一测多评法测定黄连中小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱含量

 目的在建立黄连中的5个主要生物碱同步测定方法的基础上,建立一测多评法的方法学考察模式,验证该方法在黄连中应用的可行性和技术适应性。方法以黄连药材为研究对象,以药材中5个典型生物碱为指标,建立小檗碱与巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱的相对校正因子,并用该校正因子进行巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱的含量计算(计算法),实现一测多评;同时采用外标法测定药材中该5种生物碱的含量(实测法),并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。结果28批黄连药材和饮片中5个生物碱的含量可以用一测多评法进行测定,其计算值与实测值间无显著差异(RSD<5%)。结论以小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱同步测定的一测多评法控制黄连药材和饮片的质量是可行的、准确的。     

一测多评法比较不同黄连炮制品中4种生物碱的含量

目的:比较黄连及其不同炮制品中表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的含量.方法:应用一测多评法同时测定黄连不同炮制品中4种生物碱的含量.Agilent TC-C18色谱柱(2)(4.6 mm ×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(50∶50,每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4g,再以磷酸调节pH 4.0),检测波长345 nm,柱温25℃,流速1mL·min-1,理论塔板数以盐酸小檗碱计算应大于2 000.结果:黄连经不同方法炮制后表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的含量均有不同程度的降低.结论:试验建立的含量测定方法快捷、经济,可作为黄连不同炮制品的质量检测方法.     

正交实验法优选黄连-厚朴药对的提取工艺

目的:优选黄连-厚朴药对的提取工艺。方法:以小檗碱与厚朴总酚的提取率以及出膏率为指标,采用正交实验法,考察溶剂量,提取次数,提取时间,醇浓度对各指标的影响。运用高效液相色谱法,测定小檗碱,厚朴总酚的含量,流动相:乙腈:0.3%磷酸(三乙胺调节pH=4.0)。结果:黄连厚朴的最佳提取工艺为10倍量药材,70%乙醇回流,提取60min,提取1次。结论:该工艺稳定,可靠,省时,省材。为黄连-厚朴配伍的复方制剂的工艺研究提供了实验依据。     

一测多评法同步测定肿节风药材中6种成分

目的:建立肿节风药材中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、迷迭香酸6个成分的一测多评法。方法:以异嗪皮啶为研究对象,建立肿节风药材中该成分与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸的相对校正因子(分别为1.0621、1.0576、1.0603、1.8517、0.8840),利用相对校正因子计算6种成分的含量,实现一测多评;同时用外标法测定6种成分的绝对含量;以验证一测多评的准确性和科学性。结果:建立的校正因子重现性良好,肿节风药材中6种成分采用校正因子计算值与外标法实测值之间没有显著性差异。结论:该方法准确、操作简单、专属性和重现性良好,可实现只用异嗪皮啶一种对照品同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸的含量。     

一测多评法测定白芍中芍药苷与芍药内酯苷的含量

目的:建立白芍中芍药苷和芍药内酯苷的一测多评含量测定方法.方法:采用HPLC和UPLC法,以芍药苷为内标物,建立其与芍药内酯苷的相对校正因子,并进行含量测定,实现一测多评.同时采用外标法测定16批白芍中芍药苷、芍药内酯苷的含量,验证一测多评法的准确性.结果:建立的校正因子重现性良好,采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间无显著差异.结论:在对照品缺乏的情况下,以外标法测定芍药苷,利用相对校正因子实现对芍药内酯苷的含量测定是可行的.     

一测多评法同时测定参桂理中丸中6种成分的含量

目的建立同时测定参桂理中丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd和6-姜辣素含量的一测多评法,验证该方法在参桂理中丸质量控制应用中的科学性和可行性。方法采用高效液相色谱法,以人参皂苷Rb1为内参物,建立该成分与白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd和6-姜辣素的相对校正因子,利用相对校正因子来计算各成分的含量,同时将一测多评法计算结果和外标法实测值进行比较。结果相对校正因子的耐用性良好,一测多评法计算结果与外标法测定结果无显著差异。结论利用相对校正因子对参桂理中丸中6种成分的含量测定是可行的,一测多评法可以用于参桂理中丸的质量评价研究。     

一测多评法同时测定侧柏叶中5种黄酮类成分的含量

目的:建立HPLC一测多评法(QAMS)同时测定侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、阿福豆苷、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮5种黄酮类成分的含量。方法:以槲皮苷为内参物,分别建立其与其他4种成分间的相对校正因子(RCF),并计算各成分含量;再将QAMS法与传统外标法的结果进行比较。结果:建立的QAMS方法符合定量分析的要求。QAMS法和外标法的含量测定结果比较,其准确度良好。结论:该实验建立的一测多评法简单、准确,适用于侧柏叶中5种黄酮成分含量的同时测定。     

一测多评法测定苦参中5种生物碱的含量

目的:在建立苦参中5种主要生物碱成分同时测定方法的基础上,建立5种生物碱一测多评测定方法,验证该方法在苦参含量测定中应用的可行性和技术适应性.方法:以苦参中5个主要生物碱成分为指标,建立氧化苦参碱与槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱的相对校正因子,并考察了相对校正因子的重现性;同时采用外标法测定该5种生物碱的含量.结果:相对校正因子的重现性较好;21批苦参药材和饮片中5个生物碱的含量用一测多评法进行测定,其计算值与外标法实测值间无明显差异.结论:以同步测定氧化苦参碱、槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱的一测多评法控制苦参药材和饮片的质量是可行的、准确的.     

黄连解毒片中黄连黄柏提取工艺的优选

目的：优选黄连解毒自片中黄连黄柏的提取工艺。方法：以季铵总碱的含量为指标,应用Ｌ９（３＾４）正交试验设计筛选黄连解毒汤中黄连黄柏的最佳提取工艺条件。结果：以的主次因素为：Ｂ〉Ａ〉Ｄ〉Ｃ（Ａ为煎煮时间;Ｂ为煎煮次数;Ｃ为加水量;Ｄ为醇提用量）。最佳提取条件为：加倍水量,煎煮１２０ｍｉｎ,共煎３次,干燥、粉碎,再用４０倍无水乙醇回流提取３次,每次３０ｍｉｎ,趁热过滤,回收乙醇 ,干燥即得。根据优选工艺     

一测多评法与外标法测定养血止疼丸中3种丹参酮类成分

目的:采用一测多评法测定养血止疼丸中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量,验证一测多评法(QAMS)的适用性。方法:以丹参酮ⅡA为内参物,建立其与丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的相对校正因子,考察不同仪器、不同色谱柱对相对校正因子的影响。分别用外标法测定丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量,后者与计算值进行比较。结果:10批养血止疼丸中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量可以用一测多评法进行测定,隐丹参酮、丹参酮Ⅰ含量的计算值与实测值间无显著差异。结论:一测多评法可用于养血止疼丸中丹参酮类成分的含量测定。     

星点设计-效应面法优化黄连提取工艺

目的:优选黄连提取工艺.方法:以乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间为自变量,以总评“归一值”(包括浸膏得率,小檗碱、黄连碱、黄连总碱的质量分数)为因变量,对自变量各水平进行多元线性回归及二项式拟合;采用效应面法优选提取工艺,并对结果进行预测分析.结果:优选的提取工艺为10倍量50％乙醇提取3次,每次50 min.提取率实测值与预测值偏差为-2.27％,二项式拟合r=0.9362.结论:优选的黄连提取工艺简便,预测性良好.     

黄连软化与切制工艺优选

目的:优化黄连的软化与切制工艺.方法:以盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量为指标,采用单因素试验和正交试验优选黄连的软化和切制工艺,HPLC测定指标成分含量.结果:黄连的最佳软化方法为淋法,一般在室温下,每100 kg药材用60 L水软化48 h.黄连的最佳切制工艺为切成1～2 mm的顶头片.结论:优选的软化和切制工艺切实可行,可推广使用.     

一测多评法测定补骨脂中不同类型成分的含量

目的:探讨一测多评法在补骨脂质量评价中的应用.方法:以补骨脂药材为研究对象,选取补骨脂素为指标,确定该成分与其他药效成分——异补骨脂素、补骨脂甲素(补骨脂二氢黄酮)、补骨脂乙素(异补骨脂查耳酮)间的校对因子.考察一测多评法和外标法测得结果的差异性,并研究不同仪器及色谱柱对相对校正因子的影响.结果:补骨脂素对异补骨脂素的相对校正因子、补骨脂素对补骨脂甲素的相对校正因子及补骨脂素对补骨脂乙素的相对校正因子分别为0.8630(1.17％),0.299 6(0.86％),0.201 3(0.37％);一测多评法和外标法测得的数据间RSD均＜3％;不同仪器及色谱柱所得的相对校正因子无显著性差异.结论:一测多评法用于补骨脂的质量评价是可行的.     

黄连非生物碱类化学成分研究

目的:对黄连中非生物碱类化学成分进行分离和鉴定。方法:利用各种色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和NMR,MS等波谱技术鉴定化合物的结构。结果:从黄连乙醇提取物中分离鉴定了13个化合物,包括7个木脂素,3个简单苯丙素,2个黄酮,1个酚酸,分别为erythro-guaiacylglycerol-8-O-4’-(coniferyl alcohol)ether(1),threo-guaiacylglycerol-8-O-4’-(coniferyl al-cohol)ether(2),(+)-松脂醇[(+)-pinoresinol,3],(+)-5’-甲氧基松脂素[(+)-medioresinol,4],(+)-落叶松树脂醇[(+)-lar-iciresinol,5],(+)-5’-甲氧基落叶松树脂醇[(+)-5’-methoxylariciresinol,6],(+)-异落叶松树脂醇[(+)-isolariciresinol,7],绿原酸(chlorogenic acid,8),阿魏酸(ferulic acid,9),Z-咖啡酸硬脂醇酯(Z-octadecyl caffeate,10),鼠李素(rhamnetin,11),汉黄芩素(wogonin,12),香草酸(vanillic acid,13)。结论:化合物1,2,4,6,10～13为首次从黄连属植物中分离得到。     

雅连、味连治疗复发性口疮疗效差异性——分层区组、随机双盲、平行对照、多中心临床试验报告

目的:比较不同基源黄连(雅连、味连)治疗复发性口疮疗效差异,确定最能代表黄连清热燥湿、泻火解毒功效的基源种。方法:复发性口疮(心胃热盛证)的患者,随机分为2组。雅连组口服雅连提取物3 g,每日3次,味连组口服味连提取物3 g,每日3次,疗程7 d。结果:①共有131例受试者入并完成试验,其中味连组65例、雅连组66例。②治疗7 d后比较,两组疾病疗效差异有统计学意义(P<0.05),雅连优于味连;③治疗7 d后比较,两组心胃热盛证疗效差异有统计学意义(P<0.05),雅连优于味连。④治疗7 d后比较,两组主证(口疮疼痛、口疮溃疡大小)改善程度差异有统计学意义(P<0.05),雅连优于味连。⑤味连组和雅连组均无不良事件发生。结论:雅连在口疮疗效、心胃热盛证疗效以及改善口疮疼痛、口疮溃疡大小症状方面优于味连。两种基源黄连中,雅连可能更能代表黄连清热燥湿、泻火解毒之功。     

动态聚类法确定黄连种苗分级标准

目的:制定黄连种苗质量分级标准。方法:测量19个不同产地黄连种苗的株高、叶片数、叶长、叶宽、叶重及根重等指标,通过对各指标数据的相关性统计分析,并结合生产实际,确定黄连种苗质量分级的主要指标和参考指标。采用动态聚类确定黄连种苗的质量分级标准。结果:叶数是黄连种苗质量分级的主要指标,株高作为质量分级的低优指标。结论:黄连种苗分为3级,Ⅰ级种苗:叶数≥8片,14≥株高≥12 cm;Ⅱ级种苗:8≥叶数≥6,12 cm≥株高≥9 cm;Ⅲ级种苗:6≥叶数≥4,株高≥9 cm;达不到3级种苗标准的为不合格种苗。     

三白草中三白草酮提取工艺优选

目的:优选三白草中三白草酮的提取工艺参数.方法:采用HPLC测定三白草酮提出量,并以此为指标,正交试验法对粉碎度、乙醇体积分数、料液比、提取时间、浸泡时间5个因素进行考察,优选最佳提取工艺.结果:最佳提取条件为药材过10目筛,95％乙醇提取2次,第1次加14倍量乙醇浸泡2h,提取2h;第2次加10倍量乙醇提取1h.在此条件下,三白草酮平均提取得率0.21％,提取转移率为96％.结论:优选的提取工艺稳定、合理,可用于三白草中三白草酮的提取.     

增强UV-B对黄连代谢及小檗碱含量的影响

目的:测定黄连根中小檗碱含量对不同UV-B辐射强度的响应,为提高黄连小檗碱含量提供理论参考.方法:实验设置了CK(自然光),UL(0.05 W·m-2),UM(0.10 W·m-2),UH(0.20 W·m-2)4个处理组,探讨UV-B辐射下初生代谢中光合特性、PPP途径和次生代谢中酪氨酸酶及黄连根中的小檗碱含量的变化特性.结果:在UH辐射胁迫下,黄连叶片中光合色素、PSⅡ非光化学猝灭系数(qN),初始荧光(Fo),电子传递速率(ETR)以及6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性、根中小檗碱含量均较其他组低.而处于UM辐射下的黄连,光合作用能力、PPP途径、酪氨酸酶活性以及小檗碱含量均高于对照组,产生了胁迫应激反应来抵御适度的UV-B辐射.结论:黄连处于UM辐射时,通过增强光合作用及PPP途径,能提供较多的次生代谢物前体物及次生代谢物所必需的NADPH,进而小檗碱的含量也相应提高,为黄连栽培种植中提高小檗碱含量提供参考.     

黄连须根浸提液对土壤微生物及酶活性的影响

黄连Coptis chinensis是大量使用的中药材,连作障碍严重。试验在供试土壤中加入不同浓度的黄连须根浸提液(REC),研究了它们对土壤微生物和酶活性的影响。结果表明,在加入REC的土壤中,微生物碳氮量显著降低,细菌和放线菌比对照降低约60%,但真菌增加3倍左右。自生固氮菌、磷细菌、钾细菌、硝化细菌和氨化细菌均显著减少,说明土壤固(供)氮、溶磷、解钾、促生等功能受到抑制。REC对土壤酶活性的影响表现出多样性,提高转化酶活性,降低脲酶活性,对脱氢酶活性无显著影响,妨碍了土壤生物化学反应的有序进行。此外,REC减少微生物标记性磷脂脂肪酸(PLFAs)种类,降低PLFAs总量,提高真菌/细菌PLFAs比值,说明REC在抑制细菌繁殖生长的同时,相对的增加了真菌数量,致使后续作物容易发生真菌病害。REC还显著降低土壤微生物群落的多样性和均匀度指数,说明加入REC恶化了土壤生态环境,使微生物种群减少,密度降低。因此,在黄连生长过程中,根系分泌的化感物质可能改变土壤微生物种群结构,造成连作障碍。