miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P 0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P 0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

miR-145通过调控MMP-2、MMP-9的表达对卵巢癌细胞调亡、增殖、迁移的影响

目的研究微小RNA-145(miR-145)通过调控基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达对卵巢癌细胞调亡、增殖、迁移的影响。方法将卵巢癌细胞株随机分为3组,其中对照组为单纯卵巢癌细胞株,不做其他处理,进行正常培养;miR-145组为含miR-145质粒的慢病毒转染的卵巢癌细胞株;NC组为含NC质粒的慢病毒转染的卵巢癌细胞株。检测3组卵巢癌细胞的凋亡、增殖、迁移情况。检测3组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平。结果与对照组、NC组比较,miR-145组卵巢癌细胞凋亡率明显升高,卵巢癌细胞增殖数、迁移数明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组与NC组卵巢癌细胞凋亡率、增殖数、迁移数差异无统计学意义(P>0.05)。miR-145组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平均低于NC组、对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组与NC组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-145可抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移,促进调亡,其作用机制可能与miR-145能降低MMP-2、MMP-9的表达有关。     

miRNA-375对宫颈癌细胞系SiHa增殖能力和迁移能力的影响及相关机制研究

目的研究微小RNA-375(miR-375)对宫颈癌细胞系SiHa增殖能力和迁移能力的影响及相关机制。方法收集宫颈癌细胞系SiHa,将细胞随机分为A组(转染对照抑制剂)、B组(转染对照模拟基因)、C组(转染miR-375抑制剂)、D组(转染miR-375模拟基因)。通过实时荧光定量PCR法对SiHa细胞中miR-375的表达水平进行检测,并用免疫蛋白印迹法对磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α(PIK3CA)蛋白的表达水平进行检测;采用MTT法对SiHa增殖活性进行检测,并用划痕实验对细胞迁移能力进行检测;采用双荧光素酶报告基因实验对miR-375与PIK3CA的靶向关系进行验证。结果采用生物学信息软件检测结果发现,miR-375与PIK3CA 3'-UTR存在结合位点。双荧光素酶报告基因检测结果可见,miR-375模拟基因+PIK3CA-Mut共转染组荧光素酶活性与对照模拟基因+PIK3CAMut共转染组比较,并无显著差异(P 0. 05);而相比对照模拟基因+PIK3CA-WT共转染组,共转染miRNA模拟基因和PIK3CA-WT后细胞荧光活性明显下降(P 0. 05)。相比A组,C组SiHa细胞中miR-375的相对表达量明显下降(P 0. 05);相比B组,D组SiHa细胞中miR-375的相对表达量明显增高(P 0. 05)。经免疫蛋白印迹法检测结果可见,相比A组,C组SiHa细胞中PIK3CA蛋白的表达水平明显增高(P 0. 05);相比B组,D组PIK3CA蛋白的表达水平明显下降(P 0. 05)。细胞培养后1 d、2 d、3 d,相比A组,C组SiHa细胞增殖活性明显升高(P 0. 05);相比B组,D组SiHa细胞增殖活性明显下降(P 0. 05)。划痕实验结果可见,相比A组,C组SiHa细胞迁移能力明显增强(P 0. 05);相比B组,D组SiHa细胞迁移能力明显减弱(P 0. 05)。结论 miR-375具有阻滞宫颈癌细胞增殖和迁移的作用,其作用机制可能与靶向调控PIK3CA密切相关。     

miR-421靶向PDCD4促进前列腺癌DU145细胞增殖的实验研究

目的研究MicroRNA-421(miR-421)促进前列腺癌DU145细胞增殖的作用及潜在的分子机制。方法培养前列腺癌DU145细胞,分为对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-421组、miR-421+pcDNA组、miR-421+pcDNA-细胞程序性死亡基因4(PDCD4),miR-NC组转染miR-NC、miR-421组转染miR-421、miR-421+pcDNA组转染miR-421及pcDNA质粒、miR-421+pcDNA-PDCD4组转染miR-421及pcDNA-PDCD4质粒,MTS法测定细胞增殖活力,荧光定量PCR测定PDCD4的mRNA表达水平,western blot测定PDCD4的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-421与PDCD4的靶向结合。结果与对照组及miR-NC组比较,miR-421组的增殖活力增加,PDCD4的表达水平及野生型PDCD4双荧光素酶报告基因的荧光活力均降低(P<0.05);与miR-421+pcDNA组比较,miR-421+pcDNAPDCD4组的增殖活力降低,PDCD4的表达水平增加(P<0.05)。结论 miR-421对前列腺癌DU145细胞的增殖具有促进作用,靶向抑制PDCD4是miR-421发挥这一作用的潜在分子机制。     

miR-451a/KIF2A轴对食管鳞状细胞癌顺铂耐药的影响

目的探讨miR-451a通过调控PI3K/Akt通路对食管鳞状细胞癌顺铂(cisplatin, DDP)耐药的作用及其可能机制。方法人正常食管鳞状上皮细胞系Het-1A、人食管鳞状细胞癌细胞系Eca109、人食管鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系Eca109/DDP,采用实时荧光定量PCR法检测3种细胞miR-451a相对表达量,采用Western blot法检测3种细胞KIF2A蛋白相对表达量。对数生长期Eca109/DDP细胞分为空白对照组(不进行转染操作)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-451a模拟物组(转染miR-451a模拟物),采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞miR-451a相对表达量,采用Western blot法检测3组细胞KIF2A蛋白相对表达量。采用荧光素酶报告实验检测miR-451a和KIF2A的靶向关系。对数生长期Eca109/DDP细胞再分为对照组(不进行转染操作)、miR-NC+oe-NC组(转染miR-NC+oe-NC)、miR-451a模拟物+oe-NC组(转染miR-451a模拟物+oe-NC)、miR-451a模拟物+oe-KIF2A组(转染...     

LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴调控乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制

目的 探讨LncRNA XIST对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、T47D和Bcap-37细胞,将不同物质转染至MCF-7、T47D细胞,设为空白组(无转染)、si-XIST组(转染si-XIST)、si-NC组(转染si-NC)、微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)组(转染miR-20a-5p mimics)及miR-NC组(转染miR-NC)。CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL染色检测细胞凋亡。采用荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST与miR-20a-5p及miR-20a-5p与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的靶向关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA XIST、miR-20a-5p的表达水平。采用Western blot检测HMGA2的表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,MCF-7、T47D和Bcap-37细胞中LncRNA XIST表达水平升高,miR-20a-5p表达水平降...     

miR-135a靶向调控STAT6对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的分析微小RNA-135a(miR-135a)靶向调控信号传导和转录激活因子6(STAT6)对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法选取DU145前列腺癌细胞株,细胞培养后分为空白组、miR-135a阴性对照组、miR-135a转染组,构建miR-135a慢病毒载体,空白组加入常规细胞培养液、生理盐水做空白处理,miR-135a阴性对照组加入miR-135aNC、Lipofectamine 2000试剂行无义序列转染,miR-135a转染组加Hsa-miR-135a、Lipofectamine 2000试剂行细胞转染。鉴定miR-135a转染效率及STAT6mRNA表达量,分析对细胞生物学行为、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bax蛋白的影响。结果与空白组相比,miR-135a阴性对照组miR-135a表达量降低,miR-135a转染组miR-135a表达量升高,差异具有统计学意义(P0.05),说明miR-135a转染成功。空白组、miR-135a阴性对照组、miR-135a转染组STAT6mRNA表达量、增殖、凋亡率、侵袭、迁移个数、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、Bcl-2、Bax蛋白表达比较,差异具有统计学意义(P0.05);与miR-135a阴性对照组相比,miR-135a转染组STAT6mRNA表达量、细胞增殖率、侵袭、迁移个数、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,细胞凋亡率、TIMP-2、Bax蛋白表达量升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miR-135a对STAT6表达有一定的调控作用,通过调控MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达抑制前列腺癌细胞迁移和侵袭,通过调控Bcl-2、Bax相关蛋白表达抑制前列腺癌细胞增殖,促进其凋亡,为临床前列腺癌靶向治疗提供理论依据。     

MicroRNA-9对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的检测miR-9在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和细胞中的表达水平,探讨miR-9对OSCC细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法收集42例OSCC患者肿瘤及癌旁组织标本。将SCC-9细胞分为3组:miR-9 mimics组,转染对照组(miR-NC)和未转染组(空白组)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织样本和细胞中miR-9的表达水平,体外实验通过转染miR-9 mimics至SCC-9细胞中,平板克隆形成试验和流式细胞术检测细胞增殖凋亡情况。Pearson相关分析分析miR-9与人高迁移率族AT Hook蛋白2(HMGA2)的相关性;荧光素酶试验,qRT-PCR和蛋白质印迹技术(Western blot)验证HMGA2是miR-9的靶基因。结果与癌旁组织和正常口腔角化细胞相比,miR-9在OSCC组织和细胞中的表达下调(P0.05);体外实验发现,与空白组和miR-NC组相比,miR-9mimics组的细胞增殖受到抑制,而凋亡比率增加(P0.05)。机制研究结果表明,OSCC组织中HMGA2 mRNA和蛋白的表达均增加(P0.05),并与miR-9成显著负相关(r=-0.7701,P0.001);荧光素酶结果显示,miR-9能直接与HMGA2-3'-UTR靶向结合;成功转染miR-9 mimics后能降低SCC-9细胞中HMGA2 mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论在OSCC中,miR-9表达下调;miR-9能够降低HMGA2表达,抑制OSCC细胞增殖,促进其凋亡。     

miR-20a过表达促进VEGF表达及血管平滑肌细胞活性和迁移

目的探讨miR-20a过表达对血管内皮生长因子(VEGF)表达及血管平滑肌细胞(VSMC)活性和迁移的影响,并初步探索其可能的机制。方法将miR-20a mimics转染至VSMC,VSMC分为3组:空白对照(Con)组、阴性对照(miR-NC)组和转染(miR-20a)组。Real-time PCR检测miR-20a的表达变化,Real-time PCR和Western blot检测各组VSMC中VEGF的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组VSMC活性变化,Transwell实验检测各组VSMC迁移能力,生物信息学和荧光素酶报告基因实验分析miR-20a对CNN1的靶向关系。结果与miR-NC组比较,转染miR-20a mimics后miR-NC组VSMC中miR-20a的表达明显升高,VEGF m RNA和蛋白表达明显上调,VSMC活性升高,VSMC迁移能力增强,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,Con组以上各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-20a可显著抑制野生型钙调蛋白1(CNN1)相对荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型CNN1相对荧光素酶活性无明显抑制作用(P>0.05)。结论过表达miR-20a能够促进VSMC活性和迁移以及VEGF的表达,其作用机制可能与靶向调控CNN1的表达有关。     

miR-202在膀胱癌细胞中的表达水平及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

【目的】探讨miR-202在膀胱癌细胞中的表达水平及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。【方法】实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱细胞中miR-202的相对表达水平;转染技术将miR-202和miR-NC质粒转染至UM-UC-3细胞中,并设置为miR-202组和NC组。细胞增殖实验、细胞侵袭实验和凋亡实验分别检测两组细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况,比较两组裸鼠移植瘤体积和重量,Western blot实验检测两组细胞中PIK3CA蛋白的表达情况。【结果】膀胱癌细胞中miR-202的相对表达水平分别低于正常膀胱上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-202组与NC组相比细胞的OD值、迁移和发生侵袭的细胞数降低,凋亡率增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。miR-202组移植瘤的体积和重量均低于NC组,差异有统计学意义。miR-202组PIK3CA蛋白的表达低于NC组,差异有统计学意义。【结论】miR-202可能通过抑制PIK3CA蛋白的表达从而抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡。     

miR-21对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响

目的探讨miR-21对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响。方法采用不同浓度的miR-21慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞,通过MTT实验检测乳腺癌MCF-7细胞增殖情况,采用免疫印迹与双荧光素酶实验检测miR-21与PDCD4蛋白的调控关系,使用划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测miR-21对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响。结果对照组与使用浓度为0、20、40 nmol/L的miR-21-inhibitor慢病毒转染后的乳腺癌MCF-7细胞增殖速度分别为(81.24±4.65)×10`4、(72.15±6.19)×10~4、(70.25±5.59)×10~4、(52.92±7.08)×10~4,差异均统计学意义(P0.05)。抑制miR-21表达后,PDCD4蛋白的表达水平相应下调,且转染miR-21-inhibitor后,野生型PDCD4-3'非翻译区的表达活性受到一定程度抑制。抑制miR-21表达后,乳腺癌MCF-7细胞的侵袭、迁移能力均受到抑制,miR-21-inhibitor组与对照组细胞侵袭数量及细胞迁移率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-21通过调控PDCD4蛋白的表达以影响乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭行为。     

miR-29a靶向调控IFITM3表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响

目的探究微小RNA-29a(miR-29a)靶向调控干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞株LO2中miR-29a的表达水平;采用脂质体法将miR-29a minmic及阴性对照转染至HepG2细胞,并分为过表达组和对照组,转染48 h后用QRCR法检测两组miR-29a水平;采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖及凋亡情况; Western blotting检测各组Bax、caspase-3凋亡相关基因及IFITM3的表达;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a对IFITM3的靶向调控作用。结果肝癌HepG2细胞miR-29a水平低于正常LO2细胞(P 0. 05);过表达组HepG2细胞miR-29a表达低于对照组(P 0. 05);过表达组HepG2细胞增殖率低于对照组(P 0. 05),凋亡率及Bax、caspase-3、IFITM3表达高于对照组(P 0. 05); miR-29a可显著抑制野生型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P 0. 05),但其对突变型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性无显著影响(P 0. 05)。结论 miR-29a在肝癌中表达降低,可靶向调控IFITM3表达,抑制肝癌细胞生长、增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌的潜在治疗靶点。     

DNA甲基化介导miR-203/CREB1信号调控对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨DNA甲基化介导miR-203/CREB1信号途径的调控对多发性骨髓瘤细胞增殖、侵袭和凋亡等生物学行为的影响。方法:采用重亚硫酸氢盐测序法定量检测多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞株中miR-203的甲基化水平;实时荧光定量PCR检测miR-203的表达水平;应用5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预RPMI 8226细胞建立去甲基化模型;转染miR-203模拟物(mimic)构建miR-203过表达细胞;采用CCK-8法、Transwell、流式细胞术分别检测RPMI 8226细胞增殖、侵袭和凋亡;采用双荧光素酶报告实验验证miR-203与CREB1的靶向作用关系;Western blot检测CREB1的蛋白表达水平。结果:RPMI 8226细胞miR-203启动子区存在高甲基化且低表达,去甲基化可以诱导表达;去甲基化作用可以抑制RPMI 8226细胞增殖及细胞侵袭能力,促进细胞凋亡,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。miR-203过表达组的细胞增殖抑制作用、细胞侵袭能力、凋亡率与去甲基化作用组相当。双荧光素酶报告实验证实,CREB1是mi...     

环指蛋白44基因表达对胃癌细胞增殖和凋亡的调节作用及机制

目的 探讨环指蛋白44(RNF44)基因表达对胃癌细胞增殖和凋亡的调节作用及机制。方法 检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞RNF44的基因和蛋白表达;胃癌MKN45细胞株和AGS细胞株分别转染shRNF44病毒和oeRNF44病毒,测定RNF44的基因和蛋白的表达、细胞增殖和细胞凋亡情况、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白表达情况;测定AKT通路抑制剂LY294002对RNF44基因过表达AGS细胞株增殖、凋亡和AKT信号蛋白的影响;采用MKN45细胞株构建裸鼠皮下瘤模型,观察肿瘤生长情况、肿瘤组织Ki-67表达情况以及AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果 正常胃黏膜GES-1细胞RNF44的基因和蛋白表达水平最低,胃癌MKN45细胞株RNF44的基因和蛋白表达水平最高。MKN45细胞株经RNF44基因干扰慢病毒转染后,RNF44的基因和蛋白表达水平降低,细胞增殖能力降低,早期和晚期凋亡率均增加,RNF44和p-AKT蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。AGS细胞株经RNF44基因过表达慢病毒转染后,RNF44的基因和蛋白表达水平升高,细胞增...     

探讨miR-33a对人皮肤恶性黑色素瘤细胞系A375增殖、黏附和迁移的影响及其可能机制

目的探讨miR-33a对人皮肤恶性黑色素瘤系A375生物学功能的影响,分析其可能机制。方法脂质体转染人工合成microRNA片段mimics,干预miR-33a在人皮肤恶性黑色素瘤细胞系A375细胞中的表达水平,行实时PCR检测干预效能。行MTT法检测细胞增殖能力;行细胞黏附实验检测其黏附能力;行细胞划痕实验、Transwell实验检测其迁移侵袭能力;以表达谱基因芯片筛选miR-33a过表达后细胞差异表达基因。结果检测发现,miR-33a过表达组细胞增殖、黏附、迁移侵袭能力均明显弱于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-33a过表达后210个基因表达出现变化,包括84个上调、126个下降,细胞信息学分析指出差异表达基因广泛参与细胞周期调控、转录调控。结论 miR-33a对人皮肤恶性黑色素瘤细胞系A375增殖、黏附、迁移能力均有一定抑制作用,这与其导致的基因表达谱改变有关。     

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。     

p62参与人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性调控

目的探讨多功能蛋白p62参与调控人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性的机制。方法选取人恶性黑色素瘤标本20例,免疫组化方法检测p50、p65、p62表达。人黑色素瘤A375细胞,转染p62-siRNA特异性表达载体。MTT法检测细胞生存率,western blot检测p62蛋白表达,NF-κB荧光素酶报告基因分析检测NF-κB活性。结果 Spearman等级相关性分析p50与p65、p65与p62表达呈正相关均有统计学意义（P〈0.05）。与对照组相比,A375细胞转染p62-siRNA特异性表达载体24h、48h和72h,p62蛋白表达、细胞生存率和NF-κB活性均明显降低（P〈0.05）。结论人恶性黑色素瘤中p62表达与NF-κB高表达呈正相关,降低p62表达能通过抑制NF-κB活性降低A375细胞存活率,表明p62参与NF-κB活性调控。     

以RNAi慢病毒为载体下调CD59对急性T系白血病Jurkat细胞株的表达影响

目的:分析以RNAi慢病毒为载体下调CD59基因表达对急性T系白血病Jurkat细胞株的表达影响。方法:通过RNAi慢病毒作为载体,诱导急性T系白血病Jurkat细胞株中的CD59表达降低;采用激光共聚焦技术分析RNAi慢病毒转染情况和CD59分子的定位情况;应用实时荧光定量PCR法检测空白对照组、阴性对照组和RNAi慢病毒转染组中CD59 mRNA的相对表达量;用酶联免疫吸附试验法测定3组细胞培养上清中肿瘤坏死因子-β(TNF-β)和白介素-3(IL-3)的表达,用免疫印迹法(Western blot)测定3组细胞中凋亡相关分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、生存素(Survivin)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)及BCL-2相关X蛋白(BAX)蛋白表达水平。结果:Jurkat细胞转染效率高于90%,CD59主要定位于细胞膜中。相比空白对照组和阴性对照组,RNAi慢病毒转染组中CD59 mRNA表达明显下调(P 0. 05)。RNAi慢病毒转染组中CD59蛋白表达水平较空白对照组和阴性对照组明显降低(P 0. 05)。相比空白对照组和阴性对照组,RNAi慢病毒转染组中TNF-β表达水平明显升高,IL-3表达水平明显降低(P 0. 05)。RNAi慢病毒转染组Survivin和BCL-2表达水平较空白对照组和阴性对照组明显降低,Caspase-3和BAX蛋白表达较空白对照组和阴性对照组明显升高(P 0. 05)。结论:通过转染RNAi慢病毒载体促使CD59基因表达下调可降低急性T系白血病Jurkat细胞株中促增殖分化相关分子IL-3的表达,提高肿瘤坏死相关因子TNF-β的表达,同时可提高细胞中促凋亡相关蛋白Caspase-3和BAX的表达,降低抗凋亡蛋白Survivin和BCL-2的表达。     

敲减microRNA-205靶向PTEN抑制食管癌细胞TE1的增殖并促进细胞凋亡

目的:探讨miRNA-205对食管癌细胞株TE1增殖和凋亡能力的影响及其作用机制。方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western印迹检测正常食管黏膜细胞Het-1A和不同食管癌细胞株(KYSE70,TE12,TE1)中miRNA-205的mRNA及蛋白表达水平。转染miRNA-205抑制剂下调TE1细胞中miRNA-205的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞增殖和细胞凋亡相关CDK2,cyclin D1,P21,Bcl-2,cleavedcaspase-3,caspase-3,p-Rb,Rb,p-Akt和Akt的蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因。结果:MiRNA-205在各型食管癌细胞中高表达。沉默miRNA-205后,TE1细胞的增殖能力降低并表现为细胞周期阻滞,而细胞凋亡率显著升高(P0.05)。同时细胞中cyclinD1,CDK2,bcl-2,p-Rb及p-Akt的蛋白表达水平均显著降低,p21及cleaved-caspase-3的蛋白表达水平显著升高。双荧光素酶报告基因分析显示PTEN是miRNA-205的可能作用靶点,TE1中共转染miRNA-205抑制剂和PTENsiRNA可部分逆转miRNA-205介导细胞增殖抑制及凋亡诱导作用。结论:沉默miRNA-205可靶向PTEN抑制食管癌细胞株TE1的增殖,并促进其凋亡,提示miRNA-205可作为食管癌诊疗的一个潜在作用靶点。     

miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能

目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响.方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱.利用lipofectamine2000转染HEC-1-B细胞.实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达.CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变.流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况.结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达.转染效率达73.43％.转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P＜0.05).实验组较NC组生长明显受抑(P＜0.05).实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P＜0.05).结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点.