左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨左归降糖益肾方治疗糖尿病肾病(DN)的效果及可能作用机制。方法 40只MKR小鼠随机分为MKR鼠组、模型组、中药组和西药组,每组10只,同期另设10只C57小鼠为对照组。模型组、中药组、西药组均予高脂饮食联合右肾切除建立糖尿病肾病模型,术后8周中药组给予左归降糖益肾方溶液28g/(kg·d),西药组给予格列喹酮片7.9mg/(kg·d)和贝那普利片1.3mg/(kg·d),其余各组均以等量蒸馏水灌胃,每日1次,连续8周。检测各组小鼠空腹血糖、尿微量白蛋白(Um A1b)、肾小球足细胞凋亡水平及Bcl-2 mRNA、Bax mRNA和蛋白表达水平。结果模型组可见凋亡细胞明显增多,多数为肾小球内的足细胞,中药组及西药组足细胞凋亡情况较模型组明显减少。与对照组比较,MKR鼠组和模型组小鼠空腹血糖、Um A1b和Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达均明显升高,并且模型组明显高于MKR鼠组(P0.01);给药后,中药组与西药组空腹血糖、Um A1b及Bax mRNA和蛋白表达均较模型组明显降低,Bcl-2mRNA和蛋白升高(P0.01),而中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论足细胞凋亡参与了DN的发病,左归降糖益肾方可能通过影响Bcl-2、Bax的表达以及抑制足细胞凋亡从而保护肾脏。     

冬虫夏草及雷公藤多甙对糖尿病肾病大鼠足细胞影响的实验研究

目的探讨冬虫夏草及雷公藤多甙对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞的保护作用。方法制备DN大鼠模型,将动物随机分为正常对照组(A组)、DN模型组(B组)、冬虫夏草治疗组(C组)及雷公藤多甙治疗组(D组)、两药联合治疗组(E组)。12周后观察24h尿蛋白排泄量(24hurinary protein count,24hpro)、血糖(Glu)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、外周血白细胞(WBC)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)以及肾重(KW)/体重(BW)等值的变化;HE染色检测肾组织病理变化;透射电镜测量足细胞超微结构变化;免疫荧光方法检测肾皮质nephrin和podocin蛋白表达。结果与A组比较,B组SCr、BUN增高(P<0.05);Glu、KW/BW和24hpro明显增高(P<0.01),肾小球、小管间质及足细胞病变,肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达减少。与B组比较,C、D、E组KW/BW和24hpro降低(P<0.01),肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻;肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达增高。与C组比较,D、E组KW/BW和24hpro降低,肾小球、小管间质及足细胞病变减轻,肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达增高,差异均有统计学意义以E组最为明显(P<0.01)。结论冬虫夏草及雷公藤多甙具有减轻DN蛋白尿,保护及修复DN大鼠足细胞病变的作用。其机制可能与其上调nephrin和podocin蛋白的表达有关。冬虫夏草与雷公藤多甙联合治疗可增加疗效并减轻雷公藤多甙的不良反应。     

左归降糖益肾方对糖尿病肾病MKR鼠肾组织TGF-β1及CTGFmRNA表达的影响

目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体缺失转基因鼠(MKR鼠)转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)基因mRNA表达的影响。方法:MKR鼠60只,按性别、空腹血糖、体重随机分为4组,即空白组,模型组,左归降糖益肾方组(28.8 g·kg-1),阳性药物组(格列喹酮0.003 9 g·kg-1与盐酸贝那普利0.001 3 g·kg-1),每组15只,同龄C57鼠10只作为正常组,除正常组与空白组外,其余各组高脂喂养联合单侧肾切除造成糖尿病肾病(DN)小鼠模型,造模后8周ig给予相应药物8周,留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠。电化学法检测空腹血糖(FBG),常规生化法检测血清肌酐(SCr),尿素氮(BUN)含量,ELISA检测尿微量白蛋白含量;并取新鲜肾组织,RT-PCR检测肾组织TGF-β1及CTGF mRNA的表达水平;其余组织4%多聚甲醛固定24 h,HE及Masson染色观察肾组织病理变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG,SCr,BUN及尿微量白蛋白含量明显升高(P0.01);与模型比较,左归降糖益肾方能明显降低DN小鼠FBG,降低SCr,BUN及尿微量白蛋白含量(P0.01);下调TGF-β1mRNA及CTGF mRNA的表达水平(P0.05,P0.01),疗效等同于阳性药物组;与空白组比较,模型组肾组织肾小球体积缩小,肾小球萎缩,球囊腔增宽,球囊腔壁层细胞增多且异形化,左归降糖益肾方能明显改善肾组织病理损伤。结论:左归降糖益肾方可以通过下调TGF-β1mRNA及CTGF mRNA的表达水平,从而抑制肾组织纤维化的发生发展。     

左归降糖益肾方对MKR糖尿病肾病小鼠足细胞葡萄糖调节蛋白78、C/EBP同源蛋白表达的影响

目的观察内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)在MKR转基因糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞的特异性表达及左归降糖益肾方的干预作用。方法以8周龄MKR小鼠为研究对象,随机分为空白组、模型组、左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组、格列喹酮片+贝那普利组,以C57野生鼠为正常组,每组10只。采用高脂喂养加单肾切除复制DN模型,各给药组予相应药物灌胃30 d。采用电化学法观察小鼠空腹血糖(FBG),ELISA测定尿微量白蛋白(Um Alb),RT-PCR及Western blot检测GRP78、CHOP基因和蛋白表达,电镜观察足细胞形态结构。结果与空白组比较,模型组FBG、Um Alb明显升高(P0.01),足细胞GRP78基因及蛋白表达明显下调(P0.01),CHOP基因及蛋白表达明显上调(P0.01);与模型组比较,各给药组FBG、Um Alb明显降低(P0.01),左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组GRP78基因及蛋白表达明显上调、CHOP基因及蛋白表达明显下调(P0.01)。电镜观察结果显示,各给药组小鼠肾小球足细胞结构、数量及密度较模型组明显改善。结论左归降糖益肾方能改善内质网应激介导的足细胞损伤,延缓DN进展。     

加味升降散对糖尿病大鼠足细胞nephrin. podocin 蛋白表达的影响

目的:加味升降散对糖尿病大鼠足细胞肾小球细胞黏附分子受体抗原(nephrin)、肾小球足细胞跨膜蛋白(podocin表达的影响,探讨其肾脏保护机制。方法:60只雄性成年SD大鼠随机分为空白组、模型组、培哚普利组、低剂量中药组和高剂量中药组。采用大鼠左侧切除左肾手术+高脂高糖饲料+链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)法制备糖尿病大鼠模型。高剂量中药组大鼠给予27 g/(kg·d)加味升降散灌胃,低量中药组大鼠给予9 g/(kg·d)加味升降散灌胃,培哚普利组大鼠给予0.48 mg/(kg·d)(溶于2 mL的CMC-Na溶液)培哚普利灌胃。空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。观察大鼠一般状况,应用考马斯亮蓝法监测24 h尿蛋白定量,应用全自动生化分析仪检测肾功能、血糖。光镜下观察大鼠肾脏病理学变化,免疫组织化法观察nephrin、podocin蛋白在肾脏组织的分布及表达情况。结果:与空白组比较,模型组血糖、血肌酐(Serum creatinine,SCr)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24 h尿蛋白均升高(P 0.01),nephrin、podocin蛋白表达均下降(P 0.01);与模型组比较,培哚普利组及低、高剂量加味升降散血糖、SCr、BUN、24 h尿蛋白均下降(P 0.01);培哚普利组、低剂量中药组、高剂量中药组nephrin、podocin蛋白表达水平均有不同程度上调(P 0.05),其中高剂量中药组nephrin、podocin蛋白表达水平上调最为显著。结论:加味升降散能有效改善糖尿病大鼠肾功能,减少蛋白尿,改善肾小球硬化等,其途径可能与加味升降散上调大鼠足细胞nephrin、podocin蛋白表达水平,减轻大鼠足细胞损伤有关。     

消渴平合剂对糖尿病肾病db/db小鼠肾脏足细胞 Nephrin、Podocin、CD2AP表达的影响

目的:观察消渴平合剂对糖尿病肾病db/db小鼠肾脏足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin、Podocin、CD2AP表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法:选取12只db/m小鼠为正常对照组,其余36只db/db小鼠随机分为模型组、消渴平组、厄贝沙坦组,每组各12只;连续给药8周后分别检测各组小鼠空腹血糖(FBG)、胱抑素C(CysC)及24 h尿蛋白(24 hUP)。采用Real-time PCR、Western blot检测肾脏足细胞nephrin、podocin及CD2AP mRNA和蛋白表达变化。结果:消渴平合剂可以明显降低db/db小鼠FBG、CysC和24 hUP。与正常对照组相比,模型组小鼠肾脏足细胞nephrin、podocin及CD2AP的表达明显降低(P0.01);与模型组相比,消渴平组nephrin、podocin及CD2AP的表达明显上调(P0.05),与厄贝沙坦组比较无明显差异(P0.05)。结论:消渴平合剂可以降低db/db小鼠空腹血糖、胱抑素C及24 h尿蛋白,保护肾功能,其机制可能与上调肾脏足细胞nephrin、podocin和CD2AP表达有关。     

绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响及机制

目的:研究绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏足细胞相关分子(nephrin)、血管通透因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的机制。方法:采用单侧肾切除加链脲佐菌素(STZ)注射法改良复制DN模型,实验分为正常组、模型组、治疗组(绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组)和缬沙坦组。干预4周后电镜观察肾小球超微结构改变,RT-PCR检测nephrin、VEGF mRNA表达。结果:各治疗组病理变化较模型组均有不同程度改善:足突增宽或部分融合,基底膜增厚减轻,同时nephrin mRNA表达水平较模型组明显上调(P0.01),VEGF表达明显抑制(P0.01),其中高剂量组和缬沙坦组效果类似,明显优于低剂量组(P0.01)。结论:绞股蓝总皂苷可能通过上调足细胞相关分子nephrin表达,抑制分泌VEGF过表达,减轻足细胞超微结构改变,从而保护足细胞,降低尿蛋白,延缓肾小球硬化。     

基于活性氧簇-自噬通路调控的加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞的保护机制研究

目的观察加味黄芪赤风汤基于活性氧簇(ROS)-自噬通路对AngⅡ诱导肾小球足细胞损伤的保护机制。方法制备低、中、高剂量加味黄芪赤风汤(分别应用生药浓度为0.57、1.15、2.29 g/mL的加味黄芪赤风汤灌胃小鼠)含药血清及替米沙坦(0.83 mg/mL灌胃小鼠)含药血清,采用AngⅡ(1×10~(-7)mol/L)诱导足细胞损伤模型,分为空白组,模型组,加味黄芪赤风汤低、中、高剂量组以及替米沙坦组;为验证自噬与模型的关系,设置3MA与氯喹组。采用Western Blot检测足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、P62表达,溶酶体荧光探针检测自噬流活性,透射电镜观察足细胞内自噬体的形成,流式细胞仪检测细胞内ROS平均荧光强度(MFI)。结果与空白组比较,模型组足细胞nephrin、podocin、P62表达下调(P0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达上调(P0.01),ROS的MFI增强(P0.01)。透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示模型组自噬体数量增多,溶酶体表达增强。与模型组比较,加味黄芪赤风汤中、高剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin、P62表达上调(P0.01,P0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达下调(P0.01,P0.05);3MA及氯喹组足细胞nephrin、podocin表达下调(P0.01,P0.05);加味黄芪赤风汤低剂量组Beclin-1表达下调(P0.05);各给药组ROS MFI减弱(P0.01,P0.05)。透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示加味黄芪赤风汤组及替米沙坦组自噬体数量减少,溶酶体表达减弱。结论 AngⅡ通过下调nephrin、podocin表达损伤足细胞;加味黄芪赤风汤可上调AngⅡ诱导的nephrin、podocin表达,缓解足细胞损伤;加味黄芪赤风汤可能基于ROS-自噬通路,下调AngⅡ诱导的自噬流,拮抗肾小球足细胞损伤。     

从自噬机制探讨加味黄芪赤风汤含药血清对阿霉素诱导的肾小球足细胞损伤的保护作用

目的研究加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞自噬及足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及desmin表达的影响。方法采用体外培养小鼠肾小球足细胞、以阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的方法制作足细胞损伤模型。随机分为空白组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组)。采用Western blot法检测各组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、desmin和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平,透射电镜下观察各组足细胞自噬超微结构变化。结果 (1)与空白组比较,模型组nephrin、podocin表达明显下降(P0.01),desmin表达明显升高(P0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin表达明显升高(P均0.01),desmin表达明显下降(P均0.01),中药低剂量组无明显改善(P0.05)。(2)模型组较空白组自噬小体数量明显增多,体积增大,细胞器减少;中药高、中剂量组及替米沙坦组较模型组自噬超微结构均有不同程度改善,而中药低剂量组无明显改变。(3)与空白组比较,模型组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显上升(P0.01);与模型组比较,中药高、中剂量及替米沙坦组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显下降(P0.01),中药低剂量组无明显下降(P0.05)。结论加味黄芪赤风汤对ADR诱导的足细胞损伤具有保护作用,调节足细胞自噬活性可能是其足细胞保护作用的内在机制之一。     

小檗碱对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响

目的观察高糖对体外培养小鼠足细胞活力、凋亡的影响以及小檗碱的保护效果。方法通过温度条件培养方法诱导永生代小鼠足细胞株分化成熟,分为正常糖对照组(NG,5 mmol/L)、甘露醇高渗对照组(MA,30 mmol/L)、高糖模型组(HG,30 mmol/L)、高糖(30 mmol/L)+小檗碱治疗组(BBR,1.25μmol/L),干预24 h、48 h、72 h后收集细胞,采用MTT法检测足细胞活力,用流式细胞仪分析细胞凋亡率,并用Q-PCR法检测podocin和nephrin的mRNA表达水平。结果 NG对照组和MA对照组之间的细胞活力、凋亡率和凋亡相关分子的mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05);与NG对照组比较,HG模型组足细胞活力和足细胞凋亡率差异有统计学意义(P0.01),对podocin和nephrin的mRNA表达有明显的抑制作用(P0.01),并且这种高糖刺激作用可随着作用时间的延长而增强;与HG模型组比较,BBR治疗组足细胞活力和凋亡率差异有统计学意义(P0.01),podocin和nephrin的mRNA表达水平明显增加(P0.01)。结论高糖环境可诱导小鼠足细胞凋亡,且这种诱导凋亡作用与高渗环境无关;小檗碱对高糖诱导的足细胞凋亡有保护作用。     

芪丹益肾降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏AGEs表达的影响

目的观察芪丹益肾降糖胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏糖基化终产物(AGEs)表达的影响,探讨其作用机制。方法用单侧肾脏切除并腹腔注射链脲佐菌素制备DN大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、芪丹益肾降糖胶囊组,给药12周后,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿蛋白排泄率(UAE),免疫组化方法测定肾组织AGEs的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠FBG、BUN、SCr、UAE均显著增高,肾组织AGEs表达明显增强;经芪丹益肾降糖胶囊治疗12周后,BUN、SCr、UAE均明显低于模型组,肾组织AGEs表达明显下调。结论芪丹益肾降糖胶囊对DN大鼠有一定的治疗作用,其可能机制是下调大鼠肾组织AGEs的表达。     

三黄益肾胶囊防治糖尿病肾病实验研究

目的:比较三黄益肾胶囊与雷米普利胶囊对糖尿病肾病(DN)的干预作用,探析肾脏保护深层机制,为临床防治DN提供实验依据。方法:选用雄性SD大鼠,按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、雷米普利组、三黄益肾胶囊低剂量(0.4 g/kg)组、三黄益肾胶囊中剂量(0.8 g/kg)组、三黄益肾胶囊高剂量(1.6 g/kg)组6组,每组10只。给药治疗8周后,检测各组大鼠肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及24 h尿微量白蛋白等指标。光镜下观察肾脏形态学变化。免疫组化观察肾病蛋白(nephrin)、单核细胞超化蛋白-1(MCP-1)、胰岛素样生长因子(IGF-1)蛋白表达,RT-PCR观察nephrin mRNA、MCP-1mRNA及IGF-1mRNA表达水平。结果:造模后大鼠TG、TC、SCr、BUN、24 h尿微量白蛋白、MCP-1及IGF-1mRNA水平均明显升高(P0.05),nephrinmRNA表达明显降低(P0.05);与模型对照组比较,三黄益肾胶囊组TG、TC、SCr、BUN、24 h尿微量白蛋白、MCP-1及IGF-1 mRNA水平均明显下降(P0.05),nephrinmRNA水平明显上升(P0.05),并能改善大鼠肾组织病变。结论:三黄益肾胶囊可能通过下调IGF-1、MCP-1mRNA表达,上调nephrinmRNA表达,改善肾组织病变并起保护作用。     

降糖益肾方对MKR鼠2型糖尿病肾病早期的保护作用

目的探讨滋阴益气、补肾活血解毒法组方(降糖益肾方)对MKR转基因小鼠2型糖尿病肾病早期的保护作用。方法15周龄MKR鼠24只,根据性别和空腹血糖分层,随机分为3组,即模型组、中药组[降糖益肾方16.72g/(kg·d)]、西药组[格列喹酮4.33mg/(kg·d)+贝那普利1.44mg/(kg·d)],同期另设C57BL/6野生型小鼠为正常组。用药组分别给予相应剂量药物灌胃,模型组和正常组给予等容量蒸馏水灌胃。30d后,同步观察各组小鼠的空腹血糖、尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白(ELISA法)的含量,电镜观测肾脏病理改变。结果给药30d后,降糖益肾方能显著降低MKR鼠空腹血糖、尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白的排泄,与给药前比较,P0.01;与模型组比较,P0.01。电镜结果显示:降糖益肾方组肾小球基底膜增厚减轻,系膜区基质堆积减少。结论降糖益肾方能显著改善MKR鼠空腹血糖、降低尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白的含量、改善肾脏的病理损害,从而延缓MKR鼠肾脏病变的进一步发展。     

肾炎消白颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞podocin、nephrin表达的影响

目的:通过实验观察肾炎消白颗粒对糖尿病肾病(DN)模型大鼠足细胞podocin、nephrin表达的影响,探讨其作用机制。方法:给予高脂、高糖饮食联合单侧肾脏切除后一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立DN大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、盐酸贝那普利(洛汀新)组、肾炎消白颗粒高剂量组、肾炎消白颗粒低剂量组,共5组。连续灌胃给药8周,检测大鼠尿蛋白排泄率(UAE)、血清总胆固醇、三酰甘油;Western-Blot检测大鼠足细胞podocin和nephrin的表达。结果:肾炎消白颗粒能明显降低DN大鼠血清总胆固醇、三酰甘油水平及UAE,与模型组比较有显著性差异(P0.05),低剂量组作用更显著,与西药对照组比较差异显著(P0.05);与正常组相比,模型组大鼠肾组织podocin、nephrin表达水平显著降低(P0.05);与模型对照组比较,肾炎消白颗粒组大鼠肾组织podocin、nephrin表达水平显著升高(P0.05)。结论:肾炎消白颗粒可减少DN大鼠尿蛋白的排泄率,降低血脂水平,上调podocin和nephrin蛋白是其延缓DN进展的作用机制之意。     

缩泉益肾方对糖尿病肾病小鼠的保护作用

目的:研究缩泉益肾方对糖尿病肾病(DN)小鼠的保护作用。方法:将小鼠分为正常组、模型组、厄贝沙坦组、缩泉益肾方高低剂量组。检测血糖、BUN、尿蛋白、SCr排泄量及GSH、CAT活性。结果:厄贝沙坦组、缩泉益肾方高低剂量组降低DN小鼠血糖。模型组BUN、尿蛋白、SCr排泄量高于正常组且GSH、CAT活性低于正常组,模型组给予缩泉益肾方后BUN、尿蛋白、SCr排泄量显著下降,GSH、CAT活性显著上升。结论:缩泉益肾方能降低DN小鼠血糖水平,降低尿蛋白、BUN、SCr的排泄量,及增加CAT、GSH活力,从而达到保护DN小鼠的作用。     

黄连温胆汤拆方对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨黄连温胆汤拆方对糖尿病大鼠肾脏的保护作用,并初步阐明其可能的作用机制。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)和弗氏完全佐剂(CFA)的方法建立糖尿病大鼠模型,造模成功后分为模型组(M)与黄连配半夏组(L1)、黄连配陈皮组(L2)、黄连配茯苓组(L3)、陈皮配半夏组(L4)。正常对照组(C)常规饲养,各治疗组给予相应中药灌胃,模型组以生理盐水灌胃。连续8周。实验结束后,检测生化指标,光镜下观察肾脏组织病理变化;Western Blot和RTq PCR检测肾组织足细相关蛋白nephrin和podocin的表达。结果与模型组比较,L3组肌酐(SCr)降低明显(P﹤0.01),L1、L3组尿素氮(BUN)降低明显(P﹤0.01),L1、L2、L3组丙二醛(MDA)降低明显(P﹤0.05);拆方各治疗组能够明显改善模型动物的肾脏病理损伤,增加nephrin、podocin的基因表达。结论黄连温胆汤拆方可以有效改善DN大鼠的肾脏损伤,延缓DN的发生,其机制与改善足细胞损伤有关。     

六味地黄汤联合来氟米特、泼尼松治疗大鼠IgA肾病的研究

目的:探讨六味地黄汤联合来氟米特、泼尼松对大鼠IgA肾病的作用及其可能的机理。方法:第12周末造模成功后,随机分为模型对照(M)组、来氟米特和泼尼松(LP)组和中药(C)组、来氟米特、泼尼松联合中药(LPC)组和正常对照(K)组,检测24小时尿蛋白、尿红细胞、肾功、血浆白蛋白。肾组织行HE、PAS、P+M及免疫荧光染色;RT-PCR检测足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin mRNA的表达。结果:与其他组相比,LPC组尿蛋白、尿红细胞明显减少,血清BUN、SCr明显下降,HE、PAS染色、P+M染色提示肾组织病理损害程度相对较轻,免疫荧光提示肾小球系膜区IgA沉积相对明显减少,且肾组织nephrin、podocin mRNA表达上调。结论:六味地黄汤联合来氟米特、泼尼松能够延缓肾脏损害的进展,其作用机制可能与上调Nephrin、Podocin的表达,抑制系膜细胞增生,减少系膜区免疫复合物沉积有关。     

六味地黄丸防治大鼠糖尿病肾病的实验研究

目的:观察足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin在糖尿病肾病发病机制中的作用,探讨六味地黄丸(LWDHW)保护糖尿病肾病大鼠肾脏的机制。方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型,1周后,按血糖浓度将成模的糖尿病大鼠随机分为:模型组(STZ,8只)、治疗组(STZ+LWDHW,8只),另设正常组(Control,8只)。治疗组给予六味地黄丸灌胃,模型组、正常组给予等量生理盐水,持续观察8周。治疗第8周末,称大鼠体重,计算肾系数,观察肾脏病理改变;检测24h尿蛋白总量、血尿素氮、血肌酐;免疫印迹检测nephrin和podocin在肾组织中的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血糖,体重明显下降(P<0.01),肾系数,24h尿蛋白总量,血尿素氮,血肌酐明显升高(P<0.01);模型组大鼠肾小球肥大、毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡样变,见蛋白管型;nephrin和podocin蛋白表达减少(P<0.01)。治疗组血糖、体重无明显改变;肾系数,24h尿蛋白总量,血尿素氮,血肌酐明显降低(P<0.05);病理改变明显减轻;大鼠肾组织nephrin和podocin表达明显增加(P<0.05)。结论:六味地黄丸可能通过增加足细胞nephrin和podocin表达发挥保护糖尿病肾病大鼠肾脏的作用。     

基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨益肾化瘀方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤的干预机制

目的 探讨基于Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）调控上皮-间充质细胞转化（EMT）途径益肾化瘀方对糖尿病肾病（DN）肾小球足细胞损伤的干预机制。方法 60只SD大鼠分为正常组,模型组,Wnt-C59组（Wnt/β-catenin通路抑制剂,0.03 g·kg^-1）,低、中、高剂量益肾化瘀方组（8,16,32 g·kg^-1）,12周后,比较各组一般体征变化及血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,肾指数,尿蛋白量,血糖,肾脏病理改变,足细胞和肾小球基底膜损伤情况及足细胞损伤相关蛋白［去氧肾上腺素（nephrin）,肾小球蛋白（synaptopodin）］,Wnt/β-catenin通路相关蛋白（Wnt1,β-catenin）,足细胞EMT相关蛋白［α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,E-钙黏蛋白（E-cadherin）］表达水平。结果 与正常组比较,模型组肾组织出现明显病理改变,肾小球系膜基质弥漫性增厚,足突融合较为严重,SCr,BUN,肾指数,尿蛋白量,血糖及Wnt1,β-catenin,α-SMA表达水平明显升高（P<0.05）,nephrin,synaptopodin,E-cadherin表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,各干预组SCr,BUN,肾指数,尿蛋白量,血糖及Wnt1,β-catenin,α-SMA表达水平明显下降（P<0.05）,nephrin,synaptopodin,E-cadherin表达水平明显升高（P<0.05）;各干预组中,高剂量益肾化瘀方组对于上述指标的改善程度明显优于低、中剂量益肾化瘀方组（P<0.05）,与Wnt-C59组比较无显著差异。结论 益肾化瘀方通过抑制Wnt/β-catenin通路阻止足细胞EMT,从而修复DN大鼠肾小球足细胞损伤。     

三芪口服液对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞及其蛋白表达的影响

目的 观察三芪口服液对实验性糖尿病肾病(DN)模型大鼠足细胞计数及足细胞标志性蛋白PCX及足细胞裂孔膈膜蛋白的影响.方法 SD雄性大鼠,予STZ单次腹腔注射及高脂饲料造模,筛选DN成模大鼠,随机分组,药物干预;6周后采集大鼠尿测尿蛋白,处死大鼠取肾组织以免疫组化方法测定PCX、nephrin的蛋白表达、足细胞计数.结果 三芪口服液组肾小球足细胞数较模型组多(P＜0.05);定量分析结果显示;模型组PCX平均荧光密度、nephrin蛋白表这均低于三芪口服液组(P＜0.05);Pearson相关分析结果显示,24小时UMA与肾小球足细胞PCX平均荧光密度、nephrin蛋白表达呈负相关(P＜0.01).结论 益气活血中药复方三芪口服液能够上调肾足细胞裂孔隔膜nephrin、足细胞特异性标志蛋白PCX的蛋白表达,从而改善足细胞的损伤,减少尿蛋白,延缓DN进程.