黄芪有效组分对神经干细胞增殖作用的实验研究

目的:观察黄芪有效组分(黄芪黄酮、黄芪多糖、黄芪甲苷)对体外培养的神经干细胞的增殖作用。方法:①筛选黄芪黄酮、黄芪甲苷、黄芪多糖对神经干细胞有增殖作用的最佳浓度。③神经干细胞分为对照组、黄芪甲苷、黄芪黄酮组,分别用普通培养基及上述筛选的最佳浓度的黄芪甲苷、黄芪多糖、黄芪黄酮含药培养基进行神经干细胞培养,分别于第7天、第14天进行免疫细胞化学法染色,观察神经干细胞增殖标志物BRDU表达。结果:②浓度为0.002mg/ml的黄芪甲苷、0.02mg/ml黄芪黄酮对体外培养的神经干细胞有明显的增殖作用(P<0.05),黄芪多糖对体外培养的神经干细胞无明显增殖作用。②神经干细胞用最佳浓度的黄芪甲苷及黄芪黄酮培养7天及14天后BRDU阳性表达均较对照组显著(P<0.05)。结论:黄芪甲苷、黄芪黄酮有显著促进神经干细胞增殖的作用。     

益气生骨注射液促进体外成肌细胞增殖作用的研究

目的:研究益气生骨注射液对体外培养的成肌细胞的增殖作用.方法:将成肌细胞进行体外培养,实验组加入不同浓度的益气生骨注射液,对照组分别加入不同浓度的黄芪注射液和复方当归注射液,空白组不加任何药物.筛选出各药物对细胞增殖的最适生长浓度,并观察其对细胞的增殖作用.结果:益气生骨注射液对成肌细胞的增殖作用最强,与空白组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:益气生骨注射液有促进成肌细胞增殖的作用.     

益气生骨注射液促进体外成肌细胞增殖作用的研究

目的：研究益气生骨注射液对体外培养的成肌细胞的增殖作用。方法：将成肌细胞进行体外培养,实验组加入不同浓度的益气生骨注射液,对照组分别加入不同浓度的黄芪注射液和复方当归注射液,空白组不加任何药物。筛选出各药物对细胞增殖的最适生长浓度,并观察其对细胞的增殖作用。结果：益气生骨注射液对成肌细胞的增殖作用最强,与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,与对照组比较,差异无统计学意义。结论：益气生骨注射液有促进成肌细胞增殖的作用。     

低氧环境下黄芪注射液对人骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的探讨低氧环境下黄芪注射液对人骨髓间充质干细胞(h MSCs)体外增殖的影响。方法将体外培养的h MSCs分成常氧组和低氧组,分别用0、25、50、100、150、200、300、400、500、600、1 000μg/m L的黄芪注射液干预48 h,采用倒置相差显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖情况。结果低氧环境下,25、50、100、150、200μg/m L的黄芪注射液均可明显促进h MSCs的增殖(P<0.01),其中50μg/m L黄芪注射液的增殖效果最显著(P<0.01),达600μg/m L时产生抑制作用;常氧环境下,黄芪注射液以300μg/m L对h MSCs的促增殖作用最为明显(P<0.01),25、50、100、150、200、600、1 000μg/m L黄芪注射液均抑制h MSCs的增殖。结论黄芪注射液在一定质量浓度下可促进体外培养的h MSCs的增殖。低氧环境下,低质量浓度促进其增殖;常氧环境下,低质量浓度抑制其增殖。     

不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法取SD大鼠,无菌条件下收集股骨、胫骨骨髓内的细胞进行体外培养,选第3代细胞用于实验。川芎嗪培养液选用9个不同的浓度进行干预实验。骨髓间充质干细胞分别在不同浓度的川芎嗪培养液中培养24h后,倒置显微镜下观察细胞形态,采用MTT比色法检测骨髓间充质干细胞增殖的情况。结果在低浓度范围内,川芎嗪对细胞的增殖作用具有浓度依赖性,浓度越高越明显,但到达一定浓度后,随着川芎嗪浓度进一步增加,对细胞的增殖反而有抑制作用。0.08mmol/L的川芎嗪对骨髓间充质干细胞的增殖作用最强。结论川芎嗪对体外培养的骨髓间充质干细胞的增殖作用与剂量有关。     

黄芪香丹红花注射液对间充质干细胞增殖的影响

目的 研究黄芪香丹红花注射液对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)增殖的影响.方法 体外加药培养MSCs,用四甲基偶氮唑法检测黄芪香丹红花注射液促进大鼠MSCs的增殖作用,免疫组化检测MSCs细胞的5-溴尿嘧啶核苷(Brdu)标记阳性率.结果 发现香丹药液对MSCs的增殖与对照组比较有显著性差异;而红花、黄芪药液对MSCs的增殖无显著作用.结论 香丹注射液有促进MSCs增殖的作用.     

黄芪主要活性成分及其提取物对鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的影响

目的研究黄芪注射液、黄芪甲苷及黄芪多糖对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖的影响。方法将黄芪注射液、黄芪甲苷及黄芪多糖添加入大鼠BMSC培养基中,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测培养不同时间(24,48,72h)后的细胞活性。结果 MTT法检测结果显示0.05g/ml浓度的黄芪注射液、100μmol/L的黄芪甲苷及1mg/ml的黄芪多糖后,大鼠BMSC的细胞活性均明显高于未添加组(P0.05)。结论适宜浓度的黄芪注射液、黄芪甲苷和黄芪多糖可显著促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖。     

黄芪注射液在生理量雌二醇环境下对人乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的:探讨黄芪注射液在生理剂量雌二醇环境下对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响.方法:实验设细胞对照组,他莫昔芬对照组和生理剂量雌二醇环境下5个不同剂量的黄芪注射液组.用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,PI染色检测凋亡率,DAN ladder观察凋亡条带.结果:各剂量组黄芪注射液均无促MCF-7细胞增殖效应,且随作用时间延长,均能抑制MCF-7细胞增殖(P＜0.05),并呈剂量依赖性.在质量浓度为2×10-1～2×10-4 g/mL时,各剂量黄芪注射液作用24 h均可使MCF-7细胞周期阻滞于G0/G1或S期(P＜0.05).高剂量(2×10-1g/mL)黄芪注射液作用72 h可诱导MCF-7细胞凋亡.结论:一定剂量范围内的黄芪注射液可抑制激素受体阳性乳腺癌细胞的增殖,并诱导其凋亡,阻滞细胞的有丝分裂于G0/G1或S期.     

补肾活血法调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的实验研究

目的:探讨补肾活血汤及其拆方含药血清调控大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活性的作用。方法:体外骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,取第3代细胞,免疫荧光法鉴定细胞表面抗原,成骨及成脂诱导证实其多向分化潜能;实验分为补肾活血汤全方组、补肾组、活血组及空白对照组,运用补肾活血汤及其拆方含药血清干预第3代BMSCs 48h,并用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:MTT结果显示:体积分数5%及10%补肾活血汤全方含药血清均有促进大鼠BMSCs增殖的作用;流式细胞仪检测细胞周期显示:运用补肾活血汤含药血清干预后,处于增值分裂期(S+G2+M期)的BMSCs百分率增多,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血汤全方含药血清有促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的作用。     

生肌玉红膏提取液促进脂肪干细胞增殖的实验研究

目的:探查生肌玉红膏提取液对脂肪干细胞的增殖作用与机制,为构建中医药组织工程血管化支架提供前期基础。方法:实验分为空白组:仅加入细胞培养液与CCK-8溶液,对照组:空白组基础上加入细胞密度为4×104/m L P3代的脂肪干细胞悬液0.2 m L,实验组:对照组基础上加入生肌玉红膏梯度浓度为0.012 5、0.025、0.05、0.1 mg/m L的生肌玉红膏提取液。表面抗原及脂滴油红O染色与细胞茜素红S染色鉴定脂肪干细胞;CCK法测定脂肪干细胞增殖状况;流式细胞仪测定脂肪干细胞增殖周期及蛋白质印迹法(Western blot)测定脂肪干细胞凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax及促血管生长因子VEGF的表达。结果:脂肪干细胞P3代细胞表面抗原CD34阴性,CD90阳性,油红O染色可见细胞中的脂滴且细胞茜素红S染色阳性;生肌玉红膏提取液浓度由低到高刺激脂肪干细胞增殖率逐渐增加,0.05 mg/m L时增殖达到高峰,明显高于对照组及浓度为0.012 5 mg/m L与0.025 mg/m L组(P<0.01)及对照组;浓度为0.05 mg/m L生肌玉红膏提取液在培养后24 h与48 h脂肪干细胞细胞周期更多位于DNA合成期与合成后期,比例分别达24%与28%,高于对照组8%左右(P<0.01)并显著促进抑制凋亡蛋白Bcl-2与凋亡蛋白Bax的比例与刺激VEGF表达。结论:生肌玉红膏具有促进脂肪干细胞增殖疗效且0.05 mg/m L生肌玉红膏提取液疗效较佳,其作用机制与抗脂肪干细胞凋亡相关。     

黄芪不同有效部位配伍干预糖尿病模型大鼠 的药效研究

目的:探讨黄芪不同有效部位配伍对糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素及脂联素的影响,筛选有效干预糖尿病的黄芪有效部位。方法:SD大鼠ip STZ 52 mg·kg-1诱导糖尿病模型,分别ig给黄芪及其有效部位的不同配伍,同时设对照组;给药30d后,以血糖仪测血糖,ELISA法测血清胰岛素、脂联素。结果:糖尿病模型大鼠体重减轻,血糖升高,血清胰岛素、脂联素水平下降(P<0.05);酮苷组大鼠体重增加明显(P<0.05);黄芪组、酮糖组、酮苷组、酮糖苷组血糖降低(P<0.05),酮苷组优于糖苷组(P<0.05);黄芪组升高胰岛素作用显著(P<0.05);各给药组对血清脂联素均有调节作用(P<0.05),以黄芪、酮苷、酮糖苷组作用显著(P<0.05)。结论:黄芪及其有效部位的不同配伍调节糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素及脂联素水平的作用强度有差异,以黄芪黄酮配伍黄芪皂苷药效较优。     

痰热清注射液配合西药治疗胸外科术后肺部感染40例

目的:观察痰热清注射液配合西药治疗胸外科术后肺部感染的临床疗效.方法:将符合病例人选标准的80例胸外科术后肺部感染患者随机分为观察组、对照组各40例.两组均常规行手术治疗,术后给予广谱抗生素积极预防、控制感染.同时以盐酸氨溴索注射液30 mL+生理盐水250 mL,gtt,1次/d.观察组在对照组治疗基础上给予痰热清注射液30 mL+生理盐水250 mL,gtt,1次/d.两组患者均以7d为1个疗程,治疗1个疗程后观察疗效.结果:痊愈率观察组77.50％,对照组62.50％,两组差异显著(P＜0.05);总有效率观察95.00％,对照组82.50％,两组差异显著(P＜0.05).咳痰、发热、啰音等消失时间,住院时间,胸片病灶消失时间观察组分别为(5.82±1.45),(3.68±1.15),(5.27±1.24),(4.68±1.08),(12.62±3.28)d,对照组分别为(7.68±1.72),(5.43±1.22),(7.36±1.55),(7.83 ±1.35),(15.15±3.18)d,观察组优于对照组(P＜0.05).结论:痰热清注射液治疗胸外科术后肺部感染临床疗效显著,可缩短咳痰、发热、啰音等症状、体征消失时间,住院时间,胸片病灶消失时间.     

南蛇藤提取物含药血清对小鼠肝癌Hepa1-6细胞的增殖能力和VEGF-c表达水平的影响

目的:制备南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)兔含药血清,初步研究其对小鼠肝癌Hepa1-6细胞株的增殖能力及血管内皮生长因子-c(VEGF-c)表达水平的影响。方法:取新西兰白兔,以20 mg·kg-1.d-1南蛇藤提取物ig,按通法制备含药血清。设立低、中、高剂量组(分别含有10%,20%,30%的南蛇藤提取物含药血清),作用小鼠肝癌Hepa1-6细胞,同时设阴性对照组及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)阳性对照组,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测含药血清对细胞增殖的影响,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清VEGF-c的含量。结果:形态学上,3组COE含药血清均使细胞发生典型的凋亡改变;MTT结果显示COE中、高剂量组的含药血清能抑制Hepa1-6细胞增殖,并呈明显的时效关系;ELISA结果表明COE含药血清作用24 h后,中、高剂量组VEGF-c水平降低,与对照组相比有显著性差异。结论:COE含药血清能够有效地抑制小鼠肝癌Hepa1-6细胞的增殖,并降低细胞VEGF-c的表达水平。     

半夏、掌叶半夏及禹白附凝集素蛋白的刺激性研究

目的:研究半夏凝集素(Pinellia ternata agglutinin,PTA),掌叶半夏凝集素(Pinellia pedtaisecta agglutinin,PPA),禹白附凝集素(Typhonium giganteum agglutinin,TGA)的刺激性作用。方法:SD雄性大鼠随机分为空白组,PTA,PPA及TGA高中低剂量组(300,200,100 mg.L-1),ip给药,4 h后处死大鼠,ip生理盐水,取腹腔液测中性粒细胞迁移数目,测定腹腔液中总蛋白,一氧化氮(NO),前列腺素E2(PGE2)的含量;家兔随机分为空白组,半夏,掌叶半夏及禹白附的凝集素组及毒针晶组,半夏,掌叶半夏及禹白附的针晶加其凝集素组,观察家兔眼结膜充血,水肿及分泌物,考察PTA,PPA,TGA的刺激性作用。结果:大鼠ip PTA,PPA,TGA后,与空白组腹腔液中性粒细胞迁移数目(633.33±233.81)×106/L比较,100 mg.L-1组PTA(1 083.33±116.9)×106/L,PPA(1 033.3±150.55)×106/L及TGA(1 133.33±103.28)×106/L均具极显著性差异(P<0.01),均可引起严重的中性粒细胞向腹腔迁移,且浓度升高,作用增强;大鼠腹腔液的总蛋白,NO及PGE2的含量显著升高,均可加重针晶刺激家兔眼结膜强烈水肿。结论:天南星科中具有刺激性毒性作用的半夏,掌叶半夏及禹白附所含凝集素蛋白具有刺激性作用,是其毒性刺激性成分。     

参脉注射液联合利血生治疗化疗后白细胞减少症

目的:观察参脉注射液联合利血生治疗化疗后白细胞减少症的临床疗效.方法:将符合病例入选标准的60例患者随机分为观察组、对照组各30例.两组均给予利血生片、维生素C、维生素B口服,观察组同时给予参麦注射液(每次20mL,1次/d,静脉滴注)治疗.两组疗程均为4周,治疗结束后观察临床疗效及白细胞变化情况.结果:显效率观察组36.67％,对照组20.00％,两组差异显著(P＜0.05);总有效率观察组76.67％,对照组66.67％,两组差异显著(P＜0.05).两组白细胞计数情况治疗后1周均迅速降低,与治疗前比差异显著(P＜0.05);治疗后2周两组白细胞计数继续下降,与治疗前比差异显著(P＜0.05);治疗后3周均有所回升,但观察组[(3.58±0.4) ×109/L]较对照组[(2.82±0.6)×109L]改善更为显著(P＜0.05);治疗后4周观察组为(4.58±0.B5) ×109/L,已接近正常,与对照组[(3.20±0.74)×109/L]相比差异显著(P＜0.05).结论:利血生片联合参麦注射液治疗化疗后白细胞减少症临床疗效显著.     

终末期肾病患者血清对内皮细胞凋亡的影响及黄芪总黄酮的干预作用

目的:探讨终末期肾病患者血清对内皮细胞凋亡的影响及黄芪总黄酮的干预作用。方法:收集22例健康志愿者和25例终末期肾病规律血液透析患者的血清,在体外模拟终末期肾病患者内环境,以人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为对象,分为空白对照组(10%胎牛血清),正常对照组(10%健康人血清),终末期肾病组(10%终末期肾病患者血清),低剂量(TFA1),中剂量(TFA2),高剂量(TFA3)组(在终末期肾病组基础上分别加入0.5,1.0,2.0 g·L-1黄芪总黄酮),培养24 h后光镜下观察血管内皮细胞形态,MTT法检测细胞生存率,免疫组化法检测C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达,ELISA法检测4-羟基壬烯醛(4-HNE)的含量,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:与正常对照组相比,终末期肾病患者组细胞生存率降低(P<0.01),CHOP和4-HNE升高(P<0.05),凋亡细胞数增高(P<0.01)。黄芪总黄酮干预后,各组HUVECs生存率提高(P<0.05);CHOP的表达降低(P<0.05),中剂量剂量组优于低剂量组(P<0.01),但高剂量组与中剂量组差异无统计学意义;4-HNE含量降低(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05),呈剂量依赖性(P<0.05)。相关性分析显示:CHOP与4-HNE的含量呈正相关(P<0.01)。结论:终末期肾病患者血清可诱导HUNFCs凋亡,其机制部分与内质网应激诱导的细胞凋亡通路相关,黄芪总黄酮可通过减轻内质网应激从而抑制终末期肾病患者血清诱导的内皮细胞凋亡。     

天麻注射液治疗丛集性头痛40例

目的:观察天麻注射液治疗丛集性头痛(cluster headache,CH)的临床疗效.方法:将80例符合入选标准的CH患者随机分为观察组、对照组各40例.两组患者均给予尼莫地平,40 mg/次,3次/d,口服.观察组在此治疗基础上加用天麻注射液800 mg+5％葡萄糖注射液500 mL静脉点滴,1次/d.两组均以1周为1个疗程,治疗2个疗程后观察两组患者临床疗效及治疗前后疼痛症状积分的变化及不良反应的发生情况.结果:治愈率观察组为77.50％,对照组为62.50％,两组差异显著(P＜0.05);总有效率观察组为92.50％,对照组为82.50％,两组差异显著(P＜0.05).两组治疗后疼痛症状积分分别为(2.12±0.71),(4.13±0.31)分,与治疗前相比差异明显(P＜0.05),观察组改善较对照组明显(P＜0.05).两组患者均顺利完成治疗,均未出现明显的不良反应.结论:天麻注射液治疗CH临床疗效显著.     

康艾注射液对大鼠肝纤维化的影响

目的:探讨康艾注射液抑制大鼠肝纤维化的作用。方法:选取雌性Wistar大鼠30只随机分成康艾注射液干预组、单纯造模组和空白对照组各10只,实验组以含0.01%二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)饮水为纤维化诱导剂,干预组在造模过程中应用康艾注射液(1 mL.kg-1,腹腔注射,每周1次)治疗,对照组腹腔注射等量生理盐水作对照,空白对照组给予正常食水作对照。大鼠在同样条件下饲养21周观察HE染色和VG特殊染色下肝脏组织的病理形态学变化。结果:HE染色后单纯对照组镜下见正常肝小叶结构破坏,被假小叶取代,可见较多硬化结节,而干预组的肝小叶结构破坏相对较轻,可见较少硬化结节;VG染色后,空白对照组的纤维化程度为(6.52±2.64)%,康艾注射液干预组的纤维化程度明显低于单纯造模组[(17.41±1.11)%vs(20.18±2.52)%],3组相比均有统计学意义(P<0.05)。结论:在DEN制备的大鼠肝纤维化模型中,康艾注射液在一定程度上可抑制肝纤维化的生长。     

野菊花多糖对小鼠免疫功能低下的保护作用

目的:研究野菊花多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的保护作用.方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型组及野菊花多糖高、低剂量组,每组10只.野菊花多糖高、低剂量组分别ig给药400,200 mg·kg-1·d-1,连续14 d;于ig的第10天开始,模型组及野菊花多糖高、低剂量组分别经腹腔注射环磷酰胺100 mg·kg-1 ·d-1,连续4d,制备免疫功能低下小鼠模型 .观察野菊花多糖对免疫功能低下小鼠碳廓清试验的影响;测定小鼠体重及胸腺、脾脏质量,计算胸腺、脾指数;采用二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应法(耳肿胀法)测定细胞免疫功能;检测血清溶血素含量.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠的各项指标均显著降低(P＜0.01).野菊花多糖高、低剂量组的碳廓清指数分别为0.027 8±0.005 9,0.019 9±0.004 7,吞噬指数分别为5.397 0±0.735 6,4.827 8±0.480 1,耳肿胀度分别为(5.23±0.98),(4.89±1.10) mg,血清溶血素分别为(0.410±0.063),(0.357±0.058).模型组的碳廓清指数为0.0134±0.0038,吞噬指数为4.231 6±0.367 2,耳肿胀度为(3.21±0.91)mg,血清溶血素吸光度(A)为0.299±0.032.各指标与模型组比较,均具有显著性差异( P＜0.01或P＜0.05).结论:野菊花多糖可增强环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的免疫功能.     

舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞活化增殖的抑制作用

目的:研究中药舒肝颗粒对体外培养活化大鼠肝星状细胞(HSC)活化增殖的影响,探讨舒肝颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法:用空白对照及0.01,0.02,0.04 g.L-1的舒肝颗粒分别处理HSC细胞系HSC-T6 24 h后,MTT比色法检测细胞增殖,光镜下观察HSC形态学变化,免疫组化法测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化。结果:舒肝颗粒作用HSC细胞24 h后,0.01,0.02,0.04 g.L-1终浓度肝星状细胞抑制率分别为7.02%,13.33%,20.85%,明显高于空白对照组,且与药物浓度相关。与对照组比较,随着舒肝颗粒药物浓度的增高,HSC的细胞增殖和胞体伸展受到明显抑制;空白对照组,舒肝颗粒0.01,0.02,0.04 g.L-1组α-SMA阳性表达率分别为(62.83±3.42)%,(47.31±2.74)%,(37.79±3.01)%,(25.74±2.83)%,各组与空白对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:舒肝颗粒抑制肝星状细胞活化、增殖并抑制α-SMA表达,可能是其抗纤维化的作用机制。