HPLC法测定不同产地竹叶柴胡中柴胡皂苷a、d

目的建立HPLC法同时测定竹叶柴胡中柴胡皂苷a和d并对不同产地的品种进行比较。方法 Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水;检测波长204 nm;柱温40℃;体积流量1.0 mL/min;进样量10μL。结果竹叶柴胡中柴胡皂苷a、d的进样量分别在0.147～4.41μg(r=0.999 9)、0.091～2.73μg(r=0.999 7)范围内与峰面积呈良好线性关系,加样回收率分别为101.6%(RSD为2.9%)、100.4%(RSD为2.3%)。结论对10个产地竹叶柴胡中柴胡皂苷a的平均含有量为0.12%,柴胡皂苷d为0.07%,其中以云南禄丰产的含有量最高。     

HPLC法测定柴胡疏肝胶囊中柴胡皂苷a、d的含量

目的建立同时测定柴胡疏肝胶囊中柴胡皂苷a、d含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent C18柱(250 mm x 4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0mL/mi n,柱温为30℃,检测波长为210nm,进样量为10μL。结果柴胡皂苷a、d检测浓度分别在2.958~19.72μg/μL(r=0.999 8),3.09~20.6μg/μL(r=0.999 7)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为99.33%、99.53%,RSD分别为0.84%、0.64%(n=6)。结论本方法简便、准确、重复性好,可用于柴胡疏肝胶囊的质量控制。     

RP-HPLC法测定保康北柴胡中柴胡皂苷a、d的含量

目的采用RP-HPLC法测定保康北柴胡中柴胡皂苷a、d的含量。方法色谱柱:BonChrom C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相:乙腈-水(40∶60),流速:1.0 mL.min-1,检测波长:204 nm。结果柴胡皂苷a:Y=7.131 4X+2.011 8,r=0.999 7,线性范围:2.136~21.360μg;柴胡皂苷d:Y=9.032 3X+3.739 2,r=0.999 0,线性范围:2.656~26.560μg。平均回收率:柴胡皂苷a 99.3%(RSD=0.73%),柴胡皂苷d99.4%(RSD=0.82%)。结论本法简便快捷,结果准确,重复性好,GAP基地的柴胡皂苷含量较高。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定柴胡药材中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量

目的制定柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量测定方法。方法用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),A lltim a C18色谱柱,流动相甲醇-水(80∶20),速度0.8 m l.m in-1;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度40℃,气压3.5bar。结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在1.908~19.08μg(r=0.999 6)和1.804~18.04μg(r=0.999 2)范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.35%(RSD=1.26%)和97.64%(RSD=1.58%)。结论该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好,可作为柴胡药材的质量控制方法。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量

目的采用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法建立柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量测定方法,并测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a,d的含量。方法采用Phnom enex C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水(43∶57)为流动相,流速0.8 m l/m in,A lltech ELSD2000ES蒸发光散射检测器,漂移管温度99℃,气速3.0 L/m in,外标法定量。结果柴胡皂苷a在0.296~2.96μg范围内呈良好线性关系,回归方程为Ya=1.387 6X-2.920 2(r=0.999 8),平均回收率为97.4%,RSD为2.39%(n=6);柴胡皂苷d在0.299~2.99μg范围内呈良好线性关系,回归方程Yd=1.259 5X-1.290 6(r=0.999 6),平均回收率为98.1%,RSD为2.47%(n=6)。结论该方法简便易行,结果准确,重现性好,可作为柴胡药材质量控制的方法。     

天山花楸平喘胶囊的质量标准研究

目的建立天山花楸平喘胶囊的质量标准。方法用薄层色谱法(TLC)对胶囊内容物中金丝桃苷、苦杏仁苷进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定金丝桃苷、槲皮素和山柰素的量。结果 TLC鉴别专属性强,斑点清晰、分离度好,阴性对照无干扰;金丝桃苷、槲皮素和山柰素进样量分别在3.72⁷4.4μg(r=0.999 9)、8.0074.4μg(r=0.999 9)、8.00⁶4.00μg(r=0.999 3)、2.0064.00μg(r=0.999 3)、2.00¹6.00μg(r=0.999 3)范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系,平均回收率分别为101.2%、97.3%和93.7%,RSD分别为1.4%(n=9)、2.6%和1.9%(n=6)。结论所建标准可用于天山花楸平喘胶囊的质量控制。     

HPLC法测定复方绞股蓝袋泡茶中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量

目的：建立复方绞股蓝袋泡茶中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的测定方法。方法：采用HPLC法,色谱柱：InertSustain C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为360 nm,进样量为10μl。结果：槲皮素、山柰素、异鼠李素分别在0.071～0.570μg(r=0.999 8)、0.079～0.635μg(r=0.999 5)、0.048～0.387μg(r=0.999 7)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.33%(RSD=1.74%)、100.02%(RSD=1.46%)、100.50%(RSD=1.20%)。测定的3批复方绞股蓝袋泡茶中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量平均值分别为0.870 mg/g、0.641 mg/g、0.071 mg/g。结论：该方法测定结果准确、灵敏,可用于复方绞股蓝袋泡茶的质量控制。     

九龙化风丸中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、羌活醇、异欧前胡素和细辛脂素的HPLC梯度洗脱法测定

目的采用高效液相梯度洗脱法测定九龙化风丸(防风、羌活、细辛、大黄、桔梗等)中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、羌活醇、异欧前胡素和细辛脂素的量。方法 Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),体积流量0.9 mL/min,升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的色谱条件,流动相A为甲醇-乙腈(2∶1),流动相B为0.5%磷酸溶液,检测波长254 nm。羌活醇和异欧前胡素的色谱条件,流动相A为乙腈,流动相B为0.1%醋酸水溶液,检测波长310 nm,细辛脂素的色谱条件,流动相为乙腈-甲醇(85∶15),检测波长286 nm。结果升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在0.014 6⁰.292 0μg(r=0.999 1)、0.010 80.292 0μg(r=0.999 1)、0.010 8⁰.216 0μg(r=0.999 3)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.55%、97.73%,RSD(n=6)分别为1.46%、1.18%;羌活醇和异欧前胡素分别在0.017 40.216 0μg(r=0.999 3)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.55%、97.73%,RSD(n=6)分别为1.46%、1.18%;羌活醇和异欧前胡素分别在0.017 4⁰.348 0μg(r=0.999 3)、0.012 80.348 0μg(r=0.999 3)、0.012 8⁰.256 0μg(r=0.999 7)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.62%、98.11%,RSD(n=6)分别为1.43%、1.39%;细辛脂素在0.012 40.256 0μg(r=0.999 7)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.62%、98.11%,RSD(n=6)分别为1.43%、1.39%;细辛脂素在0.012 4⁰.248 0μg(r=0.999 2)范围内进样量与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为97.65%,RSD(n=6)为1.24%。结论该方法测定结果准确、灵敏、重复性好。     

HPLC-CAD法测定不同产地柴胡药材中柴胡皂苷

目的建立HPLC-CAD法测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷d的含有量。方法柴胡甲醇提取液的分析采用Waters C18柱(4.6 mm×15 0 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温20℃;CAD检测器。结果 3种柴胡皂苷分别在0.088~8.8μg(r=0.999 1)、0.044~4.4μg(r=0.999 0)、0.088~8.8μg(r=0.998 5)范围内线性关系良好,平均加样回收率99.04%~100.42%。结论该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于柴胡药材的质量评价。     

丁沉透膈丸中和厚朴酚、厚朴酚、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ和儿茶素的测定

目的采用HPLC法测定丁沉透膈丸(厚朴、白术、丁香、沉香、木香、香附、砂仁、草豆蔻、陈皮、麦芽、广藿香、青皮、法半夏、云曲、茯苓、甘草)中和厚朴酚、厚朴酚、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ和儿茶素的量。方法 Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm);体积流量0.7 mL/min。和厚朴酚与厚朴酚的测定以乙腈为流动相A,流动相B为2%冰醋酸溶液(V/V),检测波长294 nm;白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的测定以甲醇-乙腈(1∶1)为流动相A,流动相B为0.1%磷酸水溶液,检测波长220 nm;儿茶素的测定以甲醇-0.5%冰醋酸溶液(26∶74)为流动相,检测波长278 nm。结果和厚朴酚与厚朴酚分别在0.032 4⁰.648 0μg(r=0.999 6)、0.021 80.648 0μg(r=0.999 6)、0.021 8⁰.436 0μg(r=0.999 8)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.17%、99.29%,RSD(n=9)分别为0.84%、1.04%;白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ分别在0.006 80.436 0μg(r=0.999 8)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.17%、99.29%,RSD(n=9)分别为0.84%、1.04%;白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ分别在0.006 8⁰.136 0μg(r=0.999 4)、0.010 20.136 0μg(r=0.999 4)、0.010 2⁰.204 0μg(r=0.999 3)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.02%、99.15%,RSD(n=9)分别为0.69%、0.75%;儿茶素在0.004 60.204 0μg(r=0.999 3)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.02%、99.15%,RSD(n=9)分别为0.69%、0.75%;儿茶素在0.004 6⁰.092 0μg(r=0.999 8)进样量与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为99.30%,RSD(n=9)为0.69%。结论该测定方法结果准确、灵敏度高、重复性好。     

锌硼钼配施对北柴胡产量及柴胡皂苷a,d含量的影响

采用"3414"肥料效应试验方案,对北柴胡进行不同配比的锌硼钼配施处理,通过测定北柴胡干物质积累量和柴胡皂苷a,d含量动态变化以及北柴胡产量,考察不同浓度的锌(Zn)硼(B)钼(Mo)配施对北柴胡产量及柴胡皂苷a,d含量的影响。结果发现适宜配比的锌硼钼配施对北柴胡干物质积累及分配有积极的调节作用,处理Zn2B2Mo3不仅能促进干物质积累,还利于干物质有效地向地下部分转移;一定范围内,单施Zn,Mo肥均能够增加北柴胡根部的产量,处理Zn2B2Mo1的产量为所有处理中的最大值。回归分析结果表明:适当调整微肥配施,按Zn 48.45 g·hm-2,B 355.05 g·hm-2,Mo 86.40 g·hm-2的配方,北柴胡能够获得3 313.05 kg·hm-2的产量;处理Zn2B3Mo2的锌硼钼配比最有利于北柴胡根部柴胡皂苷a,d总量的增加,回归分析结果表明:最佳微肥施肥量为Zn 36.15 g·hm-2,B 343.05 g·hm-2,Mo 106.35 g·hm-2,此配方下,柴胡皂苷a,d总量能够达到1.23%。该研究首次发现适宜配比的锌硼钼配施能够提高北柴胡的根部产量,并能够促进柴胡皂苷a,d的积累。     

Dynamic variation of saikosaponin contents]

In this paper both the cultivated and wild Bupleurum chinense and B. scorzonerifolium from northeast China of different growing periods and ages were analyzed for the contents of saikosaponins a and d by HPLC and total saikosaponins by spectrophotometry. The results indicated that the saikosaponin content of B. chinense was higher than that of B. scorzonerifolium, and that the saikosaponin contents of the cultivated species were higher than or almost equal to those of the wild ones. It was also found that both the cultivated and wild B. chinense and B. scorzonerifolium featured the highest contents of saikosaponins in the nutrition-growing period.     

干旱胁迫对柴胡中皂苷合成关键酶基因表达及皂苷含量的影响

为了探究干旱胁迫对柴胡皂苷合成关键酶基因表达和皂苷含量的影响,以期从终产物,基因水平揭示柴胡皂苷合成对环境变化的响应。该研究以定植5个月的柴胡苗为研究材料,通过添加聚乙二醇(PEG)模拟干旱环境,利用HPLC测定不同胁迫程度下,柴胡根中皂苷a和d含量的变化,同时以β-tubulin为内参基因,采用荧光实时定量PCR(RT-q PCR)分析皂苷合成途径中4个关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR),异戊烯基焦磷酸异构酶(IPPI),法尼基焦磷酸合酶(FPS)和β-香树素合成酶(β-AS)基因的表达。通过研究发现,干旱胁迫处理显著提高了柴胡中皂苷的含量,且当PEG为10%时,柴胡皂苷a和d质量分数最高,分别达到0.648%,0.781%;同时,各基因表达量结果显示,4个关键酶基因的表达均呈现不同程度的上调,其中FPS和β-AS上调极显著(P0.01);此外,相关性分析表明,HMGR,IPPI,FPS,β-AS的表达量和皂苷含量间存在显著正相关关系。因此,干旱胁迫下,柴胡通过调节皂苷合成关键酶基因的表达,来调节次生代谢物皂苷的合成,从而对逆境做出响应。     

五灵胶囊中柴胡皂苷d在小鼠体内药代动力学研究

目的:探讨五灵胶囊中柴胡皂苷d在小鼠体内药代动力学特征.方法:小鼠ig五灵胶囊,在不同时间点采集血浆,加硫酸胺与乙腈-甲醇(4:1)混合液萃取制备样品液,经RP-HPLC测定血浆中柴胡皂苷d的浓度,SIP7软件拟合药动学参数.结果:小鼠ig给药五灵胶囊(5.5g/kg),五灵胶囊中柴胡皂苷d的药代动力学模型为一级吸收单室模型,其药代动力学参数在第1吸收峰Ka=2.341/h,Ke=0.081/h,Tmax=1.45h,Cmax=83.81ug/ml,T1/2Ke=7.76h;在第2吸收峰Ka=1.321/h,Ke=0.081/h,Tmax=6.48h,Ti/2Ke=7.76 h.结论:五灵胶囊中柴胡皂苷d在小鼠体内生物药剂学特征是吸收慢,清除也慢.     

HPLC测定不同产地北柴胡中的柴胡皂苷a、c、d

目的建立一个RP-HPLC方法,对国内20个不同产地北柴胡样品中的柴胡皂苷a、c、d进行含量测定.方法以ODS C18色谱柱、乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长为210nm.结果柴胡皂苷a、c、d的线性回归方程分别为Yssa=2.0377 ×105+1.1555×106Xssa(r=O.9999)、Yssc=4.7644×105+9.4346×105Xssc(r=0.9992)、Yssd=3.4031×105+1.3522×106Xssd(r=0.9992);加样回收率分别为(93.2±3.5)%、(95.9±1.7)%、(95.6±3.3)%(n=5).结论本研究建立的柴胡皂苷a、c、d含量测定方法简便易行,结果准确、可靠.     

HPLC法测定不同品种柴胡中的柴胡皂苷a、c、d的含量

目的 考察不同品种柴胡中柴胡皂苷a、c、d的含量，以期扩大柴胡药用品种的范围。方法 采用RP－HPLC法，使用LUNAC18柱、乙腈－水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为210nm，以柴胡皂苷a、c、d含量为指标进行比较。结果 不同品种柴胡中的柴胡皂苷a、c、d含量差异悬殊，其中云南会泽产多枝柴胡、中的含量最高，结论 研究所建立的方法适合不同品种柴胡中柴胡皂苷a、c、d的定量分析，并且结果准确可靠。     

柴胡皂甙对戊四氮致痫大鼠的作用

目的:探讨柴胡皂甙对大鼠癫痫发作及脑电的影响。方法:观察柴胡皂甙对戊四氮致痫大鼠痫性发作潜伏期、发作程度以及脑电的影响。结果:腹腔注射柴胡皂甙50mg/kg、100mg/kg及150mg/kg三种剂量均能显著延长大鼠惊厥潜伏期,明显减轻大鼠痫样发作程度;对大鼠的脑电图有一定的改善作用。结论:柴胡皂甙具有抑制戊四氮诱发癫痫的作用。     

柴胡皂苷经不同给药途径血药和脑药动力学的比较研究

通过比较柴胡皂苷经不同途径给药后血药及脑药动力学,评价柴胡皂苷治疗癫痫的最佳给药途径。柴胡皂苷经不同途径给予小鼠后于不同时间点取血和全脑,以乙腈-甲醇(9∶1)沉淀血浆蛋白质,采用UPLC-MS/MS测定SSa在小鼠血浆和脑组织中的浓度,用Kinetica程序软件计算药代动力学参数和生物利用度,并计算脑靶向系数(Re)和药物脑靶向指数(DTI)。鼻腔给药后脑药Re为142.17%,DTI为3.06,要显著高于注射组。灌胃组DTI为1.25。柴胡皂苷鼻腔给药后脑靶向性要高于注射组和灌胃给药组,显示出鼻腔给药"引药入脑"的优势。     

柴胡皂苷D对慢性应激诱导小鼠焦虑症的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对慢性应激诱导焦虑模型小鼠的影响及其作用机制。方法:选取50只雄性ICR小鼠,按照随机数字表法分为五组,分别为正常组、慢性应激组、氟西汀组(20 mg/kg)、柴胡皂苷D低剂量组(20 mg/kg)和柴胡皂苷D高剂量组(40 mg/kg)。除正常组外,其余四组予慢性应激诱导小鼠建立焦虑症模型。通过蔗糖偏好实验、旷场试验、强迫游泳试验和悬尾试验检测小鼠行为学。采用酶联免疫技术检测IL-6、IL-β、TNF-α; 采用Western blot技术检测小鼠海马组织RIP140、p-NF-κB-p65、p-IκBα、p-IKKα和p-IKKβ蛋白表达; 采用免疫组化法检测小鼠海马组织RIP140蛋白表达。结果:柴胡皂苷D低剂量组、柴胡皂苷D高剂量组均能改善焦虑症模型小鼠行为学,并能降低血清IL-6、IL-β和TNF-α水平。柴胡皂苷D低剂量组、柴胡皂苷D高剂量组可降低小鼠海马组织RIP140、p-NF-κB-p65、p-IκBα、p-IKKα和p-IKKβ蛋白的表达。结论:柴胡皂苷D可以缓解慢性应激焦虑模型小鼠症状,其机制与调控RIP140/NF-κB信号通路相关。     

BcbZIP134的多克隆抗体制备用于柴胡皂苷生物合成的转录调控分析

目的：本研究的目的是使用特异性抗体来验证转录因子BcbZIP134如何调节柴胡皂苷的合成。然而,难以获得体外表达的可溶性蛋白质,可溶性蛋白的获得是制备抗体的先决条件。因此我们探索了一种可溶性蛋白可以有效表达的条件,进行特异性多克隆抗体的制备。 方法：首先在Transetta（DE3）大肠杆菌中表达柴胡BcbZIP134 cDNA（DC保留）。探索了不同浓度的IPTG（0.05和0.5mmol / L）和不同培养温度（16和37℃）以有效表达靶蛋白。然后,使用Ni Sepharose 6 Fast Flow纯化表达的具有His标签的蛋白质。使用不同浓度的咪唑洗脱液（15,60和300mmol / L）洗脱靶蛋白。用纯化的BcbZIP134蛋白免疫家兔。使用纯化的多克隆抗体,通过蛋白质印迹分析BcbZIP134在转基因毛状根系中的表达。 结果：在以下条件下：使用pEASY®-Blunt E1载体和Transetta（DE3）大肠杆菌,IPTG 0.5mmol / L,16℃和诱导过夜获得大量的可溶性BcbZIP134重组蛋白。在兔中免疫后以高效价1：51 200获得特异性 的BcbZIP134的抗体。多克隆抗体可以与BcbZIP134转基因毛状根特异性结合。 结论：获得了BcbZIP134的可溶性重组蛋白在大肠杆菌中高效的表达系统,。 通过使用这种蛋白质,制备了特异性和高性能的多克隆抗体。 此外,通过使用BcbZIP134过表达的毛状根,通过蛋白质印迹分析验证了多克隆抗体的可用性。