Ⅱ相毒物代谢酶基因、致癌物代谢及与大肠癌遗传易感性研究近况

 据生物转化反应的类型,毒物代谢酶相应分为Ⅰ相代谢酶和Ⅱ相代谢酶。Ⅰ相代谢酶主要有细胞色素P450 (CYP) 超家族; Ⅱ相代谢酶主要有谷胱甘肽S-转移酶( GST) 、N-乙酰化转移酶(NAT ) 、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT ) 、环氧化物水解酶( EH)等。体内的致癌物一般先由Ⅰ相代谢酶氧化、还原、水解等作用,改变毒物的功能基团,使其降解或转变为亲电团而具致癌作用; Ⅱ相代谢酶则催化毒物或Ⅰ相代谢酶的代谢产物与其极性基团结合,增加其水溶性,利于排出体外,或被活化为亲电子致突变剂或致癌剂。毒物代谢酶对致癌物的代谢反应及其多 态性在大肠癌(CRC) 的发生、发展过程中起重要作用。     

职业癌的预防

一、对职业癌的认识自1775年pott在扫烟囱工人中发现皮肤癌以后,认识到职业癌的发生是由于职业性工作中接触某些致癌因素所致。到1932年,Cook等从烟尘中分离出了相应的致癌物。1895年Rehn在德国安尼林工厂45名工人中发现3例膀胱癌,其他国家也有类似报道,认为芳香胺是引起膀胱癌的原因。国际劳动办事机构在1921年就指出2-萘胺和联苯胺是相应的致癌物,1938年Hueper等用2-萘胺诱发狗的膀胱瘤,为此提供了实验证据。从这发现以后,陆续又发现许多职业性致癌因     

某些多环烃及其“K区”环氧化物在体外-体内致癌试验系统中的活性

虽知环氧化物在多环烃代谢过程中生成,但前者是否为后者致癌作用的活性中间代谢物尚不明确。已观察了一些多环烃及其“K 区”环氧化物致癌作用的活性,但结果矛盾。作者选用了体外-体内试验系统。将年龄为一个月的 BALB/C 雌小鼠的肺组织作移植物,放入含4微克/毫升试验化合物的 Trowell 氏基质中温培30分钟,然后放入单独的基质中24小时以除去任何残余的致癌物,再将移植物植入年龄为2～     

亚硝酰胺的致癌性

跟研究亚硝胺致癌活性问题相反,对亚硝酰胺可能是致癌物这种复杂性直至最近几年仍然兴趣不大,而对脲、脲烷和胍的N-亚硝基衍生物已作了长时间的研究,只是最近几年才指出N-亚硝基-N-甲基乙酰胺和N-亚硝基-N-甲基苯酰胺大部分是在动物的胃肠道引起肿瘤。相对于需要酶的代谢活化的亚硝胺致癌物,亚硝酰胺是近致癌物。对亚硝酰胺致癌性研究容易忽略,可归因于如下一些原因。研究者推测:亚硝酰胺稍受热(<100℃)而引起的化学不稳定性和光解,使得在一般环境条件下处理它们变得非常困难(但不是不可能),因而不引起人们的注意。我们可以指出:在另一方面,亚硝胺是异常稳定的,例如,N-亚硝基二烷基胺能从20％氢氧化钠或浓硫酸溶液中回收而不变化。亚硝胺的生物学活性是因为α-羟基化     

性激素对大鼠胃致癌作用的影响

妇女胃癌发病率仅为男性的一半,而增殖型硬变性胃炎胃癌则常见于妇女,人们由此推测性激素特别是雌性激素可能在致癌过程中起重要作用.作者曾报告给大鼠致癌物N-甲基-N-硝基-亚硝基胍(MNN-G),雄性大鼠胃癌发生率极高而雌性大鼠则极少患病.为了探讨性别与发病的关系,本文作者将大鼠去势观察给致癌物后不同时间的致癌过程.Wistar 大鼠出生后四周随机分成正常雄鼠(第1组),正常雌鼠(第2组)、去势雄鼠(第3组)、去势雌鼠(第4组)、以50微克/毫升NNNG 代替水做为饮料进行     

细胞色素P-450 1A1在人胎肾上腺细胞中的表达

目的 :研究与前致癌物和致突变物代谢活化密切相关的细胞色素P 4 5 0 (cytochromeP 4 5 0 ,CYP)1A1在人胎肾上腺细胞中的表达。方法 :用酶学和RT PCR技术检测胎肾上腺和肝细胞中CYP1A1酶活性和mR NA表达 ,并进行比较。结果 :人胎肾上腺和胎肝微粒体中不能检测到CYP1A1标志酶 7-乙氧异唑O -脱乙基酶 (EROD)活性 ,同时在CYP1A1诱导剂 3 -甲基胆蒽 ( 0 .5～ 2 .0 μmol·L-1,2 4h)诱导的人胎肾上腺细胞中也不能检测到EROD活性。而动物在体实验表明 ,3 -甲基胆蒽 ( 2 5mg/kgip ,qd× 3 )致成年大鼠肝脏EROD活性增强的同时 ,大鼠肾上腺EROD活性也提高。大鼠肾上腺EROD活性明显低于肝脏。RT -PCR结果进一步表明 ,胎肾上腺和胎肝中存在CYP1A1mRNA表达。结论 :和胎肝一样 ,胎肾上腺中存在低表达量的CYP1A1,提示发育期间的胎肾上腺具有潜在的致癌可能性     

肝癌药物预防

控制和消灭肝癌最有效的途径是预防,首先的预防策略是消除或避免与致癌物接触。但要消除或避免致癌病因什分困难,况且有一些人可能对肝癌的发生具有遗传易感性。在这些情况下,肝癌的药物预防便具有重要意义。 一、抗氧化剂: (一)羟基甲苯丁酯(BHT)和叔丁基对羟基茴香醚(BHA):它们是防止脂肪变质的食物添加剂。近年Williams研究了BHT和BHA对大鼠AFB_1致肝癌的影响,单独暴露于AFB_1 20周后诱发大量转化病灶,停止暴露24周后,肝癌发生率为63％。暴露AFB_1同时饲BHT和BHA,转化病灶减少,肝细胞癌发生率和每个动物的肿瘤数目亦减少,呈剂量依赖关系。     

大鼠正常肝和化学诱发肝癌上皮细胞株的生长和结构的特性

作者比较了正常成年大鼠的几个肝细胞株和经芳香胺致癌物诱发的肝癌细胞株,在离体培养条件下形态、生长和生物学等特性,试图从中确定用以区别正常的和转化的上皮细胞的标准。所有这些株培养物在形态学和生长类型上都显示为上皮细胞而不是成纤维细胞。测定细胞生长所需培液内胎牛血清最     

硒抗癌机理研究进展

近几年来,硒抗癌研究报道较多,其抗癌机理概括如下.1 降低致癌物质的诱癌性硒通过影响乙酰氨基芴(AAF)和N—羟基AAF的代谢使其大量转化为非致癌性AAF代谢物从尿中排出.Harbach等用硒预防处理大鼠可使化学致癌物二甲肼代谢为最终致癌物的中间代谢物偶氮甲氧烷,使其从肺呼出增加(31％～69％),使二甲肼掺入腺嘌呤和鸟嘌呤减少69％～72％.作者认为,硒通过减少1,2—二甲基肼(DMH)在肝脏中的代谢及结肠组织DNA的合成,而抵抗     

人胚纤维母细胞体外诱导恶性转化过程中某些生物学标记的改变

经致癌物N-甲基-N′-硝基-亚硝基胍(MNNG)多次处理体外培养的人胚纤维母细胞诱发了恶性转化,其表现包括形态改变、转化灶形成、生长特性改变、寿命明显延长、染色体非整倍体明显增加和细胞内血卟啉衍生物(H.P.D)掺入量增高,后两种现象出现早且持续于整个观察过程,可能是人类细胞恶性转化过程中较早期出现的生物学标记。     

细胞色素P450 1B1基因多态性与乳腺癌易感性

血清雌激素的浓度是患乳腺癌危险的主要决定因素之一，雌激素在乳腺局部可通过细胞色素氧化酶P4501B1的作用代谢为4羟基雌激素而致癌，本文通过分析雌激素-细胞色素氧化酶P4501B1-乳腺癌之间的相互联系，讨论了CYP1B1的基因多态性与乳腺癌易感性的关系。     

细胞色素P450 1A2的转基因细胞及其应用

1引言 细胞色素P450(CYP是一种含血红素酶,广泛分布于从细菌到动物中,能代谢各种外源性和内源性化合物.动物肝微粒体中的CYP能代谢外源性物质,如药物、农药、环境污染物、前突变物和/或前致癌物.细胞色素P450 1A2(CYP1A2)能代谢芳香胺、杂环胺、黄曲霉素B1等许多类化合物.转CYP1A2的各种细胞系的建立为研究CYP1A2的功能提供了新的工具.到目前为止,已经建立的细胞系有细菌、酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞.最近,CYP1A2和其他微粒体电子转运系统如NADPH-细胞色素P450还原酶共同表达成功,提高了异源性CYP1A2的代谢能力.另外,为了重建杂环胺的完全代谢活化系统,建立了同时表达CYP1A2和二相酶(phase Ⅱ enzyme)N-乙酰转移酶的细胞系.各种永生的细胞系已经在毒理学试验领域内取得发展.下面按不同的细胞系说明它们的应用.     

用荧光显微镜研究化学致癌物的细胞定位

经体内或体外方法接触致癌物的组织中,用放射自显影和亚细胞组份分离都已发现致癌物可与DNA结合。作者则用荧光显微镜直接证明了动物接受致癌物后,其细胞质和细胞核中有致癌物的存在。作者选用了下列经紫外线激发可产生荧光的致癌物:苯(α)芘(BP)、N-2-芴基乙酰胺(FAA)、黄曲霉毒素B_1(AFB)、5-氧代-5H-苯(c)异氧萘(4,3-b)吲哚(R 47)、苯(c)萘并(1,2-j)甲基-4-吖啶(BNMA)(原文为benzo(c)naphto(1,2-j)methyl-4-acridine,     

基因芯片技术研究抗病毒药物Bay41-4109的肝毒性机制

背景与目的:研究新型抗乙肝病毒药物Bay41-4109的肝毒性机制.材料与方法:用典型诱导剂苯巴比妥作为对照,观察大鼠连续5d灌胃给予Bay41-4109后肝脏脏器系数的变化,并对肝脏进行组织学检查;用MTT比色法进行HepG2细胞毒性实验.然后利用大鼠和人的全基因组芯片,分析Bay41-4109对大鼠肝脏和人肝细胞基因表达谱的影响,并对基因芯片数据进行聚类分析和初步功能分析,采用RT-PCR对部分差异表达的基因进行验证.结果:Bay41-4109和苯巴比妥均引起大鼠肝脏脏器系数显著增高(P＜0.05),肝组织局部出现小的灶性坏死;Bay41-4109引起大鼠肝脏发生差异表达的基因主要与药物代谢及脂肪和能量代谢有关,其中有26个基因的改变与苯巴比妥一致.体外研究发现Bay41-4109在IC20和IC50浓度下引起HepG2细胞发生差异表达的基因主要与脂肪、氨基酸、能量代谢有关,与大鼠肝脏基因芯片结果一致.差异表达基因用RT-PCR能得到验证.结论:Bay41-4109的肝毒性与药物代谢酶表达异常以及脂肪能量代谢异常有关.     

甲基亚硝胺基吡啶基丁酮致癌作用研究进展

甲基亚硝胺吡啶基丁酮(4-(methylnit-rosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanonoe,NNK)是一种香烟特异性亚硝胺,它是烟碱与硝酸钠在PH2-7, 温度20℃时进行亚硝化而产生的一种亚硝胺酮。1978年Hoffman等首次报道香烟中有NNK,并对NNK的活化代谢进行了研究。在过去的十几年中有关NNK的研究有较多报道。实验表明,NNK是香烟的主要致癌物之一,它在香烟中含量较高,且致癌性较强,可诱发动物肺癌,鼻咽癌等肿瘤。近年来,在NNK致癌机制等方面有了更进一步的认识,NNK对人的致癌作用也开始引人注目,本文就NNK的研究资料,着重近年来的研究情况作一综     

细胞色素P450 2E1在人鼻咽部的表达及体外表达模型的建立

细胞色素P4502E1是细胞色素P450（CYPs）超家族的主要成员之一,参与内源性固醇类、脂肪酸和外源性的药物;酒精及化学致癌物的代谢。亚硝是一类环境中广泛存在的间接致癌物,它在体内的代谢活化主要由CYP2E1介导。本室早些时候曾应用二亚硝基哌嗪（DNP）体外诱导人胚鼻咽上皮细胞恶性转化获得成功,因此推测在鼻咽部可能存在DNP的代谢活性酶。本文采用RT－PCR对8例人胚鼻咽上皮细胞（HENE）、1例恶性转化鼻咽细胞系（7429）、5例鼻咽癌细胞系（CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、HNE3）和10例鼻咽癌（NPC)活检组织CYP2E1表达检测后,结合Western blot对CNE2的CYP2E1表达分析,首次发现了CYP2E1在鼻咽组织的表达。同时,发现200μg/ml-300μg/ml DNP能使CYP2E1cDNA在HENE细胞表达明显增强。这些结果提示CYP2E1可能在DNP诱发的正常人胚鼻咽上皮细胞恶性转化中起作用。基于CYP2E1在化学致癌物遗传毒理学中的重要作用,为进一步对其肿瘤发生相关功能研究的需要,我们采用基因重组的方法构建了人CYP2E1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-2E1,经脂质体Lipofectamine介导分别转入NIH3T3和CNE2细胞系,通过G418筛选后随机挑选若干抗性克隆扩大培养,建成稳定传代的转染细胞株,利用PCR和Southern blot对各转染细胞克隆外源基因整合情况进行了鉴定,结果显示有4个克隆NIH3T3－A4、NIH3T3－A8、CNE2－R12、CNE2－R18呈Southern杂交阳性,且经RT－PCR及Western blot分别证实了外源基因的稳定表达。说明人CYP2E1 cDNA真核表达细胞株的建立成功。用乙醇及DNP分别对此模型进行诱导后的表达检测发现CYP2E1蛋白水平的增加主要与mRNA水平增高有关,可能是二者介导了CYP2E1的转录活化或mRNA的稳定。可以预见,CYP2E1cDNA真核表达细胞株的建立将为CYP2E1相关的化学致癌机制的阐明打下坚实基础。     

93. 细胞色素P450 2E1在人鼻咽部的表达及体外表达模型的建立

细胞色素P4502E1是细胞色素P450（CYPs）超家族的主要成员之一，参与内源性固醇类、脂肪酸和外源性的药物、酒精及化学致癌物的代谢。亚硝胺是一类环境中广泛存在的间接致癌物，它在体内的代谢活化主要由CYP2E1介导。本室早些时候曾应用二亚硝基哌嗪（DNP）体外诱导人胚鼻咽上皮细胞恶性转化获得成功，因此推测在鼻咽部可能存在DNP的代谢活化酶。本文采用RT-PCR对8例人胚鼻咽上皮细胞（HENE）、1例恶性转化鼻咽细胞系(7429）、5例鼻咽癌细胞系（CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、HNE3）和10例鼻咽癌（NPC）活检组织CYP2E1表达检测后，结合Western blot对CNE2的CYP2E1表达分析，首次发现了CYP2E1在鼻咽组织的表达。同时，发现200 μg/ml～300 μg/ml DNP能使CYP2E1 cDNA在HENE细胞表达明显增强。这些结果提示CYP2E1可能在DNP诱发的正常人胚鼻咽上皮细胞恶性转化中起作用。基于CYP2E1在化学致癌物遗传毒理学中的重要作用，为进一步对其肿瘤发生相关功能研究的需要，我们采用基因重组的方法构建了人CYP2E1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-2E1，经脂质体Lipofectamine介导分别转入NIH3T3和CNE2细胞系，通过G418筛选后随机挑选若干抗性克隆扩大培养，建成稳定传代的转染细胞株。利用PCR和Southern blot对各转染细胞克隆外源基因整合情况进行了鉴定，结果显示有4个克隆NIH3T3-A4、NIH3T3-A8、CNE2-R12、CNE2-R18呈Southern杂交阳性，且经RT-PCR及Western blot分别证实了外源基因的稳定表达。说明人CYP2E1 cDNA真核表达细胞株的建立成功。用乙醇及DNP分别对此模型进行诱导后的表达检测发现CYP2E1蛋白水平的增加主要与mRNA水平增高有关，可能是二者介导了CYP2E1的转录活化或mRNA的稳定。可以预见，CYP2E1 cDNA真核表达细胞株的建立将为CYP2E1相关的化学致癌机制的阐明打下坚实基础。     

大鼠肺鳞癌caspase-3基因表达水平与其细胞增殖关系的研究

目的　探讨caspase 3在大鼠肺鳞癌癌变转化过程中的表达及其与细胞增殖的关系。方法　Wistar大鼠 60只 ,其中 5 0只用化学致癌物 3 甲基胆蒽 (MCA)及二乙基亚硝胺 (DEN)碘油溶液于左肺叶支气管灌注诱发大鼠肺鳞状细胞癌 ,10只作为对照。应用免疫组织化学S P法检测促凋亡基因caspase 3和增殖细胞核抗原 (PCNA)在癌变过程中的表达。结果　 3 4例大鼠肺鳞癌中 15例 (4 4 .12 % )有caspase 3的阳性表达 ,阳性系数为 1.3 8± 0 .95 ,均显著低于对照组大鼠支气管粘膜上皮细胞 (P =0 .0 0 7,P <0 .0 1)和癌前病变 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。对照组大鼠支气管粘膜上皮区、实验组大鼠癌前病变区与肺癌区PCNA的平均增殖指数 (PC NA LI)分别为 :14 .10± 5 .0 2、2 8.13± 8.72、41.88± 14 .2 4,两两比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。Caspase 3与PCNA LI呈显著负相关 (r =-0 .73 0 6,P <0 .0 1)。结论　Caspase 3失表达促进了肿瘤细胞的生长 ,可能在大鼠肺鳞癌的发生发展中起着重要的作用。联合检测caspase 3和PCNA蛋白可作为肺鳞癌癌变的主要参考指标。     

谈谈环境中的化学致癌物质

目前认为2/3以上人类癌瘤与外环境因素有关。资料表明近年来由于工业迅速发展,环境污染日益严重,肺癌发病率不断增加。美国从40年代至70年代,男性肺癌死亡率提高了18倍。环境致癌物中约80～90％为化学物质。迄今,已有1000余种化学致癌物质已由动物试验证实。 化学致癌物的作用可分为二类:一类是能直接引起人和动物癌的化学物质称为直接致癌物;一类需通过体内代谢转化过程或激活后才能起致癌作用的称为前致癌物。另一类本身单独不能致癌,但能促进致癌物质起致癌作用的称促癌物。环境中化学致癌物质主     

葡多酚对N-亚硝基化合物诱变性的抑制作用

背景与目的:探讨葡多酚(grape procyanidin,GPC)对N-亚硝基化合物诱变性的抑制作用.材料与方法:采用0.5%的亚硝酸钠经口灌胃诱发大鼠肝细胞突变,2个GPC实验组同时经口分别给予GPC 100和10 mg/kg,8周后杀鼠,用免疫组织化学技术检测肝细胞突变型P53蛋白表达水平和用微核分析技术检测骨髓嗜多染红细胞微核率.结果:诱变损伤组突变型P53蛋白表达的阳性细胞平均值为84.95±6.33(个),骨髓嗜多染红细胞微核率为37.40%,高剂量GPC组分别为16.30±1.63(个)和8.40%,低剂量GPC组则分别为57.50±4.68(个)和24.20%,高、低剂量GPC组与诱变损伤组之间的差异均有显著性(P＜0.01).结论:GPC可降低亚硝酸钠引发的突变型P53蛋白表达和骨髓嗜多染红细胞微核率水平,GPC对N-亚硝基化合物的诱变性有抑制作用.