气血并治方有效组分对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块的干预作用

目的探讨气血并治方水提取物有效组分(CWQB)配伍对载脂蛋E基因敲除(ApoE-)小鼠晚期动脉粥样硬化不稳定斑块的干预作用及其可能的作用机制。方法6周龄ApoE-小鼠,给予高脂饲料,随机分为模型组、辛伐他汀2.5mg·kg-1组、CWQB 72和360mg·kg-1组。从24周龄起灌胃给药,每日1次,连续12周。同时取同龄C57BL/6小鼠作为正常对照。36周龄时麻醉处死,检测血脂水平和主动脉病理变化,免疫组织化学及计算机图像处理系统分析主动脉斑块中巨噬细胞内CD68的表达和平滑肌细胞内α-肌动蛋白的表达。结果CWQB及辛伐他汀均能降低小鼠的血脂水平,降低其胆固醇含量,升高高密度脂蛋白水平。CWQB大剂量组和辛伐他汀组可见主动脉斑块纤维帽厚度增加,斑块面积和管腔面积的比值下降;斑块中平滑肌细胞内α-肌动蛋白表达增加,巨噬细胞内CD68表达减少。结论CWQB具有一定的消减和稳定主动脉斑块的作用,其机制可能与其降低血脂水平、减少斑块内巨噬细胞浸润和增加血管平滑肌细胞数量有关。     

普罗布考对新西兰兔动脉粥样硬化的影响

目的:研究普罗布考对正常饮食及高脂高胆固醇饮食新西兰兔血脂、肥大细胞及动脉粥样硬化的影响.方法:40只雄性新西兰兔分别给予基础饲料、基础饲料+普罗布考、高脂高胆固醇饲料、高脂高胆固醇饲料+普罗布考喂养4周,取材.采用酶比色法检测血清中脂质水平;甲苯胺蓝染色检测肥大细胞;苏丹Ⅳ染色测定主动脉粥样硬化病变面积.结果:与高脂高胆固醇组比较,高脂高胆固醇+普罗布考组新西兰兔血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均明显降低(P＜0.05);主动脉和空肠脱颗粒的肥大细胞百分率明显减少(P＜0.001);主动脉粥样硬化病变面积明显减少(P＜ 0.001).结论:普罗布考能降低高脂高胆固醇饮食新西兰兔血脂水平;减少主动脉、空肠脱颗粒的肥大细胞百分率以及主动脉粥样硬化病变面积.     

木耳多糖影响家兔动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶-13表达的研究

目的观察木耳多糖对实验性家兔动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响,从而进一步探讨木耳多糖在动脉粥样硬化中的作用。方法将40只健康雄性新西兰白兔随机分为3组:空白对照组(正常组)8只,每天喂普通饲料;阳性对照组(模型组)16只,每天给普通饲料+1g胆固醇+15%猪油;实验组(预防组)16只,每天给普通饲料+1g胆固醇+1g木耳多糖+15%猪油。16周末所有实验用兔麻醉处死,各组行主动脉粥样硬化病理形态学观察,包括大体形态学观察、光镜观察。根据形态学特点分成稳定斑块和不稳定斑块。通过免疫组织化学、特殊染色及电镜对斑块内的病变进行定量分析。结果特殊染色(Masson特染)可见模型组的粥样硬化斑块中有大量胶原纤维增生,而预防组蓝染的胶原纤维数量较模型组少。S-P免疫组织化学可见模型组中MMP-13在粥样斑块中平滑肌细胞及泡沫细胞中的细胞核及细胞质中呈阳性表达,而正常血管壁表达阴性。预防组与模型组对照结果显示,MMP-13在预防组中的表达较模型组明显减少。结论木耳多糖降低斑块中MMP-13的表达,进一步说明其消退斑块的作用;木耳多糖能够降低胶原纤维的生成,说明其不仅可以降低血脂,还可能抑制胶原纤维的产生从而抑制AS的发生发展。     

氯沙坦对兔动脉粥样硬化形成的影响

目的：观察氯沙坦对高脂兔动脉粥样硬化形成的影响。方法：建立高脂兔动脉粥样硬化模型,治疗组在高脂饮脂的同时给予氯沙坦治疗,3mo后观察兔主动脉及冠状动脉粥样硬化形成的情况及测定血脂水平。结果：治疗组主动脉粥样硬化面积小于高脂组,冠状动脉病变较后者轻微,各组间血脂水平差异无统计学意义。结论：氯沙坦能抑制高脂血症所造成的兔动脉粥样硬化病变的形成,其作用并非通过降低血脂水平。     

青心酮对载脂蛋白E缺陷小鼠主动脉粥样硬化形成及斑块中主要细胞的TLR4表达的影响

目的观察青心酮对小鼠动脉粥样硬化（AS）斑块中平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞Toll样受体4表达（Toll-like receptor 4,TLR4）的影响,及对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样硬化病变的影响。方法取小鼠胸主动脉,进行平滑肌细胞、内皮细胞的原代培养,RAW264.7（小鼠巨噬细胞）细胞株传代培养。实验分4组：空白对照组,脂多糖（LPS）组,青心酮组,辛伐他汀组。收集各组细胞总mRNA及蛋白,应用RT-PCR及Western-blot方法检测TLR4 mRNA及蛋白。取30只8周龄雄性ApoE（-/-）小鼠,随机分成3组：模型组（n=10）,每天生理盐水灌胃;青心酮治疗组（n=10）经胃管灌注青心酮10mg·kg^-1·d^-1,辛伐他汀治疗组（n=10）经胃管灌注辛伐他汀10mg·kg^-1·d^-1。所有实验小鼠均饲以＂西方类型膳食＂饲料12周。剪取主动脉根部切片及HE染色观察主动脉粥样硬化病变情况。结果1×10^-7mol·L^-1青心酮组血管平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4 mRNA和蛋白含量明显低于未处理组（P〈0.01）;与辛伐他汀组比较无显著性差异;青心酮组AS病灶形成减少。结论青心酮可下调LPS活化的小鼠平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,在一定程度上能减少AS病灶的形成,可能通过TLR4途径发挥其作用。     

Narc-1在动脉粥样硬化中的表达及意义

目的探讨NARC-1蛋白在新西兰兔动脉粥样硬化血管壁中的表达。方法选取健康纯种雄性新西兰白兔30只,适应性喂养1周后,随机分为对照组(15只,普通颗粒饲料喂养)和高胆固醇组(15只,高胆固醇组给予含高胆固醇的饲料),分别喂养12周后处死。分析两组动物主动脉内膜粥样硬化病变面积,免疫组化检测检测两组动物主动脉组织NARC-1蛋白的表达。结果高胆固醇组出现了明显的动脉粥样硬化病变,主动脉内膜面粥样硬化病变面积为(27.41±2.12)%,与对照组(0.51±0.20)%相比差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化证实NARC-1蛋白在高胆固醇组动物主动脉内膜壁较对照组组织呈高表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 NARC-1/PCSK9可能是影响动脉粥样硬化病变形成与发展的重要因素,为进一步对高胆固醇血症和动脉粥样硬化药物防治的研究奠定了基础。     

微小RNA-206对apoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏X受体α表达的影响

目的探讨微小RNA(mi R)-206对apo E-/-动脉粥样硬化小鼠肝脏X受体α(LXRα)表达的影响。方法取4周龄apo E-/-小鼠30只,喂以高脂饮食,14周后随机分成对照组、mi R-206 mimic组、mi R-206 inhibitor组,每组10只。尾静脉采血检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),油红O染色观察主动脉粥样硬化程度,荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定LXRαm RNA表达量,蛋白印迹法测定LXRα蛋白表达量。结果 mi R-206 mimic组HDL-C较对照组升高;mi R-206 inhibitor组与对照组、mi R-206 mimic组相比,TC、LDL均显著升高,HDL明显下降。各组TG无明显不同。苏木精-伊红(HE)染色示对照组主动脉粥样硬化程度较轻,mi R-206 inhibitor组主动脉粥样硬化程度最重,mi R-206 mimic组主动脉粥样硬化病变极其微弱。mi R-206 mimic组肝LXRα表达增多,而mi R-206 inhibitor组表达减少。结论mi R-206可能与LXRα构成反馈环,共同调节胆固醇逆转运。     

兔腹主动脉粥样硬化模型的建立

目的:探讨建立经济实用、稳定可靠的腹主动脉粥样硬化模型的建立。方法:新西兰白兔24只,随机分为三组:正常对照组(Ⅰ组)6只,高胆固醇组(Ⅱ组)8只,高蛋氨酸组(Ⅲ组)8只。采用血管球囊扩张内膜剥脱术在兔腹主动脉上造成特定条件的损伤,评价各组动物血管粥样硬化程度和病理改变。结果:4周高胆固醇组血脂水平较其他两组均明显升高(P<0.05),Ⅲ组血浆同型半胱氨酸水平较其他两组明显升高(P<0.05)。高脂餐及高蛋氨酸喂养20周肉眼、病理及超声检查评实,动脉粥样硬化病变已属于较成熟的纤维斑块期。结论:采用高脂饲料喂养加血管球囊扩张内膜剥脱术建立兔腹主动粥样硬化模型是可行的。     

SREBPS及VEGF调节辛伐他汀对血管平滑肌细胞的作用

目的观察辛伐他汀对血管平滑肌细胞作用,是否通过SREBPs及VEGF的调节起作用,SREBPs与VEGF之间相互关系。方法①体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs),观察辛伐他汀对VSMCs增殖、迁移的影响及SREBPs、VEGF的mRNA表达。②建立大鼠动脉粥样硬化血管损伤模型,分为NC组、AI,组、LS组和HS组。药物干预4周后测定各组血脂、胸主动脉内膜/(内膜+中膜)比值及血管SREBPs、VEGF的mRNA表达。结果实验证明,大剂量辛伐他汀明显抑制VSMCs增殖和迁移,VSMCs的SREBP-1、SREBP-2的mRNA表达显著增加同时VEGF的表达显着减少,SREBPs与VEGF之间有一定的相关性。结论辛伐他汀抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移机制可能是通过增加VSMCs的SREBPs的表达进而减少VEGF表达。     

基于Cav-1/NF-κB通路探讨调脾护心方抗动脉粥样硬化的作用机制

目的:研究调脾护心方对载脂蛋白基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)的影响,并探讨其作用机制。方法:将40只雄性ApoE-/-小鼠分为空白组、模型组、辛伐他汀组(阳性对照,5 mg/kg)以及调脾护心方低、高剂量组(50、150 mg/kg),每组8只。除空白组小鼠给予普通饲料外,其余各组小鼠均给予高脂饲料以复制AS模型。造模后,各给药组小鼠均灌胃相应药物,空白组和模型组小鼠均灌胃等容生理盐水,每天1次,连续12周。末次给药后,采用分光光度法检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,采用硝酸酶还原法检测血清一氧化氮(NO)水平;采用酶联免疫吸附测定法检测血清白细胞介素6(IL-6)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平;分离胸主动脉,以苏木精-伊红染色,观察各组小鼠胸主动脉斑块形成情况,并计算校正斑块面积;采用蛋白质印迹法检测各组小鼠胸主动脉组织中核因子κB(NF-κB)p65、小窝蛋白1(Cav-1)、一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、IL-6、VCAM-1水平均显著升高,HDL-C、NO水平均显著下降(P<0.01);胸主动脉斑块明显,校正斑块面积显著增大(P<0.01),该组织中NF-κB p65、Cav-1蛋白的相对表达量均显著升高,eNOS蛋白的相对表达量显著下降(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平以及辛伐他汀组和调脾护心方高剂量组小鼠血清IL-6、VCAM-1水平均显著下降,各给药组小鼠血清HDL-C、NO水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);各给药组小鼠胸主动脉斑块减少,校正斑块面积均显著缩小(P<0.05或P<0.01),该组织中NF-κB p65、Cav-1蛋白的相对表达量均显著下降,eNOS蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:调脾护心方可调节血脂水平、降低炎症因子水平、抑制AS斑块的形成,其机制可能与其抑制Cav-1/NF-κB通路有关。