β-catenin/Tcf复合体、cyclinD1、c-myc在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨Wnt/β-catenin通路中β-catenin/Tcf复合体和下游主要靶基因cyclinD1、c-myc在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用。方法转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量;采用免疫组化方法检测79例不同分化类型的鼻咽癌组织中cyclinD1、c-myc的表达。结果通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株（CNE-2和HONE-1）中的表达是高分化鼻咽癌细胞株（CNE-1）的80.12-123.6倍。在角化性鳞癌与分化型非角化癌、分化型非角化癌与未分化型非角化癌中,cyclinDl表达有统计学差异（均P〈0.05）。c-myc的表达在未分化型非角化癌和分化型非角化癌之间比较,同样有统计学差异（P〈0.01）。结论低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的核内β-catenin/Tcf复合体c、yclinD1和c-myc的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用。     

Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用

[目的]探讨Wnt/β-catenin通路的枢纽分子β-catenin和β-catenin/Tcf复合体在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路对鼻咽癌分化的作用.[方法]采用免疫组化方法检测13例鼻咽粘膜慢性炎症和74例不同分化类型的鼻咽癌组织中β-catenin的表达;转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量.[结果]β-catenin在鼻咽癌中的异常表达主要出现在细胞浆内过表达.在角化性鳞癌、分化型非角化性癌中β-catenin胞浆内的过表达相对少,而在未分化癌中胞浆内累积明显增多.未分化癌与角化性癌、未分化癌与分化型非角化性癌相比较,β-catenin的表达有统计学差异,P值分别为0.0195和0.0003.通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2和HONE-1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)的80～123.6倍.[结论]低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的胞浆内β-catenin和核内β-catenin/Tcf的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用.     

Wnt／β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用

【目的】探讨Wnt/β-catenin通路的枢纽分子β-catenin和β-catenin/Tcf复合体在不同分化程度鼻咽癌中的表达，进而阐明Wnt/β-catenin通路对鼻咽癌分化的作用。【方法】采用免疫组化方法检测13例鼻咽粘膜慢性炎症和74例不同分化类型的鼻咽癌组织中β-catenin的表达：转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒，检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量。【结果】β-catenin在鼻咽癌中的异常表达主要出现在细胞浆内过表达。在角化性鳞癌、分化型非角化性癌中β-catenin胞浆内的过表达相对少．而在未分化癌中胞浆内累积明显增多。未分化癌与角化性癌、未分化癌与分化型非角化性癌相比较．β-catenin的表达有统计学差异，P值分别为0．0195和0．0003。通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin／Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2和HONE-1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)的80—123．6倍。【结论】低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的胞浆内β-catenin和核内β-catenin/Tcf的表达，说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中，提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用。     

Wnt3a在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中对神经发生的作用

目的探讨Wnt3a在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中对神经发生的作用及其机制。方法将健康雄性SD大鼠70只按随机数字表法分为假手术组、SAH组、Wnt3aⅠ组、Wnt3aⅡ组、Wnt3aⅢ组、Wnt3aⅣ组和DKK-1组。蛛网膜下腔出血的模型通过枕大池自体血注入法建立。应用免疫荧光技术观察各组大鼠海马的神经发生情况,应用蛋白印迹法检测各组大鼠海马中Wnt通路信号分子散乱蛋白-1(Dvl-1)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。结果随着Wnt3a剂量升高,各组中BrdU阳性细胞百分率呈上升趋势(P<0.05),各组中Dvl-1与β-catenin的蛋白表达量也呈逐渐升高趋势(P<0.05);给予经典Wnt通路抑制剂DKK-1后,Dvl-1、β-catenin蛋白表达量与阳性细胞百分率均明显下降(P<0.05)。结论在蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤中,Wnt3a可能通过经典Wnt信号通路促进神经发生,对中枢神经系统的修复与保护发挥积极作用。     

TIM-3 基因在上皮性卵巢癌中高表达并促进癌细胞的增殖和迁移

目的 通过挖掘GEPIA数据库中的基因信息,分析T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（TIM-3）基因在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达及作用机制。方法 采用GEPIA数据库在线分析TIM-3基因在EOC组织和正常卵巢组织中的表达水平。收集2018年6月~2019年12月在我院实施卵巢手术治疗的82例EOC癌变组织标本和18例正常卵巢组织标本,免疫组织化学法检测标本组织中TIM-3的表达水平,分析TIM-3表达与EOC临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier Plotter分析TIM-3表达水平与EOC患者生存之间的关系。qRT-PCR法检测卵巢癌组织和正常组织标本TIM-3和Wnt1 mRNA表达水平及相关性。采用pMAGic 4.0质粒转染构建TIM-3沉默卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组（未转染的SKOV3细胞系）、沉默阴性对照组（SKOV3+NC siRNA组：转染pMAGic 4.0 NC siRNA质粒的SKOV3细胞系）和沉默TIM-3组（SKOV3+TIM-3 siRNA组：转染pMAGic 4.0 TIM-3 siRNA质粒的SKOV3细胞系）;采用pcDNA3.1质粒转染构建TIM-3过表达卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组、过表达阴性对照组（pcDNA NC组：转染pcDNA3.1质粒的SKOV3细胞系）和过表达TIM-3组（pcDNA TIM-3组：转染pcDNA3.1 TIM-3质粒的SKOV3细胞系）。MTT法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,TOPflash/FOPflash双荧光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin通路活性,qPCR检测Wnt/β-catenin信号通路中转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平,Western blot检测SKOV3细胞中MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin及E-cad蛋白表达。结果 TIM-3在正常卵巢组织中呈阴性表达,在EOC组织中呈阳性表达,EOC组织中TIM-3阳性表达率（84.14%）显著高于正常卵巢组织（16.67%,P<0.05）。TIM-3表达与FIGO分期、组织分化程度及淋巴结是否转移有关（P<0.05）,与年龄、病理类型无关（P>0.05）。且TIM-3与Wnt1水平呈正相关（P<0.05）。沉默TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性受到抑制,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低（P<0.05）,凋亡能力显著升高（P<0.05）,转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著下调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著下调,EMT相关蛋白E-cad水平显著上调（P<0.05）。过表达TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性被激活,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高（P<0.05）,凋亡能力显著降低（P<0.05）,转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著上调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著上调,EMT相关蛋白E-cad水平显著下调（P<0.05）。结论 TIM-3在EOC组织中高表达,可促进卵巢癌细胞的恶性生物学行为,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

SFRP1/FZD6抑制Wnt/β-catenin信号通路对A549肺癌细胞生物学行为的影响

目的研究分泌型frizzled相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)影响A549肺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对细胞增殖、克隆形成和迁移侵袭能力的影响。方法 q RT-PCR和western blot检测SFRP1在肺腺癌及癌旁组织中的表达。在A549细胞中通过质粒过表达SFRP1和用si RNA敲低FZD6的表达,采用q RT-PCR、western blot检测Wnt信号通路相关基因的表达水平变化。通过CCK-8、平板克隆形成、划痕实验以及transwell实验分别检测SFRP1/FZD6对A549细胞增殖、克隆形成、细胞迁移侵袭能力的影响。结果 SFRP1在肺癌组织中表达水平显著低于癌旁组织(P0.05);过表达SFRP1显著抑制了A549肺癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路,干扰受体FZD6的表达能够显著减弱SFRP1对Wnt/β-catenin信号通路的抑制效应。过表达SFRP1显著抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力等恶性表型,并且能够通过干扰FZD6被逆转。结论 SFRP1通过受体FZD6抑制A549肺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路活化,进而抑制细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力。SFRP1/FZD6可能在肺癌进展中发挥重要作用,靶向SFRP1/FZD6有望成为研发治疗肺癌的重要靶点。     

Sulindac通过抑制Wnt通路诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡

目的初步研究Wnt通路及蛋白激酶B（PKB）在非甾体类抗炎药sulindac诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡过程的作用。方法利用流式细胞仪检测肝癌细胞7721的凋亡,利用Western blot检测caspase-9、PARP（poly ADP-ribose polymerase）等凋亡相关分子的剪切,β连环蛋白（β-catenin）及糖原合酶激酶3β（GSK3β）与蛋白激酶B（PKB）磷酸化水平的变化,利用RT-PCR检测β-catenin及c-myc的mRNA水平。结果sulindac能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,显著降低β-catenin的蛋白水平,抑制GSK3β9位丝氨酸的磷酸化,同时促使caspase-9、PARP等凋亡相关分子发生剪切;β-catenin的mRNA水平未见变化;PKB的磷酸化水平未见降低,反而略有增高。结论sulindac能够通过抑制Wnt通路,促进β-catenin的蛋白降解,降低其蛋白水平,诱导SMMC-7721细胞凋亡,且该作用不依赖PKB活性的抑制。     

华蟾素对Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨华蟾素对肾癌细胞侵袭和迁移的影响,并探讨其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法将肾癌细胞分为对照组（添加PBS）和华蟾素组（添加华蟾素）,CCK-8法检测细胞增殖力,Transwell侵袭和细胞迁移法检测细胞侵袭和迁移力,流式细胞检测细胞凋亡和细胞周期,免疫蛋白印迹法检测Wnt/β-catenin和上皮间质变（epithelial mesenchymal transition,EMT）信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,华蟾素组可抑制肾癌细胞增殖,抑制细胞侵袭和迁移力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期 (P<005);E-cadherin蛋白表达上调(P<005),Wnt/β-catenin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<005)。结论华蟾素可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,逆转EMT,抑制肾癌细胞增殖和侵袭。     

Wnt信号通路异常激活在卵巢上皮性癌中的作用

Wnt信号通路是重要的细胞信号传导通路,参与了从胚胎到成体的一系列调控,在细胞增殖、分化、运动、黏附及机体发育中起重要的调节作用,异常激活会导致相关疾病尤其是肿瘤的发生。人类卵巢上皮性癌的发生发展过程中存在经典Wnt信号通路的异常激活。研究发现,在卵巢上皮性癌细胞中Wnt信号通路相关蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt-1、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达明显增高,其中β-catenin蛋白与癌细胞的异常增殖及转移有密切关系。针对Wnt信号通路变化的研究对卵巢上皮性癌的临床诊断与治疗有重要意义。     

经典Wnt/β-catenin信号通路介导子痫前期滋养细胞氧化应激损伤的机制研究

目的：研究经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路参与人滋养细胞氧化应激损伤的机制,探讨其在子痫前期（preeclampsia,PE）发病中的作用。方法：（1）采用免疫组化SP法和蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测胎盘组织中β-catenin信号分子的表达。（2）将HTR8/SVneo分为正常培养对照组、缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）处理组、氯化锂（LiCl）+H/R处理组、LiCl+正常培养组。利用WB法和间接免疫荧光法检测β-catenin在各组细胞中的表达。（3）利用流式细胞仪检测各组细胞凋亡指数及细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。（4）利用Transwell小室模型和明胶酶谱法分析检测各组HTR8/SVneo的侵袭率及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、9的活性。结果：（1）与正常晚孕比较,子痫前期胎盘组织中β-catenin蛋白表达降低（P<0.05）。（2）与正常培养组相比较,H/R处理组的β-catenin蛋白水平显著下降,经LiCl预处理后H/R细胞中的β-catenin蛋白表达增加（P<0.01）。（3）与正常对照组相比,H/R处理可导致HTR8/SVneo凋亡率及ROS水平增加（P<0.01）;予以LiCl预处理可有效抑制H/R导致的细胞凋亡及ROS聚集（P<0.05,P<0.01）。（4）H/R组细胞的体外侵袭能力及MMP-2、9的活性均低于正常培养组;经LiCl预处理后,H/R组细胞的体外侵袭能力及清液中MMP-2、9的活性显著上升（P<0.01）。结论：LiCl通过特异性激活Wnt/β-catenin信号通路,对滋养细胞氧化应激损伤有保护性作用。     

芒果甙对肝癌大鼠肝组织β-catenin和p120ctn表达的影响

目的　探讨芒果甙抗肿瘤作用及其机理 ,检测肝癌组织中 β -catenin和p12 0ctn的表达以及芒果甙对上述分子表达的影响。方法　采用Walker2 5 6肝癌细胞和Wistar大鼠制作肝癌模型 ,用免疫组化法观察肝组织中 β -catenin和p12 0ctn的表达情况。 结果　A组肝组织中上述分子表现为胞膜表达而胞浆无表达。B组中主要表现为胞膜胞浆均表达或胞膜表达减弱 ,一些细胞胞膜缺乏表达。C组中主要表现为胞膜表达明显 ,少数细胞胞浆也有表达。D组中主要表现为胞膜胞浆均明显表达 ,但以胞膜为主 ,少数细胞缺乏表达。E组中主要表现为胞膜胞浆均出现表达 ,且以胞浆表达为主 ,少数细胞出现胞膜表达减弱且不连续。结论　芒果甙对这些细胞信号转导分子的正常表达有一定的稳定作用。提示芒果甙是一个具有针对介导的细胞粘附和信号转导通路的潜在的抗癌物质。     

干扰CXCR4基因抑制胰腺癌经典Wnt通路活化的体外实验研究

目的观察CXCR4 shRNA转染胰腺癌细胞后经典Wnt通路的活性变化.方法构建CXCR4 shRNA表达载体转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株,通过Realtime-PCR、WesternBlot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率;通过PGL3-OT/OF荧光素酶检测方法观察CXCR4基因沉默后对胰腺癌Wnt/β-catenin经典通路活性的影响,并通过Realtime-PCR、Western Blot实验观察CXCR4 shRNA对Wnt/β-catenin通路下游靶基因的影响.结果特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达,抑制效率达70%以上,同时,特异性CXCR4干扰后能够显著抑制PGL3-OT转染后的荧光素活性（P〈0.05）以及Wnt/β-catenin下游靶基因的mRNA及蛋白的表达.结论CXCR4基因沉默能抑制Wnt/β-catenin经典通路在胰腺癌中的活性,阻遏Wnt/β-catenin通路下游靶基因表达,为CXCR4作为胰腺癌治疗的分子靶点提供依据.     

TRIM21可抑制肝癌细胞的侵袭能力：基于泛素化途径降解β-catenin

目的 探讨TRIM21基因在肝癌侵袭表型中的作用及机制。方法 利用siRNA敲低肝癌细胞MHCC 97H,HCC LM3中的TRIM21、β-catenin基因,将肝癌细胞分为对照组：转染对照siRNA;TRIM21敲低组：转染siTRIM21 RNA;CTNNB1敲低组：转染siCTNNB1 RNA;双敲低组：共转染siTRIM21 RNA及siCTNNB1 RNA。利用Western blotting验证敲除效率及相关通路的激活或抑制情况。通过Transwell侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭性。通过尾静脉注射敲低TRIM21的HCC LM3细胞构建裸鼠肺转移模型以观测其肺转移能力。在HEK 293细胞中过表达TRIM21,将HEK 293细胞分为对照组：加入转染试剂;过表达组：转染flag-TRIM21。并利用Co-IP检测TRIM21蛋白与β-catenin的相互作用及泛素化水平。生信分析TCGA数据库中CTNNB1highTRIM21high和CTNNB1highTRIM21low两种亚型肝癌的预后。结果 敲低TRIM21可以显著增强肝癌细胞MHCC 97H和HCC LM3的侵袭能力（P<0.01,P<0.05）和HCC LM3细胞的肺转移能力（P<0.01）。机制研究发现,TRIM21可通过泛素化蛋白酶体途径降解β-catenin以减少其入核,进而降低肝癌细胞的的侵袭性（P<0.0001,P<0.05）。由于TRIM21表达水平降低使肝癌细胞中Wnt信号通路激活,最终使 CTNNB1highTRIM21high亚型肝癌患者的生存预后明显优于 CTNNB1highTRIM21low亚型肝癌患者（P<0.05）。结论 TRIM21能通过泛素化途径降解β-catenin来抑制肝癌细胞的侵袭性,这可能导致了CTNNB1highTRIM21low肝癌患者预后较差。     

Effect of p120 catenin silencing on biological behaviors of PANC-1 cells

This study examined the possible role of p120ctn in the pathogenesis and development of pan-creatic cancer.PANC-1 cells,a kind of human pancreatic carcinoma cell line,were cultured in this study.p120ctn was immunocytochemically detected in PANC-1 cells.The recombinant lentivirus vector was constructed to knock down the p120ctn expression of PANC-1 cells.Real-time quantitative PCR (RQ-PCR) and Western blotting were used to determine the expression of p120ctn and E-cadherin in PANC-1 cells after p120ctn knockdown.The adhesion,invasion and migration capacity of PANC-1 cells after p120ctn knockdown was detected by cell adhesion,invasion and migration assays.Cell growth was measured by the MTT method.Cell cycle and apoptosis were analyzed by fluorescence-activated cell sorting.The results showed that p120ctn knockdown led to significantly down-regulated E-cadherin and a reduced cell-to-cell adhesion ability in PANC-1 cells.shRNA-mediated knockdown of p120ctn reduced invasion and migration capacity of PANC-1 cells,inhibited cell growth,caused a significant decrease in the percentage of cells in G1,an increase in S,and promoted apoptosis of PANC-1 cells.It was concluded that p120ctn plays a pivotal role in the proliferation and metastasis of pancreatic carcinoma,suggesting that p120ctn is a novel target for pancreatic carcinoma treatment.     

胃癌组织中NLRC5表达的意义及其影响胃癌侵袭转移的可能机制

目的 观察核苷酸结合结构域受体家族含CARD结构域-5(NLRC5)、β-catenin在胃癌组织中的表达情况.分析NLRC5与胃癌临床病理特征及预后的关系.并初步探讨NLRC5与Wnt/β-catenin信号通路间的关系.方法 收集根治性胃癌切除术患者石蜡标本93例,免疫组化检测胃癌组织中NLRC5和β-catenin的表达情况;分析NLRC5的表达与胃癌临床病理特征的关系.采用胃癌细胞株MKN-45和MGC-803分别转染pEGFP-C2-NLRC5重组质粒,qRT-PCR法和Western blot法验证NLRC5转染效率.采用MTT细胞增殖和细胞划痕实验对NLRC5进行功能分析,观察体外实验中NLRC5表达变化对胃癌细胞的生物学行为的影响,采用Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的变化.结果 NLRC5在93例胃癌标本中阳性表达67例(72.04％),阴性表达26例(27.96％).NLCR5的表达情况与胃癌的TNM分期、淋巴结转移和复发情况密切相关.Kaplan-merier生存分析结果显示NLCR5阴性表达的患者预后好于阳性表达患者(P＜0.05).93例胃癌标本中β-catenin阳性表达63例(67.74％),阴性表达30例(32.26％).Cox多因素回归分析显示,NLRC5和β-catenin的阳性表达、低TNM分期、淋巴结转移是影响胃癌患者预后的独立危险因素.胃癌细胞在过表达NLRC5后,MTT细胞增殖和划痕实验结果显示,细胞的增殖和迁移能力显著增强(P ＜0.05,P＜0.01),Western blot实验结果显示,Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-catenin和下游关键靶蛋白C-myc、金属基质蛋白酶-7的表达水平明显提高.结论 NLRC5广泛表达于胃癌组织中,其表达与胃癌的TNM分期和淋巴结转移密切相关.Kaplan-merier生存分析显示:NLRC5高表达是影响胃癌预后的危险因素.Cox多因素回归分析显示:NLRC5高表达是影响胃癌预后的独立危险因素.NLRC5与β-catenin的表达呈正相关性,NLRC5的表达变化影响胃癌细胞的生物学行为和Wnt/β-catenin信号通路的关键蛋白的表达.提示NLRC5可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌的浸润和转移.     

苦参碱通过调控β-catenin信号通路抑制肝癌细胞干性

目的探讨苦参碱对人肝癌HepG2和Huh7细胞增殖活性、细胞干性、β-catenin转录活性以及AKT/GSK3β/β-catenin信号 通路的影响。方法应用MTT法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验检测0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱对 人肝癌HepG2 和Huh7 细胞的克隆形成能力,荧光定量PCR分析0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱对人肝癌 HepG2 和Huh7 细胞干性基因CD90、EpCAM（上皮细胞粘附分子）和CD133 mRNA的表达水平,双荧光素酶报告基因检测 0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱对人肝癌HepG2 和Huh7 细胞内β-catenin 转录活性,Western blotting 检测 0 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱对人肝癌HepG2和Huh7细胞内AKT（蛋白激酶B）、GSK-3β和β-catenin及其相应磷酸化 蛋白的表达水平。结果MTT实验结果显示,苦参碱呈时间-浓度依赖性地抑制肝癌HepG2 和Huh7 细胞的增殖,处理24、 48、72 h 对HepG2 细胞的半数抑制浓度依次为2369、1565、909.1 μg/mL,对Huh7 细胞的半数抑制浓度依次为1355、781.8、 612.8 μg/mL。苦参碱浓度依赖性地抑制肝癌细胞的克隆形成能力,400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制HepG2细胞的 克隆形成能力（P<0.01,P<0.001）,200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制Huh7细胞的克隆形成能力（P<0.05,P<0.01, P<0.001）。苦参碱能够显著肝癌细胞内CD90、EpCAM和CD133 等干细胞标志物mRNA的表达,其中400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱能够显著抑制HepG2细胞中CD90（P<0.01,P<0.001）、EpCAM（P<0.05,P<0.01）和CD133（P<0.01,P<0.01）mRNA的表 达,400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制Huh7细胞中CD90（P<0.01,P<0.01）、EpCAM（P<0.05,P<0.01）和CD133（P<0.01, P<0.01）mRNA的表达。同时400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱显著抑制HepG2细胞（P<0.001,P<0.001）和Huh7细胞（P<0.01,P<0.001） 内β-catenin的转录活性。研究结果显示400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著降低HepG2和Huh7细胞内β-catenin和磷酸化 的AKT和GSK-3β蛋白水平,增加β-catenin的磷酸化水平。结论苦参碱可抑制肝癌HepG2和Huh7细胞的增殖、克隆形成以及 肝癌干性基因CD90、EpCAM和CD133的表达,其机制可能与抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路,从而降低β-catenin的转录 活性有关。     

结肠癌中S100A2的表达及其与Wnt/β-catenin通路的相关性

目的探讨钙结合蛋白S100A2与Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin、pGSK-3β在人结肠癌组织中的表达和意义以及相关性。方法采用免疫组化和Western blot方法检测42例结肠癌及癌旁正常组织中S100A2、β-catenin和pGSK-3β的表达情况,分析它们与结肠癌临床病理参数的关系,进一步采用Pearson等级相关分析其相关性。结果①免疫组化显示S100A2和β-catenin主要定位于癌细胞核和(或)细胞质,而pGSK-3β主要定位于癌细胞质;②Western blot结果显示S100A2、β-catenin和pGSK-3β在结肠癌组织中均高表达,明显高于癌旁正常组织(P<0.01),三者在结肠癌DukesC+D期中的表达明显高于A+B期(P<0.01),在有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01);③S100A2分别与β-catenin、pGSK-3β的表达呈明显正相关(r=0.637,P<0.01;r=0.626,P<0.01)。结论 S100A2可能通过调节Wnt/β-catenin通路关键分子而参与结肠癌的发生、发展。     

Wnt／β-catenin信号途径促进肌源性干细胞向神经细胞分化

目的探讨Wnt／β—catenin信号途径在肌源性干细胞（musclederivedstemcells,MDSCs）分化过程中的调控作用。方法对照组单纯体外培养MDSCs;实验组采用丙戊酸（valproicacid,VA）诱导培养MDSCs分化为类神经细胞;抑制剂组在实验组的基础上采用Dickkopf-l（DKK-1）和sFRP抑制Wnt／β—catenin信号途径。免疫细胞化学检测各组MDSCs的分化情况。RT—PCR检测MDSCs中Wnt3amRNA表达的变化,Westernblot检测MDSCs中GSK-3β、β—catenin蛋白含量的变化。结果实验组和抑制剂组MDSCs经VA诱导后出现神经细胞分化现象,抑制剂组分化水平明显低于实验组,对照组未见分化。与对照组相比,实验组和抑制剂组Wnt3amRNA和β—catenin表达水平增加,实验组明显高于抑制剂组。实验组和抑制剂组GSK-3B表达水平低于对照组。结论MDSCs向类神经细胞分化过程中Wnt／i3-catenin信号通路被激活,Wnt／β-catenin信号通路阻断能够部分抑制MDSCs向类神经细胞分化。