大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究

【目的】探讨大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究。【方法】肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、模型组、20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组,对照组细胞常规培养,其余组细胞均经过肺炎链球菌感染,20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组细胞在感染后24 h分别加入不同浓度的大黄素(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL)处理。噻唑蓝(MTT)检测各组A549细胞的增殖;流式细胞术检测凋亡率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白质印迹法检测A549细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平。【结果】与对照组相比,肺炎链球菌感染的A549细胞增殖活性、Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率及IL-6、TNF-α、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平增加(P<0.05);不同浓度大黄素促进肺炎链球菌感染的A549细胞增殖(P<0.05),抑制其凋亡(P<0.05),降低IL-6、TNF-α水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05),下调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P<0.05),提高β-catenin、Cyclin D1蛋白水平(P<0.05)。【结论】大黄素可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路从而促进肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖,抑制其凋亡。     

二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌细胞生长停滞和细胞凋亡作用及对PARP-1/p53信号通路的影响

目的探究二甲双胍(DMBG)联合紫杉醇(PTX)对乳腺癌细胞MCF-7生长停滞和细胞凋亡的作用及对聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)/p53信号通路的影响,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法在细胞培养基(不添加药物处理,空白组)、含有DMBG的细胞培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG,DMBG组)、含有PTX细胞培养基(培养基中添加10μg/ml PTX,PTX组)、含有PTX、DMBG的培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG和10μg/ml PTX,联合组)中分别培养乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况; Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测PARP-1、p53、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,MCF-7细胞PARP-1PARP-1、p53蛋白表达明显增加(P 0. 05)。空白组细胞形态、大小均正常,DMBG组、PTX组细胞体积明显变小,细胞核荧光强度增高,部分出现碎片化,联合组细胞核固缩现象更加明显。与空白组相比,DMBG组、PTX组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。与DMBG组、PTX组相比,联合组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。结论 DMBG联合PTX可能通过抑制PARP-1和p53的表达,引起细胞周期G1期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

破骨细胞外泌体miR-183-5p靶向程序性细胞死亡因子4促进肺腺癌细胞增殖及侵袭

目的 探讨破骨细胞来源外泌体(osteoclast-derived exosomes)中miR-183-5p靶向程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4, PDCD4)对肺腺癌侵袭增殖的影响。方法 利用RAW264.7细胞诱导分化破骨细胞并提取外泌体,透射电镜及粒度仪对其进行鉴定。将外泌体与A549细胞共培养,通过CCK8法检测细胞活性,观察miR-183-5p对A549细胞增殖的作用;检测A549细胞周期分布,观察miR-183-5p对细胞周期的作用;利用Transwell侵袭实验,观察miR-183-5p对A549细胞侵袭能力的作用。Western blotting检测PDCD4、周期蛋白D1(Cyclin D1, CCND1)和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase, CDK4)相对表达,观察miR-183-5p靶蛋白表达情况及其对A549细胞侵袭、增殖的影响。结果 外泌体呈边缘透亮清晰的椭圆形囊泡状结构,粒径分布范围30-200nm左右,荧光探针发现外泌体能够较快的被肺腺癌细胞A549摄取,并且共培养后A549细胞中miR-183-5p表达水平明显增高(p<0.01)。miR-183-5p高表达可以明显促进A549细胞的侵袭、细胞增殖和周期(p<0.05)。A549细胞中miR-183-5p过表达后,PDCD4表达降低,同时CCND1、CDK4也高表达(p<0.05)。结论 破骨细胞来源的外泌体与A549细胞共培养可提高细胞中miR-183-5p的表达,miR-183-5p通过靶向抑制PDCD4表达可促进肺腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。     

冬凌草甲素干预SHH信号通路抑制人结肠癌细胞SW1116增殖的实验探讨

目的研究冬凌草甲素对结肠癌细胞SW1116增殖的影响及机制。方法用不同浓度的冬凌草甲素处理SW1116细胞,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度。SW1116细胞分为对照组、冬凌草甲素组、Cyclopamine组、联合组,对照组细胞培养液中不添加任何药物,冬凌草甲素组细胞培养液中添加70μmol/L的冬凌草甲素,Cyclopamine组细胞培养液中添加10μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine,联合组细胞培养液中添加10μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine和70μmol/L的冬凌草甲素,MTT检测细胞增殖,细胞克隆实验检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中音猬因子(SHH)、平滑蛋白(Smo)、锌指转录因子1(Gli-1)、剪切的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平。结果冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖能力明显降低,其半数抑制浓度为(69.65±6.32)μmol/L。冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中SHH、Smo、Gli-1蛋白表达水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,与未用冬凌草甲素处理的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。SHH信号通路抑制剂处理也可以抑制SW1116细胞增殖和克隆形成,诱导SW1116细胞凋亡,促进细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少细胞中Bcl-2蛋白表达。联合组的SW1116细胞增殖能力和克隆形成能力下降更多,细胞凋亡增加更多,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平更高,Bcl-2蛋白水平更低,与单纯冬凌草甲素处理的SW1116细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论冬凌草甲素通过抑制SHH信号通路抑制结肠癌细胞增殖和克隆能力。     

全反式维甲酸对人肺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR基因表达的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR(apelin receptor)基因表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测ATRA对体外培养的A549细胞增殖的抑制情况,光学显微镜下观察细胞形态改变,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,western blot检测APLNR蛋白、cyclin D1及p16蛋白的表达情况。结果经ATRA作用后,A549细胞增殖受到明显抑制且抑制程度呈剂量及时间依赖性(P均0.01);其细胞形态发生明显变化,细胞周期被阻滞于G_0/G_1期且细胞凋亡率明显升高(P0.01);western blot结果显示,随着ATRA浓度的升高,APLNR蛋白及cyclin D1蛋白的表达水平降低,而p16蛋白的表达水平升高(P均0.01)。结论 ATRA可抑制A549细胞增殖并促进其凋亡,且能下调APLNR基因的表达。     

Vinorelbine对肺癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响

目的探究长春瑞滨(Vinorelbine)对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响以及可能作用机制。方法采用前瞻性研究通过不同浓度长春瑞滨(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)作用于肺癌A549细胞。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法分析细胞的凋亡率,流式细胞术检测细胞周期变化,Caspase-3活性检测试剂盒观察含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的水平。结果与对照组相比,不同浓度长春瑞滨显著增加细胞的增殖抑制率(P0.05),且其抑制作用随着浓度的增加而增强;与对照组相比,长春瑞滨显著升高细胞的凋亡率(P0.05),上调细胞周期G2/M期和Casapse-3活性(P0.05),明显增加Bax/Bcl-2(P0.05)。结论长春瑞滨抑制肺癌细胞增殖,诱导其凋亡,阻碍细胞周期G2/M期,可能通过Caspase-3信号通路发挥作用。     

灯盏花素对肺癌A549细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的灯盏花素对肺癌A549细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用MTT法研究不同浓度(0 mM、1 mM、3. 125 mM、6. 25 mM、12. 5 mM、25 mM、50 mM、100 mM)灯盏花素对肺癌A549细胞的生长抑制作用并计算半数抑制浓度(IC50)值;用半数抑制浓度的灯盏花素处理肺癌A549细胞12 h、24 h、48 h后,通过Annexin V-FITC形态学染色法和流式细胞术分析细胞死亡类型和细胞周期变化; Western blot方法检测细胞内p-53/p53、p21、cyclin B1、p-cdc2/cdc2、Bcl-2/Bad和cleaved-caspase-3蛋白表达变化。结果 MTT检测发现灯盏花素处理后的A549细胞生长受到显著抑制(IC50为25. 03 mM),且表现出明显的剂量依赖性(P 0. 05);形态学染色和流式细胞术表明灯盏花素能够诱导肺癌A549细胞时间依赖性凋亡(P 0. 05),并发生G2/M细胞周期阻滞; Western blot结果显示与细胞周期相关蛋白p-p53、p21、p-pcdc2随着灯盏花素作用时间的增加,表达量显著提高(P 0. 05),而cyclin B1的表达明显受到抑制(P0. 05);凋亡相关蛋白分析发现:促凋亡蛋白Bad和cleaved-caspase-3的表达显著增加,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低(P 0. 05)。结论灯盏花素能够使肺癌A549细胞发生G2/M期阻滞,上调细胞周期相关蛋白表达,改变细胞周期,抑制细胞增殖;同时通过调控Bcl-2和caspase家族蛋白诱导并执行肺癌A549细胞凋亡。     

p27kip-1和细胞凋亡的研究进展

CDK抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitors，CDKI) p27Kip-1除了参与细胞周期调节，广泛抑制多种细胞周期蛋白CDK复合物的活性外，它还参与细胞的凋亡、分化、细胞细胞间黏附等多种生物功能的调节作用。本文对p27Kip-1和凋亡调节的研究进展作一综述。     

Fascin shRNA通过Notch1信号通路调控结直肠癌细胞的生长

目的:研究聚束蛋白(Fascin)shRNA对结直肠癌细胞生长的影响。方法:结直肠癌细胞HT29感染FascinshRNA和shRNAcontrol慢病毒,real-timePCR和Western印迹法分别测定细胞中FascinmRNA和蛋白的表达水平,同时用Western印迹法检测细胞中的Notch1蛋白水平。用Notch1信号通路抑制剂DAPT处理下调Fascin后的HT29细胞,MTT测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹法检测周期蛋白p27、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平。结果:Fascin shRNA慢病毒感染后的细胞中Fascin转录和表达水平均降低,而shRNA control慢病毒感染对细胞中的Fascin表达水平没有影响。沉默Fascin的细胞增殖能力降低,细胞G0/G1比例升高,细胞中Cyclin D1蛋白水平降低,p27蛋白水平升高。沉默Fascin能够降低细胞中Notch1蛋白水平,并且Notch1信号通路抑制剂DAPT可以协同沉默Fascin,进一步抑制结直肠癌细胞增殖,阻滞结直肠癌细胞周期,减少CyclinD1蛋白表达,促进p27蛋白表达。结论:FascinshRNA通过抑制Notch1信号通路阻碍结直肠癌细胞增殖,将细胞周期阻滞在G0/G1期。     

大蒜素对小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响

目的探讨大蒜素对肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响,为大蒜素治疗肺癌补充理论依据。方法实验分为对照组(正常培养A549细胞)、低剂量组(A549细胞+10μmol/L大蒜素)、中剂量组(A549细胞+30μmol/L大蒜素)和高剂量组(A549细胞+50μmol/L大蒜素)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞增殖情况;采用荧光TUNEL法检测各组细胞凋亡;采用Transwell检测各组细胞迁移能力,采用Western blot技术检测各组细胞Caspase-3、p53和CHOP表达。结果不通浓度大蒜素可有效降低肺癌细胞的增殖、迁移能力,且与剂量呈负相关(P0.05);增加肺癌细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、p53和CHOP的表达,且表达水平与剂量呈正相关(P0.05)。结论大蒜素通过提高肺癌A549细胞Caspase-3、p53和CHOP等凋亡因子的表达诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖和迁移能力,从而发挥其抗肿瘤的作用。     

姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法将人类绒毛膜癌细胞JEG-3细胞株随机分为对照组和姜黄素干预组。姜黄素干预组加入100μl不同浓度的姜黄素与细胞孵育24 h;对照组只加入PRMI 1640培养液与等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT检测检测细胞抑制率。姜黄素干预组加入100μl姜黄素(终浓度为40μmol/L)与细胞孵育24 h后,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki-67和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,以及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与对照组相比,姜黄素干预组JEG-3细胞培养24 h后吸光度显著下降(P 0. 05);姜黄素对JEG-3细胞抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(IC50)为(39. 33±1. 02)μmol/L;与对照组相比,JEG-3细胞的凋亡率明显升高,增殖相关蛋白Ki-67和Cyclin D1的表达显著降低(P 0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的蛋白表达量显著升高(P 0. 05),Bcl-2的表达量显著降低(P 0. 05)。结论姜黄素可以下调人类绒毛膜癌细胞增殖相关蛋白的表达,上调凋亡相关蛋白的表达,调控其增殖和凋亡。     

ODNMT01促进骨髓间充质干细胞增殖机制的研究

目的探究寡核苷酸MT01(ODN MT01)促进人骨髓间充质干细胞(h BMSCs)增殖的机制。方法将第三代h BMSCs以6.0×103/cm2接种于6孔板,实验组和对照组各3个孔,实验组加入ODN MT01使其终浓度为2.0 mg/L,对照组加入等量PBS,连续检测3 d,应用MuseTM Cell Analyzer进行细胞周期检测;并根据细胞周期检测结果,分组同上,对相应处理后第1、2、3天的h BMSCs进行Cyclin A、Cyclin D1、CDK2和CDK4四种蛋白的实时荧光定量检测。结果细胞周期检测结果显示:与对照组相比,实验组处于G0/G1期的细胞百分比降低,而处于S期和G2/M期的细胞百分比升高,差异具有统计学意义(P<0.01);实时荧光定量检测显示:与对照组相比,实验组中Cyclin A、Cyclin D1、CDK2和CDK4四种蛋白的表达有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论与对照组相比ODN MT01降低了G0/G1期的细胞百分比,提高了S期、G2/M期的细胞百分比;其分子机制可能但不局限于通过调高Cyclin A、Cyclin D1、CDK 2和CDK 4四种蛋白的表达而实现的。     

抑制Shh信号通路增加胰腺癌细胞对紫杉醇敏感性的实验研究

目的研究抑制音猬因子(Shh)信号通路对胰腺癌细胞紫杉醇敏感性的影响。方法给予人胰腺癌SW1990细胞0、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇刺激,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度约为50 nmol/L。用Western blot方法测定0、50 nmol/L紫杉醇处理后细胞中Shh信号通路蛋白Shh、锌指转录因子1(Gli1)、补丁蛋白1(Ptch 1)的表达水平。分别用紫杉醇、Shh信号通路抑制剂cyclopamine处理SW1990细胞,用紫杉醇和cyclopamine共同处理SW1990细胞,MTT测定增殖,克隆实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平。结果 10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇抑制SW1990细胞的增殖,50 nmol/L的紫杉醇可以抑制细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白表达。紫杉醇和cyclopamine单独处理后的细胞增殖能力和克隆形成能力降低,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平升高。与紫杉醇和cyclopamine单独处理的细胞比较,紫杉醇和cyclopamine共同处理后的细胞增殖和克隆能力下降更多,细胞凋亡率更高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平更高,细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平更低。结论抑制Shh信号通路能够增加胰腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

丹参酮ⅡA抑制非小细胞肺癌NCI-H520细胞生长的研究

目的:探讨丹参酮ⅡA抑制非小细胞肺癌NCI-H520细胞生长及其分子机制。方法:用不同浓度的丹参酮ⅡA(0,5,10,20μM)处理非小细胞肺癌NCI-H520细胞后,采用MTT法检测非小细胞肺癌NCI-H520细胞活力;采用流式细胞计检测非小细胞肺癌NCI-H520细胞周期;应用免疫印迹方法检测蛋白表达水平。结果:丹参酮ⅡA显著抑制非小细胞肺癌NCI-H520细胞生长,并呈浓度依赖方式;流式细胞检测到丹参酮ⅡA处理非小细胞肺癌NCI-H520细胞后,细胞周期S期细胞比例较处理前显著增多(P<0.05);免疫印迹实验检测到丹参酮ⅡA处理非小细胞肺癌NCI-H520细胞后,细胞周期蛋白Cyclin E及CDK2抑制剂P27较处理前显著上调(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可能通过上调P27抑制CDK2,导致非小细胞肺癌细胞NCI-H520细胞周期S阻滞。     

PCI-24781诱导SKOV-3细胞凋亡及相关机制的研究

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂PCI-24781（abexinostat）对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响，并研究其作用机制。 方法以不同浓度PCI-24781（0 μmol/L、0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、0.75 μmol/L、1.0 μmol/L）处理SKOV-3细胞48 h后，用BD FACSCalibur流式细胞仪检测细胞凋亡情况，分析细胞周期分布的变化情况，使用活性氧荧光探针（DCFH-DA）检测细胞内ROS变化情况。Western blot法检测β-catenin、Wnt-5a、Caspase-8、ROR2、Cyclin D1、CDK4的表达水平。 结果经PCI-24781处理后，SKOV-3细胞凋亡率增加（P＜0.001），细胞内ROS水平呈上升趋势（P＜0.001），氧化应激增加，作用具有剂量-效应关系；β-catenin、Wnt-5a的表达水平下降，Caspase-8的表达水平上升，ROR2的表达不明显。SKOV-3细胞周期出现G1/G0期的阻滞、S期和G2/M期细胞减少（P＜0.05），细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4表达水平下降。 结论PCI-24781通过诱导Caspase-8激活和ROS的生成介导细胞凋亡，将SKOV-3细胞阻滞于G1/G0期从而抑制肿瘤细胞的增殖，对Wnt/β-catenin信号通路和非经典Wnt信号通路产生双重抑制作用。     

P27kip-1和细胞凋亡的研究进展

CDK抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitors,CDKI)p27Kip-1除了参与细胞周期调节,广泛抑制多种细胞周期蛋白-CDK复合物的活性外,它还参与细胞的凋亡、分化、细胞-细胞间黏附等多种生物功能的调节作用。本文对p27Kip-1和凋亡调节的研究进展作一综述。     

他克莫司对人肾小球系膜细胞细胞周期相关蛋白表达的影响

目的探讨他克莫司对体外培养的人肾小球系膜细胞细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E及p27kip1的影响及可能机制。方法设正常对照组和他克莫司处理组,他克莫司组设为三个组(浓度分别为10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测他克莫司组处理12h后肾小球系膜细胞的增殖情况;流式细胞仪检测他克莫司组分别作用12、24、48h后系膜细胞的上述三种蛋白质及与其结合的CDK2和CDK4的表达情况;选择有明显抑制作用的时间点(12h),Westernblot检测上述三种蛋白质的表达情况。结果 (1)作用12h,他克莫司组均能抑制系膜细胞的增殖。(2)作用12、24、48h,与对照组相比,浓度为10μmol/L他克莫司对细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E及抑制因子p27kip1的表达无明显影响,而浓度为25、50μmol/L时,cyclin D1及cyclin E明显降低,p27kip1表达明显升高,呈一定的剂量效应关系;且相同浓度的他克莫司在作用三个时间点后,cyclin D1、cyclin E及p27kip1的表达无明显差异。(3)作用12h,与对照组相比,浓度为10μmol/L他克莫司对周期蛋白依赖性激酶CDK2、CDK4的表达无明显影响,而浓度为25、50μmol/L时,CDK2、CDK4的表达明显降低。结论一定浓度的他克莫司可抑制系膜细胞的增殖,其作用机制至少部分与其影响细胞周期相关蛋白的表达有关。     

Xklp2靶蛋白对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和Western blot检测感染后细胞中TPX2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,将各组细胞接种到裸鼠皮下,检测各组裸鼠肿瘤体积和重量,Western blot检测肿瘤组织中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、TPX2、p53水平。结果 siRNA-NC组细胞中TPX2 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率及Cleaved Caspase-3、TPX2、p53水平与Control组比较,差异无统计学意义(P0.05)。siRNA TPX2组细胞中TPX2mRNA和蛋白均明显低于Control组(P0.05)。siRNA TPX2组细胞增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,与Control组比较差异有统计学意义(P0.05)。接种siRNA TPX2组细胞的裸鼠肿瘤体积和重量均低于Control组,而肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、p53水平均高于Control组,TPX2水平低于Control组(P0.05)。结论下调TPX2抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞裸鼠成瘤能力,这可能与促进p53表达和促进Caspase-3活化有关。     

Wnt信号通路抑制剂对下调PKM2表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及ROS水平的影响

目的研究Wnt信号通路抑制剂对下调丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及活性氧(ROS)水平的影响。方法肺癌A549细胞转染PKM2小干扰RNA(PKM2 siRNA组)和小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC组),以没有转染的A549细胞作为对照组。Real-time PCR和Western blot检测三组PKM2水平。用含有5μmol/L的Wnt信号通路抑制剂IWR-1的细胞培养液培养,设置为PKM2 siRNA+IWR-1组和IWR-1组,同时以不含有IWR-1的正常细胞培养液培养PKM2 siRNA组和对照组细胞。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)法检测ROS水平,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果细胞转染PKM2 siRNA后的PKM2 mRNA和蛋白水平、细胞存活率明显下降,细胞凋亡率、ROS水平明显升高,细胞中β-catenin、c-myc水平下降,而Cleaved Caspase-3水平升高,与不转染的对照组细胞相比差异具有统计学意义(P0.01)。Wnt信号通路抑制剂处理A549细胞后,细胞存活率也下降,细胞凋亡增多,细胞中ROS水平升高,Cleaved Caspase-3水平升高,与正常培养的A549细胞相比差异具有统计学意义(P0.01)。Wnt信号通路抑制剂处理转染PKM2 siRNA后的A549细胞,细胞凋亡率最高,细胞存活率最低,细胞中ROS水平最高,与单纯Wnt信号通路抑制剂处理和单纯转染PKM2 siRNA后的细胞相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 Wnt信号通路抑制剂和下调PKM2均能够抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,ROS水平升高,并且二者共同作用后抑制肺癌细胞的作用更明显,下调PKM2可能通过抑制Wnt信号通路阻碍肺癌发生。     

长链非编码RNA ZFAS1在非小细胞肺癌患者组织中表达及作用

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中锌指结构反义转录本1(zinc finger antisense 1,ZFAS1)表达水平,探讨ZFAS1在NSCLC进展中的生物学作用。方法实时荧光定量RT-PCR检测ZFAS1在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的表达水平。RNA干扰ZFAS1在A549细胞中表达,细胞计数和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式分析检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell迁移和基质胶侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量RT-PCR检测Cyclin D1、Bcl2、N-cadherin、ZEB1、Slug和Twist基因表达水平变化。结果 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中的平均表达水平[0.01(0.002,0.054)]较癌旁组织[0.002(0.001,0.012)]明显升高(Z=-2.638,P0.01)。ZFAS1基因敲减后,A549细胞增殖能力明显减弱(P0.01);A549细胞周期G1期比例升高,S期比例下降(P0.01);A549细胞凋亡比例明显增加(P0.01);A549细胞迁移和侵袭能力明显下降(P均0.01);A549细胞中Cyclin D1、Bcl2、N-cadherin、ZEB1、Slug和Twist基因表达水平均降低(P均0.05)。结论 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中呈高表达。ZFAS1基因敲减诱导细胞周期阻滞、凋亡和抑制上皮-间质转变(EMT),减弱NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力。