5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古抑酶素A对亚砷酸钠处理细胞中DNMT1和HDAC1基因转录及表达的影响

目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-AZA-dC)和曲古抑酶素A(TSA)对亚砷酸钠(NaAsO2)处理的人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDA C1)基因mRNA转录和蛋白表达的影响.方法 以25 μmol/L NaAsO2重复间隔染毒HaCaT细胞72 h(25 μmol/L NaAsO2处理24h,隔天再次进行相同处理,共处理3次),再分别以1.5、3.0、6.0 μmol/L 5-AZA-dC作用于NaAsO2处理细胞72 h,125、250、500 nmol/L TSA作用于NaAsO2处理细胞48 h,以实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测DNMT1及HDA C1基因的mRNA转录,以免疫印迹分析(western blotting)检测DNMT1及HDAC1蛋白表达.设不进行任何处理的细胞为空白对照,仅染砷的细胞为阳性对照.结果 1.5、3.0、6.0 μmol/L 5-AZA-dC作用于NaAsO2处理细胞后,DNMT1及HDAC1 mRNA转录相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义;DNMT1蛋白相对表达量降低,与仅染砷的阳性对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05);HDAC1蛋白相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义.125、250、500 nmol/L TSA作用于NaAsO2处理细胞后,DNMT1及HDAC1 mRNA转录相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义;DNMT1及HDAC1蛋白相对表达量降低,与仅染砷的阳性对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 5-AZA-dC能抑制砷所致的DNMT1蛋白高表达,TSA能抑制砷所致的DNMT1及HDAC1蛋白高表达,这为进一步探索砷中毒的表观遗传学治疗提供了科学依据.     

亚砷酸钠对HaCaT细胞中DNMT1、HDAC1基因mRNA转录及蛋白表达的影响

目的 了解不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因mRNA转录和蛋白表达的影响.方法 分别以0、3.13、6.25、12.5和25μmol/L NaAsO2溶液重复间隔处理HaCaT细胞72 h(NaAsO2处理24...     

β-酪啡肽-7对大鼠离体小肠葡萄糖吸收的抑制效应

目的探讨β-酪啡肽-7(β-casomorphin7,β-CM7)对大鼠离体小肠吸收葡萄糖的影响以及辅助降血糖作用。方法利用翻转的大鼠离体小肠囊研究β-CM7对葡萄糖转运和小肠粘膜α-葡萄糖苷酶活性的影响,同时将纳络酮(Naloxone,NaL)阻断剂与β-CM7按2:1浓度混合,探讨影响葡萄糖吸收的阿片样机制。结果在离体情况下,β-CM7在7.5×10-7～7.5×10-5mol/L浓度范围内对葡萄糖的小肠吸收均有一定的抑制作用;抑制作用与其浓度呈正相关能够降低葡萄糖跨膜快速转运期的平均速率;对α-葡萄糖苷酶活性没有抑制作用。阿片特异性拮抗剂纳络酮对β-CM7的抑制作用没有明显逆转。结论β-CM7不能影响α-糖苷酶活性,可通过非阿片样途径抑制大鼠小肠葡萄糖的吸收。     

14-3-3β蛋白mRNA在宫颈癌及宫颈上皮内瘤样变的表达

目的:探讨14-3-3β蛋白在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、宫颈癌(CC)中的表达情况。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测14-3-3β蛋白mRNA在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的表达情况,采用图像分析软件处理数据,用系统统计软件SPSS 11.5进行统计分析。结果:14-3-3β蛋白mRNA在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的表达量分别为0.61±0.07、0.69±0.03、1.11±0.13、1.29±0.08、1.45±0.02;CC组、CINⅢ组、CINⅡ组与慢性宫颈炎组相比,表达明显上升,有显著性差异(P<0.01);CC组与CIN各组相比,表达上升,有显著性差异(P<0.01);CIN组间随着病变程度的增加,表达呈上调趋势,有差异(P<0.05);CINⅠ组与慢性宫颈炎组相比,表达无差异性(P>0.05)。结论:14-3-3βmRNA在CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌中表达明显上调,有利于临床指导宫颈癌的早期诊断和治疗。     

中性内肽酶高表达对β-淀粉样肽诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 确定中性内肽酶（NEP）高表达对β-淀粉样肽（AB）诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制。方法 利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和免疫印迹法（Western blot法）检测基因在细胞中的表达。利用AB25-35诱导PC12细胞，CellTiter96AQueous单溶液检测系统（MTS）检测细胞存活率；分光光度法检测乳酸脱氢酶（LDH）含量、活性氧（ROS）生成量水平变化；化学发光法检测细胞三磷酸腺苷（ATP）生成量和Caspase-3表达量的变化。结果 在AB25-35诱导PC12细胞凋亡中，NEP高表达可明显提高细胞存活率，降低培养基中LDH含量和ROS生成量；提高细胞ATP释放量；抑制Caspase-3在细胞凋亡中的激活，与正常PC12细胞相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。稳定表达失活NEP的PC12细胞则对细胞凋亡没有影响。结论 NEP通过降低氧化应激反应对细胞线粒体的损伤，抑制凋亡关键蛋白Caspase-3的激活，从而提高AB25-35诱导的神经细胞的存活率。     

Aβ1-40对PND5大鼠海马线粒体p-drp-1表达的影响及相关分析

目的:探讨Aβ1-40致伤PND5大鼠后对其海马线粒体p-drp-1表达的影响。方法:选取刚出生5天的健康(PND5)大鼠为实验组,同时选同样的PND5大鼠作为对照组,于实验组大鼠海马区注射Aβ1-40试剂1μl。所有大鼠均正常饲养7天后,将实验组海马区神经元制作培养基,对照组海马区神经元制作悬浮液,然后分别运用Western blots技术检测两组大鼠线粒体p-drp-1的表达情况并分析这两组海马神经元线粒体p-drp-1表达的差异性。结果:PND5大鼠经Aβ1-40注射后,提取海马区组织总蛋白,并运用Western blots技术定量检测线粒体动力学调节蛋白p-drp-1,结果显示其表达量明显下降。结论:p-drp-1的表达水平能反映线粒体的分裂程度和神经元的活跃程度,Aβ1-40对神经元的损伤导致疾病的发生和进展。保护线粒体结构和功能的稳定,抑制细胞凋亡的作用可以使疾病得到转归。     

妊娠期糖尿病患者血清中胰高血糖素样肽-1及二肽基肽酶-IV的浓度检测及临床意义

目的:研究妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和二肽基肽酶-IV(DPP-IV)的水平,并探讨其在妊娠期糖尿病中的作用。方法:采用ELISA法检测43例GDM患者、38例糖耐量正常孕妇及35例正常非孕妇血清GLP-1及DPP-IV的水平;同时测定3组妇女空腹血糖(FPG)、胰岛素(FINS)及糖化血红蛋白(HbA1c)的水平,并根据HOMA稳态模型提出的公式,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素分泌指数(HOMA-HBCI)进一步评价胰岛β细胞的功能。结果:①GDM患者血清GLP-1水平明显低于糖耐量正常孕妇组及正常非孕妇组,差异有统计学意义(P<0.05),血清DPP-IV水平明显高于糖耐量正常孕妇组及正常非孕妇组,差异有统计学意义(P<0.05);②GDM患者与另两组相比,存在明显的胰岛素抵抗(HOMA-IR明显增大,P<0.05),而胰岛素分泌明显下降(HOMA-HBCI明显减小,P<0.05),差异均有统计学意义。结论:GDM患者血清GLP-1水平明显下降,而DPP-IV水平明显升高,可能在GDM的发病中发挥一定的作用。     

磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)抑制剂BEZ235联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响,分析其相关机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞分为对照组(未加任何药物刺激)、BEZ235组(100 nmol/L)、SAHA组(10μmol/L)、联合给药组(BEZ235 100 nmol/L+SAHA 10μmol/L)。采用噻唑蓝(MTT)法检测宫颈癌HeLa细胞活力,采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测bcl-2蛋白、Bax蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路激活情况。结果 对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值分别为(0.77±0.05)、(0.62±0.05)、(0.60±0.04)、(0.45±0.05)。与对照组比较,BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值均显著降低(t=5.959,P<0.05;t=7.690,P<0.05;t=13.280,P<0.05)。与BEZ235组和SAHA组比较,联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值均显著降低(t=7.187,P<0.05;t=6.631,P<0.05)。BEZ235组和SAHA组宫颈癌HeLa细胞OD值比较差异无统计学意义(t=1.183,P>0.05)。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞凋亡率分别为(5.72±0.34)%、(13.11±0.67)%、(18.36±0.75)%、(30.46±1.10)%。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组bcl-2相对表达量分别为(0.84±0.06)、(0.47±0.05)、(0.40±0.04)、(0.20±0.04),Bax相对表达量分别为(0.19±0.03)、(0.46±0.05)、(0.67±0.05)、(0.82±0.05)。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组p-AKT相对表达量分别为(0.97±0.08)、(0.72±0.07)、(0.54±0.07)、(0.22±0.05),p-mTOR相对表达量分别为(0.84±0.06)、(0.43±0.07)、(0.61±0.08)、(0.16±0.05)。结论 PI3K/mTOR抑制剂BEZ235、组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA单独或联合应用能显著抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,诱导细胞凋亡,且具有协同效应,与PI3K/AKT/mTOR信号通路进一步抑制有关。     

电刺激通过整合素β1/转化生长因子-β1提高L 929细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达

目的探究电刺激(electrical stimulation,ES)通过整合素β1(integrinβ1)/转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)提高L 929细胞I型胶原(Collagen, COL)蛋白和Ⅲ型COL蛋白的表达,为ES治疗盆底功能障碍性疾病提供一定的参考机制。方法 2018年6～11月武汉大学人民医院中心实验室将小鼠成纤维细胞L 929根据是否进行ES(刺激强度取100 mv,2 h)及Anti-Itgb1(integrinβ1抑制剂)处理,分为control组、Anti-Itgb1组、Anti-KLH(integrinβ1抑制剂的阴性对照)组、ES组、Anti-Itgb1+ES组、Anti-KLH+ES组,共计6组。分别使用ES、Anti-itgb1处理相应组的细胞,并采用Western-blot和qRT-PCR检测处理前后的TGF-β1、COLI、COLⅢ蛋白及mRNA表达量。结果与control组对比,ES可提高TGF-β1、COLI、COLⅢ的蛋白及mRNA表达量(均为P0.05),而Anti-itgb1+ES组与ES对比,TGF-β1、COLI、COLⅢ的蛋白及mRNA表达量显著降低(均为P0.05),Anti-itgb1抑制了ES对TGF-β1信号通路的作用。结论 ES通过integrinβ1作用于TGF-β1信号通路进而影响COL的表达。     

慢性阻塞性肺疾病合并肺部真菌感染患者血浆(1-3)-β-D葡聚糖与sTREM-1的表达

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并真菌感染患者血浆(1-3)-β-D葡聚糖与可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)的表达,为患者临床诊治提供参考。方法选取2017年6月-2018年6月在宁波市第四医院住院初步诊断为COPD合并肺部真菌感染的100例患者,收集痰液进行感染病原菌检测,抽取患者外周静脉血检测血浆(1-3)-β-D葡聚糖与sTREM-1。结果 74例患者确诊为肺部真菌感染,占74.00%,26例为细菌感染,占26.00%,肺部真菌感染的患者其中52例同时合并细菌感染、22例为单纯真菌感染,分别占52.00%、22.00%;真菌感染患者其中34例白假丝酵母感染、20例热带假丝酵母感染,分别占45.95%、27.03%;真菌感染患者血浆(1-3)-β-D葡聚糖与sTREM-1分别为(43.33±28.40)pg/ml、(18.09±5.17) ng/L,高于无真菌感染患者(P<0.05);相关性分析结果显示真菌感染患者血浆(1-3)-β-D葡聚糖与sTREM-1之间有正相关性(P<0.05)。结论 COPD合并肺部真菌感染患者感染病原菌主要为白假丝酵母和热带假丝酵母,真菌感染患者血浆(1-3)-β-D葡聚糖与sTREM-1均明显升高,用于肺部真菌感染的临床诊治具有指导价值。     

涎腺腺样囊性癌中内皮细胞特异性分子-1、整合素β1的表达及临床意义

目的探讨内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)和整合素β1在涎腺腺样囊性癌(SACC)中的表达及临床意义。方法采用组织芯片(TMA)作为实验平台,运用免疫组织化学和原位分子杂交技术对52例SACC和11例“正常”涎腺组织中ESM-1、整合素β1的表达情况进行观察,并分析二者表达之间的相关性。结果SACC组织中ESM-1表达较涎腺“正常”组织显著增强(P<0.01);整合素β1表达较涎腺“正常”组织显著增强(P<0.01),与肿瘤淋巴结转移和侵犯神经呈正相关(P<0.05);SACC组织ESM-1和整合素β1mRNA表达呈显著正相关(r=0.372,P<0.01)。结论SACC组织中ESM-1和整合素β1的表达上调,二者可能相互协同,共同参与了SACC的发生和发展。     

GLP-1介导PI3K/Akt通路拮抗AOPP诱导HTR-8/SVneo细胞凋亡的作用

目的:探究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路在胰高血糖素样肽链-1(GLP-1)拮抗晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导妊娠滋养细胞凋亡的保护作用机制。方法:体外培养妊娠滋养细胞HTR-8/SVneo,将细胞分为对照组、AOPP组、GLP-1组、AOPP+GLP-1组、AOPP+GLP-1+LY294...     

VAP患者WISP1/TLR4/整合素β5通路基因及相关炎性因子的表达

目的 探究Wnt1-诱导的信号通路蛋白1(WISP1)/Toll样受体4(TLR4)/整合素β5通路基因及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-8在呼吸机相关性肺炎(VAP)患者中的表达。方法 选取2018年4月-2021年3月绍兴市人民医院收治的120例VAP患者(VAP组)及60例机械通气非VAP患者(对照组),统计VAP患者病原菌分布;比较两组外周血单个核细胞WISP1、TLR4、整合素β5 mRNA相对表达量及血清TNF-α、IL-6、IL-8水平;绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析相关指标预测VAP患者28 d死亡的临床价值。结果 120例患者分离出156株病原菌,革兰阴性菌、革兰阳性菌、真菌分别占51.92%、36.54%、11.54%。VAP组外周血单个核细胞中WISP1、TLR4、整合素β5相对表达量以及血清TNF-α、IL-6、IL-8表达水平较对照组均升高(P<0.05)。VAP组死亡患者外周血单个核细胞中WISP1、TLR4 mRNA相对表达量以及血清TNF-α、IL-6表达水平较存活组均升高(P<0.05)。WISP1 mR...     

细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路对SiO2活化的肺成纤维细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路对矽尘诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中转化生长因子(TGF-β1)表达的影响及调控作用.方法 收集矽肺患者支气管肺泡灌洗液中的肺泡巨噬细胞(AM),在体外将AM分别用不含SiO2的DMEM培养液和含SiO2(50 μg/ml)的DMEM 培养液培养作用18 h后,将收集的AM条件培养上清液与HELF共同孵育.通过采用免疫细胞化学法检测应用ERK1/2抑制剂PD98059干预后SiO2活化的矽肺患者AM上清介导的HELF中TGF-β1表达的改变.结果 SiO2处理组HELF中TGF-β1的表达量(0.3227±0.0238)明显高于空白对照组(0.1637±0.0196)及AM对照组(0.2406±0.0225),而PD98059干预组TGF-β1的表达量(0.2711±0.0229)明显低于SiO2处理组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PD98059对由SiO2刺激的矽肺患者AM条件培养上清介导的HELF中TGF-β1的表达有一定抑制作用,ERK信号途径在一定程度上可能介导SiO2刺激的HELF细胞因子表达.

Abstract：

Objective To investigate the effect and regulation of extracellual signal-regulated kinase (ERK1/2)signaling pathway on the expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) in human embryonic lung fibroblasts induced by SiO2. Methods Human alveolar macrophages were collected from a silicotic patient by bronchoalveolar lavage and in the presence or absence of SiO2 (50 ug/ml) exposition for 18h, and then the conditioned supernatants were used to incubate HELF. The expressions of TGF-β1 of the HELF acted with the conditioned AM supernatant fluid were detected with the immunocytochemistry method after treatment with PD98059 of inhibitor of ERK. Results The expression of TGF-β1 in HELF of the SiO2 treatment group(OD value is 0.322 7±0.023 8)exceed blank group (OD value is 0.163 7±0.019 6) and AM control group(OD value is 0.240 6±0.022 5) by the immunocytochemistry method. But the expression of TGF-β1 had reduction in some extent in the PD98059 intervention group (OD value is 0.271 l±0.022 9). The values were statistically different (P＜0.05). Conclusion ERK inhibitor PD98059 have inhibition effect on the expression of transforming growth factor-pi and expression of cytokine of human embryonic lung fibroblasts stimulated by SiO2, The study indicate that the proliferation and collagen prodction of HELF activated by SiO2 are mediated by ERK/MAPK signal pathway in some extent. PD98059 may antagonizes silica-induced lung fibrosis by inhibiting the expression of transforming growth factor-β1.     

转化生长因子-β_1/Smad信号通路在肾小球系膜细胞的表达及血管紧张素转化酶抑制剂对其影响

目的探讨转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/Smad信号传导通路在肾小球系膜细胞(glomerular measanial cell,GMC)中的作用,观察血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI)福辛普利(fosinopril,Fos)在该通路中对磷酸化Smad2/3(phosphorylationSmad2/3,P-Smad2/3)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,ColⅠ)表达的影响,阐明福辛普利的肾保护作用机制。方法采用经典方法进行大鼠肾小球系膜细胞复苏、培养和传代后,将其按处理方式分为3组:TGF-β1组(TGF-β15ng/mL处理);②Fos组(TGF-β15ng/mL+Fos1×10-4mol/L处理);③对照组(空白)。甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法分别检测3组肾小球系膜细胞增殖光密度(optical density,OD)值,计算细胞抑制率;间接免疫荧光法检测磷酸化Smad2/3表达情况;酶联免疫吸附测定(enzyme linkedi mmunosorbent assay,ELISA)法测定Ⅰ型胶原蛋白的变化,计算抑制率。结果各时间点肾小球系膜细胞增殖荧光强度比较,TGF-β1组明显高于对照组,Fos组低于TGF-β1组,差异有显著意义(P<0.05)。磷酸化Smad2/3在对照组仅极微量表达,TGF-β1组在刺激30min后,荧光强度显著增强,且集中于细胞核。与TGF-β1组相比,Fos组磷酸化Smad2/3表达下降,细胞荧光强度较弱,差异有显著意义(P<0.05)。对照组Ⅰ型胶原蛋白仅少量基础性分泌。与对照组相比,TGF-β1组在各时间点Ⅰ型胶原蛋白分泌量显著上升,差异有显著意义(P<0.05);与TGF-β1组比较,Fos组Ⅰ型胶原蛋白在15min和6h的表达量比较,差异无显著意义(P>0.05);在12h和24h比较,差异有显著意义(P<0.05)。结论人重组转化生长因子-β1能激活体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化-Smads表达,并激活转化生长因子-β/Smads信号途径,该途径激活能致Ⅰ型胶原分泌增多,并能诱导肾小球系膜细胞增殖,其作用呈一定的时间依赖性关系。福辛普利能部分阻断转化生长因子-β/Smads信号传导通路在大鼠肾小球系膜细胞的激活,抑制Ⅰ型胶原分泌及肾小球系膜细胞增殖,其抑制作用呈一定的时间依赖性关系。