头颈部鳞状细胞癌细胞中的上皮间质转化机制

上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)对肿瘤转移过程至关重要。在EMT形成中,两个EMT标志性蛋白E-钙粘蛋白和波形蛋白是通过多个信号转导通路被严格控制的。表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和转换生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)通过调节一组独特的转录因子促进EMT的形成,这些独特的转录因子包括Snail和Twist。Snail、Twist和Slug通过直接调控参与细胞黏附、迁移和侵袭的基因诱导EMT的发生。本文将重点阐述头颈部鳞状细胞癌细胞中EMT发生过程中的分子机制,为进一步研究头颈部鳞状细胞癌的转移机制提供理论基础。     

RNA干扰巨噬细胞移动抑制因子对宫颈癌Caski细胞上皮-间质转化的影响

目的通过RNA干扰技术研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对宫颈癌Caski细胞上皮-间质转化(EMT)的影响作用。方法通过构建重组真核表达载体p Genesil-1-MIF si RNA,转染宫颈癌Caski细胞(Caski-p Genesil-MIF si RNA组),同时设空载体转染组(Caski-p Genesil-1组)和空白对照组(Caski组),采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Caski细胞中MIF m RNA相对表达量的变化,并检测转染前后Caski细胞中EMT相关指标E-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 p Genesil-1-MIF si RNA转染Caski细胞后MIF m RNA的表达量减少,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);RNA干扰抑制MIF基因表达后,与对照组相比,p Genesil-1-MIF si RNA组Caski细胞上皮标记物E-cadherin m RNA及蛋白表达水平上调(P<0.05),间叶标记物Vimentin m RNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。结论抑制MIF基因表达可抑制宫颈癌Caski细胞发生EMT的能力。     

miR-577对胶质瘤细胞上皮-间质转化的调控作用及机制

目的探讨miR-577调控胶质瘤细胞上皮-间质转化活性的机制。方法将人源性胶质瘤细胞U87细胞分为miR-577类似物组、miR-577抑制物组和空白对照组,分别转染miR-577 mimic、miR-577 inhibitor和miR577-NC。转染24 h后,采用划痕实验检测各组细胞迁移距离,采用Transwell小室实验检测各组细胞侵袭细胞数,采用反转录PCR法检测各组细胞β-catenin mRNA表达水平,采用Western blot法检测各组细胞vimentin、E-cadherin蛋白相对表达量。结果 miR-577抑制物组、空白对照组、miR-577类似物组细胞迁移距离[(3.44±0.55)、(2.13±0.21)、(1.04±0.14)mm]、侵袭细胞数[(128.50±8.11)、(84.60±4.20)、(39.80±6.01)个]、细胞β-catenin mRNA相对表达量(0.80±0.06、0.61±0.04、0.45±0.06)和vimentin蛋白相对表达量(0.82±0.06、0.67±0.08、0.31±0.02)均依次降低(P0.05),E-cadherin蛋白相对表达量(0.44±0.04、0.76±0.05、0.89±0.08)依次增高(P0.05)。结论 miR-577可能作为抑癌基因,通过阻断Wnt/β-catenin信号通路的活性,降低人源性胶质瘤U87细胞上皮-间质转化活性,从而抑制肿瘤发展。     

Twist 2在胃癌细胞中的表达及对上皮间质转化的影响

目的探讨Twist 2在胃癌细胞中的表达情况及对上皮间质转化的影响。方法采用免疫组织化学方法检测Twist 2在胃癌组织中的表达情况,流式细胞术检测Twist 2对胃癌细胞凋亡行为的影响,Western blot检测Twist 2对上皮间质转化过程的影响,胃癌细胞裸鼠成瘤实验检测Twist 2对胃癌细胞裸鼠成瘤的影响。结果在胃癌组织中Twist 2的表达阳性率为(48. 35±5. 31)%,高于癌旁正常组织中Twist 2的表达阳性率(11. 26±1. 62)%,差异有统计学意义(P 0. 05)。流式细胞术检测结果显示,与对照组细胞凋亡率(2. 43±0. 33)%比较,抑制Twist 2细胞株的实验组细胞周期呈现凋亡增强趋势,细胞凋亡率升高为(15. 04±1. 23)%,两组比较差异有统计学意义(P 0. 05)。Western blot检测显示,抑制Twist 2表达后,E-cadherin蛋白表达相对下调,显微镜下观察Twist 2分布于胃癌细胞的细胞核和细胞质中,在抑制Twist 2表达后,E-cadherin蛋白表达相对减弱。与空白对照组比较,miR-135b-inhibitor组抑制Twist 2表达后可以减弱裸鼠皮下异种移植瘤的生长情况,移植瘤的生长趋势降低,同时成瘤后肿瘤总体体积相应减小,质量相应降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论 Twist 2细胞分布差异可能与其在肿瘤进展中的作用有关,且可能通过参与上皮间质转化过程,瞬时激活上皮间质转化,进而参与胃癌的侵袭和转移行为。     

上皮间质转化在肿瘤中的分子机制研究

上皮间质转化(EMT)在早期的胚胎发育及后期的组织形态发生和器官形成过程中起着关键的作用,与肿瘤细胞的局部浸润和远处转移密切相关[1,2]。肿瘤EMT发生最重要的标志就是E-钙黏着蛋白(E-cad-herin,E-cad)的表达下调或沉默,被认为是上皮细胞获得侵袭/转移能力的先决条件。肿瘤EMT的发生包     

细胞自噬调控上皮间质转化在肺纤维化中的作用机制

目的 探讨细胞自噬在特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)中的作用机制及其变化对调控肺泡上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,为进一步阐明IPF的发病机制提供实验依据.方法 采用倒置显微镜观察不同浓度转化生长因子(...     

沉默Tiam1基因对大肠癌LoVo细胞上皮-间质转化的影响

目的:探讨RNAi技术沉默Tiam1对大肠癌LoVo细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法:应用RNAi技术将Tiam1的特异性干扰片段转染处理LoVo细胞,采用Real time-RT PCR方法检测Tiam1表达水平和沉默前后LoVo细胞E-cadherin、Vimentin、RhoA、RhoC、Rac1的表达水平;扫描电镜、透射电镜,HE染色观察细胞结构及形态变化;考马斯亮蓝染色观察细胞骨架变化.结果:与对照组比较,RNAi组的Tiam1 mRNA表达水平明显降低;RNAi组的E-cadherin mRNA表达水平比对照组上调,差异具有统计学意义(P ＜ 0.05),RNAi组Vimentin、RhoA、RhoC、Rac1的mRNA表达水平与对照组比较差异均无显著性(全部P ＞ 0.05);扫描电镜显示RNAi组细胞胞体比对照组变圆、细胞突起明显变短或消失,丝状微绒毛减少,变为扁平盘状突起;透射电镜显示RNAi组细胞表面丝状微绒毛比对照组有较明显减少;HE染色显示对照组细胞散在生长,呈细长梭形,RNAi组细胞生长较集中,呈圆形或类圆形;RNAi组细胞质中丝网状的骨架蛋白结构及点状肌动蛋白小体比对照组减少.结论:沉默Tiam1能在一定程度上使已发生EMT的大肠癌细胞出现上皮表型及降低其迁移运动能力,对EMT有一定程度的逆转作用,推测Tiam1通过诱导EMT来促进大肠癌侵袭、转移,至于其确切机制尚待进一步研究.     

启膈散对食管鳞状细胞癌上皮-间质转化的影响

目的探究中药方剂启膈散对食管癌细胞系上皮-间质转化的影响。方法启膈散经过煎煮、浓缩制备成为冻干粉。Eca109细胞分别与浓度为50、100、200μg/ml的启膈散共培养,用CCK-8法检测细胞增殖活性;用Transwell实验检测细胞迁移能力;用荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,200μg/ml启膈散可以显著抑制细胞增殖;100μg/ml和200μg/ml启膈散可以显著抑制细胞迁移;随着启膈散浓度的升高,E-钙粘蛋白mRNA和蛋白水平表达量均上升,N-钙粘蛋白和波形蛋白mRNA及蛋白水平表达量均下降。结论启膈散抑制食管癌细胞上皮-间质转化并影响细胞迁移。     

雌激素对香烟烟雾诱导肺上皮间质转化的影响

目的 探究在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)中,雌激素通过调控miR?21/SMAD信号通路对香烟烟雾诱导的肺上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 RT?qPCR、Western b...     

Twist介导上皮间质转化参与胃癌干样细胞的形成及其相关机制的研究

目的研究Twist蛋白在胃癌干样细胞向上皮间质转化过程中的作用机制。方法采用免疫组化检测方法对42例胃癌标本中的Twist蛋白、人低氧诱导因子1α(HIF-1α)水平进行检测;并对同期体检健康人群胃黏膜组织中的Twist蛋白、HIF-1α水平进行检测。比较两组研究对象的Twist蛋白、HIF-1α阳性率,分析其与胃癌干样细胞转化上皮间质的关系。结果胃癌组Twist蛋白阳性率(59.52%)明显高于对照组(16.67%),胃癌组HIF-1α阳性率(64.29%)亦明显高于对照组(21.43%),差异均有显著性(P0.05)。胃癌患者Twist、HIF-1α的表达与淋巴转移、分化程度、浸润深度、淋巴结转移和远处转移有密切关系(P0.05),但与年龄、性别和肿瘤大小无明显相关性(P0.05)。结论 Twist蛋白的表达参与胃癌干样细胞向上皮间质转化的过程,其表达与胃癌的转移和侵犯相关,对胃癌的诊断、治疗和预后具有一定的指导意义。     

转录因子在上皮间质转化中分子机制研究进展

上皮细胞-间充质转化(epithelia-mesenchymal transition,EMT),是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,目前研究证实这种表型的转化与转录因子密不可分。与其他转录因子相比,转录因子SNAIL、TWIST、ZEB为促进EMT过程的主要转录因子,本文总结国内外与EMT相关研究并对转录因子及其在EMT过程中的分子机制加以综述。     

活性氧对卵巢癌上皮-间质转化作用研究进展

上皮-间质转化与上皮性卵巢肿瘤的侵袭和转移密切相关,氧化应激对疾病的发生、发展有重要影响。活性氧作为氧化应激过程中的重要产物,在卵巢癌细胞上皮-间质转化中通过对多种因子的调节参与卵巢癌细胞增殖分化、黏附和迁移等,在卵巢癌的诊断、治疗及预后中有重要作用。本文就活性氧对卵巢癌上皮-间质转化作用的研究进展作一综述。     

胺碘酮增加α-SMA表达诱导肺A549细胞上皮-间质转化机制研究

目的 探讨胺碘酮诱导肺A549细胞上皮-间质转化的机制.方法 通过胺碘酮体外干预肺A549细胞,通过免疫荧光染色检测细胞形态及间质细胞标志物α-SMA的表达,通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测间质细胞标志物α-SMA的mRNA表达.结果 相差显微镜观察A549细胞在应用胺碘酮100μM,150μM处理72h组呈α-SMA的高表达.实时RT-PCR分析显示胺碘酮诱导的α-SMAmRNA及α-SMA蛋白上调达72h.胺碘酮诱导的A549细胞系中α-SMAmRNA及α-SMA的表达变化呈剂量依赖性及时间依赖性.结论 胺碘酮通过增加α-SMA表达诱导肺A549细胞上皮-间质转化,可能是胺碘酮诱发肺纤维化的重要促纤维化因子.     

口腔鳞状细胞癌瘤芽与上皮-间质转化相关性分析及临床意义

目的:观察口腔鳞状细胞癌瘤芽(tumorbudding)与上皮–间质转化(EMT)相关性,进一步探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法:收集我院2007年至2013年收治的30例口腔鳞状细胞癌患者手术切除的标本,根据HE染色瘤芽数量将其分为2组,低瘤芽组(≤5),高瘤芽组(5)。免疫组织化学观察切片组织波形蛋白(Vimentin)表达情况,分析瘤芽数量与上皮间质转化的相关性以及与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier法进行生存分析,组间差异采用Log-rank检验。结果:低瘤芽组共22例,高瘤芽组共18例,病理学检查发现瘤芽内肿瘤细胞形态与肿瘤主体细胞无差异,瘤芽数量与患者年龄、性别、无相关性,瘤芽与肿瘤大小、临床分期以及淋巴结转移呈正相关(P0.05),高瘤芽组其Vimentin的表达率明显高于低瘤芽组,提示瘤芽与口腔癌EMT过程相关,是EMT的形态学表现。两组患者的中位生存期(overallsurvival,OS)分别为40.4,26.5个月(χ2=5.265,P=0.012),两组中位无进展生存期(progression-freesurvival,PFS)分别为35.8,22.1个月(χ2=6.744,P=0.009)。结论:口腔鳞状细胞癌组织瘤芽数量与EMT密切相关,代表恶性和侵袭能力更高的癌细胞亚群,可作为口腔鳞状细胞癌患者的预后判断指标。     

白藜芦醇对缺氧诱导胃癌细胞的上皮间质转化的抑制作用及其可能机制

目的本研究探讨白藜芦醇对缺氧诱导胃癌细胞的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的抑制作用及其可能机制。方法在缺氧和正常情况下培养胃癌细胞SGC-7901,设立对照组、白藜芦醇组、缺氧组、白藜芦醇+缺氧组,通过四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测白藜芦醇对胃癌细胞的增生抑制作用,细胞划痕试验检测白藜芦醇对胃癌细胞侵袭转移的抑制作用,荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测胃癌细胞中上皮间质转化相关因子Snail、E-cadherin及vimentin的表达情况。结果与对照组相比,缺氧状态下胃癌细胞SGC-7901的侵袭和转移能力显著增强,缺氧状态下,E-cadherin的表达降低,而Snail和vimentin的表达升高,白藜芦醇则可以抑制缺氧的影响,且白藜芦醇的抑制作用主要表现为对HIF-1α蛋白表达的影响,而对HIF-1α mRNA无影响。结论白藜芦醇可能通过影响HIF-1α蛋白的表达,抑制胃癌细胞的增生、侵袭及上皮间质转化过程。     

基质金属蛋白酶-11对骨肉瘤细胞上皮-间质转化的调控作用

目的 观察基质金属蛋白酶-11(matrix metalloproteinase-11, MMP-11)对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、转移的影响,探讨其对骨肉瘤细胞上皮-间质转化的调控作用。方法 对数生长期Saos-2细胞随机分为空白对照组(正常培养)、siRNA-MMP-11组(转染siRNA-MMP-11)、ovRNA-MMP-11组(转染ovRNA-MMP-11)。转染48 h采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞MMP-11 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞E-cadherin、N-cadherin、MMP-11蛋白相对表达量,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数,采用划痕实验检测迁移细胞数;采用MTT法检测转染后培养72 h时3组细胞增殖率。结果 转染48 h, ovRNA-MMP-11组MMP-11 mRNA和蛋白相对表达量(1.511±0.082、1.688±0.115)均高于空白对照组(1.339±0.211、1.024±0.066)、siRNA-MMP-11组(1.147±0.382、0.382±0.068)(P<0.05),空白对照组...