姜黄素联合瑞舒伐他汀对大鼠心肌梗死损伤的保护作用机制的研究

目的研究姜黄素联合瑞舒伐他汀对大鼠心肌梗死损伤的保护作用以及可能作用机制。方法用结扎左冠脉前降支的方法构建心肌梗死大鼠模型。40只大鼠随机分为假手术组、心肌梗死组、姜黄素组、瑞舒伐组、姜黄素+瑞舒伐组。假手术组实行开胸术,但不结扎左冠脉前降支。冠脉结扎24 h后,以灌胃的方式分别给予大鼠姜黄素100mg/(kg·d)、瑞舒伐他汀10 mg/(kg·d)、姜黄素100 mg/(kg·d)+瑞舒伐他汀10 mg/(kg·d),假手术组、心肌梗死组以同样的方式给予等量生理盐水,连续给药4周。实验结束后以超声仪检测左心室大小如左室舒张末期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室射血分数(EF);大鼠处死后,测量大鼠体重、心脏重量以及比值;采用末端脱氧核昔酸转移酶(Td T)介导的原位末端标记法(TUNEL)检测心肌梗死组织石蜡切片心肌细胞凋亡指数;蛋白质印迹法(Western Blot)检测心肌组织中凋亡相关蛋白Fas、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表达量。结果与假手术组相比,心肌梗死组大鼠LVIDd、LVIDs、心脏重量、心脏/体重显著增加(P0.05),EF、体重显著降低(P0.05),表明大鼠心脏收缩、舒张功能障碍,心功能损伤,造模成功;瑞舒伐他汀和姜黄素显著降低LVIDd、LVIDs、心脏重量、心脏/体重(P0.05),EF、体重显著增加(P0.05),表明瑞舒伐他汀和姜黄素可改善心肌梗死损伤,联合作用效果更显著;大鼠发生心肌梗死后心肌细胞的凋亡指数显著上调(P0.05),Fas、Caspase-3蛋白表达量显著上调(P0.05),姜黄素和瑞舒伐他汀可缓解心肌细胞的凋亡以及Fas、Caspase-3蛋白增加,联合作用效果优于单药的作用。结论姜黄素和瑞舒伐他汀可缓解大鼠心肌梗死损伤,改善心功能,可能通过抑制Fas、Caspase-3蛋白水平进而阻碍心肌细胞凋亡发挥作用。     

二维超声斑点追踪成像评估大鼠不同程度心肌损伤的应用价值

目的 探讨基于二维超声斑点追踪成像(2D-STI)技术的左心室整体环向应变及应变率参数评估急性心肌梗死大鼠不同程度心肌损伤的应用价值.方法 55只Wistar大鼠随机分为急性心肌梗死组(MI组)45只和假手术组(SO组)10只.MI组大鼠随机分为MI15组、MI30组和MI60组各15只,分别钳夹冠状动脉左前降支15 min、30 min、60 min,以建立不同梗死面积的急性心肌梗死模型.各组大鼠分别于基础状态和恢复灌注24 h后行超声心动图检查,记录左室乳头肌短轴高帧频二维图像,应用EchoPAC工作站分析获得左室乳头肌短轴整体收缩期峰值环向应变(GSc)和应变率(GSRc)值,并采用解剖M型测量左室舒张末期内径(LVIDd)和收缩末期内径(LVIDs)、短轴缩短率(FS)、射血分数(EF).实验结束后处死大鼠取出心脏行TTC染色并计算左室乳头肌短轴的梗死面积(AN).结果 ①MI15组、MI30组和MI60组的LVIDd和LVIDs测值均较基础状态和假手术组明显增加,FS和EF测值明显降低;MI60组的LVIDd和LVIDs测值均较MI15和MI30组明显增大,FS和EF测值明显降低(P<0.05);②MI15组、MI30组和MI60组GSc和GSRc测值均较假手术组明显减低;MI组的GSc和GSRc测值随缺血时间延长而显著降低(P<0.05);③GSc和GSRc与AN显著相关(P<0.01),相关系数分别为0.90和0.88;GSc和GSRe参数是AN的显著预测因子(P<0.01),标准回归系数(Beta)分别为0.558和0.491;④TTC染色显示AN随缺血时间延长而显著增加(P<0.05).结论 基于2D-STI技术的左室整体环向应变及应变率随心肌梗死面积增加而显著降低,该参数可准确评价急性心肌梗死后不同程度心肌损伤.     

L-肌肽预处理对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨L-肌肽预处理对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响.方法:30只SD雄性大鼠随机分为L-肌肤预处理组、心肌缺血2h组及假手术组,采用冠状动脉结扎的方法建立大鼠心肌缺血模型.用TUNEL法观察各组大鼠的心肌细胞凋亡情况:采用Western blot检测各组大鼠心肌细胞bcl-2及caspase-3蛋白的表达水平,并探讨它们之间的关系.结果:与心肌缺血2h组相比,L-肌肽预处理组bcl-2蛋白的表达水平明显升高,心肌细胞凋亡数与bcl-2蛋白表达量值之间呈明显的负相关(r=-0.93,P<0.05):L-肌肤预处理组caspase-3蛋白的表达水平降低,心肌细胞凋亡数与caspase-3蛋白表达量值之间呈明显的正相关(r=0.89,P<0.05).结论:L-肌肤对心肌缺血大鼠模型心肌梗死有明显保护作用,其作用机制可能与调节心肌细胞凋亡相关蛋白作用有关.     

骨髓间充质干细胞联合VEGF基因移植对AMI心肌细胞凋亡的影响

目的观察同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)联合血管内皮生长因子(VEGF)基因移植对急性心肌梗死(AMI)小型猪心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响,并探讨其可能机制。方法体外分离、培养骨髓MSCs,腺病毒介导的VEGF基因转染骨髓MSCs。用球囊堵闭法建立猪AMI模型。1周后,随机将其分为4组(每组4只),组Ⅰ:转染VEGF腺病毒的MSCs移植;组Ⅱ:单纯MSCs移植;组Ⅲ:单纯VEGF移植;组Ⅳ:磷酸盐缓冲液对照组。4周后超声心动图检测心功能,采用DNA缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,测定心肌细胞凋亡指数(AI);免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白在心肌细胞中表达水平。结果 (1)超声心动图检查发现:组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ反映心功能的射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)值较干预前均有明显增加(P<0.01或P<0.05),组Ⅰ与其他3组比较心功能改善最明显(P均<0.01),组Ⅳ干预前后心功能无明显变化(P>0.05)。(2)TUNEL结果显示:与其他3组比较,干预后组Ⅰ心肌细胞AI最低(P均<0.01),Bax、Caspase-3的表达最低(P均<0.05),Bcl-2的表达最高(P均<0.05)。结论骨髓MSCs联合VEGF基因移植猪AMI区可促进血管再生,改善心功能,减少心肌细胞凋亡,抑制Bax、Caspase-3的表达,促进Bcl-2的表达。     

阿托伐他汀对大鼠心肌急性缺血细胞凋亡及caspase-3基因表达影响

目的:观察不同剂量阿托伐他汀对大鼠急性缺血心肌细胞凋亡及caspase-3基因表达的影响。方法:取雄性SD大鼠79只,随机分为模型组、阿托伐他汀高剂量组(20 mg/(kg.d))、中剂量组(10 mg/(kg.d))、低剂量组(2mg/(kg.d))和生理盐水对照组。除模型组只开胸外,其余大鼠术前连续灌胃3 d,第4天结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型。伊文氏蓝和TTC染色法确定缺血和梗死心肌范围。原位末端标记检测细胞凋亡,RT-PCR检测caspase-3 mRNA的表达。结果:与对照组比较,阿托伐他汀高?中剂量组可明显减少心肌梗死面积,明显减少心肌细胞凋亡和心肌内caspase-3 mRNA基因表达。不同剂量组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:高、中剂量阿托伐他汀可减少大鼠急性缺血心肌细胞损伤,与能减少心肌细胞凋亡及抑制caspase-3 mRNA基因表达有关。     

高频率超声影像在急性心肌梗死大鼠心功能评价中的应用

目的 采用高频率超声影像技术方法观察急性心肌梗死大鼠心功能变化.方法 用冠状动脉结扎法建立心肌梗死大鼠模型,采用高频率超声影像系统测量左心室舒张末期前壁厚度(LVAWd)与后壁厚度( LVPWd)、舒张末期(LVIDd)和收缩末期左室内径(LVlDs),计算舒张末期和收缩末期左室容积(LVEDV,LVESV),射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、每搏输出量(SV).同时对梗死心肌组织进行定量检查,并检测血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等生化指标,进一步证实超声影像评价小动物心脏功能的可行性和准确性.结果 模型组与正常组、假手术组比较,LVIDs,LVESV,EF、FS、SV有显著性差异(P＜0.01).心肌梗死面积有极显著性差异(P＜0.01).模型组与正常组比较,CK、LDH值明显升高,有极显著性差异(P＜0.01).MDA值明显升高,有极显著性差异(P＜0.01).结论 高频率超声影像对大鼠心脏功能的评价有较高的准确性,可以作为大鼠心梗模型实验研究中可选择的无创性心功能评价技术之一.     

阿托伐他汀对大鼠心肌急性缺血细胞凋亡及 caspase-3 基因表达影响

目的:观察不同剂量阿托伐他汀对大鼠急性缺血心肌细胞凋亡及caspase-3基因表达的影响.方法:取雄性SD大鼠79只,随机分为模型组、阿托伐他汀高剂量组(20 mg/(kg·d))、中剂量组(10 mg/(kg·d))、低剂量组(2mg/(kg·d))和生理盐水对照组.除模型组只开胸外,其余大鼠术前连续灌胃3 d,第4天结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型.伊文氏蓝和TTC染色法确定缺血和梗死心肌范围.原位末端标记检测细胞凋亡,RT-PCR检测caspase-3 mRNA的表达.结果:与对照组比较,阿托伐他汀高、中剂量组可明显减少心肌梗死面积,明显减少心肌细胞凋亡和心肌内caspase-3 mRNA基因表达.不同剂量组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:高、中刺量阿托伐他汀可减少大鼠急性缺血心肌细胞损伤,与能减少心肌细胞凋亡及抑制caspase-3 mRNA基因表达有关.     

早期短期给予caspase抑制剂对于急性心肌梗死大鼠心功能影响的实验研究

目的评价早期、短期给予caspase抑制剂对于急性心肌梗死大鼠心功能的影响,并探讨其机制。方法将Wistar大鼠随机分为3组心肌梗死组、治疗组、假手术组。应用超声心动图评价心功能;caspase-3活性检测试剂盒测定caspase-3活性;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况。结果治疗组较心肌梗死组左室舒张末期直径(LVEDd)、左室收缩末期直径(LVESd)明显降低,而射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)明显升高。治疗组较心肌梗死组caspase-3活性及凋亡指数(AI)明显降低。结论早期、短期给予caspase抑制剂可以有效改善心肌梗死大鼠心功能。抑制心肌细胞凋亡和改善心室重构是其主要作用机制。     

当归对心肌梗死后心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的 探讨当归对大鼠心肌梗死后左室功能、梗死灶边缘区心肌细胞凋亡及凋亡相关基因变化的干预作用及其可能机制.方法 将120只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(sham组)、急性心肌梗死(AMI)组和当归干预组.采用结扎大鼠冠状动脉左前降支制备AMI模型.当归干预组于术后24 h开始腹腔注射当归注射液(20 ml·kg-1·d-1,相当于含生药量10 g·kg-1·d-1);AMI组和sham组注射等量生理盐水.术后1、2、3和4周记录血流动力学改变后处死动物,分别采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)和免疫组化法检测心肌细胞凋亡系数,以及促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的蛋白表达水平.结果 ①AMI发生后左室功能明显降低,当归干预4周后可改善左室功能(P＜0.05或P＜0.01).②AMI组和当归干预组比较心肌梗死面积差异无统计学意义;AMI组4周后全心和左室相对重量均较sham组显著增加(P均＜0.01),当归干预4周后可明显减轻全心和左室相对重量(P均＜0.05).③sham组未见心肌细胞凋亡,AMI组和当归干预组梗死灶边缘区均有心肌细胞凋亡,但当归干预组心肌细胞凋亡较AMI组明显减少(P＜0.01).④与sham组比较,AMI组和当归干预组Bax和Bcl-2的蛋白表达均明显升高;而当归干预组Bcl-2的蛋白表达进一步增加,并能明显抑制Bax的蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 心肌梗死后发生左室功能降低,梗死灶边缘区有大量的心肌细胞凋亡;当归可能通过上调Bcl-2和下调Bax的表达,使Bax/Bcl-2比值下降,从而抑制该区的心肌细胞凋亡,减少心肌细胞丢失,进而改善左室功能,减轻心室重构.     

瑞舒伐他汀对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡和心肌细胞凋亡基因Fas及Caspase-3表达变化及瑞舒伐他汀对其的影响。方法:结扎30只雄性SD大鼠左冠状动脉前降支造成AMI模型,存活的24只随机分为两组:他汀组(12只)和对照组(12只),另取8只雄性SD大鼠作为假手术组。术后第1天起他汀组给予瑞舒伐他汀1mg/(kg·d)灌胃,对照组、假手术组给予等量生理盐水灌胃。4周后,比较各组大鼠心肌细胞凋亡,凋亡基因Fas及Caspase-3表达变化。转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞。免疫组织化学法检测Fas、Caspase-3蛋白水平。反转录-聚合酶链反应法分析Fas、Caspase-3基因mRNA表达水平。结果:他汀组和对照组心肌细胞凋亡指数,Fas、Caspase-3蛋白阳性染色细胞指数及Fas、Caspase-3基因的mRNA表达水平较假手术组明显增加(P<0.05),而他汀组较对照组减少(P<0.05)。结论:AMI大鼠心肌细胞凋亡指数、心肌组织Fas、Caspase-3蛋白及Fas、Caspase-3基因的mRNA表达水平明显增高。瑞舒伐他汀对AMI大鼠的心肌细胞凋亡、细胞凋亡基因fas及Caspase-3表达水平增高有较好的拮抗作用。     

右美托咪定对心肌缺血再灌注大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的分析右美托咪定对心肌缺血再灌注(MIR)大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响。方法取30只SD大鼠,随机分为对照组(仅穿线而不结扎)、MIR组(建立MIR模型)、干预组(建立MIR模型前给予右美托咪定预处理),三组各10只。比较干预组与MIR组大鼠心肌梗死面积、危险区面积和心肌细胞凋亡率的差异,并比较三组大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及补体3蛋白表达水平的差异。结果相比MIR组,干预组大鼠心肌梗死面积和危险区面积明显缩小,心肌细胞凋亡率显著降低(P 0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);相比MIR组,干预组大鼠Bcl-2蛋白表达水平显著升高,而Bax蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠补体3蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);相比MIR组,干预组大鼠补体3蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。结论通过右美托咪定预处理可提高MIR大鼠模型心肌Bcl-2蛋白表达,降低Bax和补体3蛋白表达,减少心肌梗死面积,缓解大鼠心肌损伤,减少心肌细胞凋亡。     

同种异体骨髓单个核细胞移植急性心肌梗死大鼠:心肌细胞凋亡及相关基因的表达

背景:细胞凋亡增加所导致的进行性心肌细胞丢失是引起急性心肌梗死后充血性心力衰竭的主要原因之一,通过降低肿瘤坏死因子α浓度及Bax蛋白、PDCD5 mRNA表达可以抑制急性心肌梗死后心肌细胞凋亡.目的:探讨同种异体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-01/11在华中科技大学附属协和医院完成.材料:体质量为(240±20)g的Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、模型对照组、细胞移植组,20只/组.另取体质量为100～150 g的Wistar大鼠60只用于制备骨髓单个核细胞.方法:模型对照组、细胞移植组大鼠结扎冠状动脉左前降支,建立急性心肌梗死模型;假手术组大鼠仅开胸,不结扎冠状动脉左前降支.造模后,细胞移植组大鼠在梗死心肌周围分4点于心外膜下植入骨髓单个核细胞悬液,每点100 μL(107个细胞);假手术组、模型对照组同法注射等量DMEM培养基,培养4周.主要观察指标:血清及非梗死区心肌组织中肿瘤坏死因子α的水平,左室非梗死区心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白和PDCD5mRNA的表达.结果:移植后4周,细胞移植组在发生凝固坏死的宿主心肌内可以看到局灶BrdU标记阳性的骨髓单个核细胞.与假手术组比较,移植后4周模型对照组、细胞移植组血清和心肌组织中肿瘤坏死因子α水平均显著升高(P<0.05),但细胞移植组升高幅度明显小于模型对照组(P<0.05).与假手术组比较,模型对照组和细胞移植组左心室非梗死区心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白和PDCD5 mRNA(PDCD5/GAPDH)均明显升高(P<0.05),但细胞移植组升高幅度明显小于模型对照组(P<0.05).结论:同种异体骨髓单个核细胞移植可以抑制大鼠心肌梗死后心肌细胞凋亡的发生,其机制可能与其抑制肿瘤坏死因子α的表达、降低Bax蛋白和PDCD5基因的促凋亡作用有关.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心功能及bcl-2和caspase-3 mRNA表达水平的影响

目的观察急性心肌梗死大鼠应用骨髓间充质干细胞(MSCs)移植前后心功能及凋亡相关蛋白bcl-2和caspase-3mRNA的变化,以期了解骨髓间充质干细胞移植治疗心梗的机制。方法 40只SD大鼠,雌雄各半,随机分为对照组、假手术组、心梗组、移植组,每组各10只。心梗组和移植组大鼠分别结扎前降支造成心梗模型。取大鼠骨髓,体外分离扩增培养MSCs。术前4组大鼠进行超声心动图检测心功能,结扎后移植组立即予MSCs多点注射到大鼠心肌梗死区周边,而梗死组和假手术组注射同剂量培养液,对照组不注射。饲养8周后,分别予超声心动图心功能检测。取梗死周边区心肌行RT-PCR检测bcl-2和caspase-3 mRNA的表达。结果术前4组大鼠心功能指数无显著差异(P>0.05);而MSCs移植后,梗死组大鼠心肌LVESD、LVEDD较其它3组明显增高,差异具有显著性(P<0.05);而移植组又较对照组和假手术组明显增高(P<0.05);而对照组和假手术组在上述指标中无显著差异(P>0.05);梗死组大鼠EF较其它3组明显降低(P<0.05);而移植组又较对照组、假手术组明显降低(P<0.05);而对照组与假手术组之间无显著差异(P>0.05)。bcl-2mRNA在对照组和假手术组表达较少,而在梗死组表达增加,差异有显著性(P<0.05);在移植组表达更多,与梗死组相比有显著性(P<0.05);caspase-3在对照组和假手术组表达较少,在梗死组表达增加,有显著差异(P<0.05);在移植组表达又较梗死组表达减少,有显著差异(P<0.05);但与对照组和假手术组相比,表达增加(P<0.05)。结论急性心肌梗死移植MSCs后,心功能得到改善,心肌凋亡得到抑制。     

心肌缺血再灌注交界区细胞凋亡促进因子、p53、bcl-2基因动态表达的临床意义

目的探讨缺血再灌注损伤诱导交界区心肌细胞凋亡与细胞凋亡促进因子(caspase-3)、p53、bcl-2基因动态表达的临床意义。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应技术、原位杂交技术、免疫组化技术等,观察家兔心肌缺血/再灌注模型缺血交界区caspase-3 mRNA、p53 mRNA、bcl-2 mRNA动态表达的内在联系。结果①caspase-3 mRNA与心肌细胞凋亡在缺血再灌注损伤4h后开始升高,12h达高峰,二者之间存在明显正相关性(r=0.9286,P<0.01)。②p53mRNA于缺血再灌注8h开始升高。bcl-2 mRNA在缺血再灌注8h时开始激活,并持续维持低水平状态。p53 mRNA和bcl-2mRNA二者的表达之间存在明显的负相关性(r=-0.9648,P<0.01)。结论caspase-3的激活进一步上调p53表达,二者促进心肌细胞凋亡,进而影响心肌功能。     

miR-22修饰的骨髓间充质干细胞外泌体抑制急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨miR-22修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法扩增培养从SD大鼠骨髓中分离的BMSCs,将携带miR-22重组慢病毒载体及其阴性对照(miR-NC)载体分别转染至BMSCs,并提取转染后BMSCs的外泌体。将60只SD大鼠随机分为Sham组、AMI组、Exo BMSCs组、Exo BMSCs/miR-NC组和Exo BMSCs/miR-22组,每组12只。采用冠状动脉左前降支结扎术构建AMI大鼠模型,于心肌梗死区原位注射外泌体进行干预。干预72 h后,采用超声心动图监测大鼠心脏功能;TTC染色观察大鼠心肌梗死情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡水平;qRT-PCR检测心肌组织中miR-22及p53 mRNA表达水平;Western blot检测心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶剪切体(Cleaved-caspase-3)及p53蛋白表达水平。结果与Sham组比较,AMI组大鼠心脏功能明显降低(P <0.05),心肌梗死面积(%:1.16±0.84 vs.38.68±5.31)和心肌细胞凋亡率(%:9.04±1.95 vs.66.70±5.92)明显增加(P <0.05),心肌组织中miR-22和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P <0.05),而p53、Bax和Cleavedcaspase-3等蛋白表达水平明显升高(P <0.05);与AMI组比较,各外泌体干预组大鼠心功能明显改善(P <0.05),心肌梗死面积(%:38.68±5.31 vs.23.54±3.94,22.33±4.12,13.79±2.25)和心肌细胞凋亡率(66.70±5.92 vs.43.73±3.39,42.67±2.87,30.73±2.97)明显降低(P <0.05),心肌组织中miR-22以及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P <0.05),而p53、Bax和Cleaved-caspase-3等蛋白表达水平明显降低(P <0.05),其中Exo BMSCs/miR-22组大鼠各指标改善情况均优于Exo BMSCs组和Exo BMSCs/miR-NC组。结论 miR-22修饰的BMSCs外泌体可有效抑制p53介导的心肌细胞凋亡,从而改善AMI大鼠的心功能。     

红景天苷对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的作用及机制研究

目的:观察红景天苷对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨其可能的分子机制。方法:制备Sprague Dawley大鼠急性心肌缺血模型,随机分为红景天苷高、低剂量组(40 mg/kg、10 mg/kg)、急性心肌缺血组和对照组。原位末端转移酶标记染色法检测心肌组织凋亡情况,免疫印迹法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Cytochrome c(Cyt-c)、cleaved caspase-3以及cleaved caspase-9蛋白的表达水平。结果:原位末端转移酶标记染色法显示红景天苷浓度依赖性抑制急性心肌缺血所引起心肌细胞的凋亡;免疫印迹法结果显示,与急性心肌缺血组相比,红景天苷干预后心肌组织中Bcl-2的蛋白表达显著增加,Bax的蛋白表达显著减少,胞浆(cyto)中Cyt-c的蛋白表达水平显著下降,cleaved caspase-3和cleaved caspase-9表达均显著降低。结论:红景天苷具有抗心肌细胞凋亡的作用,其作用机制可能是通过抑制线粒体通路减少细胞的凋亡。本实验为红景天苷可作为临床上治疗缺血性心脏病提供实验依据。     

胰岛素减轻大鼠急性心肌梗死的作用及其抑制炎症的机制研究

目的探讨胰岛素对大鼠急性心肌梗死(AMI)的缓解作用,评价胰岛素用药时间对缓解效果的影响,探索胰岛素通过抑制炎症作用缓解急性心肌梗死的作用机制。方法 60只成年雄性Sprague-Dawley大鼠行冠状动脉左前降支(LAD)结扎制备AMI模型,将大鼠随机分为4组:假手术组(n=15,仅开胸不结扎冠脉动脉左前降支)、AMI模型组(n=15,AMI模型大鼠,缺血20 min后生理盐水尾静脉滴注+皮下注射)、早期治疗组(n=15),AMI模型大鼠,缺血20 min后尾静脉胰岛素滴注+皮下注射)和晚期治疗组(n=15,AMI模型大鼠,缺血1周后尾静脉胰岛素滴注+皮下注射)。采用ELISA法分别检测大鼠模型术前、术后缺血20 min、术后缺血24 h、术后缺血48 h和术后缺血1周时血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;超声心动图检测术后1周和4周各组大鼠左心室收缩末内径(LVESD)、左心室舒张末内径(LVEDD)、左室射血分数(EF)和缩短分数(FS);监测大鼠心脏血流动力,测定心率(HR)、左心室发展压(LVDP)、左室最大收缩和舒张末压微分(±LV d P/dtmax);伊文斯蓝(Evans Blue)染色法评估术后4周各组大鼠心肌梗死面积; ELISA检测术后4周各组大鼠血清白介素6(IL-6)和白介素17(IL-17)水平;流式细胞术评估外周血Th17占CD4~+细胞比例变化。结果与假手术组相比,AMI模型组后四个时间点CK和LDH值均显著增加(P 0. 05),EF、FS、LVDP和±LVd P/dtmax明显下降,LVESD、心肌梗死面积明显升高(P 0. 05),血清IL-6、IL-17水平和Th17/CD4~+比例显著增高(P 0. 05);与AMI模型组相比,早期治疗组大鼠血清CK值和LDH值显著降低(P 0. 05),且随着时间的延长差异逐渐增大; EF、FS、LVDP和±LV d P/dtmax明显升高,LVESD、心肌梗死面积明显缩小(P 0. 05);血清IL-6、IL-17水平和Th17/CD4~+比例显著降低(P 0. 05)。晚期治疗组中与AMI模型组以上各项指标一致,未见明显急性心肌梗死后的缓解作用。结论急性心肌梗死后早期使用胰岛素可以有效改善心脏功能,保护心肌细胞,并可通过抑制IL-6和Th17/CD4~+细胞比例抑制炎症反应。     

二维应变超声心动图评价大鼠急性心肌梗死模型局部心肌功能改变的应用价值

目的 探讨二维应变超声心动图定量评价大鼠急性心肌梗死模型左室局部心肌功能改变的应用价值.方法 60只Wistar大鼠随机分为两组:实验组50只,制备急性冠状动脉心肌梗死模型;假手术组10只.两组分别于术前及术后1周、4周、8周行超声心动图检查.解剖M型超声心动图测量左室舒张末期及收缩末期内径(LVIDd、LVIDs)、短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)和左室质量(LVM).记录左室乳头肌短轴高帧频图像,应用二维应变分析软件测量各节段的收缩期峰值径向应变(PRS)、环向应变(PCS).实验组大鼠检查结束后处死,取出心脏行TTC染色并计算梗死面积;VG染色观察心肌组织中的胶原纤维.结果 根据TTC染色结果将实验组大鼠左窀分为梗死心肌、梗死周围和远处心肌.术后1周VG染色显示实验组大鼠左室各节段均出现不同程度的胶原纤维沉着.与术前及同时期假手术组相比,实验组大鼠于术后1周时梗死心肌、梗死周围及远处心肌的PRS、PCS均明显降低(P<0.01),并持续至第8周.与术后1周时相比,术后4周、8周实验组大鼠梗死心肌、梗死周围及远处心肌的PRS、PCS差异无统计学意义.实验组大鼠于术后4周和8周LVIDd、LVIDs及LVM明显增加,FS明显减低(P<0.05).二维应变测量组间及组内比较均具有高度一致性.结论 二维应变超声心动图可定量评价大鼠心肌梗死模型不同血供区域局部心肌的功能改变,为无创性跟踪心肌梗死后左室重构进程提供了一种敏感可行的方法.     

缺血后适应对大鼠肾脏热缺血再灌注损伤凋亡相关基因bcl-2/bax表达的影响

目的探讨缺血后适应对大鼠肾脏热缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因bcl-2/bax表达的影响。方法将40只Wistar健康雄性大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IPo)和腺苷组(Ado组)4组。行右肾切除,左肾热缺血60min后再灌注24h建立大鼠肾脏急性热缺血再灌注损伤模型;C组仅右肾切除,左肾蒂游离;IPo组于再灌注前行6个10s无限制灌注加10s再缺血循环;Ado组于缺血前10min经静脉给予腺苷。采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)和免疫组化法检测各组肾脏组织中细胞凋亡相关基因bcl-2/bax表达水平。结果与C组相比,缺血60min再灌注24h可以导致肾脏组织中bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达的相对丰度显著升高(P<0.05)。与IR组比较,经过后适应(Pos-Con)或腺苷(Ado)干预后bcl-2 mRNA表达水平升高更加显著,BaxmRNA表达水平显著降低(P<0.05),两种处理之间无显著差异(P>0.05)。比较各组bcl-2/Bax的比值,IR组较对照组显著降低(P<0.05),而Pos-Con和Ado干预后,与IR组比较bcl-2/Bax的比值显著升高(P均<0.05),两种处理之间无显著差异(P>0.05)。结论缺血再灌注可以上调大鼠肾脏促凋亡基因bax的表达,下调凋亡抑制基因bcl-2的表达,进而可能导致肾脏细胞过度凋亡;缺血后适应能够抑制促凋亡基因bax的过度上调,同时促进凋亡抑制基因bcl-2的表达,进而可能防止肾脏细胞过度凋亡。     

川芎嗪对急性心肌梗死模型大鼠的保护作用及机制

目的探讨川芎嗪对急性心肌梗死模型大鼠的保护作用及机制。方法利用结扎清醒大鼠冠状动脉左前降支复制急性心肌梗死模型,将大鼠随机分为假手术组,模型组、银杏叶提取物(20 mg/kg)组及川芎嗪(10、204、0 mg/kg)组。测定清醒大鼠心肌酶学、心肌梗死面积、细胞凋亡和组织病理HE染色的变化。结果急性心肌梗死模型大鼠SOD显著降低,MDA、LDH和心肌梗死面积显著增大,心肌细胞凋亡数量亦明显增多(P<0.01~0.001)。川芎嗪能明显提高SOD、降低MDA、LDH的含量,减小心肌梗死面积和细胞凋亡数量(P<0.05~0.001)。结论川芎嗪对急性心肌梗死模型大鼠具有一定的保护作用,其机制可能是通过缩小心肌梗死面积、改善心肌酶学、保护受损心肌细胞凋亡等多种途径实现的。