siRNA沉默血管VEGFR-1基因对乳癌生长抑制作用

目的探讨应用化学修饰的小干扰RNA（siRNA）沉默人裸鼠乳癌移植瘤新生血管中的血管内皮生长因子受体-1（VEGFR-1）基因对移植瘤生长的影响。方法将组织瘤块接种于裸鼠右侧第二对乳腺的脂肪垫内,肿瘤长至一定大小时,随机分为对照（A）组、转染试剂对照（B）组、siRNA治疗（C）组。于肿瘤局部分别注射PBS溶液、Lipofectamine 2000^TM转染试剂和Lipofectamine 2000^TM转染试剂包裹的VEGFR-1 siRNA。22d后处死全部动物,取肿瘤,测其大小;用RT—PCR及蛋白印迹法检测乳癌组织VEGFR-1基因的表达。结果与A、B组比较,C组移植瘤增长趋势受到明显抑制（F=158．18、55．72,q=11．39、14．05,P〈0．01）;RTPCR结果表明,与A、B组比较,C组明显下调了VEGFR1 mRNA的表达（F=385．06,q=33．43,34．52,P〈0．01）;蛋白印迹法结果亦显示,C组明显下调了VEGFR-1 mRNA的表达（F=114．11,q=9．31,20．75,P〈0．01）。A组和B组各指标差异无显著性（P〉0．05）。结论化学修饰的siRNA介导的RNAi可以降低人乳癌裸鼠移植瘤血管中VEGFR-1的表达,抑制血管生成进而抑制肿瘤的生长,是潜在的肿瘤治疗的新方法。     

siRNA抑制Wnt-1基因对人肺腺癌细胞株A2的影响

目的：研究siRNA对人肺腺癌细胞株A2中Wnt-1基因表达对细胞生物学行为的影响。方法：将siRNA用脂质体转染A2细胞,RT-PCR测定Wnt-1 mRNA表达变化;Western blotting测定Wnt-1蛋白表达的变化;流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响。结果：与对照组相比,传染siRNA后,实验组靶基因mRNA表达和蛋白表达均有明显降低,细胞凋亡增加。结论：Wnt-1特异性siRNA能有效干扰A2细胞内其相应基因的表达,而靶基因表达受到抑制后细胞凋亡增加。     

siRNA特异性抑制HEL细胞evi1基因的实验研究

本研究探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默人红白细胞白血病细胞（HEL）的evi1基因后对细胞evi1基因表达的抑制作用及细胞生物学特征变化及其作用机制。体外合成3条evi1基因特异性的siRNA（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3）并转染HEL细胞,并设对照。用四甲基偶氮唑蓝法评价细胞增殖抑制情况,半定量逆转录聚合酶链反应（semiquantitative RT-PCR）检测evi1基因mRNA的表达,台盼蓝染色试验测定细胞活性的变化,流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡率。结果显示,细胞转染24、48、72小时后,以siRNA-1作用最强,转染后48小时抑制作用最明显。siRNA浓度为120nmol/L时,抑制率达到最大。转染48小时后siRNA-1对HEL细胞的增殖抑制率为（72.22±2.80）%,evi1-mRNA相对表达率为（27.31±1.11）%,HEL细胞活率为（26.05±2.49）%,与其他各组相比有显著性差异（p〈0.001）。siRNA可使细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞明显减少,凋亡率明显增高（p〈0.01）。结论：evi1基因特异性siRNA可抑制HEL细胞增殖,使evi1-mRNA表达水平降低,细胞活性下降,HEL细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞的有丝分裂,促进细胞凋亡。     

SATB2基因增强槲皮素抑制肾癌细胞生长的机制

目的:探讨核基质蛋白特异AT序列结合蛋白2(special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)基因及槲皮素对肾癌细胞活力、侵袭能力和凋亡的影响及机制。方法:人肾癌786-O细胞分为空白组、重组体pcDNA3.1-SATB2组、槲皮素组和pcDNA3.1-SATB2+槲皮素组,其中pcDNA3.1-SATB2转染参照Lipofectamine 2000说明。各组细胞处理48 h后,通过CCK-8,Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞活力、侵袭能力和凋亡。Western印迹法检测SATB2,STAT3,p-STAT3,MMP-2和Bcl-2蛋白表达。结果:转染pcDNA3.1-SATB2的786-O细胞SATB2蛋白表达明显升高(P0.05)。pcDNA3.1-SATB2及不同浓度槲皮素均可抑制786-O细胞活力,且槲皮素可呈现浓度和时间依赖性抑制细胞活力(P0.05)。pcDNA3.1-SATB2及槲皮素均可抑制786-O细胞侵袭能力,诱导凋亡,下调p-STAT3,MMP-2和Bcl-2表达,而联合使用pcDNA3.1-SATB2和槲皮素对786-O细胞侵袭能力、凋亡及p-STAT3,MMP-2和Bcl-2表达影响更明显(P0.05)。结论:过表达SATB2可增强槲皮素对肾癌细胞活力和侵袭能力抑制及凋亡促进作用,机制与抑制STAT3信号通路有关。     

siRNA靶向抑制CXCR4基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭的影响及机制研究

目的探讨抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法回顾性收集鼻咽癌42例临床资料及相应的癌旁组织。RT-PCR和Western bloting分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达;人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白组(细胞未做任何处理)、NC-siRNA组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4-siRNA组(细胞中转染CXCR4的靶向siRNA序列)。转染48 h后Western bloting检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力。结果鼻咽癌中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);转染CXCR4-siRNA组后CXCR4的蛋白表达显著降低;NC-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P0.05);CXCR4-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组(P0.01)。结论抑制鼻咽癌细胞CXCR4基因表达可显著降低癌细胞的增殖与侵袭能力,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

siRNA沉默HIF-1α基因对人卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药的影响

卵巢癌的治疗主要以手术与化疗相结合,化疗在其治疗中占据重要位置,而耐药的产生往往成为临床治疗的障碍。研究表明缺氧诱导因子-1α表达与肿瘤的耐药密切相关[1],应用抑制HIF-1α的表达可增加乏氧肿瘤细胞系对依托泊甙的化疗敏感性[2]。     

DC-CIK细胞免疫疗法对卵巢癌患者免疫功能的影响及临床意义

卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,在我国,卵巢癌的死亡率高居妇科恶性肿瘤的首位,严重影响着女性的生命健康及生活质量,因而一直受到人们的关注。卵巢癌的治疗原则为手术、铂类为基础的联合化疗及放疗,但卵巢癌患者术后放化疗疗效并不十分明显,且容易复发和转移。     

siRNA沉默Slug基因抑制体外胰腺癌AsPC l细胞生长的实验研究

有研究发现Slug在恶性肿瘤中过度表达,并与肿瘤的发生、发展,患者预后有关[1].最近发现,S1ug是PUMA的强烈抑制基因,而PUMA是促凋亡基因.本文旨在研究S1ug基因沉默后对胰腺癌AsPC 1细胞的增殖和凋亡的影响,探讨胰腺癌基因治疗的新靶点.     

CA125对卵巢癌患者免疫功能影响的研究进展

卵巢癌是恶性程度极高的妇科肿瘤,是女性生殖系统最常见的三大恶性肿瘤之一,其病死率居女性生殖系统肿瘤的首位.近年来,卵巢癌的发病率逐年上升.晚期（Ⅲ、Ⅳ期）卵巢癌患者5年存活率仅为15%～20%,原因之一在于其不易被早期发现,且手术和化疗后的复发率高.糖链抗原125（carbohydrate antigen 125,CA125）对非黏液性卵巢上皮细胞癌的诊断和疗效评价具有很高的灵敏性,但其特异性较差.已有大量研究证实,血清CA125对卵巢癌的诊断、疗效评价及预后判断具有较高的应用价值.血清CA125的半衰期为4.8 d,且代谢很快,     

靶向卵巢癌HIF-1α基因siRNA真核表达载体的构建及鉴定

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是生物体内普遍存在于RNA水平上调节基因表达的方式,具有很强的转录后基因沉默作用,已广泛用于抗肿瘤的研究中。缺氧诱导因子-1α表达与肿瘤的耐药可能有密切关系,卵巢癌细胞中亦有HIF-1α蛋白的高表达,因此抑制卵巢癌细胞中HIF-1α基因的表达可能逆转肿瘤耐药。     

siRNA抑制人卵巢癌SKOV-3细胞MDM2的表达及细胞增殖的研究

目的 研究siRNA对人卵巢癌细胞SKOV-3细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入SKOV-3细胞;转染siRNA MDM2(简称si-MDM2)转染阴性对照质粒到SKOV-3,并设只加转染试剂作空白对照组,采用MTT法检测si-M...     

卵巢癌患者CA125水平对细胞免疫功能的影响

  目的  体外检测卵巢癌患者血中CA125对细胞免疫功能的影响。  方法  收集2012年5月至2013年6月北京协和医院符合诊断标准的卵巢癌患者58例, 按CA125浓度分为3组; 同时收集良性妇科疾病患者20例及体检正常的健康者20名作为对照。应用细胞培养、酶联免疫吸附法、酶联免疫斑点(enzyme-linked immunospot, ELISPOT)等实验, 观察体外刺激健康人淋巴细胞产生γ-干扰素(interferon-γ, IFN-γ)的能力, 判断CA125对机体细胞免疫状态的影响。  结果  在卵巢癌患者中, 随CA125水平升高, 淋巴细胞绝对值及百分比值呈逐渐下降趋势。高浓度CA125卵巢癌患者的血清与植物血凝素共同刺激健康者混合淋巴细胞后, 培养上清液中IFN-γ的含量[(36.16±16.89)ng/ml]较阳性对照组和低浓度CA125组[分别为(45.68±18.01)和(46.22±19.30)ng/ml]显著降低(P < 0.05);ELISPOT结果显示高浓度和中浓度CA125(斑点数均值分别为108.2和371.6)对细胞免疫抑制功能与健康对照组和良性疾病组(斑点数均值分别为573.0和523.0)比较, 差异均有统计学意义(P < 0.01, P < 0.05);而去除血清中CA125后, 对细胞免疫抑制作用明显减弱。  结论  卵巢癌患者体内的CA125水平与淋巴细胞的数量、活性及其产生细胞因子的活性呈负相关关系。CA125除作为与卵巢癌相关的标志物外, 还可能是一种细胞免疫抑制因子。     

Gli1表达抑制对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的 抑制Glioma-associated oncogene homoglog（GLI）基因在卵巢癌SKOV3细胞中的表达,探讨GLI1表达抑制对SKOV3细胞增殖的影响.方法 构建并筛选GLI1基因的RNAi表达质粒,转染SKOV3细胞,CCK-8法比较转染前后卵巢癌细胞增殖变化,流式细胞仪检测紫杉醇诱导转染前后细胞凋亡比例,流式细胞仪检测转染前后SKOV3的细胞周期情况.Westem blot检测cyclinD、Bcl-2及Capase3蛋白表达的影响.结果 转染48 h后,在SKOV3细胞中Control组、N-Control组、GLI1 shRNA-1组、GLI1 shRNA-2组、GLI1shRNA-3组、GLI1 shRNA-4组的GLI1 mRNA水平分别为1.00±0.00、1.03 ±0.02、0.73±0.07、0.98 ±0.08、0.53±0.08、0.68±0.04,与Control组相比,GLI1 shRNA-1、GLI1 shRNA-3、GLI1 shRNA-4组GLI1 mRNA表达量均下降（P＜0.05）,转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞中GLI1蛋白表达水平低于GLI1 shRNA-1、GLI1shRNA-2、GLI1 shRNA-4组（P＜0.05）,具有显著的干扰效果.转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞增殖受到明显抑制（P＜0.05）,在紫杉醇的诱导下细胞凋亡比例明显增加,细胞周期主要阻滞在G1/S期.Western blot检测发现Bcl-2蛋白表达下降（P＜0.05）,Capase3蛋白表达升高（P＜0.05）,细胞周期蛋白CyclinD1蛋白表达下降（P＜0.05）.结论 GLI1 shRNh对SKOV3细胞增殖抑制作用明显,促进细胞凋亡,GLI1信号可通过抑制cyclinD1活化抑制细胞恶性增殖.     

TP 方案化疗对上皮性卵巢癌患者免疫功能的影响及意义

化疗是卵巢癌综合治疗的一个重要组成部分,是晚期和复发性卵巢癌的主要治疗手段,在控制腹水和预防复发的同时也会对机体产生一些不良反应,如骨髓及免疫功能抑制等,影响了患者治疗的依从性。本文通过观察43例卵巢上皮性癌患者首次化疗期间机体免疫功能的变化,从免疫角度为卵巢癌患者化疗提供一个疗效评估的方法,希望减轻化疗对患者免疫功能的损伤。     

化地卵巢癌患者红细胞免疫功能的影响

本文用红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（（ＲＣ３ｂＲＲ）红细胞免疫复合物率（ＲＩＣＲ）、红细胞肿瘤花环率（Ｆ－ＴＲ）测定外周红细胞免疫功能，对２０例接受化的卵巢恶生肿瘤进行动态观察。结果表明，与化有相比，化疗第１疗程后，机体红细胞免疫功能无明显变化，第２疗程开始有轻度损伤，以后随着疗程的增加，红细胞免疫功能有逐渐下降趋势，表现为ＲＣｂＲＲ和Ｅ－ＴＲ降低、ＲＩＣＲ升高。提示化疗可能抑机体红细胞免疫功能。卵巢癌