miR-221通过作用DVL2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能

目的 评价miR-221在前列腺癌细胞系中表达的变化对其神经内分泌样转化及其侵袭功能的影响.方法 以Northern blot检测LNCaP和LNCaP-AI两种前列腺癌细胞系中7种microRNA的表达变化;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCaP和LNCaP-AI细胞系中miR-221的作用;CCK-8法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;qRT-PCR和Western blot检测转染的细胞中神经元特异性烯醇化酶(NSE)及dishevelled-2(DVL2)表达的变化.结果 与雄激素依赖性前列腺癌(AD-PC)的细胞系LNCaP相比,miR-221在雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的细胞系LNCaP-AI中明显高表达.通过转染使miR-221在LNCaP细胞系中高表达可促进细胞的NSE表达,加速其神经内分泌样分化.而在LNCaP-AI细胞系中下调miR-221水平则会升高靶基因DVL2的表达水平,并增强LNCaP-AI细胞的迁移和侵袭能力.结论 该实验证实在AIPC和ADPC细胞系中miR-221存在表达差异.miR-221可促进前列腺癌细胞的神经内分泌样转化,这可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因.MiR-221可通过作用DVL2调节晚期前列腺癌细胞的转移和侵袭.     

微小RNA-221作用蓬乱蛋白2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能研究

目的:探讨微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)在前列腺癌细胞系中的表达,对神经内分泌样(NE)转化及其侵袭功能的影响.方法:以Northern blot检测雄激素依赖性前列腺癌(LNCaP) 细胞系,雄激素非依赖性前列腺癌(LNCaP-AI) 细胞系中miRNA的表达;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCaP和LNCaP-AI细胞系中miR-221的作用;细胞增殖检测法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;定量逆转录聚合酶链反应和Western blot检测转染细胞中神经元特异性烯醇化酶及蓬乱蛋白2 (DVL2)表达的变化.结果:与LNCaP相比,miR-221在 LNCaP-AI中明显高表达.通过转染使miR-221在LNCaP中高表达可促进细胞的神经元特异性烯醇酶的表达,加速NE转化.而在LNCaP-AI中下调miR-221水平可增强靶基因DVL2的表达,并增强LNCaP-AI的迁移和侵袭能力(P<0.01).结论:LNCaP和LNCaP-AI中miR-221表达有差异.miR-221可促进前列腺癌细胞的NE转化,可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因.MiR-221可通过作用DVL2调节前列腺癌细胞的转移和侵袭.     

基于生物信息学miR-221调控前列腺癌分子机制的研究

目的:基于GEO数据库对miR-221调控前列腺癌差异基因进行分析,以期找到miR-221调控前列腺癌的重要靶点基因。方法:在GEO数据库里,获得miR-221调控前列腺癌差异基因表达的芯片GSE45627,用在线分析工具GEO2R进行数据分析,按照P <0. 01和差异倍数≥2进行筛选,将筛选得到的基因输入DAVID数据库进行基因和通路的富集分析,然后进行蛋白质互做分析。结果:共鉴定108个DEG。基因本体富集结果表明,DEG编码的功能分子主要位于细胞质、细胞核,分子功能主要涉及"双链RNA结合""螺旋酶活性""双链DNA结合""蛋白结合""单链RNA结合",与生物学过程有关,包括"调节Ⅰ型干扰素信号通路""病毒的防御反应""调控病毒遗传物质的复制""先天免疫反应"。KEGG信号通路分析主要涉及甲型H1N1流感信号通路、麻疹信号通路、丙型肝炎信号通路、RIG-I样受体信号通路、Toll样受体信号通路等。结论:生物信息分析的结果可以发现miR-221调控前列腺癌中有用的靶点和信号通路,但这些需要进一步的实验验证。     

miR-221在前列腺癌细胞中的表达及对增殖的影响

目的研究前列腺癌细胞中miR-221的表达情况及其对癌细胞增殖的影响。方法运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-221在前列腺正常细胞株与前列腺癌细胞株中表达的差异情况,利用细胞转染构建miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,再通过CCK8细胞增殖实验检测细胞增殖情况的变化。结果 qRT-PCR检测细胞株发现miR-221在PC3、LNCa P和DU145三种前列腺癌细胞株中表达量均比前列腺正常细胞株Pr EC低(F=254.197,P<0.001),其中两两比较差异也均有统计学意义。细胞转染技术构建的miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,经qRT-PCR结果显示,miR-221在LNCa P和DU145细胞株中的表达水平明显升高(LNCa P,倍数变化=2.24,t=3.46,P<0.01;Du145,倍数变化=2.24,t=4.29,P<0.01)。细胞增殖实验结果显示,过表达了miR-221的LNCa P(P<0.001)和DU145(P<0.001)细胞生长速度慢于对照组。结论实验证明miR-221表达过度能减慢前列腺癌细胞的增殖,miR-221有可能成为前列腺肿瘤治疗的生物学标志物。     

原发性癫(疒间)全身强直-阵挛发作患者脑电图与血清神经元特异性烯醇酶的检测

目的：探讨原发性癫痫全身强直一阵挛发作患者单次痫性发作后不同时段的脑电图阳性检出率及其与大脑神经元的损伤之间的关系。方法：对60例原发性癫痫全身强直一阵挛发作息者分别于间歇期、单次痫性发作第1、2、3、5、10天分别进行脑电图检查及血清神经元特异性烯醇酶（NSE）检测，并检测50名正常人的血清NSE含量作为对照。结果t60例患者痫性发作间歇期、发作第1、2、3、5、10天的脑电图阳性率分别为46．7％、51．7％、55．0％、76．7％、68．3％、48．3％。第3、5天脑电图阳性率与间歇期比较差异有统计学意义（P〈0．05），以第3天最高。与间歇期比较，血清NSE含量以发作第2天最高，第3天开始下降，第5天降至正常水平。结论：单次癫痫全身强直一阵挛发作对大脑神经元有损伤，痫性发作后第3、5天脑电图异常率较间歇期增高，可能是由于受损脑神经细胞在修复过程中兴奋性增强、膜电位不稳定，导致异常放电发生率增高。     

miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖及凋亡的调控

目的:探讨miR-19a在去势抵抗性前列腺腺癌中的表达及其对去势抵抗性前列腺癌细胞株PC3及DU145的增殖及凋亡的影响。方法:用定量PCR方法检测10例去势抵抗性前列腺癌细胞组织及相关癌旁的miR-19a表达,通过MTT、克隆形成、Western blotting、流式细胞仪检测增殖及凋亡及体内成瘤的方法来研究miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。结果:miR-19a在去势抵抗性前列腺癌组织中的表达相对于癌旁组织显著提高。抑制miR-19a在激素非依赖前列腺癌中的表达,可抑制细胞的增殖及集落形成并增加其凋亡。结论:在激素非依赖性前列腺癌中,miR-19a起着癌基因作用,与前列腺癌的增殖及凋亡相关。     

血清神经元特异性烯醇酶和胃泌素用于肺癌的临床价值

检测３０例正常对照、２５例良性肺疾病、５５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）和１５例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）患者血清神经元特异性烯醇酶（ＮＳＥ）和胃泌素及其在治疗前后的动态变化，结果显示，血清ＮＳＥ和胃泌素在４组间差异有极显著性（Ｐ＜０００１），ＮＳＥ均值分别为８２２、１０８４、１４６４和３２００μｇ／Ｌ，胃泌素均值分别为５９４７、８２００、２２１５３和３５６８６ｎｇ／Ｌ。以２０３μｇ／Ｌ（ＮＳＥ）和８１４ｎｇ／Ｌ（胃泌素）为正常参考值上限，ＮＳＥ阳性率分别是８０％（ＳＣＬＣ）和１４５４％（ＮＳＣＬＣ），胃泌素分别是８０％（ＳＣＬＣ）和６３６３％（ＮＳＣＬＣ）。肺癌治疗后血清ＮＳＥ和胃泌素在ＳＣＬＣ组均显著下降（Ｐ＜０００１），而ＮＳＣＬＣ组仅有胃泌素降低（Ｐ＜０００１）。因此，ＮＳＥ主要用于ＳＣＬＣ的诊断、组织学分型及疗效监测，而胃泌素可以用于各型肺癌，两者联合可以提高临床应用价值。     

神经元特异性烯醇酶和凝血功能在评价脑外伤预后中的意义

目的探讨神经元特异性烯醇酶和凝血功能在评价脑外伤预后中的意义。方法选取2009年1月～2011年12月在我院住院治疗的脑外伤患者66例为观察组,同期健康体检者30例为对照组,按照脑外伤的严重程度将观察组分为轻型组22例,中型组26例,重型组18例。检测并比较血清中神经元特异性烯醇酶（NSE）,凝血酶原时间（PT）,活化部分凝血活酶时间（APTT）和纤维蛋白原定量（Fbg）水平。结果血清NSE、PT、APTT和Fbg水平在对照组、轻型组、中型组和重型组中依次升高,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。生存组血清NSE、PT、APTT和Fbg水平较死亡组明显降低,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论脑外伤患者血清NSE、PT、APTT和Fbg水平与病情有关,对于判断预后有着重要意义。     

中枢神经系统白血病血清神经元特异性烯醇酶测定的临床意义

目的 探讨血清神经元特异性烯醇酶与中枢神经系统白血病之间的关系。方法 对确诊的30例急性白血病患者及匹配的正常人的血清神经元特异性烯醇酶进行测定。结果 中枢神经系统白血病组血清神经元特异性烯醇酶含量21．92 7．5μg/L均明显高于白血病组、对照组，差异有显著性。结论 血清神经元特异性烯醇酶可作为反映中枢神经系统白血病病情的生化指标。     

短暂性脑缺血发作患者血浆NSE水平的动态观察

短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack，TIA)是指历时短暂并经常反复发作的脑局部供血障碍，导致供血区局限性神经功能缺失症状。每次发作持续数分钟至1小时，不超过24小时即完全恢复，但常有反复发作。TIA被公认为缺血性脑卒中最重要的危险因素，未经治疗或治疗无效的病例，约1／3发展为脑梗死。因此，了解和研究该类患者的     

流行性乙型脑炎患者脑脊液中神经元特异性烯醇酶含量的变化

目的 研究流行性乙型脑炎（乙脑）患者脑脊液中神经元特异性烯醇酶（NSE）的含量变化及临床意义。方法 RIA法检测了58例乙脑患儿脑脊液NSE的含量变化。并对其中26例进行了随访观察。结果 脑脊液中NSE含量在发热期即有显著增高,至极期达到高峰,其增高程度与病情严重程度相平行并与疾病预后密切相关。结论 脑脊液NSE含量测定对乙脑患儿脑损伤程度及临床预后的判断有重要的参考价值。     

痫样放电与血清神经元特异性烯醇酶变化的关系研究

目的探讨血清神经元特异性烯醇酶(NSE)在癫痫控制中的诊断价值。方法采用酶联免疫分析法检测癫痫病人有痫样放电者外周血NSE的浓度。结果常规脑电图出现痫样放电波及24h脑电监测每屏都存在痫样放电波者(频发组)血清NSE浓度为(14.15±0.64)μg/L,与对照组(7.98±0.48)μg/L比较差异有高度显著性(P<0.01);与常规脑电图未能发现痫样放电波及24h脑电监测痫样放电波发生次数<10次者(非频发组)的(11.02±4.12)μg/L比较差异也有高度显著性(P<0.01)。结论痫样放电引起血清NSE升高,对脑细胞存在损伤,血清NSE检测对药物控制癫痫的评价有重要价值,动态检测可帮助判断预后。     

miR-206通过调控PDCD10抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-206通过调控程序性细胞死亡因子10(programmed cell death 10,PDCD10)对前列腺细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:选取国药汉江医院手术切除的前列腺癌标本61例,另选40例良性前列腺增生组织作为对照,采用原位杂交检测miR-206和PDCD10表达水平,分别分析miR-206和PDCD10的表达与前列腺癌患者临床病理参数间的关系;双荧光素酶实验检测miR-206和PDCD10在前列腺癌细胞中的相互作用;选取前列腺癌PC3细胞,分别转染miR-206 mimics+PDCD10pcDNA过表达载体、miR-206 mimics、PDCD10 pcDNA过表达载体、mimics NC组和mimics NC+PDCD10 pcDNA组。采用实时荧光定量PCR法检测PDCD10 mRNA的表达量,Western blot检测PDCD10蛋白的表达量;通过MTT、Transwell迁移和侵袭检测前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果:原位杂交实验染色显示,miR-206在前列腺癌组织中的阳性表达率(24.59%,15/61)明显低于良性前列腺增生组...     

牛脑和人脑神经元特异性烯醇酶的制备及免疫组织化学的应用

从牛脑和人脑内分别提取神经元特异性烯醇酶(Neuron-specific enolase,简称NSE,又称γγ烯醇酶),并制备了兔抗牛NSE抗血清(抗NSE_b)和兔抗人NSE抗血清(抗NSE_h)。用猫、狗的脊髓和大脑运动皮质切片,进行免疫组织化学-PAP法染色,其中神经元均呈阳性反应,神经胶质均阴性,并与美国的兔抗人NSE抗血清(抗NSE_H)进行染色对比。     

miR-128抑制结肠癌侵袭转移的机制研究

目的分析miR-128在结肠癌细胞中的表达情况,研究其对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法对转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞进行培养,采用MTT法行细胞增殖实验检测细胞增殖能力,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;并采用RT-RCR检测miR-128mRNA的表达,Westernblot法检测miR-128蛋白的表达。结果转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞较转染空白对照模拟物后的,细胞增殖、侵袭及迁移能力均下降（均P＜0.05）,且转录因子Sp1基因在mRNA及蛋白水平均下降（均P＜0.05）。结论miR-128可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移,可能通过调控Sp1基因发挥上述作用。     

惊厥患儿血清神经元特异性烯醇酶的测定及其意义

采用时间分辨荧光分析法对14例惊厥患儿和10例对照患儿的血清NSE含量进行测定.结果,14例惊厥患儿发作当日血清NSE为10.41±3.18μg/L,明显高于对照患儿的7.39±2.65μg/L(P＜0.01),但惊厥发作后3d血清NSE明显下降,7d已恢复正常.结果表明,惊厥发作可致血清NSE含量升高,提示存在脑神经元损伤;血清NSE可作为早期发现惊厥时脑损伤的指标之一.     

原发性癫癎全身强直—阵挛发作患者脑电图与血清神经元特异性烯醇酶的检测

目的:探讨原发性癫全身强直—阵挛发作患者单次痫性发作后不同时段的脑电图阳性检出率及其与大脑神经元的损伤之间的关系。方法:对60例原发性癫全身强直-阵挛发作患者分别于间歇期、单次痫性发作第1、2、3、5、10天分别进行脑电图检查及血清神经元特异性烯醇酶(NSE)检测,并检测50名正常人的血清NSE含量作为对照。结果:60例患者痫性发作间歇期、发作第1、2、3、5、10天的脑电图阳性率分别为46.7%、51.7%、55.0%、76.7%、68.3%、48.3%。第3、5天脑电图阳性率与间歇期比较差异有统计学意义(P<0.05),以第3天最高。与间歇期比较,血清NSE含量以发作第2天最高,第3天开始下降,第5天降至正常水平。结论:单次癫全身强直—阵挛发作对大脑神经元有损伤,痫性发作后第3、5天脑电图异常率较间歇期增高,可能是由于受损脑神经细胞在修复过程中兴奋性增强、膜电位不稳定,导致异常放电发生率增高。