产毒性和致病性大肠杆菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛的检测

目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠杆菌中的分布，探讨毒力岛在大肠杆菌中的结构和功能。方法 对毒力岛的关键基因irp2,fyua和asn-intB进行PCR扩增和DNA测序，并对irp2和fyua进行原位杂交。结果 在检测的93株肠产毒性大肠杆菌的10株肠致病性大肠杆菌基因irp2的检出率分别为32.25%(30/93)和30%（3/10),fyua的阳性率为21.51%(20/93)和30%（3/10）。而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到天门冬氨酸tRNA(asntRNA）位点。结论 小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠肝菌中较高的阳性率，对于大肠杆菌毒力的变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化可能具有重要意义。     

产毒性大肠杆菌（ETEC）中毒力岛分布的研究

目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性大肠杆菌中的分布,以便于进一步深入研究毒力岛在大肠杆菌中的结构的完整性和功能。方法 PCR扩增和原位杂交及基因序列分析,结果 在检测的93株产毒性大肠杆菌（ETEC）的毒力岛的检出率为32.25%(32/93),而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到asntRNA(天门冬氨酸tRNA0位点。结论 产毒性大肠杆菌是致病性较强的病原菌之一,而小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性大肠杆菌中阳性率较高的分布。对于进一步研究产毒性大肠杆菌的毒力的变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化具有重要意义。     

PCR检测ETEC中的irp1基因

目的：探讨高致病岛（High Pathogenility Island,HPI)的irp1基因在ETEC菌株中的分布状况。方法：利用小肠结肠耶尔森菌HPI的irp1基因,设计合成引物,对ETEC菌株进行PCR（多聚酶链反应）检测。结果：94株ETEC菌中有10株呈现阳性。结论：HPI的irp1基因在小肠结肠炎耶尔森菌与ETEC（肠致病性大肠杆菌）之间存在着基因的水平转移,但其转移机制如何及转移过程有待于进一步研究。     

利用环介导等温扩增技术检测鼠肠中的致病性小肠结肠炎耶尔森菌

目的利用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)检测鼠肠中致病性小肠结肠炎耶尔森菌,为基层现场检验工作提供依据。方法利用PCR法检测致病性小肠结肠炎耶尔森菌的ail毒力基因;根据致病性小肠结肠炎耶尔森菌的ail毒力基因设计4条环状引物,并应用LAMP技术对样本进行检测;利用生化鉴定验证实验的准确性。结果 PCR法共检出10株菌具有ail毒力基因; LAMP技术检测出10株菌结果阳性;生化鉴定有114株小肠结肠炎耶尔森菌,其中10株为O∶3或O∶9血清(为致病株)。结论 LAMP技术可以应用于小肠结肠炎耶尔森菌的检测,与PCR等传统方法检测结果高度吻合;此法可用于接受过培训的基层开展工作。     

耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体的构建

目的 构建耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体,为进一步构建HPI全岛缺失株打下基础。方法根据已知小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因序列设计PCR引物,扩增并克隆irp8结构基因,作为同源重组的一侧序列,以irp5的部分序列作为同源重组的一侧序列,并将之克隆入同一载体,中间插入有卡那霉素(Km)基因(kan)、抗性标记。以自杀质粒pcvD442为载体．构建了含有irp8基因和Irp5部分序列的缺失突变载体pCO85。结果构建的突变载体经酶切及PCR鉴定克隆片段大小与预期一致。结论成功构建了致耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体,这个以小肠结肠炎耶尔森菌为靶序列构建的重组自杀质粒可应用于肠杆菌科及其他菌属HPI毒力岛全岛缺失株的构建。     

携带毒力岛大肠杆菌性小儿腹泻

目的：探讨携带毒力岛大肠杆菌（HPIEC）在小儿腹泻中的病原学地位。方法：采用PCR扩增和菌落原位杂交检测HPIEC－irp2毒力岛基因,并用血清学分型和聚合酶链反应（PCR）法检测各类致泻大肠杆菌。结果：从1032例腹泻患者粪便中分离出652株大肠杆菌,经血清学和PCR毒力基因分型,检出各类致泻大肠杆菌225株,其中肠致病性大肠杆菌（EPEC）20株,ETEC81株,产志贺样毒素大肠杆菌（SLTEC）47株,产志贺样毒素侵袭性大肠杆菌（ESIEC）74株,产毒素大肠杆菌（EIEC）3株。所有致泻大肠杆菌和未能分型的普通大肠杆菌株,再用HPIEC－irp2探针作菌落原位杂交,共检出携带毒力岛大肠杆菌（HPIEC－irp2)112株,总阳性率为17．2％。其中41例是从致泻大肠杆菌ESIEC（24／74）和SLTEC（17／47）中检出。携带毒力岛大肠杆菌性小儿腹泻的主要临床表现为食欲不振（87．5％）,腹痛（58．0％）,腹泻（＞6次／d,75．9）,发热（50．9％）,以粘液便为主（69．6％）。结论：携带毒力岛大肠杆菌是引起小儿腹泻的重要病原菌之一。     

国内首次发现携带耶尔森菌HPI毒力岛rip^-2也基因的阴沟肠杆菌

目的研究感染性腹泻患者粪便中分离的阴沟肠杆菌携带的小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛irp-^2基因，并评价其菌株的毒力和耐药情况。方法PCR扩增法检测毒力岛irp^-2基因，小白鼠腹腔注射法捡测毒力，药敏试验采用K—B纸片扩散法。结果从感染性腹泻患者粪便中分离的9株阴沟肠杆菌均扩增出irp^-2基因片段，其相对分子量与对照菌株小肠结肠炎耶尔森菌WA株（08型）的相应PCR片段一致，并具有较强的毒力。结论检出的阴沟肠杆菌含有小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛irp^-2基因且为具有毒力的菌株，与致病性密切相关。     

西南战区腹泻患者携带耶尔森菌HPI毒力岛大肠艾希菌调查

目的收集西南战区部队和地方医院腹泻患者粪便标本,做细菌分离与鉴定,分析病原菌组成。对分离的部分生化反应符合大肠艾希菌,但血清学证明不属于肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）和肠出血性大肠杆菌（EHEC）的菌株,做耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因检测,了解西南战区腹泻病人粪便中分离的大肠艾希菌携带耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因的存在情况。方法常规法分离,用肠杆菌科细菌生化鉴定编码系列（API-20E或GYZ-11e系统）和VITEK32全自动微生物生化分析仪以及弧菌科细菌生化鉴定编码系列（GYZ-9V系统）进行系统鉴定,PCR扩增法检测耶尔森菌HPI毒力岛。结果在1 352例腹泻病人中检出36个属种594株病原菌,检出率为43.93%,弗劳地枸橼酸杆菌检出率为6.14%、肺炎克雷伯菌为5.62%、变形杆菌4.66%、志贺菌4.07%,EIEC 1.85%,检出36株携带耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因大肠艾希菌,检出率为2.66%。结论从1352例腹泻患者粪便标本中分离到弗劳地枸橼酸杆菌占首位,肺炎克雷伯菌次之,变形杆菌、志贺菌分别居第三、第四位。西南战区存在携带耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因的大肠艾希菌。     

三种细菌HPI核心区ybtE基因核苷酸序列及推导氨基酸序列的比较研究

目的比较三种肠聚集性大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌和鼠疫耶尔森菌HPI毒力岛核心区ybtE基因的同源性。方法PCR扩增肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)17-2ybtE基因的完整序列,克隆后测序。用ABIPRISM软件对该ybtE基因序列与已知的鼠疫耶尔森菌HPI的ybtE基因以及小肠结肠炎耶尔森菌HPI的irp5基因进行核苷酸序列和推导氨基酸序列比较。结果核苷酸序列,EAEC17-2与鼠疫耶尔森菌及小肠结肠炎耶尔森菌之间的同源性分别为99.8%和98.2%,鼠疫耶尔森菌与小肠结肠炎耶尔森菌之间的同源性为98.2%;推导氨基酸序列,EAEC17-2与鼠疫耶尔森菌及小肠结肠炎耶尔森菌之间的同源性分别为99.8%和97.6%,鼠疫耶尔森菌与小肠结肠炎耶尔森菌之间的同源性为97.8%。结论ybtE基因作为HPI的功能基因高度保守,EAEC中的HPI可能来源于YpsHPI。     

云南省西部地区5岁以下腹泻儿童感染致病性小肠结肠炎耶尔森菌调查

目的 了解云南西部地区≤5岁腹泻儿童小肠结肠炎耶尔森菌的感染水平及病原学特征，为儿童感染性腹泻防治提供依据。方法 采集2020—2021年在大理大学第一附属医院就诊的≤5岁腹泻儿童粪便标本，同时收集病例临床特征信息，标本冷增菌后利用耶尔森菌选择培养平板分离小肠结肠炎耶尔森菌，通过生物分型、血清学分型及毒力基因检测分析菌株病原学特征。结果 共采集397份腹泻粪便标本，在3份标本中检出7株耶尔森菌，耶尔森菌感染率为0.76%(3/397)。3份耶尔森菌阳性标本中，第212号标本检出2株弗氏或中间型耶尔森菌，第24号和第226号标本中检出5株的耶尔森菌均为小肠结肠炎耶尔森菌，其中第24号标本检出2株小肠结肠炎耶尔森菌，为生物1A型，毒力基因检测为：ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-，为非致病性小肠结肠炎耶尔森菌；第226号标本检出3株小肠结肠炎耶尔森菌，为生物3型、血清O∶3型（rfbc+），毒力基因检测为：ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+，为致病性小肠结肠炎耶尔森菌。小肠结肠炎耶尔森菌感染率为0.50%(2/397),致病性小肠结肠炎耶尔森菌检...     

佛山市食品中致泻大肠埃希菌菌型分布及毒力研究

目的 了解佛山市食品中致泻大肠埃希氏菌的菌型分布及毒力携带情况。方法采集佛山市十类食品362件中分离的17株致泻大肠埃希氏菌。按GB4789．6-94国家卫生标准检验方法进行血清分型；用ELISA检测耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素(LT)；毒力测定采用小鼠致病力试验和采用irp2和irpB基因探针菌落原位杂交检测ES-IEC菌株毒力岛。结果 菌型分布在三类11个型别上，其中EPEC占41．17％(7／17)，EIEC为35．29％(6／17)。ESIEC为23．53％(4／17)；17株致泻大肠埃希氏菌在七类食品中均有存在。对小鼠致病力试验均为阳性；耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素(LT)均为阴性，其中4株ESIEC中1株携带耶尔森氏菌强毒力岛(HPI)。结论佛山市食品中污染致泻大肠埃希氏菌普遍，对小鼠致病力与耐热和不耐热肠毒素无必然联系；有携带耶尔森氏菌HPI的ESIEC存在。应引起足够重视。     

携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛大肠杆菌的毒力基因分析

目的探索HPI毒力岛阳性大肠杆菌的毒力基因存在情况。方法使用PER和杂交技术对152株HPI毒力岛阳性的大肠杆菌进行相关毒力基因检测。结果在152株携带HPI毒力岛的大肠杆菌中，基本上未栓出常见的5类致泻性大肠杆菌的毒力基因，但是部分菌株检出泌尿道致病性大肠杆菌PAI毒力岛基因yc73和prrA以及RTX毒力岛基因rtx615。结论这些大肠杆菌和已知的致泻性大肠杆菌有明显不同，携带HPI毒力岛的大肠杆菌可能包括几个不同的群，可能存在其它的尚未发现的毒力因子，有必要继续进行进一步研究。     

安徽省六安市家禽家畜粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的病原学研究

目的 通过对安徽省六安市家禽家畜粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的病原学研究及流行病学分析,了解六安市家禽家畜感染的小肠结肠炎耶尔森菌的病原学特性和分布规律,为在六安市开展该菌的防控提供科学依据。方法 2015—2018年采集猪、狗、鸭、鹅等动物的粪便663份,进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养,对分离得到的菌株进行生化鉴定、血清型分型以及毒力基因等检测。结果 本项研究监测的663份家禽家畜粪便中,小肠结肠炎耶尔森菌总检出率为12.22%,其中猪粪的检出率最高,为23.49%,其他家禽家畜粪便中均有该菌的检出;猪粪的检出率与总检出率相比差异有统计学意义（P<0.01）,而各种粪便在各年度之间检出率差异无统计学意义;在致病性菌株中猪粪检出株占总致病性菌株的95.83%;致病性血清型主要为O:3型;致病性菌株毒力基因分布主要为基因Ⅲ型,基因Ⅲ型占总致病性基因型菌株的91.67%。结论 小肠结肠炎耶尔森菌在六安市家禽家畜粪便中普遍存在,该菌在家猪粪便的检出率最高,且致病性菌株携带率最高,致病性血清型为O:3型和O:9型。     

Multiplex Polymerase Chain Reaction for Rapid Identification of Diarrheagenic Escherichia coli

Despite the fact that diarrhaegenic Escherichia coli (DEC) has been identified as a major etiologic agent of childhood diarrhea which represent a major public health problem in developing countries, only a few studies have been performed in Bangladesh to identify these organisms. To detect DEC in patients with acute diarrhea, a total of 300 stool specimens were tested by multiplex polymerase chain reaction (PCR). The multiplex PCR was designed for the detection of target genes of "eae" for enteropathogenic E. coli (EPEC), "stx" for enterohemorrhagic E. coli (EHEC), "ipaH" for enteroinvasive E. coli (EIEC), "aspU", "CVD432" and "aggR" for enteroaggregative E. coli (EAEC) as well as "elt" and "est" for enterotoxigenic E. coli (ETEC). Out of 300 stool specimens collected from patients with acute diarrhea, the DEC was detected in 18% (54/300) cases. The dominating strain was ETEC (13%, 39/300), followed by EAEC (5%, 15/300) and no EHEC, EIEC and EPEC could be detected. Both heat-stable toxin (ST) and heat-labile toxin (LT) genes of ETEC were detected in 66.68% (26/39) strains and only ST or LT as single gene was detected in 23.07% (9/39) or 10.25% (4/39) strains respectively. The multiplex PCR assay could be used as a rapid as well as efficient diagnostic tool for identification of DEC in the clinical laboratory settings.