丹参红花提取物保护内皮细胞免受氧化损伤的体外实验

目的:观察低密度脂蛋白和无血清培养刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化,以及丹参红花提取物的干预作用。方法:实验于2005-11/2006-05在卫生部老年医学重点实验室完成。取人新鲜脐带分离培养人脐静脉内皮细胞,分为:①正常对照组。②无血清培养组:用无血清培养基培养24h。③低密度脂蛋白处理组:以含有800mg/L低密度脂蛋白的培养基培养16h。④丹参红花提取物预处理组:用丹参红花提取物(商品名丹红滴注液,由陕西步长集团提供浓缩液,国药准字号Z20026866/Z20026867)预处理24h后加入800mg/L低密度脂蛋白继续培养16h或在无血清培养基中培养24h。以MTT法观察丹参红花提取物对人脐静脉内皮细胞生长的影响;应用反转录-聚合酶链反应检测NOX4mRNA水平;用流式细胞仪分析细胞凋亡率;并以DCFH-DA法检测细胞内活性氧生成量。结果:①低密度脂蛋白处理组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡为正常对照组的1.3倍,1.2倍和4倍。②无血清培养组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为正常对照组的1.4倍、1.6倍和3倍。③丹参红花提取物预处理组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为低密度脂蛋白处理组的0.4倍,0.5倍和0.2倍。④丹参红花提取物组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为无血清培养组的0.2倍、0.5倍和0.6倍。结论:丹参红花提取物能够有效抑制高脂及缺血状态下NOX4mRNA表达水平,从而抑制人脐静脉内皮细胞内活性氧的产生及细胞凋亡,对内皮细胞起到很好的保护作用。     

硫辛酸对炎性痛小鼠脊髓背角c-Fos和Iba-1的影响

目的:观察硫辛酸(α-lipoic acid, ALA)对炎性痛小鼠疼痛行为学及脊髓背角Iba-1和c-Fos表达的影响。方法 :成年SPF级雄性昆明小鼠40只,随机分为4组(n=10):对照组(Control组)、炎性痛组[CFA组:足底注射30μl完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant, CFA)]、硫辛酸组(ALA组:腹腔注射ALA 100 mg/kg)和炎性痛+硫辛酸组(CFA+ALA组:足底注射30μl CFA3 d后腹腔注射ALA 100 mg/kg)。术后3 d,腹腔注射ALA后分别检测热缩足潜伏期(paw withdrawal latency, PWL)和足趾肿胀程度并用免疫组织化学法检测脊髓背角Iba-1 (Ionized calcium binding adaptor molecule-1)和c-Fos表达。结果:ALA明显抑制炎性痛引起的热缩足潜伏期降低,与此同时,给予ALA能明显降低炎性痛小鼠脊髓背角Iba-1和c-Fos的表达。结论:硫辛酸明显减少炎性痛小鼠脊髓背角Iba-1和c-Fos的表达,对炎性痛产生明显的抑制作用。     

缺氧诱导因子-1α和NADPH氧化酶在大鼠深静脉血栓形成中的作用

目的 探讨大鼠深静脉血栓(DVT)模型股静脉内皮组织中缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)和NADPH氧化酶(NOX4)的表达变化及其在血栓形成中的作用.方法 将60只SD大鼠随机分为对照组(10只)和模型组(50只),对模型组采用股静脉钳夹联合双下肢石膏制动构建大鼠DVT模型.不同时间点(造模后2.5 h和25 h)解剖股静脉、观察血栓发生率,进而将模型组分为血栓形成前组(造模后2.5 h)、血栓形成组(造模后25 h)、血栓不形成组(造模后25 h).分离股静脉内皮组织,提取总RNA;采用Genechip Rat Genome 230 2.0基因芯片筛查差异表达的基因;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR) 验证这些基因的表达变化.结果 基因芯片分析及real-time PCR结果均发现,大鼠股静脉内皮组织中HIF-1α和NOX4的表达水平,血栓形成组最高,血栓形成前组次之,均明显高于对照组和血栓不形成组(P<0.05).Pathway分析提示,缺氧条件下,HIF-1α可通过上调靶基因NOX4的表达,诱导活性氧(ROS)的产生,继而活化静脉内皮细胞,促进血栓形成.结论 大鼠股静脉内皮组织中HIF-1α和NOX4表达上调,可能在创伤性DVT形成中发挥重要作用.     

白藜芦醇通过激活mTOR/自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤及凋亡

目的:白藜芦醇对缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)诱导的PC12细胞损伤及凋亡的影响及作用机制。方法:以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,设置空白对照组、模型组、不同浓度(5、10μmol/L)白藜芦醇组,自噬抑制剂(3-MA)组。使用CCK-8试剂盒检测PC12的增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞培养液中TNF-α和IL-6的浓度变化;DHE荧光探针检测ROS的变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;Westernblot法检测各组mTOR的磷酸化情况及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达。结果:与空白对照组相比模型组能够显著降低PC12的增殖能力,增加细胞中ROS的含量和凋亡率,诱导TNF-α和IL-6分泌,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,而P-mTOR/mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达增加(P<0.01)。与模型组比较,不同浓度白藜芦醇作用PC12时,细胞存活率逐渐上升,ROS含量及凋亡率逐渐下降,LDH、MDA含量减少,SOD、GSH-PX活性随之上升,TNF-α和IL-6分泌显著下降,P-mTOR/mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达进一步增加(P<0.01)。自噬抑制剂(3-MA)组上述指标的检测结果与白藜芦醇组相反。结论:白藜芦醇可能部分通过激活mTOR/自噬通路对神经细胞发挥保护作用。     

硫酸吲哚酚对大鼠主动脉平滑肌细胞钙化影响的实验研究

目的观察硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)钙化的影响以及这种变化和氧化应激的关系。方法培养的VSMC分别加入100μmol/L、300μmol/L和500μmol/L IS,每组再分别加入10μmol/L辛伐他汀。应用甲σ-酚肽络合酮法检测细胞内的钙含量,硫代巴比妥酸(TBA)法检测上清液中丙二醛(MDA)含量。结果与正常组相比,IS 300μmol/L组含钙量[(10.96±3.05)mg/g蛋白vs.(7.52±1.51)mg/g蛋白,P<0.05]和IS 500μmol/L组含钙量[(14.34±4.31)mg/g蛋白vs.(7.52±1.51)mg/g蛋白,P<0.01]均明显增高。与同浓度IS组相比,辛伐他汀10μmol/L+IS 300μmol/L组和辛伐他汀10μmol/L+IS 500μmol/L组含钙量均明显降低[(7.46±1.86)mg/g蛋白vs.(10.96±3.05)mg/g蛋白;(8.83±2.76)mg/g蛋白vs.(14.34±4.31)mg/g蛋白,均P<0.05]。与正常组相比,IS 300μmol/L组(2.52±0.47 vs.1.54±0.23,P<0.01)和IS 500μmol/L组上清液MDA含量(2.72±0.53 vs.1.54±0.23,P<0.01)均明显增高。与同浓度IS组相比,辛伐他汀10μmol/L+IS 300μmol/L组和辛伐他汀10μmol/L+IS 500μmol/L组上清液MDA含量均明显降低(1.54±0.39 vs.2.52±0.47,1.60±0.39 vs.2.72±0.53,均P<0.01)。大鼠VSMC的含钙量与MDA呈正相关关系(r=0.59,P<0.01)。结论 IS可浓度依赖性地促进大鼠VSMC钙化,其作用可能与IS增加VSMC的氧化应激有关,辛伐他汀可抑制此作用。     

高浓度低密度脂蛋白对血管内皮细胞NADPH氧化酶4 mRNA水平、活性氧产生及细胞凋亡的影响

目的:低密度脂蛋白进入血管内皮细胞后可刺激细胞产生活性氧,在内皮细胞的生长与损伤过程中起关键作用.实验拟进一步观察高浓度低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞活性氧、NADPH氧化酶4 mRNA 水平和凋亡的影响.方法:实验于2004-12/2006-02在卫生部老年医学重点实验室完成.①实验材料:脐带来自卫生部北京医院产科,产妇或家属签署知情同意书;低密度脂蛋白由卫生部北京医院老年医学研究所生化室经过超速离心提取.②实验过程及分组:分离人脐静脉内皮细胞.先以不同浓度的低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞 24 h以选取最佳的浓度,观察NADPH氧化酶4表达,分为:不加低密度脂蛋白的对照组;0.8 g/L 低密度脂蛋白组;1.6 g /L 低密度脂蛋白组;2.4 g/L低密度脂蛋白组.再以1.6 g/L 低密度脂蛋白浓度处理人脐静脉内皮细胞不同的时间以选取最佳的处理时间观察NADPH氧化酶4表达,分为:不加低密度脂蛋白的对照组,12 h处理组,24 h处理组,48 h处理组.以最佳浓度和最佳时间处理人脐静脉内皮细胞,并观察其NADPH氧化酶4表达、活性氧生成和凋亡.③实验评估:反转录-聚合酶链反应检测人脐静脉内皮细胞中NADPH氧化酶的表达;流式细胞仪检测胞内活性氧生成量和细胞凋亡率,Hoechst 33342染色分析细胞凋亡.结果:①1.6 g/L低密度脂蛋白处理24 h后人脐静脉内皮细胞内活性氧生成量高于对照组(P＜0.05).②1.6 g/L低密度脂蛋白处理24 h组细胞凋亡也比对照组明显增加(P＜.05).③用反转录-聚合酶链反应检测不同浓度(0.8,1.6,2.4 g/L)低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞 24 h和以1.6 g/L低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞不同时间(12,24和48 h)时NADPH氧化酶4 mRNA水平变化,结果显示与不加低密度脂蛋白的对照组相比,各组NADPH氧化酶4 mRNA表达均增强.结论:低密度脂蛋白上调人脐静脉内皮细胞内NADPH氧化酶4 mRNA表达,并促进细胞内活性氧生成和细胞凋亡.     

活性氧介导高糖负荷致人系膜细胞癌胚纤维连接蛋白的表达

背景:研究发现,癌胚纤维连接蛋白系新合成细胞外基质的重要标志,而高糖环境氧化应激与癌胚纤维连接蛋白的关系尚未见报道。目的:观察高糖作用对人系膜细胞活性氧和癌胚纤维连接蛋白mRNA表达的影响。方法:将培养的系膜细胞分为以下各组:正常对照组(5mmol/LD-葡萄糖);渗透压对照组(5mmol/LD-葡萄糖+20mmol/LL-葡萄糖);高糖组(25mmol/LD-葡萄糖);α-硫辛酸干预组,分为高糖+LA50组(25mmol/LD-葡萄糖+50μmol/Lα-硫辛酸)、高糖+LA100组(25mmol/LD-葡萄糖+100μmol/Lα-硫辛酸)、高糖+LA200组(25mmol/LD-葡萄糖+200μmol/Lα-硫辛酸)。以RT-PCR法检测癌胚纤维连接蛋白mRNA表达水平,荧光显微镜和荧光酶标仪测定细胞内活性氧水平。结果与结论:高糖促进系膜细胞活性氧的产生,亦增加癌胚纤维连接蛋白mRNA的表达,α-硫辛酸可显著降低高糖负荷下细胞内活性氧水平,同时减少癌胚纤维连接蛋白mRNA的表达,且呈浓度依赖性,提示活性氧介导高糖负荷致人系膜细胞癌胚纤维连接蛋白的表达,α-硫辛酸可部分逆转这一效应。     

甲状腺激素对血管内皮细胞护骨素表达的影响

目的:观察甲状腺激素对血管内皮细胞护骨素(OPG)表达的影响.方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别在不同浓度甲状腺激素(0.1、1、50 nmol/L,T3)条件下培养24h.ELISA法检测细胞培养液上清OPG的含量,RT-PCR法检测内皮细胞OPG mRNA的表达水平.结果:与生理浓度组T3(1 nmol/L)比较,低浓度组T3(0.1 nmol/L)内皮细胞培养液上清OPG的含量增加(P<0.05),OPG mRNA表达水平明显增高(P<0.05);高浓度组T3(50 nmol/L)内皮细胞培养液上清OPG的含量减少(P<0.05),OPG mRNA表达水平明显降低(P<0.05).结论:HUVEC在低浓度甲状腺激素作用下OPG表达增加,提高甲状腺激素浓度可逆转该现象.     

花青素通过上调Nrf2/HO-1途径抑制H2O2诱导脐静脉内皮细胞氧化损伤的研究

目的:花青素(PC)对H_2O_2作用下血管内皮细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞,H_2O_2作用于人脐静脉血管内皮细胞诱导其氧化损伤,设置空白对照组、模型组(400μmol/LH_2O_2处理)、不同浓度(100,50μg/ml)花青素组,抑制剂组(5μmol·L^-1全反式维甲酸)。使用MTT法检测各组细胞活力;ELISA检测各组细胞培养液中NO、TNF-α和IL-6的浓度变化;DHE荧光探针检测ROS的变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;Western blot法检测各组Nrf2/HO-1蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比H_2O_2损伤组能够显著降低HUVECs的活力,增加细胞中ROS的含量,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低NO分泌,诱导TNF-α和IL-6分泌及降低了Nrf2/HO-1的表达(P<0.01)。不同浓度花青素和H_2O_2同时作用HUVECs时,细胞存活率逐渐上升,ROS、LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,同时NO分泌增加,TNF-α和IL-6分泌下降,Nrf2/HO-1表达增加(P<0.01)。全反式维甲酸组(Nrf2抑制剂)上述指标的检测结果与花青素组相反。结论:花青素对H_2O_2诱导的损伤有保护作用,可能部分通过上调Nrf2/HO-1通路发挥作用。     

丹参红花提取物保护内皮细胞免受氧化损伤的体外实验

目的：观察低密度脂蛋白和无血清培养刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化，以及丹参红花提取物的干预作用。 方法：实验于2005-11／2006—05在卫生部老年医学重点实验室完成。取人新鲜脐带分离培养人脐静脉内皮细胞，分为：①正常对照组。②无血清培养组：用无血清培养基培养24h。③低密度脂蛋白处理组：以含有800mg／L低密度脂蛋白的培养基培养16h。④丹参红花提取物预处理组：用丹参红花提取物（商品名丹红滴注液，由陕西步长集团提供浓缩液，国药准字号Z 20026866／Z 20026867）预处理24h后加入800mg／L低密度脂蛋白继续培养16h或在无血清培养基中培养24h。以MTT法观察丹参红花提取物对人脐静脉内皮细胞生长的影响；应用反转录-聚合酶链反应检测NOX4mRNA水平；用流式细胞仪分析细胞凋亡率；并以DCFH-DA法检测细胞内活性氧生成量。 结果：①低密度脂蛋白处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡为正常对照组的1.3倍，1.2倍和4倍。②无血清培养组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为正常对照组的1．4倍、1．6倍和3倍。③丹参红花提取物预处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为低密度脂蛋白处理组的0．4倍，0．5倍和0．2倍。④丹参红花提取物组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为无血清培养组的0．2倍、0．5倍和0．6倍。 结论：丹参红花提取物能够有效抑制高脂及缺血状态下NOX4 mRNA表达水平，从而抑制人脐静脉内皮细胞内活性氧的产生及细胞凋亡，对内皮细胞起到很好的保护作用。     

复方血栓通对1型糖尿病大鼠氧化应激的影响及机制探讨

目的观察复方血栓通胶囊(XST)减轻糖尿病大鼠肾脏损伤的作用,探讨其保护机制。方法通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg制作糖尿病大鼠模型,成模大鼠随机分为糖尿病组(DM组,10只)、糖尿病α-硫辛酸干预组(ALA组,10只)、糖尿病血栓通干预组(XST组,10只),另设正常对照组(10只)。ALA组大鼠予以α-硫辛酸0.1 g/kg灌胃,血栓通组大鼠予以XST 1 g/kg灌胃,DM组和正常对照组均每日同时间给予同体积蒸馏水灌胃。12周后比较各组肾脏/体重,24 h尿蛋白,尿蛋白/肌酐比,尿素氮(BUN)。测定各组大鼠肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的mRNA含量。结果和正常对照组相比,DM组、XST组、ALA组24 h尿蛋白、左肾重/体质量比、尿白蛋白/肌酐比、BUN均升高,GSHPx降低,MDA升高,i NOS表达上调(P0.05);与DM组相比,XST组和ALA组肾皮质GSH-Px活性增加,MDA含量降低,i NOS明显下降(P均0.05)。各组SOD比较差异无统计学意义(P0.05)。XST组和ALA组各指标变化相似,差异均无统计学意义(P0.05)。结论复方血栓通胶囊可通过抗氧化应激,降低i NOS的表达改善糖尿病大鼠肾脏损伤。     

老年冠心病患者血清NOX2、NOX4 mRNA水平变化及其与预后的关系

目的探究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2、NOX4 mRNA在老年冠心病(CHD)患者血清中的水平变化及其与预后的关系。方法选取该院收治的老年CHD患者146例为CHD组,另选取体检健康老年人146例为对照组。采用实时荧光定量PCR检测血清NOX2、NOX4mRNA水平。比较CHD组与对照组、不同预后老年CHD患者的血清NOX2、NOX4mRNA及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;分析老年CHD患者血清NOX2、NOX4mRNA水平与MDA、SOD水平的相关性;分析老年CHD患者预后的影响因素;分析血清NOX2、NOX4mRNA水平对老年CHD患者预后的预测价值。结果 CHD组血清NOX2、NOX4mRNA及MDA水平均明显高于对照组(P 0.05),血清SOD水平明显低于对照组(P0.05)。预后不良患者血清NOX2、NOX4mRNA及MDA水平均明显高于预后良好患者(P0.05),血清SOD水平明显低于预后良好患者(P0.05)。老年CHD患者血清NOX2、NOX4mRNA水平与MDA水平呈正相关(P0.05),与SOD水平呈负相关(P0.05)。血清NOX2、NOX4mRNA及MDA水平升高为老年CHD患者预后的独立危险因素(P0.05),血清SOD水平升高为老年CHD患者预后的独立保护因素(P0.05)。血清NOX2、NOX4mRNA联合预测老年CHD患者不良预后的曲线下面积为0.943。结论老年CHD患者血清NOX2、NOX4mRNA均呈高表达,NOX2、NOX4mRNA水平升高为老年CHD患者预后的影响因素,且有望成为评估老年CHD患者预后的预测指标。     

α-硫辛酸、银杏叶提取物对波动高糖所致人视网膜色素上皮细胞损伤的作用

目的:研究α-硫辛酸(alpha lipoic acid,ALA)、银杏叶提取物(Gingko biloba,EGb761)对波动性高糖所致人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelial,HRPE)氧化应激和炎性损伤的保护作用。方法:培养HRPE细胞株,取生长良好的对数期细胞用于实验,换用不同条件培养液,分10组进行试验。1)5.5 mmol/L葡萄糖对照组(N组);2)33 mmol/L持续高糖组(H组);3)5.5~33 mmol/L波动葡萄糖组(F组);4)33 mmol/L渗透压对照组(P组);5)ALA_(50)干预组(ALA_(50)组):5.5~33 mmol/L波动葡萄糖组+50μmol/L ALA;6)ALA_(100)干预组(ALA_(100)组):5.5~33mmol/L波动葡萄糖组+100μmol/L ALA;7)ALA_(200)干预组(ALA200组):5.5~33 mmol/L波动葡萄糖组+200μmol/L ALA;8)EGb761_(0.1)干预组(EGb761_(0.1)组):5.5~33 mmol/L波动葡萄糖组+0.1 g/L EGb761;9)EGb761_(0.5)干预组(EGb761_(0.5)组):5.5~33 mmol/L波动葡萄糖组+0.5 g/L EGb761;1 0)EGb761_(1.0)干预组(EGb761_(1.0)组):5.5~33 mmol/L波动葡萄糖组+1.0 g/L EGb761。各组细胞培养72 h,72 h时检测各组HRPE细胞上清液中SOD,GSH,MDA,TNF-α与ICAM-1的含量。采用SPSS18.0软件进行统计学分析。结果:与正常对照组相比,持续高糖组、波动性高糖组、ALA干预组(ALA_(50),ALA_(100),ALA_(200))、EGb761干预组(EGb761_(0.1),EGb761_(0.5),EGb761_(1.0))的SOD,GSH,MDA,TNF-α与ICAM-1含量差异有统计学意义(分别为F_(SOD)=67.936,F_(GSH)=71.363,F_(MDA)=81.123,F_(TNF-α)=70.684,F_(ICAM-1)=80.193;均P0.05);渗透压对照组与正常对照组相比各指标差异均无统计学意义(P0.05);波动性高糖组与持续性高糖组相比,SOD活性、GSH含量明显下降,MDA、ICAM-1与TNF-α的表达量明显升高(均P0.0 5)。ALA干预组(ALA_(50),ALA_(100),ALA_(200))、EGb761干预组(EGb761_(0.1),EGb761_(0.5),EGb761_(1.0))与波动性高塘组相比,各组有统计学差异,且随药物剂量增加,SOD活性、GSH含量增加,MDA,ICAM-1与TNF-α的表达量下降,存在剂量相关性(均P0.05)。结论:ALA,EGb761可能通过降低波动性高血糖对人HRPE所致氧化应激水平,减轻炎性反应,对波动性高血糖所导致的病理损伤有一定保护作用。     

血管紧张素Ⅱ对自发性高血压大鼠外周血单个核细胞NADPH氧化酶2表达的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠(SHR)外周血单个核细胞NADPH氧化酶2(NOX2)表达的影响.方法:分离SHR外周血单个核细胞并进行培养,将细胞随机分为4组(n=6):空白对照组、Ang Ⅱ(10-8 mol/L)组、Ang Ⅱ(10-7 mol/L)组和Ang Ⅱ(10-6 mol/L)组.RT-PCR检测NOX2 mRNA的表达,Western blot检测NOX2蛋白的表达.结果:与空白对照组相比,Ang Ⅱ(10-8、10-7mol/L)组NOX2 mRNA的表达差异无显著性(P>0.05),而NOX2蛋白的表达升高(P<0.01),Ang Ⅱ(10-6mol/L)组NOX2mRNA及蛋白的表达均明显升高(P<0.01).结论:Ang Ⅱ可以促进高血压外周血单个核细胞NOX2的激活.     

PM2.5对HaCaT细胞的损伤作用及机制研究

[目的]探讨PM2.5对人永生化角质形成细胞(HaCaT)的损伤作用及NF-κB抑制剂PDTC对PM2.5致HaCaT细胞损伤作用的影响.[方法]将HaCaT细胞分别PM2.5、PDTC、PM2.5+PDTC共孵育24h,同时设不加任何处理因素的正常组.24h后收集细胞,测定细胞内丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)的活性以及NF-κBp65的蛋白表达情况.[结果]HaCaT细胞的存活率随PM2.5浓度的增加而下降,浓度为200、400、800μg/mL组的细胞存活率明显低于正常组(P<0.05).PM2.5组细胞中MDA含量、ROS水平和NF-κBp65蛋白表达水平显著高于正常组、PDTC组和PM2.5+PDTC组(P<0.05),SOD、GSH-Px的活性显著低于上述各组(P<0.05).PM2.5+PDTC组细胞中MDA含量、ROS水平和NF-κBp65蛋白表达水平显著高于正常组和PDTC组.[结论]PM2.5能够降低HaCaT细胞的存活率.PM2.5能够对HaCaT细胞造成氧化损伤,而PDTC能够缓解这种损伤作用.应用NF-κB抑制剂PDTC可以特异性抑制NF-κB的表达,在一定程度上减轻PM2.5对HaCaT细胞的损伤作用.     

TNF-α诱导A549细胞中NF-κB与NOX2的相关性研究

目的:观察TNF-α刺激前后,NOX2基因在肺泡Ⅱ型上皮A549细胞的表达情况;探讨NF-κB与NOX2基因的相关性。方法:预转染NF-κB siNRA,以TNF-α刺激肺泡Ⅱ型上皮A549细胞,采用RT-PCR及免疫印迹法分别检测NOX2mRNA及蛋白的表达水平。结果:以TNF-α刺激A549细胞可观察到NOX2mRNA及NOX2蛋白表达增加(P0.05);预转染NF-κB siRNA,NOX2mRNA及NOX2蛋白表达降低(P0.05)。结论:TNF-α可诱导NOX2基因在A549细胞表达上调,预先沉默NF-κB可下调上述表达趋势,提示NF-κB与NOX2基因表达存在相关性。     

TLR4基因小干扰RNA对缺氧复氧诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的研究Toll样受体4(TLR4)基因小干扰RNA(siRNA)对体外缺氧复氧条件下诱导肾小管上皮细胞分泌TNF-α的抑制作用。方法 Wistar大鼠原代肾小管上皮细胞(PTECs)置于六孔培养板培养,随机分为A组(正常培养组)、B组(缺氧复氧+TLR4-siRNA转染组)、C组(缺氧复氧组)、D组(缺氧复氧+对照siRNA转染组)共4组。其中B组、C组和D组细胞缺氧3h,随后复氧24h,RT-PCR方法和Westernb lot检测TLR4 mRNA和蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA方法检测各组上清液中TNF-α含量。结果经缺氧复氧处理后,B组、C组和D组的TLR4 mRNA、蛋白水平较A组均显著上调(P<0.01),各组上清液TNF-α含量较A组也显著升高(P<0.01):而B组TLR4 mRNA、TLR4蛋白表达量和上清液TNF-α含量较C组和D组均显著下调(P<0.01);D组与C组相比,各项检测指标表达无显著变化(P>0.05)。结论针对TLR4 mRNA的siR-NA可以有效地抑制缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞的凋亡和炎症反应。     

下调PDCD4抑制MAP2K3和p38 MAPK的表达减轻LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症和凋亡

目的 研究程序性细胞死亡蛋白4(programmed cell death protein 4, PDCD4)在脓毒症诱导的急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)中的作用机制,以及调控PDCD4表达通过丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3, MAP2K3)和p38蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)对脓毒症AKI起到潜在治疗作用。方法 用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激人肾小管上皮细胞(HK-2)构建脓毒症AKI细胞模型。进一步用腺病毒介导siRNA和过表达载体抑制和上调AKI细胞模型中PDCD4的表达;CCK-8法检测细胞增殖;用DCFH-DA及激光共聚焦显微镜检测细胞中ROS水平,用总SOD活性检测试剂和MDA检测试剂盒检测细胞中SOD和MDA水平;免疫共沉淀验证PDCD4和MAP2K3之间的蛋白相互作用;TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-qPCR和Western blot检测PDCD4及相关基因的mRNA和...     

乌拉地尔对缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞内皮素-1和内皮素-1 mRNA表达的影响

目的:探讨乌拉地尔对缺氧/复氧的血管内皮细胞内皮素(ET)-1分泌和释放以及ET-1 mRNA表达的影响.方法:培养人脐静脉内皮细胞,制作缺氧/复氧模型.分为对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+乌拉地尔1、5、20、100 μmmol/L组.用逆转录聚合酶链反应方法半定量研究人脐静脉内皮细胞ET-1 mRNA的表达;用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测各组细胞上清液中ET-1的含量.结果:(1)缺氧/复氧的人脐静脉内皮细胞,ET-1产生增加,随时间延长增加明显.乌拉地尔处理后,ET-1水平增加幅度逐渐降低,呈浓度依赖性和时间依赖性(P均<0.05).(2)缺氧/复氧的人脐静脉内皮细胞,ET-1 mRNA表达增加,乌拉地尔处理后,ET-1 mRNA表达减少(P均<0.05).结论:乌拉地尔减少了缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞ET-1分泌和释放,减少ET-1 mRNA的表达.     

肾损伤分子-1 mRNA在染镉肾小管细胞的表达

目的探讨氯化镉对人肾小管上皮细胞肾损伤分子-1(KIM-1)mRNA表达的影响。方法人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养液传代培养。根据培养液氯化镉浓度分组(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)。培养24 h后进行形态观察及生存率检测,用RT-PCR方法检测各组肾小管上皮细胞KIM-1 mRNA的表达。结果氯化镉对人肾小管上皮细胞造成损伤,细胞形态破坏,细胞存活率降低。20μmol/L、40μmol/L浓度氯化镉可增加肾小管上皮细胞KIM-1 mRNA的表达。结论氯化镉可引起人肾小管上皮细胞KIM-1 mRNA表达,预示KIM-1可作为镉致肾小管损伤效应标志物之一。