KLF8在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞生物学特性影响

目的探讨Krüppel样转录因子8(KLF8)在骨肉瘤中的表达及对骨肉瘤细胞生物学特性的影响。方法通过RT-PCR和Western blot法分别检测骨肉瘤组织及配对的正常非肿瘤组织中KLF8 mRNA和蛋白水平。以骨肉瘤细胞F5M2为研究对象,细胞转染KLF8小干扰RNA(KLF8 siRNA组)及对照阴性序列(siRNA control组),同时以不做处理的细胞为对照组。RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中KLF8 mRNA和蛋白水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(pSTAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达。结果 KLF8在骨肉瘤组织中的表达水平明显高于非肿瘤组织(P0.05)。siRNA control组细胞中KLF8、STAT3、p-STAT3、Cleaved Caspase-3水平及细胞存活率、凋亡率与对照组相比无显著差异(P0.05)。KLF8 siRNA组细胞存活率及细胞中p-STAT3、KLF8水平均明显低于对照组(P0.05)。KLF8 siRNA组细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3水平均明显高于对照组(P0.05)。结论 KLF8在骨肉瘤组织中表达上调。干扰KLF8表达可能通过作用于STAT3信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖,促进骨肉瘤细胞凋亡。     

RNA干扰表皮生长因子受体对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨小发夹RNA载体介导抑制骨肉瘤细胞中表皮生长因子受体(EGFR)的表达和对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响.方法:构建pSilencer-EGFR短发夹状小干扰RNA(siRNA)真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到骨肉瘤细胞中,用Western印迹法、RT-PCR检测EGFR基因在骨肉瘤细胞中的表达;通过原位末端标记 (TUNEL)法,DNA片段化检测观察其对骨肉瘤细胞凋亡的影响.结果:成功构建pSilencer-EGFR短发夹状siRNA真核基因表达载体,转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的骨肉瘤细胞中EGFR基因表达显著抑制(60%).与对照组比较,pSilencer-EGFR转染组骨肉瘤细胞培养 48 h后,DNA片段化检测出"DNA ladder"和TUNEL法显示细胞典型凋亡特征.结论:EGFR小发夹RNA质粒载体可显著抑制骨肉瘤细胞中EGFR基因的表达,促进骨肉瘤细胞凋亡,EGFR基因具有抑制凋亡的作用.     

RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗影响

目的探讨RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗敏感性的影响。方法构建针对HepG2细胞survivin基因的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-387。将HepG2细胞接种于6孔板中,分为空白对照组（不加药物）、阴性对照组（每孔加pshRNA-survivin-NC为3.2μg）、低浓度转染组（每孔加pshRNA-survivin-387为0.8μg）、中浓度转染组（每孔加pshRNA-survivin-387为1.6μg）、高浓度转染组（每孔加pshRNA-survivin-387为3.2μg）,作用48 h后收集细胞,流式细胞术检测各组细胞凋亡指数;将HepG2细胞接种于96孔板中,分为3组：空白对照组（不加药物）、阴性对照组（每孔加pshRNA-survivin-NC为0.2μg）、实验组（每孔加pshR-NA-survivin-387为0.2μg）,四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞分别与顺铂（2.0 mg/L）作用24、36、48、60 h后的增殖水平。结果各浓度转染组细胞的凋亡指数明显高于空白对照组和阴性对照组（F=228.87,q=10.45～38.21,P〈0.01）,高浓度转染组细胞凋亡指数高于低浓度转染组（q=23.99,P〈0.01）。顺铂对实验组细胞的细胞抑制率在24、36、48、60 h时明显高于空白对照组和阴性对照组（F=235.88～910.86,q=28.04～52.28,P〈0.01）。结论 pshRNA-survivin-387转染能诱导肝癌细胞的凋亡,增强肝癌细胞对顺铂化疗的敏感性。     

hTERT基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性及COX-2表达的影响

目的本研究探讨hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞生物学特性及环氧化酶-2(COX-2)的影响。方法设计合成特异性针对hTERT mRNA的siRNA,电转染入乳腺癌细胞,以致目的基因沉默。应用RT-PCR及Western blot法检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白的表达状况;应用流式细胞仪检测细胞周期;并通过CCK-8增殖实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力;经小室侵袭实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力。利用免疫组织化学法检测COX-2蛋白的表达。结果 hTERT基因沉默48h后,hTERT转染组在沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白表达呈现明显降低(P0.05);细胞周期检测结果示乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞停滞在G0/G1周期,S期的细胞数目减低,三组比较统计学差异明显(P0.05);CCK-8增殖实验结果表明乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞在hTERT转染组的增殖得到显著抑制(P0.05);小室侵袭实验结果表明,hTERT转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P0.05);免疫组织化学法检测结果显示,COX-2蛋白在hTERT转染组的表达明显降低,并与hTERT基因的表达相关联。结论 hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞的增值和迁移能力均有影响,并能降低COX-2蛋白的表达,从而改善乳腺癌患者预后。     

RNA干扰沉寂Bcl-xL基因对肝癌细胞HepG-2生物学行为的影响

目的利用短发夹RNA（shRNA）在肝癌HepG-2细胞内诱导RNA干扰（RNAi）,抑制Bcl—xL基因表达,探讨对肝癌细胞HepG-2生长和凋亡的影响。方法构建Bcl—xL靶向的shRNA,用脂质体Lipofectamine^TM2000转染入肝癌细胞HepG-2。经RT—PCR和流式细胞术分别检测shRNA对Bcl—xL mRNA和蛋白水平的抑制效应,采用MTT,TUNEL等技术检测shRNA处理前后细胞生物学行为的变化。结果与未转染组相比,shRNA能够有效的抑制Bcl—xL基因表达,mRNA和蛋白表达明显降低,抑制率分别为86．6％和70．2％;肝癌细胞生长明显减慢,转染对照组（HepG-2hk）和未转染组（HepG-2-w）细胞的生长曲线较为接近,说明转染非特异性shRNA后的细胞增殖特性未受到影响（P〉0．05）;而转染组的细胞（HepG-2-si）增殖曲线位于前两者的下方,细胞增殖特性发生明显改变,差异有统计学意艾（P〈0．05）;凋亡明显增加,HepG-2-si组细胞每视野凋亡数为15．0±1．1,HepG-2-w,HepG-2hk组细胞凋亡数分别为1．7±1．0和3．2±1．2。HepG-2-si与HepG-2-w组间细胞凋亡数差异具有统计学显著性意义（P〈0．01）,而HepG-2hk组与HepG-2-w组间细胞凋亡数差异无统计学显著性意义（P〉0．05）。结论RNAi在体外明显抑制了肝癌细胞中Bcl—xL基因的表达和肿瘤细胞增殖,这种抑制作用是通过细胞凋亡增加实现的,为开辟Bcl—xL靶向的RNA干扰治疗肝癌提供实验基础。     

特异性小干扰RNA靶向沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨RNA干扰沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响。方法将人大肠癌【刖。细胞常规分为空白对照、阴性对照组和实验转染组。体外化学合成RIP1基因序列特异性小干扰RNA（siRNA）,Hegene介导转染人大肠癌细胞株Lovo细胞;采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测特异性siRNA对RIP1基因在mRNA水平上沉默效果;转染后采用噻唑蓝（MrI’r）比色法检测siRNA对细胞增殖的影响;流式细胞周期法检测siRNA对细胞周期的影响;Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力。结果成功转染RIP1siRNA的大肠癌Lovo细胞,RT-PCR显示RIP1mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制（P〈0．05）;GO～G1期细胞[（54．68±1．54）％]明显多于阴性对照组[（48．48±1．96）％]和空白对照组[（43．92±1．68）％];RNA干扰明显抑制Lovo细胞迁移力和侵袭力（21±2．731掷．43±2．064）。结论RIP1siRNA可有效抑制大肠癌Lovo细胞RIP1基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖。促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,RIP1siRNA能有效调控Lovo细胞恶性生物学行为。     

小干扰RNA沉默DEK基因对肝癌HepG_2细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默DEK基因表达对肝癌细胞株HepG_2凋亡的影响及其相关分子机制。方法常规培养人肝癌细胞株HepG_2,分为空白对照组、对照siRNA组和DEK siRNA组。对照siRNA组和DEK siRNA组在Lipofectamine~(TM) 2000脂质体介导下进行对照siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体的转染;空白对照组正常培养,不做任何处理。采用实时PCR法检测3组细胞DEK mRNA表达情况,采用Western blot法检测3组细胞DEK蛋白、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)表达情况,采用流式细胞术观察3组细胞周期和细胞凋亡率。结果转染48h后,DEK siRNA组DEK mRNA(0.420±0.050)和蛋白表达水平(0.311±0.038)及S期细胞比率[(20.713±1.529)%]、G_2/M期细胞比率[(20.030±4.833)%]、Bcl-2蛋白表达水平(0.342±0.061)明显低于空白对照组[0.826±0.052、0.691±0.073、(25.553±2.109)%、(26.560±4.766)%、0.599±0.075]和对照siRNA组[0.776±0.051、0.726±0.061、(24.210±2.463)%、(29.365±4.891)%、0.686±0.079](P0.05),G0/G1期细胞比率[(59.257±4.767)%]、细胞凋亡率[(10.325±0.791)%]、Bax(0.610±0.038)和caspase-3蛋白表达水平(0.716±0.054)高于空白对照组[(47.887±3.753)%、(5.697±0.508)%、0.280±0.059、0.373±0.044]和对照siRNA组[(46.425±3.354)%、(6.547±0.674)%、0.340±0.045、0.321±0.049](P0.05);空白对照组与对照siRNA组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论特异性DEK siRNA可针对性下调HepG_2细胞中DEK基因表达,促进HepG_2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达、上调caspase-3和Bax表达有关。     

干扰RNA抑制组织因子表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响

目的 研究组织因子（TF）表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞凋亡的影响。方法 以Western blotting法检测SK-N-MC细胞TF表达。分子生物学方法构建TFsiRNApSUPER表达载体，以脂质体介导进行基因转染。以水溶性四唑盐（WST）法检测阿霉素细胞毒性。以Western blotting法检测阿霉素诱导的caspase-3、多聚ADP核糖转移酶（PARP）的活化水平。以Hochest33342染色，荧光显微镜下检测凋亡细胞。结果 ①SK-N-MC细胞高表达TF；②转染TF siRNA-pSUPER表达载体的SK-N-MC细胞，TF表达水平呈剂量依赖性降低；③转染TF siRNA-pSUPER的SK-N-MC细胞及转染pSUPER质粒的对照细胞分别以不同浓度阿霉素处理24h，前者与后者相比存活细胞数显著降低；④转染TFsiRNA．pSUPER的SK-N-MC细胞及转染pSUPER质粒的对照细胞分别以阿霉素处理4、8h，可见前者较后者caspase-3、PARP活化增强；⑤转染TFsiRNA-pSUPER的SK-N-MC细胞与对照细胞相比，经阿霉素处理后的凋亡细胞数显著增多（P〈0．05）。结论 人神经母细胞瘤SK-N-MC细胞中TF异常高表达，以siRNA特异性下调TF表达后，可增强阿霉素细胞毒性及其诱导的肿瘤细胞凋亡。肿瘤细胞中TF的异常高表达可能参与阿霉素诱导凋亡的调控。     

骨肉瘤组织RRBP1表达及其对细胞生物学特征的影响

目的 探讨骨肉瘤组织中核糖体结合蛋白1(RRBP1)的表达,分析RRBP1基因对骨肉瘤U-2OS细胞生物学特征的影响。方法 选取2014年6月—2020年6月在南阳市第二人民医院和郑州大学第一附属医院行手术治疗的骨肉瘤患者91例,收集骨肉瘤组织;选取行骨科手术且排除骨肿瘤的患者45例,收集正常骨组织。采用免疫组化法检测骨肉瘤组织和正常骨组织中RRBP1蛋白。对骨肉瘤患者进行术后随访,随访至2021年12月,记录患者生存情况。选取人骨肉瘤细胞系U-2OS,根据转染序列的不同分为si-RRBP1组（转染RRBP1干扰序列）、si-NC组（转染阴性对照序列）和空白对照组（仅加入转染试剂）,以常规培养的U-2OS细胞作为对照。检测各组RRBP1 mRNA和蛋白表达,并检测各组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力。结果 骨肉瘤组织RRBP1蛋白阳性表达率高于正常骨组织（P<0.001）。Enneking分期ⅡB～Ⅲ期、有远隔转移的骨肉瘤患者RRBP1蛋白阳性率分别高于Enneking分期ⅡA期、无远隔转移的患者（P<0.05）。不同性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型和肿瘤大小的骨肉瘤患者RRB...     

RNA干扰DNA修复蛋白Ku80对乳腺癌基因HER2表达的影响

目的 构建特异性沉默Ku80基因的真核表达栽体,检测其对乳腺癌基因HER2表达的影响.方法 设计2条表达短发夹RNA的互补DNA序列,分别克隆至真核表达载体pGCsi-U6/Neo/DsRed构建shRNA-Ku80,转化大肠埃希菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定Ku80基因的真核表达载体pEGFP-N1-Ku80;将2种shRNA-Ku80分别与pEGFP-N1-Ku80共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测荧光强度筛选高效敲减靶点,并在基因和蛋白水平观察抑制Ku80对乳腺癌基因HER2表达的影响.结果 成功构建Ku80特异性shRNA表达载体,shR-NA-Ku80对靶点Ku80敲减效率达到59.50％,抑制Ku80表达使乳腺癌基因HER2在基因和蛋白水平明显降低.结论 成功构建shRNA-Ku80载体,在体外可有效抑制Ku80的表达,使癌基因HER2的表达明显下调,提示Ku80有望成为乳腺癌治疗的基因靶点.     

干扰ClC-2基因表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响

目的观察抑制容积调控氯通道ClC-2基因的表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响.方法设计和构建两个针对ClC-2基因的小干扰RNA（siRNA）重组表达载体,用脂质体Lipofectamine^TM2000介导转染,将空载体质粒和两个重组质粒分别转染入BT-325细胞（依次为对照组、PP1组和PP2组）;通过RT-PCR检测ClC-2基因mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期.结果与对照组相比较,干扰组ClC-2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期.结论干扰胶质瘤细胞系BT-325细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的生长,提示ClC-2基因可能成为控制胶质瘤恶性生长的新靶点.     

化学合成小干扰RNA对PC12细胞NgR表达的影响

目的 Nogo及Nogo-66受体(Ng R)对抑制中枢神经系统再生有重要的作用。本文主要观察化学合成Ng R特异性小干扰RNA(si RNA)对具有神经元分化潜能的克隆细胞系PC12细胞Ng R m RNA和蛋白表达的影响。方法培养大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12细胞,神经生长因子(NGF)诱导使其分化为类神经细胞,化学合成一段针对大鼠Ng R基因编码区的si RNA,用阳离子脂质体使之转染类神经细胞,转染后48 h,采用实时荧光定量PCR检测m RNA水平;并采用蛋白免疫印迹检测Ng R蛋白表达的变化,检测干扰的效果。结果荧光定量PCR结果显示:转染后48 h Ng R m RNA水平明显下降,差异具有显著性(P<0.05);同时蛋白免疫印迹结果显示,Ng R蛋白表达水平与对照组比较也降低,差异同样具有显著性(P<0.05)。结论化学合成Ng R特异性si RNA可以实现大鼠神经细胞内源性Ng R基因沉默。     

RNA干扰survivin基因对人肝癌HepG2细胞增殖影响

目的探讨RNA干扰技术抑制survivin基因表达对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响。方法构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因3个不同靶序列的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-323/387/52,用Lipofectamine 2000脂质体介导转染法转染质粒,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测survivin基因mRNA表达水平。选择对survivin基因表达抑制作用最强的shRNA载体转染HepG2细胞后,免疫细胞化学法（ICC）检测HepG2细胞survivin蛋白的表达情况,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖情况。结果与对照组比较,构建的3个shRNA质粒中pshRNA-survivin-387转染组survivin mRNA水平下调,差异有显著性（F=18.64,q=4.293～4.925,P〈0.05）,而pshRNA-survivin-323/52质粒对survivin的表达及mRNA水平的影响差异无显著性（q=0.631～0.126,P〉0.05）。转染pshRNA-survivin-387质粒的HepG2细胞survivin蛋白表达较对照组明显下调（F=68.39,q=13.71、14.37,P〈0.01）,其增殖能力较对照组显著下降（F=20.06～47.65,q=11.186、12.601,P〈0.01）。结论构建的针对人survivin基因387位靶序列的shRNA表达载体pshRNA-sur-vivin-387可显著抑制survivin的表达及HepG2细胞增殖。     

RNA干扰S100A4基因表达对肺癌SPC-A-1细胞侵袭能力的影响

目的:研究小干扰RNA抑制高迁移族蛋白s10基因表达对肺癌细胞SPC-A-1增值和侵袭能力的影响。材料与方法:设计合成靶向S100A4基因的siRNA,采用阳离子脂质体试剂瞬时转染肺癌细胞株SPC-A-1,利用实时荧光定量PCR和Western blot检测RNA干扰后S100A4基因的沉默效果,评价siRNA设计的合理性及RNA干扰抑制S100A4表达的有效性;用细胞活力计数仪测定3组细胞活力;分别在RNA干扰后24、48、72和96 h应用MTT实验检测细胞生存状态,计算生长抑制率并绘制生长曲线;应用boyden chamber法检测侵袭能力的差异。结果:靶向S100A4的siRNA成功抑制肺癌细胞株SPC-A-1中S100A4基因及蛋白表达,细胞活力检测仪测定RNA干扰48 h后,细胞活力显著下降;MTT测定肺癌细胞生长受到明显抑制;boyden chamber小室细胞侵袭实验提示肺癌穿膜细胞数明显减少。结论:应用siRNA技术能有效地抑制S100A4基因的表达,同时有效抑制SPC-A-1细胞的体外增值和侵袭,为肺癌的生物学治疗提供了新思路。     

si RNA干扰β-catenin基因对多发性骨髓瘤细胞耐药性的影响

目的:探讨小片段RNA(siRNA)干扰β-catenin基因表达对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226耐药性的影响。方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226,通过药物浓度梯度递增法建立马法兰耐药细胞模型;β-catenin-siRNA瞬时转染耐药细胞株,采用CCK-8法检测转染前后细胞对马法兰的敏感性变化,应用qRTPCR、Western-blot法分别检测β-catenin基因和蛋白表达水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:耐药骨髓瘤细胞经β-catenin-siRNA转染后对马法兰的IC50值由(5.29±0.19)μmol/L降至(1.88±0.64)μmol/L。Western-blot法检测显示,瞬时转染β-catenin-siRNA后β-catenin蛋白表达水平明显较转染前降低;转染后马法兰诱导细胞凋亡率由(35±0.5)%升高到(54±0.4)%,提示β-catenin基因可能与细胞耐药性相关,干扰β-catenin基因表达可提高耐药骨髓瘤细胞对于马法兰的敏感性。结论:β-catenin-siRNA干扰可抑制Wnt/β-catenin信号途径中β-catenin基因表达,抑制细胞增殖,增强马法兰对耐药骨髓瘤细胞株RPMI-8226毒性,增加细胞凋亡率。     

RNA干扰pygo2基因对人脑胶质母细胞瘤U251生物学行为及wnt通路的影响

目的研究pygo2在胶质瘤细胞系U251中的表达、功能及作用机制。方法利用反义pygo2转染U251,下调pygo2的表达,应用流式细胞术和MTT法,评价细胞生长、增殖、凋亡及周期变化;细胞克隆形成试验和transwell侵袭试验分析细胞的克隆形成能力和侵袭能力,采用Western印迹法检测通路蛋白的表达变化。结果转染反义pygo2后,pygo2表达降低,MTT结果显示转染反义pygo2后细胞生长受到抑制且凋亡细胞增加;流式细胞术提示G1期到S期阻滞,细胞克隆形成能力下降,侵袭能力均受到抑制,Western结果表明wnt通路相关蛋白c-myc和Cyclin D1在抑制pygo2表达后下降。结论 pygo2可促进人脑胶质瘤细胞生长、增殖,可能是胶质瘤治疗的有效靶点,其发挥作用可能与wnt通路密切相关。     

小干扰RNA对鼻咽癌CNE-2细胞Bcl-2基因的放射增敏研究

目的:探讨Bcl-2基因的特异性小干扰RNA(siRNA)对鼻咽癌细胞的辐射增敏作用.方法:构建Bcl-2基因的特异性siRNA的真核表达载体,并借助脂质体将其转入鼻咽癌CNE-2细胞.荧光显微镜观察转染效率;流式细胞仪检测Bcl-2蛋白在鼻咽癌细胞的表达,并检测CNE-2细胞的凋亡率;流式细胞仪检测Bcl-2基因的特异性siRNA真核表达载体联合X射线照射后CNE-2细胞的凋亡率.结果:流式细胞仪检测结果显示:转染组明显降低了Bcl-2蛋白在CNE-2细胞的表达,且转染组的细胞凋亡率明显增加.转染联合X射线照射后细胞凋亡率也明显增加,且明显高于阴性对照+X射线组和单纯X线照射组.结论:siRNA可以有效干扰鼻咽癌CNE-2细胞内Bcl-2基因的表达,可明显增强鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性.     

小干扰RNA下调GLI1基因的表达对MKN28细胞转移侵袭行为的影响

目的利用siRNA技术下调GLI1基因的表达,在体外研究GLI1对MKN28胃癌细胞侵袭转移能力的影响。方法脂质体法将GLI1 siRNA转染MKN28胃癌细胞,采用RT-PCR观察GLI1 siRNA转染前后GLI1在mRNA水平的变化情况。培养MKN28胃癌细胞,将细胞分为转染GLI1 siRNA组、阴性siRNA组和对照组后,分别采用Transwell小室法检测各组细胞的侵袭和转移能力。结果转染GLI1 siRNA后GLI1基因表达在24 h和48 h明显下调。侵袭和转移实验显示:GLI1 siRNA组侵袭和转移细胞数目均低于阴性siRNA组和对照组(P<0.05),而阴性siRNA组和对照组间的差异均无统计学意义。结论转染GLI1 siRNA特异下调GLI1基因表达,在体外抑制胃癌MKN28细胞的侵袭和转移,可能是胃癌靶向治疗的靶点。     

RNA干扰沉默涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞HER2基因表达

目的通过RNA干扰（RNAi）沉默HER2基因在涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞中的表达。方法将目的基因靶序列小干扰RNA（siRNA）转染Mc3细胞,并设置对照组,采用RT-PCR、免疫组化检测RNA干扰后HER2基因在Mc3细胞中的表达情况。结果RT-PCR结果显示RNA干扰后,HER2基因mRNA在涎腺黏液表皮样癌细胞中的表达与对照组比较明显降低;免疫组化实验结果显示RNA干扰后HER2基因蛋白在涎腺黏液表皮样癌细胞中的表达降低,与mRNA表达情况相一致。结论RNA干扰成功抑制了涎腺黏液表皮样癌细胞中HER2基因的表达,为口腔涎腺黏液表皮样癌针对癌基因HER2为靶基因的基因治疗提供研究基础。     

针对c-myc基因的小干扰RNA对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的c-myc、h-tert表达的影响

本研究探讨针对c-myc的小干扰RNA对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞c-myc,h-tert基因和蛋白表达的影响,为白血病的基因治疗提供新方法和靶点。针对c-myc mRNA的第1545-1565靶位点用化学合成法合成siRNA,经转染剂转染入Jurkat细胞。应用RT-PCR及Western blot分别检测c-myc siRNA作用前后c-myc、h-tert基因的mRNA及蛋白表达的变化。结果表明:c-myc siRNA能明显抑制Jurkat细胞的增殖,作用48小时的半数抑制浓度(IC50)约为75nmol/L。c-myc siRNA可引起Jurkat细胞的c-myc、h-tert mRNA和C-MYC、hTERT蛋白表达水平降低。结论:c-myc siRNA明显降低Jurkat细胞c-myc、h-tert基因的mRNA及蛋白表达水平。c-myc siRNA可能是通过抑制c-myc mRNA表达而降低胞内C-MYC蛋白水平。