抑癌基因p16原核表达载体的构建及其表达的研究

为获取具有生物学活性的ｐ１６蛋白，采用定向克隆方法将双酶切克隆质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｐ１６得到的ｐ１６ ｃＮＤＡ片段连接到双酶切的原核表达载体ｐＢＶ２２０上，转化大肠杆菌ＴＧ１得到含重组表达质粒ｐＢＶ２２０－ｐ１６的工程菌，温度诱导表达后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测证实含有ｐ１６蛋白。     

MDM2癌基因和p53抑癌基因在肉瘤组织中的表达及相关性

ＭＤＭ２癌基因和ｐ５３抑癌基因在肉瘤组织中的表达及相关性李挺张波罗杰陆哲明王颖王泰龄ＭＤＭ２基因是１９８７年从自然转化的ＢａＬＢ／Ｃ小鼠细胞株中发现的新的癌基因，其产物与抑癌基因产物ｐ５３蛋白结合并抑制介导的转录活性，部分阻断其细胞生长抑制作用［１］...     

Cyclin D1,p16在卵巢上皮性癌发生过程中的表达及相关性

研究ＣｙｃｌｏｎＤ１．ｐ１６在卵巢上皮性癌发生过程中的表达及相关性。方法采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法检测卵巢上皮性癌,交界性,良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织Ｃｙｃｌｉｎ,Ｄ１,ｐ１６的表达。结论ＣｙｃｌｉｎＤ１和Ｐ１６在卵巢上皮性肿瘤癌变过程中,两者表达水平的相关性反映了癌基因了与抑癌基因相互拮抗、抑制的机制。     

人食管癌及癌前上皮p53基因的表达

采用Ｄｉｇ标记探针原位杂交组化方法，对２０例食管癌及癌旁卷切粘膜组织切片中ｐ５３基因（Ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅｐ５３，ｗ－ｐ５３）ｍＲＮＡ水平的表达进行了研究。结果表明从上皮形态正常到鳞状细胞癌等一系列病变中，ｐ５３ｍＲＮＡ水平的表达始终是低水平的，尽管在中、重度异型增生、原位癌及高分化鳞癌中有所增强。这可能是ｐ５３基因最终未能抑制食管上皮恶性转化的原因之一。     

食管癌中3p24和11p15.5染色体位点潜在抑癌基因的研究

目的：探讨３ｐ２４染色体位点的杂和缺失和１１ｐ１５．６位点的点突变同食管癌之间的相关性,寻找这２个位点中潜在的抑癌基因,并希望通过此研究能为最后确定该基因的功能奠定基础。方法：用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测３ｐ２４染色体的３个位点（ＥＡβＭＤ,ＥＡ,βＨ,ＥＡβＲ）上等位基因的杂合缺失情况,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测１１ｐ１５,位点的点突变。结果：经ＲＦＬＰ法显示：在３ｐ２４的ＥＡβＭＤ位点,杂合缺失率为７     

p16INK4／CDKN2在胆囊癌中的表达及临床意义

为明确ｐ１６基因及其产物在胆囊恶性肿瘤中表达的意义，用免疫组化ＡＢＣ法对４６例胆囊癌ｐ１６ＩＮＫ４／ＣＤＫＮ２表达进行检测，结果表明：ｐ１６ＩＮＫ４／ＣＤＫＮ２在良性病变中的阳性率高于胆囊癌（ｐ〈０．０１）。该蛋白的失活或缺失主要见于肿瘤的中、晚阶段，与胆囊外浸润和淋巴转移密切相关（ｐ〈０．０１），与肿瘤的病理类型及分化程度无关（ｐ〉０．０５）。检测ｐ１６ＩＮＫ４／ＣＤＫＮ２对临床正确地估计肿瘤的     

抗人TGFα发夹状核酶基因逆转录病毒表达载体的构建及鉴定

构建抗和ＴＧＦα核酶基因逆转录病毒表达载体。方法；用二异丙基亚磷酰胺法合成抗人ＴＧＦα核酶基因的两条互补单链，将其退火后克隆ｐＵＣ１８，用ＥｃｏＲＩ及ＢａｍＨＩ切下该基因，定向克隆人逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ。结果；酶切后经琼脂糖凝主聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，所构建重组克隆载体ｐＵＣ１８ＴＲＺ及重组表达载体ｐＤＯＲＴＲＺ正确。     

胃癌组织中p53基因产物阳性表达与其生物学意义的关系初探

应用免疫组织化学ＡＢＣ法，用ｐ５３单克隆抗体（ＤＡＫＯｐ５３ＤＭ７００１）检测分析ｐ５３蛋白表达特征与６９例胃癌标本临床病理特性、疾病预后的关系及临床应用价值。结果：ｐ５３基因突变在胃癌中具有很高的频度，与胃癌的形成和发展密切相关；ｐ５３蛋白阳性表达对判定肿瘤的生物学行为有重要意义，是肿瘤预后不良的新的标志之一；检测组织中ｐ５３蛋白积累对胃癌早期发现可能有重要的临床意义。     

AR与cyclinD1、p16在喉鳞癌发病中作用及其相互关系

目的：探讨雄激素受体（ＡＲ）与细胞周期蛋白Ｄ１（ｃｙｃｌｉｎＤ１）、ｐ１６基因三者在喉鳞癌中的作用及相互关系。　方法：　应用ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６单克隆抗体，通过免疫组化Ｓ－Ｐ法检测４４例喉鳞癌和１１例癌旁组织中的ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６的表达。　结果：　ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６在喉鳞癌上皮组织中阳性表达分别是６８．２％，５６．８％，５２．３％，与癌旁正常组织对照，两者差异有显著性（Ｐ　＜０．０５），ＡＲ与ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达呈正相关，同样ｃｙｃｌｉｎＤ１与ｐ１６的表达呈正相关，而ＡＲ与ｐ１６之间无相关性，同时发现ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６的阳性表达与临床及病理分级无相关性（Ｐ　＞０．０５）。结论：ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６蛋白阳性表达在喉鳞癌的发生和发展中起重要作用。ＡＲ在喉鳞癌上皮细胞的阳性表达可作为诊断喉鳞癌的辅助指标。     

MDM2癌基因cDNA探针制备及在肿瘤组织中扩增的检测

为了研究ＭＤＭ＿２癌基因在人自发肿瘤中的分子改变，用逆转录ＰＣＲ法扩增出人ＭＤＭ＿２ＤＮＡ片段，将其克隆于质粒ｐＵＣ＿１８，完成了探针的制备，并检测了２０例人间叶肿瘤，发现其中７例肉瘤有不同程度ＭＤＭ＿２扩增，而３例良性者则为阴性。ＭＤＭ＿２基因改变与人肉瘤发生的关系尚待进一步研究。     

抑癌基因p16原核表达载体的构建及其表达的研究

为获取具有生物学活性的ｐ１６蛋白，采用定向克隆方法将双酶切克隆质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｐ１６得到的ｐ１６ｃＤＮＡ片段连接到双酶切的原核表达载体ｐＢＶ２２０上，转化大肠杆菌ＴＧ１得到含重组表达质粒ｐＢＶ２２０－ｐ１６的工程菌，温度诱导表达后，经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测证实含有ｐ１６蛋白。结果表明，ｐ１６原核表达载体构建成功并表达出ｐ１６非融合蛋白。     

p16,CDK4和PCNA蛋白在滋养细胞肿瘤中的表达

用ＳＰ法检测滋养细胞肿瘤，葡萄胎和正常绒毛中ｐ１６蛋白，ＣＤＫ４及ＰＣＮＡ的表达，发现：（１）ｐ１６蛋白在肿瘤表达低于绒毛中（Ｐ〈０．０５），ｐ１６蛋白阳性标本的ＰＣＮＡ表达率低于ｐ１６阴性者（Ｐ〈０．０５）。（２）ＣＤＫ４表达在滋养细胞肿瘤，葡萄胎和绒毛三者间及与ＰＣＮＡ表达间无差异（Ｐ〉０．０５）。（３）ｐ１６阳性肿瘤患者３年存活率较高，提示ｐ１６基因突变可能是滋养细胞癌变的重要原因，检测ｐ１     

云南省布依族人群EsD，PGM_1，GLOI，EAP，ADA和AK_1的分布调

采用ＥｓＤ一ｐＧＭ１一ＧＬｏＩ同步电泳分型法以及ＥＡｐ一ＡＤＡ一ＡＫ１同步电泳分型法对云南省罗平县布依族人红细胞ＥｓＤ，ＰＧＭ１，ＧＬｏＩ，ＥＡＰ，ＡＤＡ和ＡＫ１作了分型调查，计算出这６种红细胞同功酶的基因频率分别是：ＥｓＤ１．０．６３ｌ４，ＰＧＭ１１０．６９０７（ＰＧＭ６１０．０２５４），ＧＬＯ１０．１６９５，ＥＡｐＡ０．２９６６，ＡＤＡ１０．９５３４，ＡＫ１１．００００；根据这６种同功酶的表型频率计算出ＤＰ值分别为ＥｓＤ０．６０５９，ＰＧＭ１０．６ｌ０６，ＧＬＯ０．４４４２，ＥＡｐＡ０．５７３３，ＡＤＡ０．１６５８，ＡＫ１０，累积Ｄｐ值０．９６９６；累积父权排除率为５３．４６％。     

卵巢肿瘤中p16抑癌基因的表达及意义

研究抑癌基因ｐ１６与卵巢肿瘤发生与发展的关系。用免疫组化ＡＢＣ法检测了３８例卵巢癌，２２例良性或交界性卵巢肿瘤及１２例正常卵巢组织中抑癌基因ｐ１６的表达情况。ｐ１６在恶性卵巢肿瘤中检出率为，明显低于良性肿瘤，交界性肿瘤及正常卵巢组织，在肿瘤分化差，恶性程度高及复发和死亡的病例中未检出ｐ１６阳性者。     

抑癌基因p53与癌基因mdm2在肺腺癌细胞系GLC—82中的相互作用

探讨抑癌基因ｐ５３和癌基因ｍｄｍ２在肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２中的相互关系和作用。方法；采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法。用含有野生型ｐ５３基因和ｍｄｍ２基因的ＰＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体分别或共转染ＧＬＣ－８２细胞。结果：转染野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ－８２细胞生长；抑制ＧＬＣ－８２细胞ＤＮＡ合成；软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤性减慢，而ｍｄｍ２转染可拮抗野生     

抑癌基因p53在壶腹周围癌中的表达及预后意义

目的：探讨抑癌基因ｐ５３与壶腹周围癌组织学分级和预后的关系。方法：用单克隆抗ｐ５３蛋白抗体（Ｄｏ－７）通过免疫组化ＬＳＡＢ法对６１例壶腹周围癌进行检测。结果：ｐ５３蛋白在壶腹周围癌中有较高的表达，阳性率为６７．２％（４１／６７）；组织学分级呈高分化组阳性率５１．７％（１５／２９），明显低于中低分化组阳性率８１．３％（２６／３２）（Ｐ＜０．０１）；术后３年生存率为４７．５％（２９／６１），其中术后３年内死亡组阳性率８４．４％（２７／３２），明显高于存活满３年组阳性率４８．３％（１４／２９）（Ｐ＜０．０１）。结论：ｐ５３蛋白的表达与壶腹周围癌的组织学分级成正相关而与术后生存期成负相关，提示ｐ５３蛋白的表达可作为判断壶腹周围癌组织学分级和预后的一个重要参考指标     

p16,CDK_4和PCNA蛋白在滋养细胞肿瘤中的表达

用ＳＰ法检测滋养细胞肿瘤、葡萄胎和正常绒毛中ｐ１６蛋白、ＣＤＫ４及ＰＣＮＡ的表达，发现：①ｐ１６蛋白在肿瘤中表达低于绒毛中（Ｐ＜０．０５），ｐ１６蛋白阳性标本的ＰＣＮＡ表达率低于ｐ１６阴性者（Ｐ＜０．０５）。②ＣＤＫ４表达在滋养细胞肿瘤、葡萄胎和绒毛三者间及与ＰＣＮＡ表达间无差异（Ｐ＞０．０５）。③ｐ１６阳性肿瘤患者３年存活率较高。提示ｐ１６基因突变可能是滋养细胞癌变的重要原因。检测ｐ１６蛋白表达有助于估计患者预后。     

胃癌组织中p16和CyclinD1基因的表达及动态观察

目的：研究ｐ１６、ＣｙｃｌｉｎＤ１在胃癌组织中的表达，探讨其与胃癌发生、发展的关系。方法：采用ｍＲＮＡ原位杂交技术检测ｐ１６、ＣｙｃｌｉｎＤ１在不同胃粘膜病变中的表达。结果：ｐ１６在正常胃粘膜、萎缩性胃炎、不典型增生及胃癌组织中的阳性表达率渐降低，ＣｙｃｌｉｎＤ１的阳性表达率依次递增；ｐ１６的阳性表达率与肿瘤恶性程度呈负相关，ＣｙｃｌｉｎＤ１与癌分化无明显相关性；有淋巴结转移及死亡的胃癌患者ｐ１６阳性表达率明显降低，而ＣｙｃｌｉｎＤ１则明显升高。在８０例胃癌组织中，ｐ１６与ＣｙｃｌｉｎＤ１有交叉共存现象２４例，占３０％；相关分析显示，　ｐ１６、ＣｙｃｌｉｎＤ１的阳性表达率呈显著负相关。结论：ｐ１６、ＣｙｃｌｉｎＤ１与胃癌的形成密切相关；两者可单独或协同促进胃癌的发生、发展。     

p42／p44^MAPK和cyclin D1蛋白在霍奇金病中的表达及其相互关系

利用ＳＰ免疫组织化学方法检测了４０例不同类型霍奇金病９ＨＤ）ＲＨ／Ｓ细胞及１３例反应性增生淋巴结（ＲＨ）的ｐ４２／ｐ４４＾ＭＡＰＫ和ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１蛋白的表达。结果显示；ｐ４２／ｐ４４＾ＭＡＰＫ及ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１蛋白在ＨＤ之ＲＳ／Ｈ细胞中均呈过度表达，且两者阳性率呈明显的正相关，提示ＭＡＰＫ级联信号转导在ＨＤ发生中起重要作用，并通过诱导ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１蛋白高表达使ＲＳ／Ｈ细胞持续增殖及演进。     

大肠癌中p16蛋白的表达

研究大肠癌中ｐ１６蛋白的表达与肿瘤分化程度及浸转移等生物学行为的关系。方法 应用免疫组织化学ＬＳＡＢ法检测了１０５例大肠癌组织中ｐ１６蛋白的表达。结果 大肠癌ｐ１６蛋白表达的阳性率为６０．０％，随大肠癌分化程度降低，浸润肠壁深度和Ｄｕｋｅｓ分期的进展，原发灶中ｐ１６蛋白表达阳性率降低，差异具有显著性。