小白菊内酯通过NF-κB信号通路对LPS诱导的气道上皮细胞IL-8分泌水平影响的研究

目的探究小白菊内酯(PTL)对脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞IL-8的分泌水平影响以及具体的作用机制。方法 CCK8法检测0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的LPS对气道上皮细胞的毒性作用,RT-q PCR和Western blot检测不同浓度LPS对IL-8表达水平的影响。添加0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L PTL后,CCK8法检测细胞活性变化; RT-q PCR和Western blot检测白介素8(IL-8)表达水平的变化; Western blot检测PTL对NF-κB p65和IκBα蛋白表达水平的影响。结果 LPS呈时间和浓度依赖性抑制气道上皮细胞活性; LPS呈时间依赖性促进IL-8表达水平;添加LPS能够使IκB表达下调,NF-κB p65表达上调。添加适当浓度的PTL能够缓解LPS对细胞的毒性影响,使IL-8表达下调,具有浓度依赖性;并且促使IκB下调,NF-κB p65上调。结论小白菊内酯能够通过NF-κB信号通路抑制气道上皮细胞炎症因子IL-8的分泌水平。     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

NF-κB抑制剂PDTC对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响

目的:探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响。方法:用PDTC 0、25、50、100μmol/L处理HL-60细胞24、48、72 h,CCK-8实验检测细胞增殖抑制率,Hoechst染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase 3)、cleaved caspase 8及NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞24、48、72 h后,同一时间点下随着PDTC浓度升高,细胞增殖抑制率越高(r=0.924,P 0.01),在同一PDTC浓度下,随着时间推移,细胞增殖抑制率增高(r=0.952,P 0.01)。在25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞48 h后,与对照组比较,PDTC能显著提高HL-60细胞凋亡率,并使细胞周期阻滞在G1期(P 0.01); PDTC能显著下调HL-60细胞BCL-2,cyclinD1、p-NF-κB p65表达(P 0.05),上调BAX、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 8表达(P 0.01); 50、100μmol/L PDTC能显著下调HL-60细胞p-NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)表达(P 0.01)。结论:PDTC能显著抑制急性白血病细胞HL-60的增殖,并诱导细胞凋亡。     

姜黄素对CD34~+人急性髓系白血病细胞增殖抑制作用及机制探讨

目的:探讨姜黄素对CD34+人急性髓系白血病细胞株KG1a和Kasumi-1增殖抑制作用及其机制。方法:以不同浓度姜黄素(0、20、40、80μmol/L)处理KG1a和Kasumi-1细胞48 h,采用台盼蓝染色计数法检测细胞活率,Western blot法测定姜黄素对细胞NF-κB P65核蛋白表达影响,免疫荧光检测姜黄素对细胞NF-κB P65核蛋白移位影响。结果:姜黄素可显著抑制KG1a和Kasumi-1细胞生长,随着姜黄素浓度的增加,细胞数量逐渐下降。姜黄素可下调KG1a和Kasumi-1细胞P65核蛋白表达,抑制NF-κB P65核移位,使NF-κB处于失活状态。结论:姜黄素可抑制KG1a和Kasumi-1细胞增殖,其机制可能与姜黄素抑制NF-κB P65核蛋白表达有关。     

凝血酶促进结肠癌SW480细胞生长的研究

目的探讨凝血酶对结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响。方法将20 nmol/L、100 nmol/L、500nmol/L的凝血酶作用于SW480细胞48 h,以未处理组（0 nmol/L）作为对照。CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测蛋白酶活化受体-4（protease-activated receptor-4,PAR-4）的mRNA表达;Western blotting检测NF-κB p50蛋白表达。结果在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可剂量依赖性的促进SW480细胞的增殖;细胞周期显示G0/G1期细胞百分数减少,S期及G2/M期细胞百分数增加,表明凝血酶可诱导细胞从G0/G1期向G2/M期发展,从而促进细胞增殖;随着凝血酶浓度的增加,PAR-4 mRNA及NF-κB p50蛋白含量也有不同程度的增加。结论在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可促进结肠癌SW480细胞的增殖,加速细胞周期进程;其作用可经PAR-4介导,并与NF-κB信号通路活化有关。     

阿司匹林经核因子-κB信号通路抑制胃癌细胞株AGS生长

目的 研究阿司匹林是否通过阻断核因子-κB（NF-κB）信号通路对胃癌细胞AGS增殖及周期产生影响。 方法 培养胃癌细胞株AGS,MTT法检测阿司匹林在不同浓度和不同作用时间下对AGS细胞增殖的影响;流式细胞术检测阿司匹林对细胞周期的影响;western blotting 和免疫荧光法检测阿司匹林对AGS细胞 NF-κB p65表达的影响。 结果 阿司匹林在0.1~10 mmol/L浓度区间内,随浓度增加和时间延长,对AGS细胞的抑制率逐渐增加。细胞周期中DNA合成前期(G0/G1期)的细胞比例增加,DNA合成期（S期）细胞比例下降。随阿司匹林浓度增加和作用时间延长,AGS细胞 NF-κB p65的表达渐降。 结论 阿司匹林抑制胃癌细胞AGS的增殖, 诱导细胞G0/G1期阻滞,其作用机制可能是通过阻断NF-κB信号通路实现的。     

血小板源性生长因子-DD通过Akt信号通路促进膀胱癌T24细胞增殖

目的研究外源性血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)对膀胱癌T24细胞增殖及Akt信号转导通路的影响,阐述factor其诱导细胞增殖的机制。方法外源性PDGF-DD蛋白作用T24细胞,采用MTT法分析细胞的增殖;流失细胞仪检测细胞周期的变化;Western blot法观测膀胱癌T24细胞Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR以及核因子NF-κB蛋白表达的变化。结果 PDGF-DD促进T24细胞的增殖,并且具有浓度依赖性;DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例下降,合成期(S期)细胞比例上升;Akt、mTOR表达变化不明显,而p-Akt、p-mTOR及NF-κB p65的表达均上调。LY294002抑制PI3K/Akt及其下游靶位蛋白磷酸化;雷帕霉素和PDTC分别抑制p-mTOR和NF-κBp65的表达。结论外源性PDGF-DD刺激T24细胞的增殖,其机制可能是通过Akt/mTOR和Akt/NF-κB两条独立的信号通路实现的。     

p62参与人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性调控

目的探讨多功能蛋白p62参与调控人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性的机制。方法选取人恶性黑色素瘤标本20例,免疫组化方法检测p50、p65、p62表达。人黑色素瘤A375细胞,转染p62-siRNA特异性表达载体。MTT法检测细胞生存率,western blot检测p62蛋白表达,NF-κB荧光素酶报告基因分析检测NF-κB活性。结果 Spearman等级相关性分析p50与p65、p65与p62表达呈正相关均有统计学意义（P〈0.05）。与对照组相比,A375细胞转染p62-siRNA特异性表达载体24h、48h和72h,p62蛋白表达、细胞生存率和NF-κB活性均明显降低（P〈0.05）。结论人恶性黑色素瘤中p62表达与NF-κB高表达呈正相关,降低p62表达能通过抑制NF-κB活性降低A375细胞存活率,表明p62参与NF-κB活性调控。     

糖基化终末产物对视网膜色素上皮细胞表达NF-κB及VEGF的影响

目的研究糖基化终末产物(AGEs)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达核因子kappaB(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法体外培养人RPE细胞,分别加入浓度为50mg/L、100 mg/L、200 mg/L的AGEs,采用免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达,免疫荧光染色观察NF-κB活化情况,应用Western Blot方法检测VEGF的蛋白水平。结果免疫细胞化学染色结果表明,对照组仅少量细胞有VEGF弱阳性表达,AGEs各浓度可见细胞浆黄色或棕黄色着染,随作用浓度的增加其表达逐渐增强。免疫荧光染色显示AGEs各浓度组可见NF-κB p65向细胞核内转移,但未见明显的浓度依赖性。Western Blot检测显示VEGF蛋白在50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L AGEs组比空白组及对照组VEGF含量明显升高(P0.05),200 mg.L-1组较其它组VEGF含量明显升高(P0.01)。结论AGEs能促使人RPE细胞VEGF表达上调,并可促进RPE细胞NF-κB的活化。     

乌索酸对T细胞淋巴瘤细胞株Hut-78细胞体外增殖的影响及其机制研究北大核心CSCD

目的 探讨乌索酸对T细胞淋巴瘤细胞株Hut-78细胞体外增殖的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度（10、20、40、80 μmol/L）乌索酸作用不同时间（4、12、24、48、72 h）对Hut-78细胞增殖的抑制作用,并采用流式细胞术分析其早期凋亡的情况.采用免疫印迹法检测乌索酸作用后Hut-78细胞细胞核因子-κB（NF-κB）p65、p50、p52和p100亚基蛋白,以及caspase-8、3、9蛋白表达变化,采用逆转录PCR法检测血管内皮生长因子（VEGF）和环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达水平.结果 与不加药对照组比较,不同浓度的乌索酸作用组Hut-78细胞的增殖均受抑制（P值均＜0.05）;AnnexinⅤ＋/pI-细胞比例均升高（P值均＜0.05）;经10、20、40、80 μmol/L乌索酸处理Hut-78细胞72 h后,Hut-78细胞NF-κBp65、p50蛋白和VEGF、COX-2 mRNA表达水平均下降（P值均＜0.05）,caspase-8、3、9蛋白表达均增加（P值均＜0.05）;NF-κBp100、p52蛋白表达差异均无统计学意义（P值均＞0.05）.上述作用均呈剂量和（或）时间依赖性（P值均＜0.05）.结论 乌索酸抑制Hut-78细胞增殖,作用可能与促其凋亡有关,经过死亡受体和线粒体途径完成;影响NF-κB经典信号路径可能是其机制之一,VEGF和COX-2可能也参与其中.     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

基于TLR4-NF-κB信号通路的槐果碱改善人支气管上皮细胞炎症和黏液高分泌的机制

目的 基于TLR4-NF-κB信号通路探讨槐果碱（SC）体外抗炎作用及其抗哮喘的潜在效应机制。方法 采用脂多糖（LPS）刺激人支气管上皮细胞NCI-H292诱导体外炎症模型，给予不同浓度SC进行治疗。采用MTT法筛选LPS和SC对NCI-H292细胞的安全浓度；设Control组、LPS组（10μg/mL LPS）、SC组（10μg/mL LPS+不同浓度SC）,ELISA法检测细胞中黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达和上清液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的分泌情况；RT-PCR法检测细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、髓样分化因子（MyD88）和核因子-κB(NF-κB p65)mRNA的表达；Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p65(p-p65)以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果 MTT结果显示，LPS和SC分别在0～10μg/mL、0～40μg/mL浓度范围内对细胞活力无影响；ELISA结果表明，与Control组相比，LPS组细...     

子宫内膜癌组织中YKL-40、NF-κB的表达及临床意义

目的检测子宫内膜癌组织中人类软骨糖蛋白39(YKL-40)、核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学二步法检测40例正常子宫内膜、65例子宫内膜癌组织标本的YKL-40及NF-κB-P65的蛋白表达水平。结果 YKL-40在子宫内膜癌与正常子宫内膜中的表达率分别为76.9%和32.5%,两组比较差异有显著意义(P<0.01)。YKL-40表达与组织学分级有关,而与肌层浸润、年龄、FIGO分期、淋巴转移无相关性。NF-κB/P65在子宫内膜癌与正常子宫内膜表达阳性率为73.8%和为30%,两组比较差异有显著意义(P<0.05)。NF-κB-P65表达与组织学分级有关,而与肌层浸润、年龄、FIGO分期、淋巴转无相关性。在子宫内膜癌中YKL-40与NF-κB-P65的表达呈正相关(r=0.338,P<0.05)。结论 YKL-40、NF-κB-P65的异常表达可能在子宫内膜癌的发生、发展过程中起着重要作用,联合检测YKL-40和NF-κB-P65对子宫内膜癌的恶性程度及预后判断具有重要的临床意义。     

胰凝乳蛋白酶和地塞米松对儿童急性淋巴细胞白血病核转录因子-κB表达的影响及其意义

本研究探讨胰凝乳蛋白酶(N-tosyl-L-phenylalnylchloromethyl ketone,TPCK)和地塞米松(dexamethasone,Dex)对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响及意义,为临床寻求以NF-κB为靶点的治疗手段提供科学依据。应用SP免疫组织化学法检测20例ALL患儿NF-κB P65蛋白的表达,并检测TPCK和Dex对ALL细胞NF-κB P65蛋白活性的影响。结果显示:40μmol/L的TPCK能非常显著地抑制ALL细胞中NF-κB P65蛋白的活化,作用2小时,ALL细胞中NF-κB P65蛋白表达转为阴性,阳性表达率为(2.5±1.6)%;且TPCK对NF-κB P65蛋白活性的抑制作用在一定范围内具有时间依赖性。临床治疗相关剂量的Dex5.0μg/ml作用于ALL细胞24小时,能非常显著地抑制NF-κB P65蛋白的表达,其阳性表达率为(25.0±3.0)%;与基础状态相比较,有显著性差异(T=55,P<0.01)。结论:TPCK和Dex可抑制NF-κB的活性,NF-κB活性的抑制可能是Dex作用于儿童ALL细胞的机制之一。抑制NF-κB信号传导途径可能在儿童ALL治疗中有重大价值。     

二氢丹参酮Ⅰ对白血病THP1细胞的增殖抑制作用及其机制探讨

目的探讨二氢丹参酮I对白血病THP1细胞的增殖抑制作用,并探讨其作用机制。方法将不同浓度的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24、48及72 h,分别采用CCK8法、Annexin V/PI双染法检测其对THP1细胞的增殖抑制与促凋亡作用;采用Western blot法检测NF-κB、MAPK及PI3K细胞信号通路的蛋白表达。结果二氢丹参酮I与THP1细胞共孵24、48及72 h,其IC50值分别为6.2、4.3及4.1μmol/L。浓度为5μmol/L的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24 h后,G0/G1期细胞比率均显著增加(P0.01)。二氢丹参酮Ⅰ可使NF-κB、PI3K信号通路的蛋白表达下调,对MAPK信号通路的蛋白表达无显著影响。结论二氢丹参酮Ⅰ对THP1细胞具有增殖抑制作用并呈浓度及时间依赖性,其通过阻滞THP1细胞周期而促凋亡;其发挥抗肿瘤作用的机制可能与抑制NF-κB、PI3K细胞信号通路的蛋白表达有关。     

TNP-470和碱性成纤维细胞生长因子在血管内皮细胞增生中的相互作用

目的:检测TNP-470对内皮细胞增生的影响及其与碱性成纤维细胞生长因子的相互作用,并探讨其可能机制。方法:实验于2005-05/2006-10在沈阳医学院完成。采用本室改进的Jaffe法进行人脐静脉内皮细胞原代培养,细胞生长达亚融合状态后,换成无血清培养液使其停止生长。实验分组:依据施加的实验因素不同,将培养的人脐静脉内皮细胞分为4组:对照组(DMEM无血清)、TNP-470组(10-4g/L)、碱性成纤维细胞生长因子组(500μg/L)、碱性成纤维细胞生长因子 TNP-470组。实验评估:采用四甲基偶氮唑盐比色分析测定各组内皮细胞吸光度,流式细胞计数仪检测内皮细胞周期各时相相对细胞数,免疫组织化学SABC法检测内皮细胞中核因子Kappa B p65和ki-67蛋白的表达阳性率。结果:①人脐静脉内皮细胞的生长活性:TNP-470显著抑制内皮细胞增生;碱性成纤维细胞生长因子显著刺激内皮细胞增生,与对照组相比,差异显著(0.119±0.002,0.168±0.004,0.138±0.003,P<0.05)。②内皮细胞周期各时相相对细胞数:TNP-470阻滞内皮细胞进入增殖期,使G0/G1期内皮细胞比例上升,S期 G2/M期比例下降;而碱性成纤维细胞生长因子具有很强的促内皮细胞分裂增殖活性,使G0/G1期内皮细胞比例减少,S期 G2/M期比例增加,与对照组相比,差异显著(P<0.05)。③各组人脐静脉内皮细胞中NF-κB p65蛋白及Ki-67蛋白的表达阳性率:对照组人脐静脉内皮细胞中NF-κB p65蛋白呈棕褐色染色、ki-67极少表达;TNP-470可显著降低碱性成纤维细胞生长因子诱导的内皮细胞核内NF-κB p65蛋白及Ki-67蛋白的表达,与碱性成纤维细胞生长因子组比较,差异显著[NF-κB p65蛋白:(16.200±1.344)%,(68.400±1.204)%;Ki-67蛋白:(1.500±0.813),(65.700±1.113)%,P<0.05]。结论:TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制内皮细胞分裂与增殖;TNP-470抑制成纤维细胞生长因子诱导的内皮细胞增生与其影响内皮细胞中NF-κB的表达有关。     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

血管内皮生长因子和核转录因子p65在多形性腺瘤中的表达及其意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和核转录因子(NF-κB)p65在不同分型的多形性腺瘤中的表达及意义.方法 涎腺多形性腺瘤患者60例,其中细胞丰富型31例,基质丰富型29例,取瘤旁正常涎腺组织30份,应用免疫组织化学技术检测组织中VEGF、NF-κBp65的表达.结果 (1)VEGF表达主要以肿瘤性上皮组织较多,多为实性上皮条索、腺管样结构区域,染色强度不尽相同.(2)多形性腺瘤组织中NF-κB p65阳性表达主要见于腺泡上皮和导管上皮,呈强阳性染色;间质成分中血管上皮呈弱阳性表达、纤维结缔组织呈弱阳性表达;黏液样组织和软骨样组织未见明显阳性表达.(3)VEGF在细胞丰富型腺瘤中平均吸光度(MA)值为955.67±305.79,基质丰富型MA值为149.13±60.85,正常对照组MA值为53.46±9.66,两两比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).(4)NF-κB p65在细胞丰富型腺瘤MA值为529.80±164.81,基质丰富型为43.40±5.46,正常对照组为6.84±1.91,两两比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).<5)涎腺多形性腺瘤中NF-κB p65与VEGF表达呈正相关(r=0.854,P＜0.05).结论 (1)涎腺多形性腺瘤新生血管形成能力及细胞增殖活性随着瘤体中细胞成分的增多而逐渐升高,细胞丰富型多形性腺瘤较基质丰富型多形性腺瘤具有更易恶变的倾向.(2)NF-κB p65可能是通过作用于VEGF来实现对新生血管的调控作用.

Abstract：

Objective To investigate the expression and significance of VEGF and NF-κB/p65 in the two subtypes of pleomorphic adenoma. Methods Immunohistochemistry was applied to detect the expression of VEGF and NF-κB/p65 in pleomorphic adenoma of 60 patients including 31 cases of cell-rich and 29 cases of stroma-rich as well as normal salivary gland tissues of 30 cases from adjacent tumor. Results VEGF positive staining was mainly found in tumor epithelia,while NF-κB/p65 positive was detected in gland alveolus cell and ductal epithelia. The Mean optical density( MA ) values of VEGF were 955.67 ± 305.79,149. 13 ± 60. 85 and 53.46 ± 9. 66, respectively, in cell-rich adenoma, stroma-rich adenoma and normal control. The difference in VEGF expression between the groups was significant (Ps ＜ 0. 05 ) . The MA values of NF-κB/p65 were 529. 80 ± 164. 81,43.40 ±5.46 and 6. 84 ± 1.91 ,respectively,in three groups mentioned above. The difference in NF-κB/p65 expression between the groups was significant ( Ps ＜ 0. 05 ). In pleomorphic adenoma, the expression level of NF-κB/p65 was positively correlated with VEGF. Conclusion ( 1 ) The angiogenesis and proliferation potential of carcinomas increased with the cell component in pleomorphic adenoma. Stroma-poor adenoma is more frequently subjected to malignant transformation than stroma-rich adenoma. (2) NF-κB/p65 may have effects on angiogenesis by activating VEGF. Detecting the expression of VEGF and NF-κB/p65 may be helpful to predict the biological behavior of pleomorphic adenoma and prognosis of the patients, which couldprovide useful information for future targeted therapy of pleomorphic adenoma.     

苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖及其相关蛋白影响

目的探究苦参碱对宫颈癌Hela细胞最适作用浓度,及其对宫颈癌Hela细胞增殖及相关蛋白的影响。方法利用比色法(MTT)筛选对宫颈癌Hela细胞增殖抑制的最适浓度的苦参碱及其作用时间;利用流式细胞术检测宫颈癌Hela细胞在苦参碱处理过程中细胞增殖周期的改变情况;Western Blot检测周期相关蛋白Wee1、CDC2、Cyclin A和Cyclin B改变情况。结果浓度为2.0 g/L、时间为72 h的苦参碱处理的宫颈癌Hela细胞增殖抑制最为明显;最适浓度的苦参碱处理后的Hela细胞在G2/M期比率升高,G1期比率显著降低(P0.01);Western Blot检测周期相关蛋白Wee1明显上调,CDC2、Cyclin A、Cyclin B的表达水平均出现明显的下调趋势。结论 2.0 g/L苦参碱处理人宫颈癌Hela细胞72 h能够明显抑制Hela细胞的增殖,为临床应用中药治疗宫颈癌提供科学依据及筛选抗宫颈癌新药提供思路,值得深入研究。