Survivin siRNA沉默对非小细胞肺癌细胞生物学的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白(Survivin)对非小细胞肺癌(NSCLC)H1299细胞株的生物学影响。方法通过脂质体介导将Survivin基因siRNA瞬时转染H1299细胞。采用RT-PCR及Western blot检测转染后H1299细胞内Survivin基因的表达水平。MTT比色法、流式细胞术(FCM)及Western blot观察细胞增殖、凋亡、周期及Caspase-9蛋白表达变化情况。结果 RT-PCR及Western blot证实,siRNA沉默的H1299细胞中Survivin mRNA、蛋白的表达水平较未转染组明显降低(t=10.970,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。MTT、细胞凋亡及周期结果表明,siRNA沉默的H1299细胞其增殖能力明显减弱、细胞凋亡明显升高,G2/M期阻滞,Caspase-9蛋白表达增加(t=8.162,P=0.001;t=10.800,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。结论 Survivin参与NSCLC细胞增殖、凋亡、周期这一生物学过程。     

siRNA沉默表皮生长因子受体蛋白表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的观察在siRNA沉默EGFR基因处理后肾癌细胞的生物学行为情况。方法将肾癌细胞株ACHN分为3组,对照组不进行任何干预,阴性对照转染组使用加入非特异性转染试剂及siRNA干预,观察组使用加入特性性转染试剂及siRNA干预,分别检测3组细胞的EGFR表达量、增殖活性、生长曲线、迁移及侵袭活性。结果经siRNA处理72 h后,观察组细胞EGFR表达水平明显低于阴性对照转染组和对照组;观察组细胞生长活跃能力显著低于对照组和阴性对照转染组,且在处理48 h后RNAi组细胞数显著低于对照组和阴性对照转染组(P0.05);较空白组和阴性对照转染组,观察组细胞生长受到显著抑制(P0.05);12 h时及24 h时观察组细胞划痕距离显著高于对照组和阴性对照转染组(P0.05);12 h时对照组、阴性对照转染组穿膜细胞数差异无统计学意义(P0.05),观察组穿膜细胞数显著低于对照组和阴性对照转染组(P0.05)。结论采用siRNA沉默EGFR蛋白后,可有效改善肾癌细胞的增殖、生长、迁移及侵袭等生物学活性。     

靶向干扰Survivin基因对结直肠癌细胞PTTG蛋白的影响

目的探讨重组载体介导的Survivin小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞株Lovo中PTTG蛋白的影响。方法运用靶向Survivin siRNA真核表达载体转染结肠癌Lovo细胞,western blot检测PTTG蛋白的表达水平。结果 Survivin基因沉默后24-72h,与正常对照组相比,Survivin和PTTG蛋白表达均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Survivin基因沉默后结直肠癌细胞PTTG蛋白表达显著下调,提示Survivin和PTTG可能相互促进共同参与结直肠癌的发生发展。     

siRNA沉默TEAD4基因对人黑素瘤细胞系A375细胞生物学行为的影响

目的探讨siRNA沉默人黑素瘤A375细胞中TEAD4基因对细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法人黑素瘤A375细胞分为TEAD4-1组、TEAD4-2组、TEAD4-3组和转染试剂对照组(MOCK组),TEAD4-1组、TEAD4-2组、TEAD4-3组细胞分别转染TEAD4-1 siRNA、TEAD4-2 siRNA、TEAD4-3 siRNA,MOCK组细胞转染RNAi-Mate转染试剂。4组细胞采用实时PCR检测TEAD4 mRNA相对表达量。TEAD4-2组和MOCK组采用流式细胞仪检测转染6 h时转染成功阳性细胞百分率、转染48 h时细胞周期变化情况,采用流式双染法检测转染48 h时细胞凋亡率。结果 TEAD4-2组TEAD4 mRNA相对表达量(0.208±0.036)低于MOCK组(1.000±0.000)、TEAD4-1组(0.361±0.047)和TEAD4-3组(0.417±0.059)(P0.05),TEAD4-1组和TEAD4-3组低于MOCK组(P0.05),TEAD4-1组与TEAD4-3组比较差异无统计学意义(P0.05);转染6 h时,TEAD4-2组转染成功阳性细胞百分率[(69.830±0.198)%]明显高于MOCK组(0)(P0.05);转染48 h时,TEAD4-2组G_0/G_1期细胞百分率[(91.327±0.251)%]和细胞凋亡率[(11.000±0.436)%]均明显高于MOCK组[(85.590±0.610)%、(0.620±0.100)%](P0.05),G_2/M期细胞百分率[(5.473±0.191)%]和增殖指数(0.086±0.003)低于MOCK组[(9.710±1.101)%,0.139±0.006](P0.05)。结论 TEAD4基因表达可促进人黑素瘤细胞系A375细胞增殖、影响细胞周期及抑制细胞凋亡,TEAD4基因可能参与人黑素瘤的发生和发展。     

不同浓度羟考酮对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨羟考酮对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞生物学行为的影响。方法选择人CRC SW620细胞接种并孵育24 h后,分别以0、10、20和40μg/ml羟考酮处理24 h,然后使用CCK-8试剂盒孵育后,酶标仪板在490 nm波长下测量不同浓度组的光密度值,比较细胞增殖抑制率差异;采用流式细胞术FITC-Annexin V/PI检测不同浓度羟考酮对SW620细胞凋亡的影响;行划痕实验检测不同浓度羟考酮对SW620细胞迁移的影响;采用酶联免疫吸附法检测不同浓度羟考酮对SW620细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果相较于对照组(未经羟考酮处理组),10、20、40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞增殖能力受到显著抑制。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(t=12.64,P=0.019;t=13.94,P=0.016)。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞迁移距离比例显著低于对照组(t=11.29,P=0.036;t=12.05,P=0.009)。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞VEGF表达水平显著低于对照组(t=12.62,P=0.031;t=13.61,P=0.013)。结论羟考酮能以剂量依赖的方式对CRC细胞的增殖和迁移起到抑制作用,抑制VEGF的产生和分泌,同时还能诱导细胞的凋亡。     

MAP4K4沉默表达对结肠癌细胞生物学特性的影响

目的 分析沉默丝裂原活化蛋白激酶-激酶激酶4(MAP4K4)对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法脂质体siRNA干扰技术转染人结肠癌细胞SW620细胞株,按转染情况分为MAP4K4干扰组(转染MAP4K4-siRNA 1. 5m L)、空载体组(转染无关siRNA 1. 5 m L)、空白对照组(不予细胞转染处理)。分别采用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白印迹法(WB)测定各组MAP4K4 mRNA及蛋白表达,并检测各组SW620细胞增殖、侵袭及细胞凋亡情况。结果 ①空载体组与MAP4K4干扰组MAP4K4 mRNA、蛋白浓度低于空白对照组(P 0. 05),MAP4K4干扰组MAP4K4mRNA、蛋白浓度低于空载体组(P 0. 05);②MAP4K4干扰组不同时间增殖活性均低于空载体组和空白对照组(P 0. 05);③MAP4K4干扰组穿膜细胞比率低于空载组和空白对照组(P 0. 05),空载体组穿膜细胞比率低于空白对照组(P 0. 05);④MAP4K4干扰组细胞凋亡率高于空载组和空白对照组(P 0. 05),空载体组细胞凋亡率高于空白对照组(P 0. 05)。结论 siRNA干扰技术沉默结肠癌细胞MAP4K4表达可降低结肠癌细胞增殖及侵袭能力,促进癌细胞凋亡,或可能为结肠癌防治的新靶点。     

siRNA沉默PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡的影响

目的研究PTTG基因沉默对胰腺癌细胞凋亡的影响,初步探讨其调控机制。方法利用阳离子脂质体进行基因沉默实验,将PANC-1细胞分为三组（①.未转染PANC-1细胞、②.转染阴性对照siRNA、③转染siRNA-PTTG）,TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blot技术检测bcl-2,bax基因和蛋白表达;ELISA法检测caspase-3活性。结果组③细胞凋亡明显增多,凋亡率为18.4±2.4%;组①和组②凋亡率分别为7.5±2.0%和6.9±1.1%,差异具有显著性（P〈0.05）;组③bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,与组①和组②比较差异具有统计学意义（P〈0.05）;组③、组①和组②间bax mRNA和蛋白表达没有具有统计学差异（P〈0.05）;组③caspase-3活性升高,与组①和组②比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 siRNA-PTTG下调PTTG基因表达导致PANC-1细胞凋亡增加,可能与bcl-2表达下调,caspase-3活性升高有关。     

hTERT基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性及COX-2表达的影响

目的本研究探讨hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞生物学特性及环氧化酶-2(COX-2)的影响。方法设计合成特异性针对hTERT mRNA的siRNA,电转染入乳腺癌细胞,以致目的基因沉默。应用RT-PCR及Western blot法检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白的表达状况;应用流式细胞仪检测细胞周期;并通过CCK-8增殖实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力;经小室侵袭实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力。利用免疫组织化学法检测COX-2蛋白的表达。结果 hTERT基因沉默48h后,hTERT转染组在沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白表达呈现明显降低(P0.05);细胞周期检测结果示乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞停滞在G0/G1周期,S期的细胞数目减低,三组比较统计学差异明显(P0.05);CCK-8增殖实验结果表明乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞在hTERT转染组的增殖得到显著抑制(P0.05);小室侵袭实验结果表明,hTERT转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P0.05);免疫组织化学法检测结果显示,COX-2蛋白在hTERT转染组的表达明显降低,并与hTERT基因的表达相关联。结论 hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞的增值和迁移能力均有影响,并能降低COX-2蛋白的表达,从而改善乳腺癌患者预后。     

RAB25沉默抑制结直肠癌细胞铁死亡的作用研究

目的 ：探讨沉默RAS相关结合蛋白25(ras-associated binding protein 25, RAB25)在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞铁死亡中的作用。方法：利用GEPIA (Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库分析RAB25的表达水平及与铁死亡关键基因表达之间的关联。在CRC细胞系HCT116上构建慢病毒介导的RAB25沉默细胞株（shRAB25）,应用定量实时聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）和蛋白印迹法检测RAB25的表达情况。应用细胞增殖与毒性检测法（CCK8）检测不同浓度的（0～20μmol/L）铁死亡诱导剂erastin对沉默RAB25后细胞活力的影响;利用荧光显微镜和透射电镜分别观察erastin对沉默RAB25后的细胞形态和线粒体结构的影响;使用C11-BODIPY染色和流式细胞仪检测erastin对沉默RAB25后的细胞脂膜过氧化水平的影响。检测erastin与西妥...     

利用siRNA沉默VEGF对膀胱癌生长的影响

目的研究VEGF特异性RNA干扰对膀胱癌细胞体内外增殖的影响。方法针对VEGF构建siRNA真核表达载体Psilencer^TM -VEGF-siRNA，并转染至膀胱癌细胞T24。RT-PCR观察VEGF的基因沉默效果；MTT比色分析检测细胞体外增殖能力；流式细胞计数检测细胞的凋亡。同时，通过裸鼠移植瘤模型观察VEGF基因沉默效果及对膀胱癌体内治疗的效果。结果转染siVEGF后膀胱癌细胞的VEG基因的表达显著被抑制（最高抑制率达79％）。与对照组比较，转染siVEGF组T24细胞的增殖活性明显低于转染阴性对照质粒组和空白对照组（P〈0．01）；流式细胞计数结果显示细胞发生凋亡。裸鼠体内致瘤实验显示，转染siVEGF组T24细胞在裸鼠体内增殖显著降低，肿瘤生长减慢。结论siVEGF能够有效的抑制膀胱癌中VEGF的表达，从而有效抑制膀胱癌细胞的生长。     

RNA干扰神经膜蛋白2基因表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响

目的探究神经膜蛋白2(NRSN2)对骨肉瘤U2-OS细胞增殖、侵袭、迁移的影响以及作用机制。方法实验分为对照组、siRNA阴性组、siRNA-NRSN2组。对照组为常规培养的细胞,siRNA阴性组和siRNA-NRSN2组通过siRNA技术干扰骨肉瘤细胞中NRSN2基因的表达,分别将siRNA-NC和siRNA-NRSN2转染入U2-OS细胞。CCK-8实验检测干扰NRSN2基因表达对细胞增殖的影响。Transwell小室法检测干扰NRSN2对骨肉瘤U2-OS细胞侵袭、迁移的影响。采用免疫印迹试验(Western Blot)检测NRSN2、钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)水平。结果与对照组相比,siRNA-NRSN2组U2-OS细胞中NRSN2蛋白的表达量显著降低(P0.05)。干扰NRSN2表达显著抑制U2-OS细胞增殖(P0.05),降低其侵袭、迁移能力(P0.05),显著增加Ecadherin蛋白水平,明显降低N-cadherin、Vimentin蛋白水平(P0.05)。结论干扰NRSN2通过抑制上皮-间质转化(EMT)的发生,阻碍骨肉瘤U2-OS细胞的增殖、侵袭、迁移。     

siRNA干扰ARD1对人结直肠腺癌细胞株基因表达谱的影响

目的 探讨siRNA干扰抑制ARD1的表达对人结直肠腺癌细胞株基因表达谱的影响.方法 利用脂质体将筛选出的有效沉默ARD1的siRNA分别转染到SW620、HCT-8两株细胞中,提取两株细胞的总RNA并应用安捷伦人全基因表达谱芯片检测转染前后基因表达谱的变化.结果 两株细胞中,转染组相对于阴性对照组,21个基因共同上调...     

苯乙酸对结直肠癌细胞中C-myc基因表达的影响

目的　观察诱导分化剂苯乙酸 (Phenylacetate,PA)抑制结直肠癌细胞HCT 8增殖过程中C myc基因表达的变化。方法　体外细胞培养 ,运用流式细胞技术观察苯乙酸对HCT 8细胞凋亡的影响。应用原位分子杂交方法观察应用PA后对HCT 8细胞C mycmRNA表达的情况。结果　PA组HCT 8细胞G1期比例从 32 3%增加到 6 1 0 % ,S期比例从 5 9 6 %下降到 2 9 7%。PA治疗后HCT 8细胞C mycmRNA表达阳性表达率为 (12 0 5± 7 92 ) % ,显著低于非治疗组中的阳性率 (5 5 15± 2 1 6 4 ) % ,P <0 0 1。通过细胞周期的检测发现 ,PA抑制大肠癌细胞HCT 8增殖的方式为抑制细胞周期G1期比例。结论　PA通过下调结直肠癌细胞C mycmRNA的生成以及细胞生长G1期阻滞在肿瘤诱导分化治疗方面发挥作用     

空间环境因素对细胞生物学特性的影响

空间是人类活动的新领域，空间环境涉及的微重力及高强度射线辐射是与人类生存的地球完全不同的环境。目前，空间医学研究已证实，空间环境会对人类心血管、骨和骨骼肌、免疫内分泌等系统产生影响，导致心血管功能障碍、肌肉萎缩、骨质减少、免疫功能低下、内分泌紊乱等病理变化；地面模拟微重力及辐射生物学研究，也从细胞水平证实了上述因素对细胞生物特性的影响。     

siRNA干扰下调DJ-1的表达对人支气管上皮细胞生物学行为的影响

目的 探讨DJ-1表达下调对人支气管上皮细胞(H B E细胞)生物学行为的影响.方法 构建DJ-1基因siRNA慢病毒载体,感染HBE细胞(DJ-1 siRNA组),并设置Control siRNA慢病毒载体对照(Control siRNA组)及空白对照(BC组),分别采用流式细胞术检测各周期细胞,四甲基偶氮唑盐(MT...     

靶向乙酰肝素酶siRNA对大肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的研究化学合成的siRNA干扰乙酰肝素酶对大肠SW620癌细胞生物学行为及其可能的机制。方法实验组选取对数期生长的SW620癌细胞转染靶向乙酰肝素酶siRNA,对照组用非特异性的siRNA处理对数期生长的SW620癌细胞。应用RT-PCR检测乙酰肝素酶基因表达,并利用免疫组化检测乙酰肝素酶蛋白表达情况,侵袭实验检测细胞侵袭力。结果实验组的对数期生长的SW620癌细胞的乙酰肝素酶基因和蛋白含量显著低于对照组,而实验组细胞的侵袭能力也显著低于对照组。对照组的侵袭细胞数显著多于实验组。结论化学合成的siRNA能够降低大肠癌细胞恶性生物学行为,可作为一种新的基因治疗方法用于大肠癌的临床治疗。     

siRNA沉默细胞周期相关激酶基因对鼠结肠癌生长及其细胞凋亡的影响

目的探讨siRNA沉默细胞周期相关激酶(CCRK)基因对鼠结肠癌生长及其凋亡的影响。 方法将50只BALB/C(nu/nu)裸鼠皮下接种人类结肠癌SW480细胞,将其中建立移植瘤裸鼠模型成功的30只裸小鼠按照单纯随机抽样方法随机分为3组,分别接种siRNACCRK转染的人类结肠癌SW480细胞株(实验组)、正常培养的SW480细胞(空白对照组)和以转染携带无关序列片段sh RNA慢病毒的SW480细胞(阴性对照组)。第42天处死裸鼠后取下肿瘤组织,比较各组肿瘤重量、CCRKmRNA表达量、CCRK蛋白表达和细胞凋亡的变化。 结果转染siRNA组肿瘤重量、CCRK mRNA和CCRK蛋白表达[(0.54±0.15)g,1.14±0.24和0.18±0.05]表达显著低于空白对照组[(1.05 ± 0.14)g,2.41±0.42和0.49±0.07]和空siRNA载体组[(1.07 ±0 .12)g,2.39±0.47,0.47±0.09;F＝21.18,23.47,90.03;P<0.01];空白对照组与空siRNA载体组比较差异无统计学意义(q＝0.98,1.07,1.13;P>0.05)。实验组沉默CCRK基因后组织中细胞凋亡率为(21.23±1.12)%,明显高于空白对照组(6.78±0.37)%和阴性对照组(7.25±0.32)%,差异有统计学意义(F＝56.936,P<0.01);但空白对照组和空siRNA载体组之间差异无统计学意义(q＝1.78,P>0.05)。 结论CCRK靶向siRNA表达载体接种结肠癌裸鼠后能显著降低结肠癌瘤体的增长,抑制CCRK基因和蛋白表达;siRNA沉默CCRK基因能促进其凋亡,CCRK基因有望成为结直肠癌治疗的新靶点。     

特异性小干扰RNA靶向沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨RNA干扰沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响。方法将人大肠癌【刖。细胞常规分为空白对照、阴性对照组和实验转染组。体外化学合成RIP1基因序列特异性小干扰RNA（siRNA）,Hegene介导转染人大肠癌细胞株Lovo细胞;采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测特异性siRNA对RIP1基因在mRNA水平上沉默效果;转染后采用噻唑蓝（MrI’r）比色法检测siRNA对细胞增殖的影响;流式细胞周期法检测siRNA对细胞周期的影响;Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力。结果成功转染RIP1siRNA的大肠癌Lovo细胞,RT-PCR显示RIP1mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制（P〈0．05）;GO～G1期细胞[（54．68±1．54）％]明显多于阴性对照组[（48．48±1．96）％]和空白对照组[（43．92±1．68）％];RNA干扰明显抑制Lovo细胞迁移力和侵袭力（21±2．731掷．43±2．064）。结论RIP1siRNA可有效抑制大肠癌Lovo细胞RIP1基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖。促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,RIP1siRNA能有效调控Lovo细胞恶性生物学行为。     

siRNA干扰LUNX对NSCLC细胞系A549增殖和侵袭的影响

【目的】探讨siRNA干扰肺特异性X蛋白（LUNX）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系A549增殖和侵袭的影响。【方法】采用脂质体LipofectamineTM 2000介导LUNX siRNA转染人NSCLC细胞系A549,转染48 h后分别用 qRT‐PCR和 Western blot方法评价干扰效果;MTT法检测LUNX siRNA转染对细胞增殖的影响;Transwell法检测LUNX siRNA转染对细胞侵袭能力的影响;并用 qRT‐PCR 和 Western blot方法检测p‐AKT的表达。【结果】转染后NSCLC细胞系A549内LUNX的表达显著降低;LUNX表达降低使NSCLC细胞系A549的增殖减慢及侵袭能力降低,且LUNX表达降低后p‐AKT的mRNA和蛋白表达均显著降低。【结论】siRNA干扰后LUNX表达、NSCLC细胞系的增殖和侵袭能力降低,可能与其表达降低后p‐AKT表达减少相关。