突发性耳聋患者外周血内皮祖细胞的变化

目的:探讨突发性耳聋患者外周血中内皮祖细胞(EPCs)数量变化及增殖集落变化情况。方法:测定突发性耳聋患者和听力正常健康人外周血中EPCs数量及培养7 d后增殖集落数量。结果:突发性耳聋组外周血中EPCs计数为(36.5±2.58)个/20万单个核细胞,听力正常健康人EPCs计数为(85.3±6.55)个/20万单个核细胞,EPCs增殖集落计数分别为(2.01±0.31)个和(3.80±1.05)个,两者比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:突发性耳聋患者由于EPCs数量及增殖集落数量下降,在机体修复过程中不能满足要求而引起耳聋等临床症状。     

老年性耳聋患者内皮祖细胞功能变化

目的探讨老年性耳聋患者外周血内皮祖细胞(EPCs)功能的变化。方法分离老年性耳聋患者(观察组)和健康老年人(对照组)外周血中单个核细胞,诱导其分化为EPCs,检测2组培养第7天的EPCs集落数目和细胞计数、黏附、增殖和迁移能力并进行比较。结果观察组EPCs集落数目(1.40±0.37)个少于对照组(2.88±0.48)个,差别有统计学意义(t=7.734,P<0.01)。观察组EPCs细胞计数(54.32±9.24)个少于对照组(67.64±8.39)个,差别有统计学意义(t=3.376,P<0.01)。与对照组相比,观察组黏附细胞数明显减少(P<0.05);EPCs增殖能力和迁移能力下降,差别均有统计学意义(P<0.01)。结论 EPCs功能下降可能为老年性耳聋的发病机制之一。     

老年性耳聋患者内皮祖细胞增殖和衰老变化及其意义

目的 探讨体外培养的老年性耳聋患者外周血来源的内发皮祖细胞的增殖和课衰老变化情况及其临床意义.方法 测定培养7d的老年性耳聋患者和对照组健康老年人内皮祖细胞增殖能力、细胞集落数,比对两组培养14d时内皮祖细胞的衰老程序.结果 老年性耳聋组内皮祖细胞增殖能力为(0.154±0.042),对照组为(0.226±0.574),两者比较差异具有统计学意义(t=3.376,P=0.005<0.01);内皮祖细胞计数,老年性耳聋组为(54.32±9.24)个,对照组为(67.64±8.39)个,两者比较差异具有统计学意义(t=3.376,P=0.003<0.01);内皮祖细胞集落计数:老年性耳聋组为(1.40±0.37)个,对照组为(2.88±0.48)个,两组相比差异具有统计学意义(t=7.734,P<0.01);衰老细胞计数为:老年性耳聋组为(43.90±4.11)个,对照组为(39.76±4.01)个,两组相比差异具有统计学意义(t=2.280,P=0.035<0.05).结论 老年性耳聋患者内皮祖细胞增殖能力下降,易于衰老,可能是老年性耳聋血管退化的机理之一.     

脑出血急性期内皮祖细胞形态学和功能变化及其意义

目的 探讨高血压脑出血急性期患者外周血来源的内皮祖细胞动态形态学和功能变化及其意义.方法 分离、诱导分化高血压脑出血急性期患者和高血压患者外周血内皮祖细胞,动态观察两组内皮祖细胞形态学变化,检测两组患者内皮祖细胞集落和计数、黏附、增殖及迁移能力并进行对比研究.结果 高血压脑出血组内皮祖细胞集落计数为(5.87±0.55),细胞计数为(74.73±11.38),黏附能力为(26.13±5.13),增殖能力为(0.273±0.060),迁移能力为(15.83±2.02);高血压组内皮祖细胞集落计数为(1.73±0.24),细胞计数为(56.70±9.72),黏附能力为(19.97±3.07),增殖能力(0.192±0.058)而迁移能力为(10.33±2.30).两组相比,脑出血组内皮组细胞功能明显增强,具有显著性统计学差异(P<0.05或P<0.01).与高血压组相比,脑出血组内皮祖细胞和集落出现较早,集落体积较大和典型,细胞密度较大.结论 高血压脑出血急性期患者内皮祖细胞数目增多,黏附、增殖和迁移功能增强.这可能有助于血管损伤的修复和再生.     

EPC的变化与冠心病危险因素相关性的研究

目的观察冠心病患者外周血中提取的内皮祖细胞的细胞形态、数量、成集落数量与正常对照组的区别。并研究冠心病患者EPC的数量变化与冠心病危险因素的相关性。方法选择冠心病患者57例和对照组30例,从外周血获取单个核细胞,体外培养后进行细胞分析和计数。分析冠心病患者各种危险因素与EPC细胞数量和成集落的数量的相关分析。结果①冠心病患者外周血内皮祖细胞数量和细胞集落数较对照组明显减少;②将冠心病的危险因素与EPC的数量进行相关分析发现,年龄、吸烟、高血压及LDL升高与EPC的数量明显相关。结论冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和成集落的数量明显降低;冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量与冠心病危险因素相关。     

系统性硬皮病患者循环内皮祖细胞数量变化的初步研究

目的分析系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量的变化。方法选择2010年11月至2011年6月该院风湿免疫科就诊的女性系统性硬皮病(SSc)患者20例作为实验组,同期健康体检者20例为对照组,取外周血20mL,密度梯度离心法分离单个核细胞,以CD133/CD34、CD133/血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)双荧光标记鉴定细胞,CD34/CD133/VEGFR2三荧光标记流式检测内皮祖细胞数量。结果实验组患者外周血内皮祖细胞表达阳性率(3.18±1.97)%较对照组(20.56±4.37)%低(P<0.05)。结论系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量减少。     

冠脉介入治疗对不稳定性心绞痛内皮功能及内皮祖细胞的影响

目的:探讨不稳定性心绞痛患者行冠脉介入治疗前后循环内皮祖细胞(EPCs)数量及功能与血管内皮功能的关系。方法:将入选患者分为二组,第一组为不稳定性心绞痛患者行冠脉介入治疗组,另一组为不稳定性心绞痛患者单纯药物组,均在入院时、术后6个月采用流式细胞仪测定外周血中CD34+/KDR+单个核细胞的水平;采取外周血分离单个核细胞体外诱导培养2周,FITC-UEA-1和DiI-acLDL免疫荧光染色双阳性细胞为正在分化的内皮祖细胞,分别观察其集落形成、增殖及迁移能力;采用高分辨率二维超声检测肱动脉血流介导的内皮依赖性血管舒张功能(FMD)。结果:与术前及对照组相比,术后6个月实验组FMD有明显改善,外周血内皮祖细胞的数量及功能亦有明显增加(P<0.05);直线相关分析显示PCI术后FMD与外周血内皮祖细胞的数量呈正相关(r=0.759)。结论:冠脉介入治疗后不稳定性心绞痛患者的内皮功能及内皮祖细胞数量及功能在术后6个月均较术前及对照组增加,说明冠脉介入治疗通过内皮祖细胞的动员有助于改善动脉血管内皮功能。     

Klotho水平与小鼠月龄相关并抑制其骨髓源性内皮祖细胞衰老

目的 观察不同月龄小鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs) 数量和部分生物学功能以及外周血抗衰老蛋白klotho(Kl)表达水平,探讨Kl对体外培养的老龄小鼠EPCs数量和功能的影响.方法 采用Western-blot法测定不同月龄小鼠外周血Kl水平;以密度梯度离心法获取老龄小鼠单个核细胞与不同浓度的Kl孵育,分别采用acLDL-DiI 和 FITC-lectin 荧光双阳性细胞计数、MTT 分析和改良的 Boyden 小室法来检测其数量、增殖、迁移能力的变化.结果不同月龄小鼠EPCs数量和功能以及外周血Kl水平均与月龄呈负相关;不同月龄小鼠Kl表达水平与外周血EPCs数量及其增殖和迁移等生物学功能具有相关性;体外培养中Kl 可呈浓度依赖性上调EPCs的数量及其迁移能力、增殖能力.结论月龄增加可导致小鼠内皮祖细胞数量和功能下降,并下调肾脏和外周血Kl水平;Kl可增加体外培养的小鼠内皮祖细胞的数量,改善其功能.     

冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞功能的改变

目的:观察冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的改变。方法:选择30例冠状动脉造影证实为慢血流的患者为CSF组,冠脉造影血流正常的患者30例为NCF组。以校正TIMI帧数>27,诊断为冠状动脉慢血流。采取外周血分离单个核细胞体外诱导培养1周,在显微镜下计数,并观察EPCs增殖能力、迁移能力、黏附能力。结果:CSF组外周血EPCs数量及增殖、迁移、黏附能力均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CSF患者外周血EPCs功能降低可能参与CSF现象发生的病理生理过程中。     

冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和功能变化

目的:观察冠心病患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)数量和功能的改变.方法:选择冠心病患者和非冠心病患者各20例,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白(fibronectin)包被培养板,培养7d后贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC.采用MTT比色法、改良的Boyden 小室和粘附能力测定实验,观察EPC的增殖能力和迁移能力及粘附能力.结果:冠心病患者外周血EPC数量明显减少(31.8±7.7 vs 59.5±10.6 EPCs/×200视野,P<0.05),且冠心病患者外周血EPC的粘附能力和迁移能力及增殖能力也明显受损.结论:冠心病患者外周血内皮祖细胞数量减少、功能减退.     

脑出血事件应激对患者内皮祖细胞增殖能力和衰老的影响

目的 探讨脑出血事件应激对患者外周血来源的内皮祖细胞增殖能力和衰老的影响.方法 诱导分化脑出血急性期和基础疾病与其相同的对照组患者的内皮祖细胞,检测两组内皮祖细胞增殖能力、集落、细胞计数和衰老情况并进行对比研究.结果 脑出血事件应激组内皮祖细胞增殖能力较对照组增强(0.270±0.074,0.185±0.050,t=3.802),集落[(5.10±0.79)个/高倍视野,(1.90±0.41)个/高倍视野,t=14.407]和细胞计数[(75.15±10.48)个/高倍视野和(57.10±9.28)个/高倍视野,t=5.157]增加,两组相比差异均具有统计学意义(P＜0.01);但2组内皮祖细胞衰老[(45.54±5.74)个/100细胞和(46.86±5.06)个/100细胞,t=0.686]差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脑出血事件应激可增强内皮祖细胞的增殖能力,但并不能改变患者内皮祖细胞易于衰老的转归.     

循环内皮祖细胞与急性脑梗死及脑血管病危险因素的相关性研究

目的探讨循环内皮祖细胞（EPC）数量和急性脑梗死及脑血管危险因素的关系。方法以CD133和KDR双阳性细胞作为EPC标记,用流式细胞仪对145例急性脑梗死患者（脑梗死组）、118例脑血管危险因素患者（危险因素组）和99例健康志愿者（对照组）的外周血EPC数量进行检测。结果与正常对照组比较,脑梗死组和危险因素组EPC数量明显减少（均P〈0.01）,脑梗死组EPC数量较危险因素组高,但差异无统计学意义（P=0.057 8）。脑梗死组和危险因素组EPC数量均与收缩压、舒张压、HbA1c、CHO、LDL-C水平呈显著负相关（均P〈0.05）,与HDL-C水平呈显著正相关（P〈0.05）,与年龄、TG水平无关（均P〉0.05）;循环EPC数量与NIHSS评分呈显著负相关（P〈0.05）。结论循环EPC数量与脑血管危险因素相关,其数量减少与急性脑梗死的病情严重程度明显相关,脑梗死可能会有限增加EPC的动员。     

吡格列酮对外周血内皮祖细胞数量与增殖能力的影响

目的观察吡格列酮对外周血内皮祖细胞（EPCs）数量与增殖能力的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种于包被人纤维连接蛋白的培养板上,培养14d后收集贴壁细胞,加入不同浓度（10^-6、10^5、10^-4、10^-3mmol／L）UE格列酮分别培养24、48、72h,同时采用激光共聚焦显微镜鉴定,FITC—UEA—I和Dil—acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,并在倒置荧光显微镜下计数;后采用MTT比色法观察EPCs的增殖能力。结果在作用48h后,不同浓度的吡格列酮均增加了外周血EPCs数量和增殖能力;10^-5mmol／L毗格列酮作用48h时影响最为显著,EPCs数量和增殖能力（分别为54．0±2．9和0．593±0．033）明显高于对照组（分别为30．0±31和0．178±0.018）,差异均有统计学意义（均P〈0．01）.结论吡格列酮可增加EPCs数量并改善EPCs的增殖能力。     

冠通方对体外培养内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响

[目的]观察冠通方含药血清对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响。[方法]将24只雄性Wistar大鼠随机分为冠通方组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞,加入各实验血清组培养液培养EPCs,经激光共聚焦显微镜、流式细胞仪鉴定为EPCs,分别在不同作用时间（12h,24h,48h,72h）后,倒置相差显微镜下观察并比较各组EPCs的数量、增殖能力、迁移能力和粘附能力。[结果]与对照组相比,冠通方组可促进外周血EPCs扩增,并显著改善外周血EPCs的粘附、迁移和增殖能力。[结论]冠通方可增加EPC的数量并改善其功能,这可能是冠通方防治冠心病患者经皮冠状动脉腔内成形术（PTCA）加支架植入术后再狭窄的作用机制之一。     

恒磁场对雷帕霉素作用下大鼠内皮祖细胞增殖和迁移的影响

目的 观察恒磁场对雷帕霉素作用下大鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)增殖和迁移能力的影响.方法 密度梯度离心法获得SD雄性大鼠的骨髓EPC,无菌条件下培养6 d.实验分为5组:空白对照组、雷帕霉素(1 ng/ml)组及雷帕霉素+不同强度的恒磁场(0.1、0.5、1.0 mT)组.各组皆于24 h后收集标本,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖能力,改良的Boyden小室法测定EPC的迁移能力.结果 雷帕霉素组EPC增殖显著低于空白对照组(0.252±0.006 vs 0.328±0.025,P<0.05),EPC迁移能力显著降低(31±3 vs 48±5,P<0.05);0.5 mT和1.0 mT恒磁场组EPC增殖显著强于雷帕霉素组(0.278±0.008、0.280±0.010,P<0.05),EPC迁移能力显著高于雷帕雷素组(37±3、38±4,P<0.05).结论 0.5 mT和1.0 mT恒磁场有拮抗雷帕霉素的作用,可促进EPC的增殖和迁移.     

冠状动脉支架再狭窄患者循环内皮祖细胞数量及活性的变化

目的 观察冠状动脉支架再狭窄患者循环内皮祖细胞(EPC)数量及活性的变化.方法 根据复查冠脉造影的结果将既往行冠脉支架置入术的研究对象分为两组:再狭窄组(15例)及对照组(17例),采用密度梯度离心法获取外周血总的单个核细胞,接种到包被有人纤维连接蛋白的24孔培养板,7 d后通过免疫荧光显微镜鉴定细胞表面特异性抗原CD34和KDR,并通过激光共聚焦显微镜鉴定EPC摄取DiI-acLDL及结合FITC-UEA-Ⅰ的能力.通过倒置显微镜进行计数,通过划痕试验测定EPC的迁移能力,通过MTT比色法测定EPC的增殖能力,并通过黏附试验测定EPC的黏附能力.结果 再狭窄组的EPC数量明显低于对照组(4.97±1.42比17.2±3.90,P=0.001),再狭窄组的EPC增殖能力明显低于对照组(增殖倍数1.37±0.32比2.01±0.62,P＜0.05),再狭窄组的EPC迁移能力明显低于对照组,但两组之间的EPC黏附能力无明显的统计学意义.结论 冠状动脉支架再狭窄患者的EPC数量及增殖能力、迁移能力明显下降,可能参与支架再狭窄的发生机制.     

Reduced number and activity of circulating endothelial progenitor cells from patients with hyperhomocysteinemia

BACKGROUND: Hyperhomocysteinemia (HHcy) contributes to atherosclerosis and coronary artery diseases by inducing endothelial cell injury and dysfunction. Recent studies provided increasing evidence that endothelial progenitor cells (EPCs) participated in ongoing endothelial repair. The changes of EPCs in patients with HHcy have not yet been elucidated. Therefore, we investigated the number and functional activity of EPCs in patients with HHcy. METHODS: Human EPCs were isolated and cultured from patients with HHcy (n = 30) and matched volunteers (n = 30). Circulating EPCs were enumerated as AC133+ KDR+ cells via fluorescence-activated cell sorter analysis. Additionally, EPC were expanded from human blood in vitro and identified by DiI-acLDL uptake and lectin staining by direct fluorescent staining under a laser scanning confocal microscope. EPC migration activities were determined by modified Boyden chamber assay. EPC adhesion assay was performed by replating cells on fibronectin-coated dishes and then counting adherent cells. RESULTS: A significant decrease was observed in circulating EPC (AC133+ KDR+ cells) numbers in patients with HHcy compared with control subjects (63.9 +/- 11.7 cells/mL vs. 91.5 +/- 14.2 cells/mL blood, p <0.01). In addition, the numbers of EPCs also decreased in patients with HHcy after ex vivo cultivation (36.1 +/- 6.5 vs. 51.5 +/- 8.3 EPCs/x200 field, p <0.01). Both circulating EPCs and differentiated EPCs were inversely correlated with total homocysteine levels. In addition, EPCs from patients with HHcy were significantly impaired in their migratory capacity and ability to adhere to fibronectin compared with controls. CONCLUSIONS: The present study demonstrated that EPC numbers and functional capacity were impaired in patients with HHcy.