLCMS/MS)法测定大鼠不同组织中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱与缝籽嗪甲醚的含量,并用于钩藤的组织分布研究。方法 大鼠ig钩藤水煎液后,分别于0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、8、12 h取心、肝、脾、肺、肾、脑组织。以长春胺为内标,采用液液萃取法提取后进行样本检测。结果 建立的UHPLC-MS/MS方法中,7个生物碱在不同的组织中最低定量限范围为0.05～1.00 ng,响应与浓度的相关性R~2≥0.991。方法学考察中的专属性、基质效应、回收率、精密度与准确度以及稳定性等方法学考察均满足要求。各个组织中均为异钩藤碱含量最高,其次为去氢钩藤碱;异钩藤碱与去氢钩藤碱含量均远高于其对应的异构体钩藤碱与异去氢钩藤碱;而3个四环单萜吲哚生物碱(毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱、缝籽嗪甲醚)在各组织中均含量最低。比较不同组织中生物碱成分含量可以发现,7个生物碱均在肝脏中含量...     

HPLC-MS法测定去氢骆驼蓬碱在人肝微粒体中代谢产物

目的:测定人肝微粒体中去氢骆驼蓬碱的代谢产物。方法:以去氢骆驼蓬碱为研究对象,采用高效液相色谱-离子阱-质谱系统分析去氢骆驼蓬碱经肝微粒体代谢的代谢产物。结果:去氢骆驼蓬碱在人肝微粒体中经Ⅰ相代谢后产物主要为哈尔酚。结论:哈尔酚为首次报道的代谢产物,本研究利用液质联用技术阐明了去氢骆驼蓬碱的体内代谢产物,为进一步研究奠定了基础。     

钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用分析

目的:探讨钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用。方法:采取水煎液以及甲醇提取液的方式对钩藤中的钩藤碱及异钩藤碱进行提取,并使用高效液相色谱系统分别对其提取的含量进行测定。结果:在2.5~80μg/m L的范围内钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=76.717 0X-0.072 7(r=0.999 8),RSD8.7%;在2.0~80μg/m L的范围内异钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=87.472 9X-0.366 6(r=0.999 7),RSD7.3%。甲醇提取液的方式所提取钩藤碱和异钩藤碱的含量高于水煎液的方式,并且使用二十倍质量的甲醇量,24 h的冷侵时间以及60 min的超声时间最合适。结论:使用甲醇进行提取在用于钩藤中钩藤碱及异钩藤碱中作用优异,对其质量的控制性好,重复性高,操作方法简单,可提高预后,值得在临床上应用推广。     

RP-HPLC检测大鼠大血管中异钩藤碱的含量

目的: 建立测定大鼠大血管中异钩藤碱含量的方法。 方法: Wista大鼠灌胃钩藤水煎液后取出大血管,液氮研磨,用乙醇沉淀组织匀浆中的蛋白质,取上清液用氮气吹干,加甲醇复溶后取上清液直接进样,用高效液相色谱仪测定。RP18 Waters^TM 色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相甲醇-水（70∶30）,三乙胺调pH 8.0,流速 0.8 mL·min^-1,检测波长254 nm,异钩藤碱保留时间约为12 min,柱温 30℃。 结果: 大血管中异钩藤碱的质量浓度在0.04~20.0 mg·L^-1,大鼠峰面积之比Y与异钩藤碱的质量浓度X具有较好的线性关系,回归方程为Y=4.644 1X+0.161 2（R²=0.999 2）;平均提取回收率为99.34%,RSD<8.0%。 结论: 方法简便、稳定、易行,可以用于测定大鼠大血管中异钩藤碱的含量。     

犬静脉注射盐酸去氢骆驼蓬碱的体内药物动力学

目的：研究盐酸去氢骆驼蓬碱在犬体内的药物动力学。方法：通过股静脉采集静脉注射给药后12h内的血样，采用高效液相色谱法测定血浆中盐酸去氢骆驼蓬碱药物浓度。结果：盐酸去氢骆驼蓬碱在犬体内符合二室模型，消除半衰期为2．054h。结论：盐酸去氢骆驼蓬碱在犬体内分布快、半衰期短。     

骆驼蓬总生物碱中骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱及其代谢产物大鼠体内药代动力学研究

目的研究骆驼蓬总生物碱中骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱及其活性代谢产物骆驼蓬醇和骆驼蓬酚在大鼠体内的药代动力学特征。方法口服骆驼蓬总生物碱(140 mg/kg)及静脉注射骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱的混合溶液(均为3.3 mg/kg),采集不同时间点的血浆,采用UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬醇、骆驼蓬酚的血药浓度,并计算药代动力学参数。结果灌胃和静脉给药后,在血浆中检测到骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬醇和骆驼蓬酚,但骆驼蓬酚的血药浓度在24 h时未下降而未能计算药动参数。静注给药后,骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬醇的t1/2e分别为2.554、3.116、1.899 h,MRT分别为1.700、1.311、1.880 h,AUC0-t为373.1、2033.0、8.914 ng·h/mL。口服总生物碱后骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬醇的Cmax分别为347.6、184.5、32.7 ng/mL,Tmax分别为3.200、1.150、0.300 h,t1/2e分别为6.994、5.625、21.912 h,MRT分别为8.588、9.791、27.780 h,AUC0-t为2 755.5、1 202.8、129.8 ng·h/mL。口服总生物碱后骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的绝对生物利用度分别为63.22%和4.96%。结论口服总生物碱后骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱均可迅速吸收并迅速代谢,骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱相比较,具有更高的生物利用度,代谢产物骆驼蓬醇和骆驼蓬酚与原型骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱相比较,消除速率相对较慢。此外,静注给药后,体内去氢骆驼蓬碱的初始血药浓度明显高于骆驼蓬碱。     

天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱大鼠 在体肠吸收动力学研究

目的:研究天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠肠道的吸收动力学。方法:采用大鼠在体肠灌流试验,利用HPLC测定钩藤碱、异钩藤碱的含量KROMASIL C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相乙腈-水(含0.01 mol.L-1三乙胺,冰醋酸调pH 7.5)(45∶55),流速1 mL.min-1,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量20μL,用紫外-可见分光光度法在560nm测定酚红的含量。结果:钩藤碱吸收动力学方程为Y=-0.331 7X-0.771 8(r=0.998 5),Ka=0.331 7(h-1),t1/2=2.09(h);异钩藤碱吸收动力学方程为Y=-0.687 0X-0.150 4(r=0.985 2),Ka=0.687 0(h-1),t1/2=1.01(h)。结论:天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠在体小肠的吸收呈一级动力学过程。     

反相HPLC法测定大鼠组织中异钩藤碱含量

目的建立测定大鼠组织中异钩藤碱的方法。方法应用甲醇沉淀蛋白,然后氮吹仪吹干甲醇复溶后用反相HPLC法直接测定。以WatersTM RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,前置保护柱为WondasilC18(4.0mm×10mm,5μm),甲醇-水(70∶30)含0.03%的三乙胺为流动相,流速为0.8mL/min,检测波长为254nm。卡马西平做内标。结果异钩藤碱在大鼠组织中的含量标准曲线方程为:Y=48.558X+0.2076(n=6),r=0.9996,在0.16～16.0μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.66%,RSD=1.56%。结论该方法灵敏、快速、简便,专一性和重复性好。     

广东4种钩藤中毛钩藤碱及总碱含量的HPLC、UV测定

目的建立UV、HPLC测定广东4种钩藤植物的总碱以及毛钩藤碱含量的方法,比较不同物种、不同部位间有效成分的含量变化。方法采用HPLC梯度洗脱法测定毛钩藤碱含量,以Hypersil ODS C18(4.6 mm×200 mm,5μm)为色谱柱,甲醇-水(含0.50%三乙胺,冰乙酸调pH 5.35)为流动相,梯度洗脱,进样体积10.00μl,柱温为40.00℃,245 nm波长下检测分析;以UV测定总碱含量,检测波长为245 nm。结果毛钩藤碱在0.02～0.40μg范围内线性关系良好,r=0.999 5,平均回收率分别为96.830%,RSD=1.600%;总碱含量在不同物种、不同部位里存在差异性,其线性范围为2.00～10.00μg/ml,r=0.998 4。结论该法准确,操作简便、快速,重复性较好,精密度较高,可用于对钩藤属植物不同物种、不同部位的总碱以及有效成分毛钩藤碱含量测定。     

天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠离体小肠的吸收动力学研究

目的: 研究天钩降压胶囊中有效成分钩藤碱、异钩藤碱的大鼠离体小肠吸收动力学。 方法: 采用外翻肠囊法,用HPLC测定不同取样时间肠内液钩藤碱、异钩藤碱的含量并计算累计吸收量,以钩藤碱、异钩藤碱的累计吸收量对时间作线性回归分析,计算吸收动力学参数。 结果: 钩藤碱回归方程为Y=0.000 9X-0.008 5(r=0.908 6),K_a=9.0×10^-4 (μg·min^-1·cm^-2),t_1/2=12.8 h,异钩藤碱回归方程为Y=0.008 6X-0.178 2(r=0.909 0),K_a=8.6×10^-3(μg·min^-1·cm^-2),t_1/2=1.34 h。 结论: 天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠离体小肠的吸收为一级动力学过程。     

去氢骆驼蓬碱在兔及小鼠体内的药物动力学研究

用UV法研究去氢骆驼蓬碱(Harmine,Har)在免及小鼠体内的药动学及组织分布。兔静注(iv)或灌胃(ig)Har 20mg/kg,其药动学行为符合二室模型。ig的绝对生物利用度为82.8％。小鼠iv Har 40 mg/kg后,药物浓度分布最高的组织为脑,其次为肺、胃、脾、肾和肝,心肌最低。Har的主要消除途径是由肾脏原形排出。     

去氢毛钩藤碱抗突变型p53（R273H）结直肠癌的体外作用机制研究

目的 从抑制结直肠癌细胞HT29增殖角度研究去氢毛钩藤碱（hirsuteine,HST）对突变型p53（R273H）结直肠癌的体外抗癌作用机制。方法 采用MTT和平板克隆形成实验评价HST对HT29细胞增殖的影响;流式细胞术和丹酰尸胺（dansylcadaverine,MDC）染色法检测细胞周期分布和自噬情况;Western blotting、qRT-PCR分析细胞中p53蛋白、mRNA表达水平和p53下游效应子的表达情况;放线菌酮（actidione,CHX）-chase实验检测p53蛋白半衰期;染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation,ChIP）实验检测p53与其下游靶基因p21启动子区的结合情况。结果 HST显著抑制突变型p53（R273H）结直肠癌HT29细胞增殖,引起细胞周期阻滞,诱导杀伤性细胞自噬,缩短突变型p53（R273H）蛋白半衰期,诱导其发生MDM2介导的泛素-蛋白酶体降解,增强其与p21启动子的结合,并上调p21的mRNA表达。结论 HST能够促进HT29细胞中突变型p53（R273H）降解并恢复p53野生型转录激活功能,其体外抗结直肠癌活性可能与p53通路密切相关。     

大孔吸附树脂法富集提取废液中骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱

 目的 研究大孔树脂富集骆驼蓬中总生物碱提取后废液中骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的最佳工艺条件。方法 用HPLC测定生物碱含量,以骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的吸附量和解吸率为考察指标,对6种不同类型的树脂（LSA-8b、LSA-5b、XDA-1、LSA-21、LSA-10、D101）进行评价。考察药液pH值、吸附流速、吸附温度、洗脱流速等参数对骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的吸附和洗脱效果的影响。结果 LSA-5b对骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱具有较好的富集能力,最佳富集工艺条件：吸附pH值为9,吸附温度为30 ℃,上样流速为3.5 BV（倍柱体积）·h-1,骆驼蓬碱饱和吸附量为32.34 mg·g-1;最佳的洗脱溶剂为体积分数为70%乙醇,最佳洗脱流速为1.5 BV·h-1,洗脱用量为16.7 BV,骆驼蓬总生物碱洗脱率达86.3%。结论 在确定的工艺条件下,体积分数70%的乙醇洗脱液中骆驼蓬总生物碱的含量提高了10倍。     

响应面分析法优化吴茱萸中去氢吴茱萸碱的提取工艺

目的:通过响应面分析法对吴茱萸中去氢吴茱萸碱的提取工艺进行优化.方法:以去氢吴茱萸碱提取率为指标,采用单因素试验和响应面分析法考察药材粉碎度、液料比、乙醇体积分数、提取时间对去氢吴茱萸碱提取率的影响.结果:最佳提取工艺条件为粉碎度90目,加18.73倍量65.22％乙醇提取0.82h,去氢吴茱萸碱提取率达6.97 mg·g-1.结论:采用响应面分析法优化吴茱萸中去氢吴茱萸碱提取条件是合理可行的,为吴茱萸的质量控制提供实验依据.     

去氢骆驼蓬碱注射用乳剂中药物的相分布和体外释放研究

目的：探讨具有不同分配系数的药物在乳剂中的相分布和体外释药性能。方法：经测定去氢骆驼蓬碱（Ｈａｒ）和去氢骆驼蓬碱盐酸盐（Ｈａｒ．ＨＣＬ）具有不同的辛醇／水分配系数,分别制成Ｏ／Ｗ型注射用乳剂后,采用超速离心和微孔滤膜过滤的方法分离水相和油相,分别测定药物在乳剂的水相、油相和中间相的分布。采用反向透析技术分别测定两种乳剂的体外释药性能。结果：相分布与分配系数有关,用Ｈａｒ．制成的乳剂药物主要分布在沿     

异钩藤碱ESI-MS裂解规律及其在代谢产物鉴定中的应用

目的:分析异钩藤碱在大鼠体内的代谢途径及产物。方法:异钩藤碱按剂量37.5 mg·kg-1给药后,收集血浆,在正离子模式下,采用UPLC-Q-TOF-MS分析异钩藤碱在大鼠体内的代谢途径,流动相0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱。结果:通过与空白生物样品和对照品的提取离子色谱图、质谱碎片裂解信息比对,共鉴别出13个成分,其中1个原型,12个代谢产物,包括Ⅰ相代谢产物11个,Ⅱ相代谢产物1个。结论:异钩藤碱在大鼠体内的代谢途径为氧化、立体异构、羟基化、脱氢、水解及葡萄糖醛酸化等,丰富了吲哚类生物碱的ESI-MS裂解规律,为此类化合物的质谱解析提供参考。