咯利普兰对NOD小鼠T淋巴细胞凋亡的影响

目的　通过对非肥胖型糖尿病 (NOD)小鼠T淋巴细胞凋亡率的分析 ,探讨咯利普兰 (rolipram)对 1型糖尿病的免疫调节机制。方法　将经环磷酰胺 (CYP)加速过的 60只体重相近的 4周龄雌性NOD小鼠随机分为两组 ,干预组给予咯利普兰 ( 8mg·kg-1) ,每日 2次 ,连续 30d ;对照组给予等次等量的磷酸盐缓冲溶液 (PBS)。将小鼠脾细胞制成单细胞悬液 ,通过DNA梯度图谱定性和流式细胞仪定量法分析外周T淋巴细胞的凋亡情况。结果　与PBS对照组比较 ,咯利普兰干预组发病率降低 (P <0 0 1) ;外周T淋巴细胞凋亡率增加 (P <0 0 5 )。结论　咯利普兰能够通过增加T淋巴细胞的凋亡减少免疫效应性细胞的积聚 ,从而阻止NOD小鼠发生 1型糖尿病     

霉酚酸酯对非肥胖性糖尿病小鼠胰岛炎和胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的:探讨霉酚酸酯(mycopbenolate mofetil,MMF)对非肥胖性糖尿病小鼠non-obese diabetic mice,NOD)胰岛炎和胰岛β细胞凋亡的保护作用.方法:8周龄NOD雌性小鼠22只分为两组,每组11只,干预组给予霉酚酸酯30 mg/kg灌胃,对照组给予等量的生理盐水.两组小鼠饲养期间定期监测其血糖水平.30天实验结束时,每组取5只小鼠处死,行HE染色观察胰岛炎程度,TUNEL法检测胰岛β细胞凋亡率.余下小鼠观察到发生精尿病或20周处死.结果:干预前两组小鼠血糖均在正常水平.干预期间和干预期满后,MMF干预组小鼠血糖与生理盐水对照组之间无差异(P>0.05);MMF组胰岛炎严重程度及胰岛β细胞凋亡率较生理盐水对照组明显减轻(P<0.01).结论:MMF可以在早期抑制NOD小鼠的胰岛炎和胰岛β细胞凋亡,从而减轻胰腺损伤.如果在糖尿病发病前给予MMF可能延缓或防止糖尿病的发生.     

Fas-FasL在NOD小鼠胰岛炎中的作用

目的分析Fas-FasL在NOD小鼠胰岛炎中的作用。方法取32只分属不同周龄的雌性NOD小鼠,观察其血糖、胰岛HE染色、免疫组织化学染色———检测胰岛素、CD8、Fas、FasL的表达。在分析NOD小鼠胰岛炎中以胰岛或相关细胞为研究单位,从而减少了混杂因素的影响。结果雌性NOD小鼠自6周龄起出现胰岛炎,其评分逐渐增加(P<0.0005),14周龄出现糖尿病。随着胰岛炎的加重:胰岛素阳性细胞减少(P<0.0005),与胰岛炎评分呈负相关(P<0.05);Fas 胰岛细胞增加(P<0.0005),与评分呈正相关(P<0.01);FasL 胰岛细胞出现并逐渐增加(P<0.0005),与评分呈正相关(P<0.01);浸润细胞表达FasL、CD8,均逐渐增加(P<0.0005)。胰岛细胞的Fas与胰岛素表达之间呈负相关、胰岛素与FasL呈负相关、Fas与FasL呈正相关,浸润细胞的CD8与FasL表达呈正相关,P值均小于0.01。结论在NOD小鼠胰岛炎中,Fas-FasL可能参与β细胞损伤及自身免疫负调节。     

ICA512／IA—2抗体及GAD抗体联合检测筛查自身免疫中介1型糖尿病

目的应用ICA512/I/2抗体与谷氨酸脱羧酶(GAD)抗体联合筛查中国人糖尿病患者中的自身免疫中介1型糖尿病。方法487例中国人,按原WHO1985标准诊断为非糖尿病109例、IDDM35例及NIDDM343例。对象血清ICA512/IA-2抗体及GAD抗体的检测采用放射配体法,以人重组ICA512/IA-2及GAD65为抗原(英国RSR公司)。结果(1)非糖尿病、IDDM组及NIDDM组ICA512/IA-2抗体阳性率分别为0.9％、14.3％及2.3％(IDDM组比非糖尿病组及NIDDM组P均＜0.001),GAD抗体阳性率分别为0.9％、40.0％及10.2％(IDDM组比非糖尿病组及NIDDM组P均＜0.001,NIDDM组与非糖尿病组P＜0.01)。(2)非糖尿病、IDDM组及NIDDM组ICA512/IA-2及/或GAD抗体阳性率分别为1.8％、42.9％及11.7％(IDDM组比非糖尿病组及NIDDM组P均＜0.001,NIDDM组比非糖尿病组P＜0.01)。(3)NIDDM组中的自身抗体阳性者年龄、诊断年龄及病程均小于阴性组(P＜0.05),应用胰岛素者显著多于阴性组(P＜0.05)。75％阳性者BMI＜25。(4)NIDDM组中抗体阳性者在病程≤1年、～5年及＞5年者中分别占52.0％、30.0％及17.5％(P＜0.05)。结论在中国人临床表现为NIDDM患者中,至少有12.0％为自身免疫中介1型糖尿病。     

人谷氨酸脱羧酶65 DNA疫苗预防非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的机制探讨

目的　探讨人谷氨酸脱羧酶 6 5 (GAD6 5 )DNA疫苗预防非肥胖糖尿病 (NOD)小鼠糖尿病的作用机制。方法　 (1) 6 2只 4周龄NOD雌鼠分为PBS(2 1只 )、PcDNA(2 0只 )、GAD6 5 (2 1只 ) 3组 ,由胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3 1、人GAD6 5DNA疫苗 5 0 μg ,1周后重复 1次。观察 30周龄的累积糖尿病发病率。 (2 )各组取 12周龄未发病NOD鼠 (n =10 )胰腺HE染色观察胰岛炎 ;并用末端脱氧核糖核酸缺口标记法 (TUNEL)加SABC法检测胰岛 β细胞凋亡 ;ELISA法测定血清、脾细胞培养上清干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素 4 (IL 4 )水平 ;RT PCR半定量检测脾脏IL 4、IFN γ和核因子NF ATc、NF ATpmRNA表达水平。结果　 (1) 30周龄时 ,PBS、PcDNA、GAD6 5组发病率分别为 95 2 %、80 0 %、6 1 9%。GAD6 5组发病率低于PBS组 (P =0 0 0 8)。 (2 ) 12周龄时GAD6 5组胰岛炎积分 (0 99± 0 71)和胰岛 β细胞凋亡率 (0 75 % )均低于PBS组 (2 16± 0 78,P =0 0 0 1;8 97% ,P=0 0 14 )和PcDNA组 (1 72± 0 5 9,P =0 0 2 7;2 6 5 % ,P =0 0 2 3)。GAD6 5组脾脏NF ATc、IL 4mRNA相对吸光度值及血清IL 4水平分别为 1 93± 0 34、0 70± 0 16、36 pg/ml± 8pg/ml,显著高于PBS组 (0 79± 0 15、0 4 9± 0 11、19pg/ml     

NKG2D mAb对自发性NOD小鼠同种胰岛移植的作用研究

目的 探讨NKG2D mAb能否单独作为共刺激信号阻断剂延长自发性非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠移植移岛的有功能存活期;NKG2DmAb和CD154mAb是否有协同作用.方法 将分离、纯化的BABL/c小鼠胰岛植入自发糖尿病的NOD小鼠左肾包膜下,移植成功的小鼠分成4组:对照组,NKG2D mAb治疗组,CD154 mAb治疗组和联合治疗组(NKG2D mAb+CD154 mAb).通过小鼠尾静脉血监测血糖,记录胰岛移植物有功能存活期;胰岛移植物所在肾脏行HE染色和CD3、CD4、CD8免疫组织化学染色.结果 NKG2D mAb治疗组移植物有功能存活期无延长(5～11 d,对照组6～11 d,两者差异无统计学意义),CD154 mAb治疗能明显延长移植物有功能存活期[20～64 d,中位期41 d,和NKG2D mAb治疗组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)],联合治疗组较CD154 mAb治疗能延长移植物有功能存活期(23～84 d,中位期51 d,但差异无统计学意义).各组发生排斥时胰岛移植所在肾脏均见淋巴细胞浸润,CD3、CD4、CD8染色结果无明显差异.结论 CD154 mAb能明显延长NOD小鼠胰岛移植物有功能生存期;单独使用NKG2DmAb治疗,不能延长胰岛移植物有功能生存期;联合治疗有效,但仍不能诱导移植物长期存活.     

己酮可可碱对NOD小鼠胰岛B细胞caspase表达的影响

目的：观察己酮可可碱（PTX）对自发1型糖尿病模型NOD小鼠的早期干预治疗效果，探索其保护B细胞作用的分子生物学机制。方法：8周龄、雌性NOD小鼠随机分为2组：PTX组32只，对照组33只。实验开始后第1天和第14天时，NOD鼠均腹腔注射1次环磷酰胺（200mg／kg）。PTX组按给药剂量为每次5mg／kg，于实验的第0～3天、第13～16天每日注射3次；第4～12天、第17～26天时每日2次。     

NOD小鼠糖尿病病症的初步观察

对126只NOD小鼠自发性糖尿病发病情况观察，52周后雌性发病率为50％、雄性发病睾为28．3％。雌性发病早于雄性，发病期小鼠尿糖、血糖水平升高，发病后2～5周死亡。主要病理学特征表现为胰岛炎及胰岛萎缩等。     

GAD-Ab与ICA检测对2型糖尿病患者中LADA早期诊断的临床价值

目的探讨谷氨酸脱羟酶抗体（GAD—Ab）和（或）胰岛细胞抗体（ICA）检测对于2型糖尿病中成人隐匿性自身免疫糖尿病（LADA）患者诊治中的临床意义。方法对124例2型糖尿病患者与43例正常人的血清,用ELISA法测定GAD—Ab及CA,采用放射免疫法测定血清C肽水平。结果124例2型糖尿病人中抗体阳性率3065％,OAD—Ab、ICA、双抗阳性分别为1532％、968％、887％,抗体阳性率显著高于单项阳性率,差异有统计学意义（p〈0．01）。对照组43例中除了lcA阳性率233％,其余均为阴性。GAD—Ab与IOA阳性患者空腹与餐后2hO肽水平低于自身抗体阴性者,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论检测初诊为2型糖尿病患者血清中GAD-Ab和ICA性率,有助于早期确诊LADA;多种抗体联合检测可提高诊断的敏感性。     

甲壳低聚糖对NOD小鼠降血糖作用观察

目的 观察甲壳低聚糖对NOD小鼠降血糖作用。方法 对NOD小鼠测血糖值，分成高血糖组(I)和低血糖组(Ⅱ)。对I、Ⅱ又分别随机分成对照组I-1、Ⅱ-1和治疗组I-2、Ⅱ-2，治疗组用30%甲壳低聚糖作饮用水，对照组用冷开水作饮用水，连续15周，定期测定各组血糖值。结果 治疗组I-2有58％降血糖作用显著，42％降血糖有效，血糖较长时间得到控制，寿命延长，治疗组Ⅱ-2血糖未见升高。对照组I-1寿命很短，对照组Ⅱ-1陆续出现高血糖。结论 甲壳低聚糖对NOD小鼠高血糖有治疗作用和控制血糖作用，能延长NOD小鼠生存期。     

Graves病患者血清谷氨酸脱羧酶抗体的变化

目的：研究谷氨酸脱羧酶抗体（GAD）在Graves病中的检出及意义。方法：采用酶联免疫法及放射免疫法检测了初发尚未并发糖尿病的Graves病患者治疗前后及正常对照组的GAD抗体、抗甲状腺球蛋白抗体（TGA）、抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb)、游离T3（FT3）、游离T4（FT4）的变化，并研究了GAD抗体与FT3、FT4、TGA、TPOAb的关系。结果：GAD抗体与血清FT3、FT4水平的相关系数r分别为一－0．367（P＞0．05）、0．029（P＞0．05），与血清TGA、TPOAb的相关系数r分别为0．320（P＞0．05）、0．394（P＞0．05）。Graves病治疗前后相经GAD抗体、TGA、TPOAb、GAD抗体阳性率治疗后有下降趋势但无统计学差异。结论：GAD抗体与Graves病相关，而与甲状腺功能亢进无关。     

GAD—Ab、ICA检测在糖尿病分型诊断中的临床价值

目的探讨血清谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）、胰岛细胞抗体（ICA）联合检测对糖尿病分型的诊断价值。方法采用RIA法和ELISA法测定138例糖尿病患者及38例正常人的血清GAD—Ab、ICA水平。结果1型糖尿病患者GAD．Ab、ICA阳性率分别为57．1％和38．8％,联合检测阳性率为91．8％,与其他组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;2型糖尿病患者GAD-Ab、ICA阳性率分别为9．0％和19．1％,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。GAD-Ab和ICA抗体阳性患者C肽水平较低。结论GAD-Ab、ICA可用于糖尿病的分型诊断,联合检测能提高阳性率,且有助于检出成人隐匿性免疫糖尿病（LADA）。     

1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶反应性T淋巴细胞的测定

目的 探讨糖尿病患者血清中谷酸脱闳酶反应性Ｔ淋巴细胞的阳性反应及临床意义。方法 应用对硝基苯２酰氨基已糖（ＮＡＧ）微量酶反应比色法反映细胞增殖,检测３７例１型糖尿病（ＤＭ）患者外周血单核细胞对谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）的反应性,并以２型ＤＭ、其他自身免疫性疾病患者及正常人各３０例对照。结果 １型ＤＭ ＧＡＤ反应性Ｔ细胞的阳性率为３５．１％（１３／３０）,其他自身免疫性疾病１０％（３／１０）,而２型ＤＭ     

灯草灸对热性惊厥幼年大鼠大脑皮质内GABA、Glu含量的影响

目的 观察灯草灸疗法对热性惊厥幼年大鼠大脑匀浆内谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量的影响及其可能的作用机制。方法 40只健康SD幼年大鼠,随机分为模型组、对照组、安定组、灯草灸组和安定+灯草灸组,每组8只,均制作热性惊厥大鼠模型。然后检测各组大鼠大脑皮Glu、GABA含量。结果 与对照组相比,模型组大鼠大脑皮质Glu含量明显升高（P<0.01）。与模型组相比,安定组、安定+灯草灸组大鼠大脑皮质Glu含量明显降低（P<0.01）,模型组与灯草灸组之间无显著性差异（P>0.05）,安定组、灯草灸组、安定+灯草灸组之间无显著性差异（P>0.05）,安定+灯草灸组与安定组相比有显著性差异（P<0.05）、与灯草灸组相比有极显著性差异（P<0.01）。与对照组相比,模型组大鼠大脑皮质GABA含量明显降低（P<0.01）;模型组与安定组、灯草灸组、安定+灯草灸组相比有极显著性差异（P<0.01）;安定组与灯草灸组相比无显著差异（P>0.05）,安定组与安定+灯草灸组相比有显著差异（P<0.05）,灯草灸组与安定+灯草灸组相比有...     

人AADC基因的克隆

为克隆表达人芳香族左旋氨基酸脱羧酶的基因 ,以了解此基因在多巴胺代谢过程中的作用 ,从人类胎儿黑质组织中提取总RNA ,以RT PCR方法扩增 1 4 4 2bp的cDNA片段 ,将此片段克隆于 pGEM T载体中 ,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后 ,进行全序列分析。结果表明克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致 ,得到了编码正确的人AADC的cDNA全序列。     

谷氨酸免疫抑制作用的研究

本文在实验动物体内和体外进行了谷氨酸的免疫抑制作用研究。谷氨酸对耳肿反应、外周血中T细胞数、淋巴细胞转化反应及特异性抗体形成(红细胞溶解分光光度法,QHS)均有明显抑制作用,并能延长小鼠同种移植物的存活时间。谷氨酸有希望成为一种低毒有效的免疫抑制剂。     

人芳香族氨基酸脱羧酶基因的克隆及测序

[目的]用RT-PCR法获得人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因全序列,并建立优化方法.[方法]从人嗜铬细胞瘤中提取组织总RNA,自行设计引物,采用两步RT-PCR法扩增出长约1550bp的基因片断,凝胶回收后与高效克隆PCR产物的新型载体T-载体连接,并转化入大肠杆菌,通过蓝白斑反应筛选出重组体,质粒提取后进行重组体的酶切鉴定及基因测序.[结果]BamHⅠ和HindⅢ酶切证实了目的基因同克隆载体进行了有效的连接,基因测序证实了所克隆的片断为人AADC基因.[结论]本实验通过对引物,Taq酶的选择及反应条件的优化,保证了扩增的有效性和特异性.新型的克隆载体明显提高了克隆效率.基因测序证实了AADC基因扩增的成功.本研究为AADC基因治疗帕金森病等多巴胺能缺乏疾病的研究打下了基础.     

Glutamic acid decarboxylase 65 autoantibody levels discriminate two subtypes of latent autoimmune diabetes in adults

Objective To compare the clinical characteristics between type 2 diabetes mellitus (T2DM) and latent autoimmune diabetes in adults (LADA) with different titers of glutamic acid decarboxylase autoantibody (GADA) and to define the two distinct subtypes of LADA.Methods Sera of 750 patients with an initial diagnosis of T2DM from central south of China were screened for GADA using a radioligand assay. The distribution and frequency of GADA levels were described. Two hundred and ninety-five patients were divided into the T2DM group (n=233) and the LADA group (n=62) to compare the age of onset, body mass index, HbA1c, C-peptide, hypertension, dyslipidemia and chronic diabetic complications. Furthermore, LADA patients with different GADA titers were subdivided to analyze the same indexes as the above. Results The prevalence of LADA (defined as GADA≥0.05, namely GADA positive) was 9.7% in the 750 initially diagnosed type 2 diabetic patients. Compared with T2DM, LADA patients were younger at their ages of onset, had lower C-peptide and body mass index, and also had less cases with hypertension and with dyslipidemia. However, only patients with high titer of GADA had poorer beta cell functions and less diabetic complications compared to T2DM and low GADA titer of LADA patients. Patients with low GADA titer were similar to T2DM patients, except that they were prone to develop ketosis more frequently.Conclusions Two clinically distinct subtypes of LADA can be identified by GADA levels in patients initially-diagnosed as type 2 diabetes. Patients with high titer of GADA (GADA≥0.5) subsequently develope more insulin dependency, which are classified as LADA-type 1; while those with lower GADA titer (0.05≤GADA&lt;0.5) and having clinical and metabolic phenotypes of type 2 diabetes are classified as LADA-type 2.     

谷氨酸对大鼠离体下丘脑内侧基底部弓状核神经元电活动的影响

目的 探讨谷氨酸(Glu)对大鼠下丘脑弓状核(ARC)神经元电活动的影响.方法 采用电生理学方法,细胞外记录大鼠离体下丘脑内侧基底部ARC神经元的电活动,观察Glu及N-甲基-D-门冬氨酸受体激动剂NMDA对ARC神经元放电的影响.结果 Glu(200 μmol/L)可使ARC神经元电活动增强,ARC神经元放电频率由给药前的(1.26±0.31)Hz增加至(1.78±0.59)Hz;NMDA(25 μmol/L)也可使ARC神经元电活动增强,ARC神经元放电频率由给药前的(1.27±0.22)Hz增加至(2.36±0.68)Hz;NMDA受体拮抗剂MK-801(100 μmol/L)能阻断Glu、NMDA引起的ARC神经元放电频率加快效应.结论 Glu、NMDA均可显著增强ARC神经元电活动,在下丘脑弓状核神经元电活动的调节中有Glu机制的参与.     

Double Labeling Immulloelectron Microscopic Study on the Synaptic Connections between Glutamic Acid Neurons and GABA Neurons in the Hippocampus of Rats

The pathogenesis of epilepsy is a very complicated process, In which neurotransmltters play important roles. The hippocamplls is a frequently attacked site and an ideal model tissue for epilepsy' l]. In general, the seizure results from the imbalance of excitation and inhibition, i. e., increased effect of excltatory neurotransmltters ordecreased effect of inhlbitory neurotransrnlttersL =' ']. However, there was no nlorphologlcal, eel)eclally at the ultrastructural level, evidenceic identify …