溶血磷脂酸对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：观察溶血磷脂酸（LPA）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的细胞增殖和胶原合成的影响。方法：用消化法培养新生SD大鼠的CF，实验分为四组。对照组（加含5％小牛血清的DMEM培养液），实验组根据不同浓度的LPA又分为10^-6μmol／L组、10^-7μmol／L组和10^-8μmol／L组。用单四唑（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成，分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响。结果：①随着LPA浓度的升高，MTT比色法吸光度（A490）值呈上升趋势。在药物作用48h后，仅有10^-6μmol／L组A。值较对照组有显著升高（P〈0．05）；作用至72h后，10^-8μmol／L组、10^-7μmol／L组、10^-6μmol／L组A490值均较对照组显著升高（P〈0．05）；作用至96h后，各实验组A。值较对照组均有显著升高（P〈0．05和P〈0．01）。②随着LPA浓度和作用时间的增加，CF分泌的胶原呈递增趋势。LPA作用48h仅10^-6μmol／L组胶原浓度较对照组显著升高（P〈0．01）；作用至72h后，10^-7μmol／L组、10^-8μmol／L组胶原含量较对照组有显著升高（P〈0．05和P〈0．01）；作用至96h，各实验组胶原含量均较对照组有显著升高，10^-6μmol／L组与10^-7μmol／L组、10^-8μmol／L组之间差异亦有显著性意义（P〈0．05）。结论：LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。     

川芎嗪对心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的观察川芎嗪（TMP）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的增殖与胶原合成的影响。方法用消化法培养新生SD大鼠的CF，用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成．观察不同浓度TMP对CF增殖和胶原合成的影响。结果随着TMP浓度的升高，MTT比色法A490值呈下降趋势；CF分泌的胶原随着TMP作用浓度和时间的增加呈递降趋势。结论TMP具有抑制SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。     

川芎嗪抑制瘢痕成纤维细胞增殖及胶原的合成

目的：研究川芎唪治疗增生性瘢痕的机制。方法：对增生性瘢痕成纤维细胞进行体外培养,通过ＭＴＴ法检测成纤维细胞细胞的增殖生,用羟脯氨酸（ＨＰ）比色法测定细胞胶中成含量。结果：ＭＴＴ法显示川芎嗪增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性,可以减少成纤维细胞的胶原合成使细胞形态学发生改变。结论;川芎唪可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成。     

溶血磷脂酸对人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的探讨溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对人肺成纤维细胞(HFL-1)Ⅰ型胶原(procollagen typeⅠ,PCOLⅠ)合成的影响。方法将HFL-1培养后置于6孔板中,随机分为6组:对照组,LPAⅠ、Ⅱ、Ⅲ组(用1μmol.L-1的LPA刺激6、12、24h后收集细胞),IL-13组(用100μg.L-1的IL-13作用48h后收集细胞),LPA+IL-13组(用1μmol.L-1的LPA刺激12h、100μg.L-1的IL-13刺激48h后收集细胞),每组3孔。用RT-PCR方法检测PCOLⅠmRNA的表达;用免疫组化方法检测PCOLⅠ蛋白的表达。结果免疫组化与RT-PCR方法均显示LPA刺激后,PCOLⅠ的表达降低,IL-13刺激后,PCOLⅠ的表达增高,且LPA+IL-13组PCOLⅠ表达比LPA组较高,比IL-13组较低。结论LPA可以下调HFL-1PCOLⅠ的合成。     

中药马勃对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

［摘 要］ 目的：中药马勃作用于体外培养大鼠皮肤的成纤维细胞,观察大鼠成纤维细胞增殖及胶原合成的能力,探讨马勃有效组分在细胞水平上促皮肤患处愈合的作用机制。方法：运用体外细胞培养技术对新生大鼠乳鼠皮肤的成纤维细胞进行培养,实验分为对照组（不给药组）和马勃有效组分37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L组;实验组于传代培养24 h后加入不同浓度的药物,继续培养24、48、72 h后收集细胞。采用MTT比色法测定细胞增殖,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定细胞胶原含量。结果：与对照组比较,37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L实验组的成纤维细胞增长率和成纤维细胞胶原合成能力均显著性升高（P＜0.01）。在药物作用时间方面,与对照组比较,在24、48和72 h观察细胞增殖率和胶原合成能力均显著增强,72 h最强,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：在不同剂量马勃有效组分作用下,大鼠成纤维细胞活化增殖,胶原合成的能力增强。     

丹参酮ⅡA对溶血磷脂酸致新生大鼠心脏成纤维细胞增殖及分泌转化生长因子β1的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对溶血磷脂酸诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞(CF)增殖以及分泌转化生长因子β1的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法获取心肌成纤维细胞,采用MTT法检测细胞增殖,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定不同条件下培养的CF培养液上清中的转化生长因子β1(TGF-β1)水平。结果:各组吸光度随时间增长而增加。与溶血磷脂酸组相比,低浓度丹参酮ⅡA组对溶血磷脂酸致CF增殖呈抑制趋势,但无显著差异。随着作用时间延长,浓度升高,各组与溶血磷脂酸组相比,吸光度显著降低(P<0.05或P<0.01);与溶血磷脂酸组相比,低浓度丹参酮ⅡA组对溶血磷脂酸致CF分泌TGF-β1呈抑制趋势,但无统计学差异(P>0.05),高浓度丹参酮ⅡA组在24 h后即明显降低(P<0.05),48、72 h后显著降低(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA可以浓度依赖性抑制CF的增殖及分泌TGF-β1,丹参酮ⅡA可能通过抑制TGF-β1的分泌抑制CF增殖。     

红花对增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨红花对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）增殖和胶原合成的影响及其意义。方法通过MTT比色试验和生长曲线测定法检测红花对体外培养的HSFB增殖活性的影响；^3H-脯氨酸掺入法测定红花对细胞胶原蛋白合成的影响；用光镜和电镜观察药物作用后HSFB形态学和超微结构的改变。结果红花可明显抑制HSFB的增殖和胶原蛋白的合成，且在一定范围内具有时间-剂量依赖性，以8μg／ml浓度组第3天作用最为显著；HSFB的形态和超微结构呈抑制改变。结论红花具有抑制HSFB增殖和胶原合成的作用，为应用该药治疗瘢痕提供了实验依据。     

地塞米松对肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的"探讨糖皮质激素在肾脏病治疗中可能的作用机理. 方法"采用MTT比色法和L-3H-脯氨酸掺入法,观察地塞米松对体外培养的肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响. 结果"一定浓度范围内的地塞米松抑制成纤维细胞的胶原合成,但未见其对细胞增殖有影响. 结论"糖皮质激素可作用于肾间质成纤维细胞,抑制胶原的合成,从而可延缓肾间质纤维化的进程.     

染料木素和槲皮素对成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制作用

目的：研究染料木素（genistein,GE)和槲皮素（quercetin,QU)对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法：用结晶紫染色法测定光密度值检测NIH3T3成纤维细胞增殖,用3H－脯氨酸掺入法测定3H－脯氨酸掺入NIH3T3细胞的Bq值表示胶原合成作用,结果：GE和QU都能浓度依赖性 抑制血清,血小板源生长因子（PDGF）或转化生长因子β1（TGF－β1）刺激的NIH3T3细胞增殖和胶原合成。结论：GE和QU具有体外抑制成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。     

胱抑素C对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨胱抑素C（CysC）高表达对大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖能力的影响。方法 取出生1～3d的Sperague-Dawley（SD）清洁级大鼠10只,体质量10～15g,差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞;采用Gateway技术构建重组CysC腺病毒高效表达载体(Ad-CysC)并体外转染大鼠CFs;将对数生长期的大鼠CFs随机分成正常细胞组（PBS组）,携有绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒组（Ad-GFP组）及CysC腺病毒高表达组(Ad-CysC组)。采用蛋白免疫印迹技术（WB）检测CysC蛋白在CFs中的表达情况,通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法检测CysC高表达对CFs增殖能力的影响。结果 经DNA测序及WB结果分析,CysC腺病毒高效表达载体构建成功,转染CFs 24h后（MOI=200）,Ad CysC的转染效率高达90%以上;用重组CysC腺病毒转染CFs后, CysC蛋白在24h即有明显的表达上调（P<0.05）;与PBS组及Ad-GFP组相比,转染Ad-CysC的CFs在72h的 BrdU摄取率显著提高（P<0.05）。结论 大鼠CysC腺病毒高效表达能够促进CFs增殖,可能加速心肌纤维化进程。     

粉防己碱对心肌成纤维细胞增殖、活化的影响

目的： 探讨粉防己碱（tetrandrine,Tet）对大鼠心肌成纤维细胞增殖、活化的影响。方法： 采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8C,CCK-8）的方法检测不同浓度Tet对心肌成纤维细胞增殖的抑制作用;采用蛋白质印迹（Western blot）法检测Tet对由转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β）诱导的心肌成纤维细胞 β-链蛋白（β-catenin）、波形蛋白（vimentin,Vm）、纤连蛋白（fibronectin,Fn）及平滑肌α 肌动蛋白（smooth muscle α-actin,SMA）的表达上调的影响作用;采用实时荧光定量PCR的方法检测Tet作用下,TGF-β诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原（collagen-1,Col-1）和Ⅲ型胶原（collagen-3,Col 3）的表达上调的变化。结果：CCK-8检测结果显示,分别用0.5、1、2、4、8 μmol/L的Tet处理心肌成纤维细胞,其增殖活力分别下降至对照组的94.4%、84.9%、74.9%、63.8%、50.3%,差异有统计学意义（所有P值<0.05;1、2、4、8 μmol/L处理组P值<0.001）。Western blot检测结果显示：5 μg/L 的TGF-β显著上调β-catenin、Vm、Fn及SMA的表达（P值分别为0.001、0.008、0.010、0.001）,而用0.5 μmol/L的Tet预处理心肌成纤维细胞后,可以阻断由TGF-β诱导的β-catenin、Fn、SMA的表达上调（P值分别为0.009、0.005、0.019）,但不改变Vm的表达变化（P>0.05）。荧光定量PCR检测结果表明：用0.5 μmol/L的Tet预处理心肌成纤维细胞,可以减弱由TGF β诱导的Ⅰ型及Ⅲ型胶原的表达上调,差异有统计学意义（P<0.001）。结论：Tet可以显著抑制心肌成纤维细胞的增殖,并阻断由TGF-β诱导的心肌成纤维细胞活化,据此推断,Tet可能具有抗心肌纤维化的作用,进而阻断心肌重塑。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞的生长抑制及细胞外基质合成的影响

目的:研究姜黄素对体外培养人胚肺成纤维细胞(HEF-5)MRC-5增殖、胶原表达和周期分布的影响。方法:体外培养MRC-5细胞,用姜黄素处理,分为正常对照组和10、20、30、40、50、60μmol/L姜黄素组。于37℃继续培养24 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用天狼猩红染色法测定细胞内胶原的表达,用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:姜黄素呈剂量和时间依赖性抑制MRC-5细胞的增生(P<0.05),并降低胶原的生成(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示,细胞主要停滞于G1期。结论:姜黄素能抑制MRC-5细胞的增殖和胶原的增加,并使细胞周期停滞在G1期,提示姜黄素可能通过抑制MRC-5细胞的增殖来减少细胞外基质积聚,从而发挥其抗肺纤维化的作用。     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用

目的　观察三七总甙对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用 ,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法　体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞 ,分别应用MTT比色法和3H 脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果　和对照组相比 ,三七总甙能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成 (P <0 0 1)。结论　三七总甙具有体外抗纤维化作用 ,可能成为治疗增生性瘢痕的有效药物     

钙调神经磷酸酶调控血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的作用

目的：探讨钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路对血管升压素（AVP）诱导新生大鼠心脏成纤维细胞（CF）胶原合成的调控作用。方法：采用胰酶消化法培养新生SD大鼠CF，应用羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清中羟基脯氨酸含量，CaN活性通过分光光度计测定。结果：①CF培养上清中羟基脯氨酸含量随着AVP浓度的升高而增加，其中10^-7mol／LAVP和10^-6mol／LAVP组羟基脯氨酸含量与空白对照组比较有显著性差异（均P〈0．01）；在0．5μg／mlCaN的特异性抑制剂环孢素共同干预下，羟基脯氨酸含量明显减少，并有统计学意义（P〈0．01）。②随着AVP浓度的升高，CF内CaN活性亦随之增高，与空白对照组比较，10^-7和10^-6mol／LAVP组细胞内CaN活性显著增高（P〈0．01）。③在10^-7mol／LAVP作用下，随着细胞内CaN活性的升高，CF培养上清中羟基脯氨酸含量随之增加，两者之间呈显著正相关（r=0．91，P〈0．05）：④在10^-7mol／LVI受体拮抗剂[d（CH2）5-Tyr2（Me）]AVP和10^-7mol／LAVP共同作用下，CF中CaN活性和培养上清中羟基脯氨酸含量与单独10^-7mol／LAVP作用组比较均显著降低，并有统计学意义（均P〈0．01）：结论：CaN信号通路在AVP诱导CF胶原合成过程中起到了重要的调控作用，该通路的激活可能是通过V1受体介导的.     

几类常用外用中药成分对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的体外观察珍珠粉、血竭、乳香、鹿茸、砒石的主要成分(水溶性珍珠粉、血竭素高氯酸盐、乳香水提物、鹿茸多肽、三氧化二砷)对人皮肤成纤维细胞(HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响,初步探讨其治疗慢性皮肤溃疡的机制。方法组织块法体外培养HSFb;MTT法检测细胞增殖活性;羟脯胺酸比色法测定细胞胶原合成含量。结果药物分别作用于HSFb 48 h后,水溶性珍珠粉在1.25×102~1×103mg/L,血竭素在5.0×100~2.0×101mg/L,乳香水提物在6.4×10-1~2.0×103mg/L,鹿茸多肽在6.25×10-3~4.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb具有促增殖作用,与对照组比较差异显著(P<0.01或P<0.05),三氧化二砷在1.6×10-1~8.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb增殖具有抑制作用,与对照组比较差异显著(P<0.01)。药物分别作用于HSFb 48 h后,水溶性珍珠粉在2.5×102~1×103mg/L,血竭素高氯酸盐在2.5×100~2.0×101mg/L,乳香水提物在6.4×10-1~2.0×103mg/L,鹿茸多肽在1.6×10-3~4.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb胶原蛋白合成具有促进作用,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.01),三氧化二砷在3.2×10-2~8.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb胶原蛋白合成具有抑制作用,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论敛口生肌药珍珠粉(水溶性珍珠粉)、活血生肌药血竭(血竭素高氯酸盐)、活血生肌药乳香(乳香水提物)、温阳生肌药鹿茸(鹿茸多肽)可促进人皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成,蚀疮化腐药砒石(三氧化二砷)抑制人皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成。     

抗纤维化短肽对血清诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成与I、III型胶原表达抑制作用的实验研究

①目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用。②方法选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成,采用westernblot法检测心脏成纤维细胞I型与III型胶原的表达。③结果在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清浓度的增加,反映心脏成纤维细胞增殖3H-TdR掺入量和胶原合成的3H-脯氨酸掺入量增加。表明一定浓度的血清能诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成。与0.4%血清的基础培养条件相比较,10%高浓度血清能刺激心脏成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达。在10-10~10-8mol/L浓度范围内,AcSDKP对10%诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用,并且在10-9mol/L时,AcSDKP对心脏成纤维细胞增殖、胶原合成抑制作用最强。同时10-9mol/L的AcSDKP对心脏成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达也有明显的抑制作用。④结论AcSDKP对血清介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成以及I、III型胶原蛋...     

卡维地洛对高血压大鼠心脏成纤维细胞胶原合成及NO含量的影响

目的探讨卡维地洛对自发性高血压大鼠(SHR)心脏成纤维细胞(CFs)胶原合成及NO含量的影响及其作用机制。方法以SHR和Wistar大鼠为研究对象,采用消化法培养CFs,用硝酸还原酶法检测不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00μmol/L)卡维地洛干预下CFs培养液中的一氧化氮(NO)含量,用3H-脯氨酸掺入法观察CFs的胶原合成情况。结果(1)在基础状态下培养72h,SHR空白对照组的NO含量明显低于Wistar大鼠空白对照组(P<0.01);SHR空白对照组的3H-脯氨酸掺入率明显高于Wistar大鼠空白对照组(P<0.01)。(2)卡维地洛以浓度依赖的方式促进CFs的NO含量增加。(3)卡维地洛以浓度依赖的方式抑制CFs的3H-脯氨酸掺入率。(4)在不同浓度卡维地洛干预下,SHRCFs的3H-脯氨酸掺入率随NO含量的增高而减低,二者呈显著负相关(r=-0.943,P<0.01)。结论卡维地洛能促进CFs的NO合成,直接抑制CFs的胶原合成,进一步逆转高血压大鼠的左室重构。