体外及裸鼠体内培养对甲状腺HLAⅡ类抗原阳性细胞数的影响

目的：探讨空气高氧，＾６０钴照射后体培养及裸鼠体内培养对甲状腺ＨＬＡⅡ类抗原阳笥细胞数的影响。方法：采用免疫组织化学方法测定ＨＬＡⅡ类抗原阳笥细胞数，并进行相互比较。结果：ＨＬＡⅡ类抗原阳性细胞数减少以＾６０钴照射后裸鼠体内培养组最明显，空气高氧，单纯＾６０钴照射后短时间体外培养对ＨＬＡⅡ抗原阳性细胞数无显著影响。     

B细胞融合人肝癌细胞疫苗60Co照射后生长及表型的观察*

目的：探讨B细胞与人肝癌细胞的融合细胞经60Co照射后的生长和免疫原性相关表型的变化。方法：体外照射后观察融合细胞生长曲线和软琼脂集落形成；体内采用裸鼠成瘤试验，观察体外生长和动物体内成瘤性，应用流式细胞仪检测照射后融合细胞MHC-Ⅰ，MHC-Ⅱ，B7及肝癌抗原(GP75)表达，观察其免疫原性相关表型变化。结果：经60Co照射的融合细胞失去增殖能力，4 d后可见部分细胞死亡，7 d后几乎全部死亡。60Co照射后3 d内MHC-Ⅰ，MHC-Ⅱ，B7及GP75表达无明显变化。结论：经60Co照射后融合细胞失去增殖能力，但3 d内免疫相关表型无明显变化。     

地塞米松对损伤面神经核中MHC抗原表达的影响

目的：研究地塞米松对面神经损伤后面神经核小胶质细胞ＭＨＣⅠ，Ⅱ类抗原表达的影响。，方法：采用免疫组织化学方法，以单克隆抗体ＯＸ１８ＳＷＩＭⅠ类抗原，用单克隆抗体ＯＡｘ６检测ＭＨＣⅡ类抗原，比较地塞米松治疗组与对照组ＭＨＣⅠ，Ⅱ类抗原阳性细胞数的变化。结果：地塞米松治疗组损伤面神经核中ＭＨＣⅡ类抗原表达的阳性细胞数与对照组相比明显减少（Ｐ〈０．０５），而ＭＨＣⅠ类抗原表达两组之间则没有明显改变（Ｐ〉     

人类胎儿骨髓间充质干细胞的白细胞抗原表达特征

目的:对体外培养不同代数流产胎儿骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)的人类白细胞抗原Ⅰ类(human leukocyte antigen,HLA-Ⅰ)和HLA-Ⅱ类抗原表达情况以及经过不同浓度干扰素γ(IFN-γ)作用后HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达变化进行观察,为建立干细胞库进行细胞移植提供体外实验证据.本研究经北京大学医学部伦理委员会批准.方法:胎儿MSCs取自23～24周流产胎儿,体外培养后取第5和第12代的细胞,流式细胞仪分析HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达水平.经过终质量浓度为5 μg/L或50 μg/L的IFN-γ处理后,于24,48,72,96,120 h 检测HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达;并用RT-PCR方法定性分析第13代细胞HLA-E和HLA-G的mRNA表达.结果:胎儿骨髓MSC表达HLA-Ⅰ类抗原,几乎不表达HLA-Ⅱ类抗原.IFN-γ可以上调MSCs的HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原.流式细胞分析显示HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞占总细胞的比例超过50%,但HLA-Ⅱ类抗原阳性细胞不到10%.经过50 μg/L的IFN-γ处理后,第5代细胞HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞百分率及荧光强度与未经处理的细胞相比明显增加,且荧光强度随时间延长呈现递增趋势.第12代细胞HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞百分率及荧光强度的上调幅度明显低于第5代细胞.相同浓度IFN-γ(50 μg/L)作用于第5代和第12代细胞均可上调HLA-Ⅱ类抗原,第5代细胞于48 h开始上调(59.9%),第12代细胞于72 h开始上调(48.1%).第12代细胞HLA-Ⅱ类抗原上调幅度低于第5代细胞.不同浓度IFN-γ(5 μg/L和50 μg/L)处理后,HLA-Ⅰ类抗原和HLA-Ⅱ类抗原阳性细胞百分率均明显增加.RT-PCR结果显示,胎儿骨髓MSCs有HLA-E和HLA-G抗原的mRNA水平表达.结论:胎儿骨髓MSCs可以被IFN-γ诱导上调HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原表达.体外培养传代能减低IFN-γ作用后的抗原上调幅度.胎儿骨髓MSCs具有HLA-E和HLA-G抗原的mRNA的表达.     

人胎儿卵巢免疫原性的研究

目的 :比较成人卵巢、胎儿卵巢免疫原性的差异 ,以及培养前后胎儿卵巢免疫原性的变化。方法 :对成人及培养前后胎儿卵巢的冰冻切片用HLA -ABC及HLA -DR单克隆抗体进行免疫组织化学染色 ,观察其阳性细胞形态及分布并计数。结果 :成人卵巢内HLA -ABC及HLA -DR抗原含量显著多于胎儿卵巢 (P <0 0 0 1) ,且培养后胎儿卵巢HLA -DR抗原含量显著低于培养前 (P <0 0 1) ,随培养天数的增加HLA -DR抗原含量逐渐减少 (P <0 0 1)。结论 :胎儿卵巢的免疫原性低于成人卵巢 ,且培养后进一步降低。以培养一段时间的胎儿卵巢作为移植供体 ,必将提高临床卵巢移植的成功率。     

CⅡTA基因在五种人类恶性血液病细胞株细胞中的表达及意义

目的:探讨5种血液病细胞株细胞的HLA-Ⅱ类抗原表达,以及对IFN-γ诱导HLA分子表达的反应性与MHCⅡ类分子反式激活因子 (CⅡTA) 表达的关系.方法:采用流式细胞术和免疫组化法检测肿瘤细胞HLA分子及CⅡTA 蛋白的表达,RT-PCR检测肿瘤细胞CⅡTA基因表达.混合淋巴细胞反应检测肿瘤细胞刺激外周血T细胞反应的能力.结果:肿瘤细胞HLAⅡ类分子表达与CⅡTA表达一致; 结构型或诱导型表达CⅡTA的肿瘤细胞,经IFN-γ作用后其HLAⅠ、Ⅱ类抗原表达增高;IFN -γ诱导后仍不表达CⅡTA的肿瘤细胞,其对IFN-γ促HLAⅡ表达的作用不反应.Jurkat诱导后刺激T细胞表达高水平的IL-2 mRNA.结论:某些恶性血液病细胞株细胞对IFN-γ不能诱导HLA分子表达与CⅡTA诱导型表达缺陷有关,表明CⅡTA参与调控肿瘤细胞 HLAⅠ、Ⅱ类抗原表达,可能在肿瘤免疫逃逸中起重要作用.     

胎儿与成人卵巢免疫原性的比较

目的 :比较胎儿卵巢、成人卵巢免疫原性的差异 ,并观察培养前后胎儿卵巢免疫原性的变化。方法 :对培养前后胎儿卵巢及成人卵巢的冰冻切片用人白细胞抗原 (HLA DR)单克隆抗体进行免疫组织化学染色 ,观察其阳性细胞形态及分布并计数。结果 :胎儿卵巢内HLA DR抗原含量显著少于成人卵巢 (P <0 .0 0 1) ,且培养后胎儿卵巢HLA DR抗原含量显著低于培养前 (P <0 .0 1) ,随培养天数的增加HLA DR抗原含量逐渐减少 (P <0 .0 1)。结论 :胎儿卵巢的免疫原性低于成人卵巢 ,且培养后进一步降低。以培养一段时间的胎儿卵巢作为移植供体 ,可能提高临床卵巢移植的成功率。     

CD28抗体协同表达MHC Ⅱ类分子的甲状腺细胞刺激自身T细胞增殖和活化

目的 探讨表达主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子的甲状腺细胞如何发挥抗原递呈功能.方法 分离表达MHCⅡ类分子的转基因鼠和对照小鼠的甲状腺细胞,免疫磁珠方法分离其自身T细胞,在体外共同培养,并加入抗CD28抗体.免疫荧光染色,流式细胞分析检测T细胞的增殖和活化.ELISA方法检测培养上清的细胞因子浓度.结果 单纯表达MHC Ⅱ类分子的转基因小鼠甲状腺细胞不能刺激自身T细胞的增殖和活化,然而当加入抗CD28抗体后,表达MHC Ⅱ类分子的甲状腺细胞能刺激自身T细胞的增殖、活化及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)的分泌,而T细胞对野生型小鼠的甲状腺细胞无反应.结论 加入协同刺激信号后,表达MHCⅡ类分子的甲状腺细胞也可刺激T细胞增殖活化及分泌细胞因子,具有递呈抗原的能力.     

甲鱼复合肽对肿瘤放疗的辅助作用研究

目的:研究甲鱼复合肽对肿瘤放疗的辅助作用。方法:采用人体胃癌细胞株BGC-823细胞皮下移植的方法,建立裸鼠移植瘤模型,从钴源放射治疗的抗肿瘤作用、荷瘤动物化疗后的总体生存状况、化疗药物所致白细胞减少以及骨髓抑制等方面,考察甲鱼复合肽对放疗的辅助作用。结果:甲鱼复合肽对放射治疗的抗肿瘤作用没有明显影响,与钴源单独照射组相比,甲鱼复合肽与钴源照射联合治疗组动物的瘤块体积和重量无统计学差异(P>0.05)。甲鱼复合肽可显著减轻钴源照射的毒副作用。与钴源单独照射组相比,甲鱼复合肽高(20.8g/kg)、中(10.4g/kg)剂量组动物体重显著增加(P<0.01);甲鱼复合肽还可改善钴源照射所致的骨髓抑制,其骨髓有核细胞DNA含量显著增加(P<0.01),但甲鱼复合肽对放疗裸鼠的外周血白细胞数无显著影响(P>0.05)。另外,甲鱼复合肽还可显著改善荷瘤动物经大剂量放射治疗后的生存率,动物的平均存活时间和存活率均显著提高(P<0.05)。结论:甲鱼复合肽对放射治疗的抗肿瘤作用没有明显的促进作用,但可以减轻放射治疗的毒副作用。     

106例广东汉族群体HLA基因频率的分析及其意义

目的 探讨广东汉族群体HLA抗原多态性分布的情况。方法 随机选择了106例广东籍汉族人进行HLA分型。分别采用微量淋巴细胞毒试验及PCR－SSP方法检测了HLAⅠ类,A,B位点及HLAⅡ类DR位点。结果 共检出了HLA－A位点抗原10种,HLA－B位点抗原21种,HLA－DR位点抗原13种,并与北方人群抗原分布进行对比。结论 A11,B46和B60抗原频率比北方人群有显著增高,而A1,A3、B7等抗原则相对减少,显示广东地区汉族人群与北方人群间在HLA多态性分布上有较显著的差异。     

肿瘤相关抗原CA-X体内外的差异性表达

目的：探讨肿瘤相关抗原ＣＡ－Ｘ体内外表达的差异性。方法：采用蛋白质印迹和流式细胞术分别检测肺腺癌细胞株移植裸鼠前后抗原表达的变化。结果：ＣＡ－Ｘ为高分子量糖蛋白,体外培养的ＳｐｃＡ１细胞株不表达ＣＡ－Ｘ,而一旦移植入裸鼠后,肿瘤重又表达该抗原。结论：肿瘤相关抗原ＣＡ－Ｘ移植入裸后重新表达,说明ＣＡ－Ｘ的表达调控受体内某些因素的调控,也可能与细胞间信号转导有关。     

全脑照射对小鼠室管膜下区GFAP表达及细胞增殖的影响

目的：探讨60Co-γ射线全脑照射对小鼠室管膜下区星形胶质细胞GFAP表达及细胞增殖的影响。方法：将56只昆明小鼠随机分成4组,每组14只,分别以0,5,15 Gy和30 Gy剂量进行照射,分别观察照射后1周和4周室管膜下区的GFAP和BrdU阳性细胞形态和数目。结果：①照射后1周,15 Gy组和30 Gy组室管膜下区GFAP阳性细胞数明显增多（P〈0.01）,BrdU阳性细胞数明显减少（P〈0.01）;②照射后4周,15 Gy组室管膜下区GFAP阳性细胞数仍明显增多（P〈0.01）,但其BrdU阳性细胞数恢复到对照组水平;30 Gy组室管膜下区GFAP阳性细胞数恢复到对照组水平,但BrdU阳性细胞数仍明显减少（P〈0.01）。结论：放射后室管膜下区GFAP表达可能与神经干细胞的增殖有关。     

树突状细胞疫苗诱导免疫效应细胞对肝癌细胞BEL-7402的生长抑制

目的:体内外观察多种细胞因子和/或肿瘤相关抗原(tumor allogenic antigen,TAA)刺激的正常人树突状细胞(Dendritic cells,DC)诱导免疫效应细胞对BEL-7402的生长抑制.方法:体外分别用人GM-CSF、IL-4、TNF-a、BEL-7402肿瘤相关抗原(TAA)和人IL-2刺激正常人DC和去DC的单核细胞(免疫效应细胞),6 d后混合培养DC和免疫效应细胞1 d.体外实验时效应细胞分无DC刺激组(A0组)、细胞因子培养的DC刺激组(A1组)、细胞因子和TAA培养的DC刺激组(A2组).体内实验时,裸鼠分为3组:预防组(Ⅱ),于接种BEL-7402前2天给DC激活的免疫效应细胞;治疗组(Ⅲ),待全部裸鼠移植瘤长出时给DC激活的免疫效应细胞;组Ⅱ、Ⅲ于给予DC激活的免疫效应细胞后再间断给予DC培养上清液6次.对照组(Ⅰ)给等量的1640培养液.结果:体外实验中最大杀伤效率:A2组为81%,A1组为68.1%,A0组为3.5%.体内实验中:组Ⅰ和组Ⅲ第12天时12例全部发生移植瘤;组Ⅱ,观察30 d时,6例有1例发生移植瘤,观察45 d时,仍只有1例发生移植瘤,组Ⅰ、Ⅱ相差有非常显著性意义(P=0.00466);于给予DC激活的免疫效应细胞后的第45天处死所有裸鼠并称瘤体的重量,组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ两两比较相差有非常显著性意义(P＜0.01).结论:DC在抗恶性肿瘤中有重要作用.     

湿度对人类白细胞抗原Ⅱ单克隆抗体配型技术的影响

目的 探讨湿度对人类白细胞抗原Ⅱ（Human leucocyte antigensⅡ，HLA－Ⅱ）单克隆抗体配型技术造成的影响。方法 严格控制试验条件，采用淋巴细胞毒方法，在不同季节、不同湿度条件下进行HLA－Ⅱ类单克隆抗体配型。结果 春季HLA－Ⅱ类反应结果明显弱于其它季节，不同湿度条件下HLA－Ⅱ类单克隆抗体结果有明显差别。结论 湿度对HLA－Ⅱ类单克隆抗体配型技术有影响，可导致反应弱，影响结果的准确率，甚至没办法出结果，需用分子生物学大量重复。     

CLD鼠肺成纤维细胞的原代培养及生物学行为研究

目的 建立一套可靠的CLD鼠肺成纤维细胞(1ung fibroblasts,LFs)分离、纯化和培养技术,并对其生物学行为进行研究,为高氧致肺间质纤维化体外研究提供平台.方法 足月新生Wister大鼠生后即分别持续吸入85%氧或空气,于7 d、14 d、21 d分别进行鼠肺LFs原代培养.绘制细胞生长曲线、计算细胞分裂指数、流式细胞术检测细胞周期.结果 与空气组相比,高氧组LFs增殖速度增快,处于分裂期的细胞数增多,细胞周期中处于G1期细胞的比率逐渐减少,S期细胞比率增加,且呈时间依赖关系.结论 本方法培养的LFs可用于CLD肺间质纤维化发病机制的体外研究;高氧可诱发LFs细胞周期紊乱,细胞异常增生.     

MHC-Ⅱ类抗原在角膜碱烧伤后眼组织的动态改变

目的：探讨角膜碱烧后角膜溃烂溶解穿孔以及眼内炎症的免疫学机制。方法：在大鼠角膜上制作碱烧伤模型。在烧伤后的不同阶段。制备角膜、虹膜、脉络膜以及视网膜铺片,采用卵白素-生物素过氧化物酶免疫组化方法（ABC法）,检测眼组织MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞。结果：烧伤初期,角膜及虹膜即有MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞的轻度增多。在角膜溶解穿孔阶段。MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞,结果：烧伤初期,角膜及虹Ⅱ类抗原阳性细胞的轻度增多;在角膜溶解穿孔阶段。MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞大量出现,密集分布于角膜缘及溃疡溶解处,以及虹膜、脉络膜组织中,且在形态学也发生了一些变化。当烧伤后角膜溶解期以及稳定期,均可见Ⅱ类抗原阳性细胞。结论：免疫反应可能参与了严重角膜碱烧伤角膜溶解及眼内炎症的病理过程,其发生机理可能与自身免疫反应有关。     

PSA特异性树突状细胞瘤苗过继免疫治疗小鼠前列腺癌

目的:利用LNCaP前列腺癌裸鼠模型,观察PSA特异性树突状细胞(dendritic cell,DC)瘤苗(PSA-DC)体外诱导的CTL体内过继输入的抗肿瘤效果。方法:采用裸鼠皮下接种LNCaP细胞的方法建立LNCaP前列腺癌荷瘤裸鼠模型;应用前期制备好的Non-DC、Ova-DC、Lys-DC及PSA-DC瘤苗体外诱导抗原特异性CTL细胞,并在LNCaP细胞接种第15天模型制备成功时首次将体外诱导的抗原特异性CTL细胞经尾静脉过继输入小鼠体内,7 d后重复输入1次。以初次治疗后50 d为终止点,观察肿瘤生长情况;观察各组荷瘤裸鼠的存活情况。结果:过继输入治疗后第30、50天,Non-DC、Ova-DC、Lys-DC及PSA-DC组瘤体明显大于肿瘤细胞接种第15天(P<0.01);Lys-DC、PSA-DC组瘤体明显小于Non-DC、Ova-DC组(P<0.01)。在观察期间内,Lys-DC、PSA-DC组裸鼠生存时间明显长于Non-DC、Ova-DC组(P<0.01)。结论:前列腺癌瘤苗PSA-DC体外诱导的PSA特异性CTL细胞过继输入可抑制裸鼠体内LNCaP肿瘤生长,提高裸鼠生存时间。     

金黄色葡萄球菌感染对鼻咽癌裸鼠移植瘤增殖活性的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌感染对鼻咽癌裸鼠移植瘤细胞增殖活性的影响及其可能机制。方法 24只BALB/c雌性裸鼠接种人鼻咽癌细胞HNE2,建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型。随机分成移植瘤模型对照组、移植瘤感染组和移植瘤治疗组,再从感染组裸鼠尾静脉注射金黄色葡萄球菌,制备鼻咽癌裸鼠移植瘤感染模型。造模后,每3天测量肿瘤大小,绘制生长曲线,15天后处死裸鼠,处死后称量瘤体重量,并对瘤体进行HE染色、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡检测。结果感染组裸鼠感染金黄色葡萄球菌后,瘤体迅速增大,重量明显增加,瘤体内增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数明显增多,增殖指数(PI)升高。同时发现金黄色葡萄球菌感染鼠的瘤体内细胞凋亡指数明显下降。结论金黄色葡萄球菌感染能增强鼻咽癌裸鼠移植瘤增殖活性。     

不同氧浓度暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤及CGRP的保护效应

目的 观察不同氧浓度对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞( AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用. 方法 将原代分离培养的孕19天早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,随机分为空气组、40％氧组、60％氧组、80％氧组及相关浓度氧CGRP组与相关浓度氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21％的空气或40％、60％、80％的氧气中暴露24 h;CGRP组在暴露前加入CGRP;CGRP拮抗剂组在CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37).培养24h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SP-C)的mRNA表达. 结果 与空气组比较,40％、60％、80％氧组MDA、ROS及细胞调亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均显著降低(P均＜0.01).与氧气组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞调亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均明显增高(P＜0.01).高氧CGRP拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无显著性. 结论 高于40％氧暴露24h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SP-C mRNA表达下降;随着氧浓度增加,损伤加重;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SP-C mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.     

用PCR—RFLP方法研究U937白血病细胞系HLA—Ⅱ等位基因

目的；探讨U937白血病细胞系HLA—Ⅱ类抗原的基因型。旨在临床上进—步探讨HLA—Ⅱ基因型与白血病致病的免疫遗传学关系奠定基础。方法：采用分子生物学方法，即：多聚酶链反应一限制性片断长度多态性(PCR—RFLP)分析方法对U937自血病细胞系HLA—Ⅱ类抗原DR、DQ、DP等位基因进行探讨。结果：U937白血病细胞系HLA—Ⅱ类抗原的基因型均为纯合子，等位基因分别是：DRB1 0301／0301，DQBl 0201／0201，DPBl 0402／0402。结论：通过本研究提高了对U937白血病细胞系的HLA—Ⅱ类抗原的免疫遗传学类型的认识。为临床上进一步探讨HLA—Ⅱ基因型与白血病的免疫遗传学关系具有重要指导意义。