福莫特罗和ICI118551对大鼠骨髓间充质干细胞来源的成骨样细胞功能的影响

目的:研究选择性β2肾上腺素能激动剂福莫特罗(Formoterol)和阻滞剂ICI118551对体外由大鼠骨髓间充质干细胞(MMSC)成骨分化的影响,探讨β2肾上腺素能受体信号对骨代谢的影响.方法:取3周龄雌性SD大鼠,全贴肇筛选法培养MMSC.用条件培养液诱导向成骨细胞分化后分别加入不同浓度Formoterol和ICI118551,检测细胞碱性磷酸酶,骨钙素的分泌水平和细胞增殖率.结果:MMSC成功诱导分化为成骨样细胞,不同浓度(10-5～10-9mmol/L)的Formoterol均可抑制成骨样细胞分泌碱性磷酸酶,骨钙素和细胞增殖.高浓度ICI118551(10-5和10-6mmol/L)抑制成骨样细胞分泌碱性磷酸酶,骨钙素和细胞增殖,低浓度ICI118551(10-8和10-9mmol/L)则可促进成骨样细胞分泌碱性磷酸酶,骨钙素和细胞增殖.结论:β2肾上腺素能受体激动剂可抑制体外成骨样细胞的功能和细胞增殖,而阻滞剂对成骨样细胞功能和增殖的影响与其浓度有关.     

ICI118551和福莫特罗对大鼠成骨样细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究选择性β2肾上腺素能受体激动剂福莫特罗(Formoterol)和阻滞剂ICI118551对体外由大鼠骨髓间充质干细胞(MMSCs)诱导分化的成骨样细胞增殖和凋亡的影响,探讨β2肾上腺素能受体信号对骨代谢的影响。方法:取3周龄雌性SD大鼠,全贴壁筛选法培养MMSC,用条件培养液诱导向成骨细胞分化后分别加入不同浓度Formoterol和ICI118551,检测细胞增殖率和细胞凋亡率。结果:MMSC成功诱导分化为成骨样细胞,不同浓度(10-5～10-9mmol/L)的Formoterol均可抑制成骨样细胞增殖。高浓度ICI118551(10-5和10-6mmol/L)抑制成骨样细胞细胞增殖,低浓度ICI118551(10-8和10-9mmol/L)则可促进成骨样细胞增殖。不同浓度(10-5～10-9mol/L)的福莫特罗和ICI118551对成骨样细胞的凋亡无明显影响。结论:β2肾上腺素能受体激动剂可抑制体外大鼠成骨样细胞增殖,而阻滞剂对成骨样细胞增殖的影响与其浓度有关。β2肾上腺素能受体激动剂和阻滞剂对大鼠成骨样细胞凋亡无明显影响。     

不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律分析

目的:建立一种灵敏度高,特异性强的成骨细胞内雌激素受体检测方法,探讨不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律,以此拟描述不同年龄人类女性个体成骨细胞内雌激素受体表达的生理曲线.方法:以不同月龄雌性SD大鼠为标本,二次酶消化法收集成骨细胞并培养,倒置相差显微镜观察成骨细胞形态,钙钴法碱性磷酸酶染色、上清液碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(OCN)检测对成骨细胞进行鉴定,应用流式细胞仪对不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体进行检测, 根据每个成骨细胞被激发后标记-FITC的雌激素受体(ER)抗体荧光强度来表达细胞内ER的含量.结果:二次酶消化法获得的成骨细胞,形态呈多边形,碱性磷酸酶染色阳性细胞染色率80%,不同培养时间的成骨细胞和成纤维细胞上清液碱性磷酸酶和骨钙素含量相比较成骨组明显高于成纤维组,统计学检验有显著意义(p<0.01),流式细胞仪检测结果显示: 1、2月龄组ER荧光强度低表达,3月组ER荧光强度虽然呈低表达但已经显示出上升趋势,4月组以后ER荧光强度表达逐渐升高,至8、9、10月ER荧光强度表达至高峰,11月组之后各组ER表达荧光强度呈下降趋势.结论:二次酶消化法可获得较多的成骨细胞,符合成骨细胞的生物学特性,可作为成骨细胞相关研究的细胞来源.雌性SD大鼠成骨细胞内含有丰富的ER,其表达有赖于雌激素的存在.雌性SD大鼠成骨细胞内ER表达随月龄增加呈现出1、2、3月组ER低表达,4月组以后ER表达逐渐升高,至8、9、10月ER表达至高峰,11月组之后各组ER表达呈下降趋势的规律性变化.     

大豆异黄酮对体外原代大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的 :研究大豆异黄酮对体外培养原代大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法 :采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞 ,培养液中加入不同浓度的大豆异黄酮 ,以17- β 雌二醇 (E2)作为阳性对照组 ,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶 (ALP)活性及骨钙素 (BGP)含量。结果 :与正常对照组相比 ,大豆异黄酮可增加成骨细胞数量(P<0.01) ,提高细胞的ALP活性和BGP含量(P<0.01)。除ALP外 ,这些作用均低于E2(P<0.01)。结论 :大豆异黄酮可促进体外培养成骨细胞的增殖、分化 ,其作用与雌激素相似 ,但低于雌激素     

补肾健骨汤对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的考察补肾健骨汤体外对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响.方法采用酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,取第3代为实验模型,用常规计数法每日同时间检测成骨细胞增殖情况,连续7 d,观察补肾健骨汤提取液及载药血清对成骨细胞增殖的影响;以酶免法测定培养第5天细胞内骨钙素的含量.结果补肾健骨汤提取液及载药血清对体外培养的成骨细胞增殖均有显著的促进作用,其中提取液的作用在0～100 μg/mL浓度范围内呈剂量依赖性;提取液与载药血清均提高细胞内碱性磷酸酶和骨钙素含量,与空白对照组比较均有显著差异(P＜0.05).结论补肾健骨汤体外对成骨细胞的增殖及碱性磷酸酶、骨钙素的合成具有促进作用.     

不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律分析

目的探讨不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律,以此拟描述不同年龄人类女性个体成骨细胞内雌激素受体表达的生理曲线。方法以不同月龄雌性SD大鼠为标本,二次酶消化法收集成骨细胞并培养,倒置相差显微镜观察成骨细胞形态,钙钴法碱性磷酸酶染色、上清液碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(OCN)检测对成骨细胞进行鉴定。结果二次酶消化法获得的成骨细胞,形态呈多边形,碱性磷酸酶染色阳性细胞染色率80%,不同培养时间的成骨细胞和成纤维细胞上清液碱性磷酸酶和骨钙素含量相比较成骨组明显高于成纤维组。结论二次酶消化法可获得较多的成骨细胞,符合成骨细胞的生物学特性,可作为成骨细胞相关研究的细胞来源。     

大豆异黄酮对体外培养成骨细胞作用的实验研究

目的研究大豆异黄酮对体外培养成骨细胞增值及分化等.方法大豆异黄酮加入新生SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中.用噻唑蓝( MTT )比色法检测细胞增殖情况;用对硝基酚磷酸盐法测定成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、用放免法测定OB骨钙素( BGP)含量,以反映OB的分化状况.结果用大豆异黄酮体外培养大鼠成骨细胞MTT吸光值明显增加,成骨细胞ALP活性显著升高,成骨细胞BGP分泌显著增加(p<0.05).结论大豆异黄酮具有促进成骨细胞增殖分化的作用,其作用程度低于雌激素.大豆异黄酮的弱雌激素作用可能是其防治绝经后骨质疏松的重要机制.     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的 观察瘦素（leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法 培养人成骨细胞,并观察其形态及功能变化。采用MTT比色法检测不同浓度的Leptin对人成骨细胞增殖的影响,同时观察不同浓度Letptin条件下骨钙素浓度的变化,并用细胞总蛋白较正。结果 体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性,培养液中加入β-甘油磷酸及L－抗坏血酸后钙茜素红染色阳性,在加入不同浓度Leptin后1、2、3天,人成骨细胞增殖无显著变化。Leptin可刺激骨钙素分泌,呈浓度依赖性（P＜0．05）,但无时间依赖性（P＞0．05）。结论 Leptin对人成骨细胞增殖无影响,但可刺激人成骨细胞功能。     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的　观察瘦素 (leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法　培养人成骨细胞 ,并观察其形态及功能变化。采用 MTT比色法检测不同浓度的 L eptin对人成骨细胞增殖的影响 ,同时观察不同浓度 L eptin条件下骨钙素浓度的变化 ,并用细胞总蛋白较正。结果　体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型 ,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性、培养液中加入 β-甘油磷酸及 L-抗坏血酸后钙茜素红染色阳性。在加入不同浓度 L eptin后第 1、2、3天 ,人成骨细胞增殖无显著变化。L eptin可刺激骨钙素分泌 ,呈浓度依赖性 (P<0 .0 5 ) ,但无时间依赖性 (P>0 .0 5 )。结论　 L eptin对人成骨细胞增殖无影响 ,但可刺激人成骨细胞功能。     

雌马酚对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

【目的】研究雌马酚对体外原代培养的成骨细胞增殖和分化作用的影响,以探讨其预防骨质疏松症的作用机制。【方法】用含20%胎牛血清的α-MEM培养新生Wistar大鼠颅骨分离培养的成骨细胞,同时分别给予10-8mol/L-10-6mol/L的雌马酚、雌二醇或二者分别联合雌激素受体拮抗剂ICI182780,MTT法检测细胞增殖能力,对硝基酚磷酸盐法测定成骨细胞碱性磷酸酶活性。【结果】雌马酚与雌二醇均能显著增加体外培养大鼠成骨细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性,且雌激素受体拮抗剂可显著抑制雌马酚和雌二醇的上述效应。【结论】雌马酚可明显促进体外培养大鼠的成骨细胞增殖,并促进前成骨细胞向成骨细胞的分化,推测该促效应可能是通过ER途径来介导的。     

选择性β肾上腺素受体激动剂对人滑膜细胞增殖能力的影响

目的：观察β-肾上腺素受体( AR)激动药对人成纤维样滑膜细胞( FLS)增殖的作用,探讨β-AR信号对人FLS功能的影响。方法组织块培养法培养人FLS;使用肿瘤坏死因子α( TNF-α)作为刺激剂,MTT法分别检测β1-AR选择性激动剂多巴酚丁胺和β2-AR选择性激动剂沙丁胺醇对人FLS增殖作用的影响,并计算增殖抑制率;使用沙丁胺醇+β2-AR选择性拮抗剂ICI 118551观察其对FLS增殖功能的影响;Western blot法检测人FLSβ-AR、G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)和β抑制蛋白2(β-arrestin2)胞膜蛋白的表达水平。结果 TNF-α可以显著促进人FLS的增殖;β2-AR激动剂沙丁胺醇能明显抑制FLS的增殖,其拮抗剂ICI 118551能显著拮抗沙丁胺醇的作用;β1-AR选择性激动剂多巴酚丁胺对FLS的增殖无显著影响;TNF-α和沙丁胺醇均能显著降低β2-AR胞膜表达,上调 GRK2、β-arrestin2的胞膜表达。结论β2-AR信号的激活可以抑制FLS增殖;TNF-α和沙丁胺醇可以使GRK2、β-arrestin2的胞膜表达增加,β2-AR胸膜表达下降。     

低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响. 方法 分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2 培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况. 结果 与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强. 结论 在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能.     

雷洛昔芬对大鼠成骨细胞增殖分化及TGF-β表达的影响

目的: 比较雷洛昔芬与雌二醇对成骨细胞增殖分化及TGF-β表达的影响.方法: 本实验在新生SD大鼠颅盖骨第二代成骨细胞培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬,并设立雌二醇阳性对照组及空白血清对照组,对其细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原(α2)链Col-I mRNA、转化生长因子(TGF-β1)mRNA的表达进行检测分析.结果: 体外培养成骨细胞在加入不同浓度雷洛昔芬和雌二醇后,(1)细胞增殖率与空白对照组比较无统计学意义(P＞0.05).(2)ALP活性和Col-I mRNA表达与雷洛昔芬成剂量依赖性,并在高浓度组与对照组比较有统计学意义(P＜0.01).(3)TGF-β1 mRNA的表达在雷洛昔芬10-8 mol/L浓度组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).雌二醇对ALP活性、Col-I mRNA表达及TGF-β1 mRNA表达与对照组相比较均有统计学意义.结论: 雷洛昔芬与雌二醇对体外培养成骨细胞均可上调细胞分化及骨胶原表达,对细胞增殖影响均不显著,雌二醇显著上调TGF-β1 mRNA表达,且与雷洛昔芬相比较有统计学意义.此结果提示雷洛昔芬在通过雌激素受体(ER)发挥拟雌激素作用时与雌二醇作用机制可能不同.     

低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响。方法分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况。结果与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强。结论在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能。     

柠檬酸化硫酸钙对鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的:观察柠檬酸化硫酸钙对成骨细胞功能的影响,探讨该材料作为骨移植替代材料的可行性。方法:采用体外培养成骨细胞的方法,观察材料浸提液对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶和骨钙素分泌能力的影响。结果:在100%浓度柠檬酸化硫酸钙浸提液中培养的成骨细胞增殖相对缓慢(但相对增殖率>90%),其细胞核内嗜银蛋白颗粒染色分析与对照组无显著性差异(P>0.05),其分泌骨钙素、碱性磷酸酶能力显著高于对照组(P<0.01)。结论:柠檬酸化硫酸钙对成骨细胞不具有细胞毒性作用,随着硫酸钙的溶解,在材料植入部位的局部形成高钙环境,这有利于成骨细胞的增殖和分化促进新骨的形成。     

致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞功能的影响

目的 研究致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞增殖、分化的作用。方法 经酶消化法从新生兔颅骨中分离成骨细胞,进行成骨细胞的碱性磷酸酶染色及成骨能力的检测。从经铬（Cr^6 ）致敏的新西兰兔外周血分离淋巴细胞并提取其培养上清液（LCM）,并分别观察在无LCM、加未经抗原（Ｃr^6 )刺激的LCM和加经Ｃr^6 刺激的LCM等3种情况下成骨细胞增殖、碱性磷酸酶和骨钙素分泌的情况。结果 从兔颅骨分离的细胞碱性磷酸酶染色阳性,在长期培养中能够形成钙化结节。致敏淋巴细胞培养介质抑制成骨细胞的增殖、促进碱性磷酸酶的分泌,抑制骨钙素的产生。经方差分析检验均具有明显的统计学差异。结论 致敏淋巴细胞能够抑制成骨细胞的功能,可导致骨形成障碍。     

β2肾上腺素能受体阻断剂对外伤性脑损伤大鼠的脑保护作用

目的外伤性脑损伤后促炎细胞因子释放增多,并引起脑损伤。文中观察β2肾上腺素能受体(简称β2受体)阻断剂ICI 118551对外伤性脑损伤大鼠促炎细胞因子释放的影响,并研究其是否具有脑保护作用。方法成年雄性SD大鼠18只,随机均分为3组(n=6):假手术组(S组)、外伤性脑损伤组(T组)及ICI 118551治疗组(I组)。T组和I组分别静脉注射等容等渗盐水或ICI 118551 20 mg/kg,20 min后建立外伤性脑损伤模型。6 h后抽血检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及神经元特异性烯醇化酶(neuronespecificenolase,NSE)水平。结果与S组相比,T组及I组TNF-α、IL-6和NSE水平升高(P<0.05);与T组相比,I组TNF-α、IL-6和NSE水平降低(P<0.05)。结论β2受体阻断剂ICI 118551具有脑保护作用,这可能与抑制外伤性脑损伤后炎症反应有关。     

重组人胰岛素样生长因子I(rhIGF-I)对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响

目的:观察胰岛素样生长因子I(IGF鄄I)对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)的合成和钙化结节形成的影响。方法:不同浓度IGF鄄I分别刺激培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力;采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中ALP活性;VonKossa染色测定钙化结节数目。结果:一定浓度IGF鄄I能明显增加大鼠成骨细胞数量(P<0.05),在0.1～100.0ng/ml这种作用与IGF鄄I的浓度呈正相关;经IGF鄄I刺激,大鼠成骨细胞ALP合成明显高于对照组(P<0.05);经IGF鄄I刺激,大鼠成骨细胞钙化结节数目明显高于对照组(P<0.001)。结论:IGF鄄I能增加体外培养的大鼠成骨细胞数量,促进成骨细胞ALP合成和钙化,提示IGF鄄I可能直接促进骨形成。     

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3 T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响.方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平.结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达.结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达.     

17β-雌二醇和晚期糖化终末产物对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的：探讨不同浓度的17β－雌二醇（17β－estrodiol)对成骨细胞增殖分化的影响及雌激素（estrogen)与晚期糖化终末产物（advanced glycosylation end-product,AGE)共存对成骨细胞的作用。方法：用不同浓度的17β－雌二醇加入大鼠成骨细胞培养体系,不同作用时间,观察对大鼠成骨细胞增殖分化的影响,以及17β－雌二醇与AGE共存时对成骨细胞增殖的影响。结果：17β－雌二醇＞10^-9mol/L主要表现为对大鼠成骨细胞增殖的抑制作用,10^-10和10^-11mol/L则显著促进大鼠成骨细胞的增殖（P＜0．01,P＜0．05）;10^-12-10^-14mol/L的17β－雌二醇培养48h显著抑制成骨细胞增高（P＜0．01）,10^-6-10^-8mol/L 17β-雌二醇存在下培养24,48,72h,均表现出显著抑制成骨细胞的分化,10^-10mol/L 17β－雌二醇与400－1000mg/L AGE共同存在,培养24h则均表现出促增殖作用（P＜0．01）。结论：雌激素在生理浓度对大鼠成骨细胞增殖产生抑制作用,低于生理浓度具有促增殖活性,浓度进一步降低,再次出现抑制作用,且适量浓度的雌激素与高浓度AGE共存时,促进大鼠成骨细胞增殖。