香烟烟雾提取物对小鼠血管平滑肌细胞的损伤作用及表型转变的影响

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对小鼠血管平滑肌细胞的损伤作用及表型转变的影响。方法制备CSE,分别使用2.5%、5%、10%、20%CSE处理小鼠血管平滑肌细胞(MOVAS细胞),并以正常MOVAS细胞作为对照组。MTT法检测各浓度CSE处理后细胞的存活率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞内ROS水平。流式细胞仪结合PI单染以及Annexin V-PI双染技术分别分析10%CSE处理后细胞周期和细胞凋亡率的变化。实时荧光定量PCR分析10%CSE处理后MOVAS细胞内SMemb和SMA的mRNA表达水平,Western blot检测10%CSE处理后MOVAS细胞内SMemb和SMA的蛋白表达水平。结果 2.5%、5%、10%及20%CSE处理后,MOVAS细胞的存活率分别为89.6%±8.6%、65.2%±10.0%、53.6%±6.9%、43.1%±5.9%,各组与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05);各浓度CSE处理后细胞内ROS水平显著提高。10%CSE处理后细胞G1期比例明显上升,细胞凋亡率也显著提高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。10%CSE处理后MOVAS合成型标志物SMemb的表达水平显著增高,而收缩型标志物SMA的表达水平显著降低。结论 CSE可以对小鼠血管平滑肌细胞造成损伤,并能够使小鼠血管平滑肌细胞表型由收缩型向合成型转变,其机制可能与CSE引起的细胞内ROS增高有关。     

银杏叶提取物对血管平滑肌细胞凋亡的影响及相关因素

目的观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,Egb)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)凋亡的影响,初步探讨其可能机制。方法采用组织贴块法培养胎儿主动脉VSMC。在不同Egb浓度及培养时间下,检测各组细胞凋亡率,并检测Fas及Bcl-2的表达量。结果凋亡细胞比率结果显示,Egb组凋亡细胞比率明显增加,在浓度为800μg/mL时间为24 h组的凋亡细胞比率最高,而且最高值已经达到了35.50%±0.63%;Fas蛋白阳性细胞率与Egb浓度和时间的增加呈现一定的正相关。Fas蛋白阳性细胞率在6h组为5.67%±1.04%,24 h组增加为11.00%±0.56%左右,Egb在浓度为800μg/mL时间为24 h组比率最高达到33.20%±1.22%;Bcl-2蛋白阳性细胞率与Egb浓度和作用时间呈现明显的负相关,Egb组在浓度为800μg/mL时间为24 h组比率降低到8.33%±0.87%。结论 Egb可以诱导VSMC的凋亡;Egb诱导VSMC的凋亡过程与Fas表达增加和Bcl-2的表达减少有着直接的联系。     

齐墩果酸对过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究齐墩果酸(OA)对H_2O_2诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMCs,随机分为对照组、H_2O_2组、H_2O_2+OA组、阻断剂组。采用Hoechst 33342染色和Annexin V/FITC染色检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中磷酸化Akt蛋白表达变化。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05);与H_2O_2组比较,H_2O_2+OA组细胞凋亡率明显降低,p-Akt蛋白表达明显升高(P<0.05);与H_2O_2+OA组比较,阻断剂组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05)。荧光显微镜显示,对照组细胞核呈蓝色,H_2O_2组细胞核呈致密浓染,H_2O_2+OA组细胞核呈蓝染,有少量细胞核致密浓染,阻断剂组细胞核呈致密浓染。结论 OA能减轻H_2O_2导致的VSMCs凋亡,其机制可能与激活细胞内磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号通路引起下游促生存基因的表达有关。     

葛根素诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：观察葛根素促进人脐动脉血管平滑肌细胞凋亡的作用，探讨葛根素抑制平滑肌细胞增殖的机制。方法：分离培养人脐动脉平滑肌细胞，不同浓度葛根素与细胞孵育，TUNEL检测葛根素诱导细胞凋亡，rt-PCR实验检测促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-XL。结果：随着葛根素浓度升高，细胞生长受抑制，TUNEL阳性细胞显著增加。rt-PCR实验发现促凋亡基因Bax随药物浓度和作用时间的增加而上升，而且Bax、Bcl-XL基因表达比例有一定升高。结论：葛根素通过调节经典的Bax、Bcl-XL通路对血管平滑肌细胞凋亡有一定诱导作用。     

血管平滑肌细胞凋亡机制的研究进展

血管平滑肌细胞凋亡与很多心血管疾病的发生、发展密切相关,目前已经成为心血管疾病防治研究的热点。现对血管平滑肌细胞凋亡机制的研究现状进行了较为深入的探讨,从其诱导因素以及基因调控机制等角度综述了近年来国内外在这方面的研究进展。     

血管平滑肌细胞凋亡机制的研究进展

本文探讨血管平滑肌细胞凋亡机制的研究现状、血管平滑肌细胞凋亡的诱导因素以及基因调控机制。     

白皮杉醇对过氧化氢诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响与机制

目的:研究白皮杉醇(PCT)对过氧化氢(H2O2)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响以及所涉及的相关分子机制。方法:组织贴块法培养SD大鼠VSMCs并进行不同分组与处理;MTT法检测各组VSMCs的存活率;LDH、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒测定各组VSMCs中LDH与SOD活力;Annexin V-PI染色检测各组VSMCs凋亡情况,Hoechst 33258染色观察各组VSMCs细胞核形态变化;Western blot检测各组VSMCs中凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、caspase-3)及PI3K/AKT/eNOS通路蛋白表达水平。结果:不同浓度与时间过氧化氢(H2O2)处理VSMCs后使其存活率降低,而不同浓度PCT预处理可提高细胞存活率,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。与对照组相比,H2O2组VSMCs中LDH活力升高而SOD活力下降,细胞凋亡率增加,细胞中Bax、caspase-3蛋白表达升高而Bcl-2蛋白表达下降,p-PI3K、p-Akt、p-eNOS蛋白表达下降,且均呈剂量依赖关系;与H2O2组相比,PCT预处理组VSMCs LDH活力下降而SOD活力升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax、caspase-3下降,Bcl-2蛋白表达升高,p-PI3K、p-Akt、p-eNOS的蛋白表达升高,且均呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:PCT对H2O2引起的VSMCs损伤有保护作用,其机制可能是抑制LDH活力、增强SOD活力以及增强PI3K/AKT/eNOS信号通路进而阻碍VSMCs凋亡的发生。     

MiR-155对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转换的影响及机制研究

目的:观察mi R-155对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)表型转换的影响并研究其可能的机制。方法:原代培养小鼠VSMC,用不同浓度、时间AngⅡ作用于VSMC,然后用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测不同处理组mi R-155表达的变化情况。用q RT-PCR检测过表达及抑制表达mi R-155后空白对照组、mi R-155 mimics组、mimics阴性对照组、mi R-155 inhibitors组、inhibitors阴性对照组的mi R-155水平变化情况,检测转染效率。用免疫蛋白印迹(Western blot)法检测过表达及抑制表达mi R-155后空白对照组、AngⅡ组、mi R-155mimics组、AngⅡ+mi R-155 mimics组、mi R-155 inhibitors组、AngⅡ+mi R-155 inhibitors组对AngⅡ激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路的影响。Western blot检测转染mi R-155、使用雷帕霉素、细胞外信号调节激酶1/2抑制剂(U0126)后空白对照、AngⅡ组、mi R-155 mimics组、AngⅡ+mi R-155mimics组、AngⅡ+U0126组、AngⅡ+雷帕霉组AngⅡ促进VSMC表型转换的影响,检测两个收缩表型蛋白标志物即平滑肌22α(SM22α)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin),及一个合成表型蛋白标志物骨桥蛋白(OPN)。结果:与作用0 h或0 mol/L AngⅡ相比,AngⅡ作用于VSMC后AngⅡ以浓度、时间依赖方式降低mi R-155的表达。转染mi R-155后可显著减少基础及AngⅡ促进m TOR与ERK1/2通路激活作用,而转染mi R-155抑制剂可进一步增加基础及AngⅡ促进m TOR与ERK1/2通路激活作用。雷帕霉素、U0126及转染mi R-155均可抑制AngⅡ减少收缩表型蛋白标志物SM22α与α-SM-actin的表达,同时抑制AngⅡ促进合成表型蛋白标志物OPN的表达。结论:AngⅡ通过抑制mi R-155表达促进m TOR与ERK1/2激活促进VSMC表型转换。     

香烟烟雾提取物对大鼠主动脉平滑肌细胞迁移的影响

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对大鼠A10主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的影响及可能机制。方法体外培养大鼠VSMC,并分为空白对照组及CSE组,其中CSE组给予5%CSE处理24 h,应用Transwell方法检测两组VSMC的迁移能力;应用RT-PCR和Western印迹方法检测两组骨桥蛋白(OPN)表达水平。结果 CSE组VSMC迁移能力较空白对照组明显增强;同时CSE组OPN mRNA及蛋白表达均较空白对照组明显升高(P0.01)。结论 CSE能够促进大鼠VSMC的迁移,其机制可能与上调OPN表达有关。     

中药诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究进展

细胞凋亡(apotosis,APO)是一种以凋亡小体的形成为特点的,不引起周围组织的炎性反应的活体内单个细胞死亡的形态学改变.APO的证据是形态学、细胞学、生化学、分子生物学等方面所表现出的特征性的改变.在维护组织、器官、细胞的正常形态和功能方面起着非常重要的作用,它将机体的组成成分限制在生理需要的范围之内.血管平滑肌细胞凋亡受阻是体内许多心血管疾病如动脉粥样硬化(AS)、高血压(EH)、再狭窄(RS)等的重要发病机制[1,2].     

罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡及磷酸化Smad2/3表达的影响.方法 高脂饮食复制SD大鼠高脂血症模型,酶消化法原代提取SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养,取5～8代细胞进行实验.无血清培养24 h后:实验一分为4组:①对照组,②罗格列酮组(本实验所用罗格列酮均为100 μmol/L),③罗格列酮+过氧化物酶体增生激活受体γ(PPAR-γ)阻断剂GW9662组,④罗格列酮+抗转化生长因子β1(anti-TGF-β1)组,分别用Western blot于1 h检测磷酸化Smad2/3水平,24 h后流式细胞学检测细胞凋亡;实验二分2组:①对照组,②100 μmol/L罗格列酮组,分别于0、0.5、1、2,6、12和24 h,用Western-blot检测磷酸化Smad2/3水平.结果 24 h后罗格列酮组细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05),罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+抗转化生长因子β1组细胞凋亡率较罗格列酮组明显降低(P<0.05);罗格列酮处理后0.5 hVSMC p-Smad2/3表达水平明显高于对照组(P<0.05),且1 h迭高峰(P<0.05),p-Smad2/3水平达到高峰后又较快下降(P<0.05);罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+anti-TGF-β1组p-Smad2/3表达水平较罗格列酮组低(P<0.05).结论 罗格列酮可能通过激活过氧化物酶体增生激活受体γ,诱导血管平滑肌细胞磷酸化Smad2/3表达水平上调从而诱导血管平滑肌细胞凋亡.     

菟丝子总黄酮对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响

目的观察菟丝子总黄酮对血管平滑肌细胞凋亡的影响,并探讨其保护作用机制。方法菟丝子经溶剂提取,聚酰胺柱分离得黄酮提取物;大鼠胸主动脉平滑肌细胞传代培养,实验分四组,采用流式细胞仪检测细胞凋亡、Westen印迹法测定细胞Bcl-2和Bax蛋白表达及RT-PCR测定C-myc基因表达情况。结果菟丝子总黄酮高剂量组能够增加活细胞数量,降低死亡细胞数,特别是降低早期凋亡细胞数,与模型组比较有显著差异(P<0.05);菟丝子总黄酮高剂量组能够下降Bax蛋白表达量,与模型组比较有显著差异(P<0.05),而菟丝子总黄酮低剂量组升高Bcl-2蛋白表达量,与模型组比较有显著差异(P<0.05);菟丝子总黄酮高剂量和低剂量组C-myc m RNA表达量显著升高,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),无剂量依从效应。结论菟丝子总黄酮能抑制平滑肌细胞凋亡,其可能是通过能够下降Bax蛋白和升高Bcl-2蛋白表达,改善抗凋亡和促凋亡的蛋白失衡,增加细胞周期C-myc的基因的表达来发挥对心血管起保护作用。     

体外转染canstatin核糖核酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 :研究体外转染canstatin核糖核酸 (RNA)对培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的影响。方法 :在无菌条件下取新西兰白兔胸主动脉 ,采用阳离子脂质体介导的基因转染方法 ,将外源性canstatinRNA转入VSMC中 ,应用流式细胞仪 (FCM )、TUNEL及电镜观察canstatinRNA转染细胞的凋亡。实验共分对照组、DOSPER组和canstatin组。结果 :阳离子脂质体介导的canstatinRNA成功转入VSMC并表达 ,流式细胞仪检测表明 ,canstatinRNA转染细胞的细胞周期发生细胞生长期 (G1期 )阻滞 ,G1期细胞 ( 5 8 93± 2 17) %较对照组 ( 4 9 13± 2 0 7) %及DOSPER组 ( 4 9 99± 1 45 ) %增加 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,脱氧核糖核酸合成期 (S期 )细胞 ( 19 88± 2 2 8) %较对照组 ( 2 8 0 6± 3 77) %及DOSPER组( 2 8 5 0± 4 41) %减少 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。canstatin组RNA转染细胞的凋亡率 ( 17 74± 3 93) %高于对照组 ( 4 89± 3 5 9) %及DOSPER组 ( 4 0 6± 1 80 ) % ,有极显著性差异 (P <0 0 1) ,而对照组及DOSPER组无显著性差异 (P >0 0 5 )。TUNEL检测显示 ,canstatin基因转染细胞凋亡明显增加 ,电镜下观察到转染细胞出现典型凋亡特征性改变。结论 :阳离子脂质体介导的canstatinRNA成功转染VSMC并能显著     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡及c-myc基因表达的影响

目的探讨17β雌二醇(E2)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响及其可能机制.方法应用流式细胞仪检测低、高浓度17βE2(10、100 nmol/L)对传代的VSMC凋亡率的影响,并通过细胞免疫组化方法观察对凋亡相关基因c-myc表达的影响.结果17β E2作用下VSMC凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),伴随着VSMC凋亡率的增加,c-myc蛋白的表达亦增强,且表现明显的浓度依赖性.结论17β E2具有诱导VSMC凋亡的作用,其部分机制可能是通过上调促凋亡基因c-myc的表达有关.     

氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

为研究氧化型低密度脂蛋白引起血管平滑肌细胞凋亡及其凋亡的机制,采用细胞形态学ＤＮＡ末标记法,流式细胞仪,Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｔｔｉｎｇ观察氧化型低密度脂蛋白诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。结果发现,在氧化型低密度脂蛋白作用下,血管平滑肌细胞阻滞在分裂期的中期,并发生凋亡,ＤＮＡ末端标记法和流式细胞仪检测发现氧化型低密度脂蛋白引起细胞凋亡明显高于天然低密度脂蛋白（前者是后者的１０倍）。电镜下凋亡细胞     

酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及机制研究

目的探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及可能机制。方法体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs按随机数字表法分为正常对照组、高磷+p H7.4、高磷+p H7.1和高磷+p H6.8(在高磷培养基的基础上调整p H值为6.8、7.1和7.4三个亚组)。刺激4 d后,采用RT-PCR检测L型钙通道(LTCC)α_(1C)、β_2和β_3亚基,Runt相关转录因子2(Runx2)及Smad1基因的表达;应用钙离子探针Fluo-3/AM检测VSMCs胞外钙离子内流的效应变化。刺激14 d后,对各组细胞进行钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果与正常对照组比较,高磷+p H7.4组钙含量、ALP活性、Runx2和Smad1mRNA的表达明显增高(88.26±6.43比22.39±3.19、94.33±3.08比20.39±1.18、0.37±0.02比0.01±0.00、0.65±0.05比0.07±0.01,均为P<0.05);与高磷+p H7.4组比较,高磷+p H7.1组和高磷+p H6.8组的钙含量、ALP活性、Runx2和Smad1mRNA的表达均降低(69.95±1.72和50.74±3.29、51.11±2.05和34.62±1.13、0.25±0.02和0.09±0.01、0.44±0.04和0.23±0.01,均为P<0.05)。与正常对照组比较,高磷+p H7.4组的LTCCβ_3亚基mRNA表达水平增加(0.80±0.01比0.34±0.13,P<0.01),高磷+p H7.1组和高磷+p H6.8组的LTCCβ_3亚基mRNA表达水平均下降(0.64±0.11和0.43±0.01,均为P<0.01)。各组之间LTCCα_(1C)和β_2亚基mRNA的表达差异无统计学意义(P=0.08和0.74)。与正常对照组比较,高磷+p H7.4组的VSMCs胞内钙离子浓度增加(438.33±7.50比149.54±20.89,P<0.05);高磷+p H7.1组和高磷+p H6.8组的VSMCs胞内钙离子浓度均降低(329.66±16.64和234.00±17.43,均为P<0.01)。结论酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其可能是通过抑制LTCCβ_3亚基表达,降低VSMCs钙离子内流,阻滞VSMCs发生表型转化来实现的。     

脑心通对氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

血管平滑肌细胞(VSMC)的异常增殖是动脉粥样硬化(AS)形成的关键因素.研究表明,氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)可以刺激VSMC的增殖,促进AS的发生和发展.应用药物抑制VSMC增殖可以有效地减少AS的发生.     

银杏叶提取物对活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察银杏叶提取物（EGB）对活性氧诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法用含100 g/L小牛血清的DMEM体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的过氧化氢（H2O2）作为外源性活性氧刺激VSMC增殖,应用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）掺入和细胞周期时相测定等方法观察给予不同浓度的EGB预处理后,EGB对H2O2作用后VSMC的增殖的影响。结果H2O2对VSMC的增殖活性具有剂量依赖性促进作用,EGB可以抑制H2O2诱导的VSMC增殖,且具有剂量依赖性。结论EGB对于动脉粥样硬化形成及经皮腔内冠状动脉介入治疗后再狭窄的防治可能具有应用前景。     

神经肽Y对血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达的诱导作用

为探讨神经肽Ｙ对血管壁平滑肌细胞凋亡相关基因表达的诱导作用,以体外培养血管平滑肌细胞模型为研究对象,运用免疫荧光组织化学技术和激光共聚焦显微镜定量研究神经肽Ｙ因管平滑肌细胞凋亡基因ｂｃｌ－２,ｂａｘ和ｆａｓ表达的影响,以阐明神经肽Ｙ参与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病发生的分子机制。