不同牙龈卟啉单胞菌菌株对人牙周膜细胞MMP-3和MMP-9表达的影响

【目的】比较3种牙龈卟啉单胞菌菌株P.gingivalis W83、P.gingivalis ATCC33277、P.gingivalis FDC381刺激人牙周膜细胞表达基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-3、MMP-9水平的差异。【方法】厌氧培养细菌P.gingivalis W83、P.gingivalis ATCC33277和P.gingivalis FDC381,原代培养人牙周膜细胞,3种菌株分别与人牙周膜细胞混合培养5 min、30 min、60 min、120 min、24 h、48 h,采用ELISA法测定上清液中MMP-3和MMP-9的浓度。【结果】在各时间点,受细菌刺激的人牙周膜细胞表达MMP-3和MMP-9的浓度均高于未受细菌刺激组(P<0.01)。P.gingivalis W83刺激人牙周膜细胞表达的MMP-3、MMP-9浓度明显高于P.gingivalis ATCC33277和P.gingivalis FDC381,经方差分析,差异具有显著性(P<0.01)。【结论】高毒力株P.gingivalis W83可以通过细菌-细胞间相互作用导致局部牙周组织中MMP-3、MMP-9高表达,造成牙周组织破坏。     

羧甲基壳聚糖银对牙龈卟啉单胞菌的抑菌作用

目的：研究羧甲基壳聚糖银 (CMCT-Ag⁺) 对牙龈卟啉单胞菌 (Pg) 的抑制作用,为研制高效无毒的抗牙周病药物提供实验依据。方法：将壳聚糖经碱化、氯乙酸修饰和离子交换制成 CMCT-Ag⁺。采用琼脂扩散和固体平板二倍稀释法观察抑菌环直径和菌 斑数,测定 CMCT-Ag⁺ 对 Pg的抑制作用。结果：获得了粉红色的 CMCT-Ag⁺ 粉末,收率为 89.4%,取代度为 0.98,银离子含量为10.21%。在抑菌环实验中,当CMCT-Ag⁺的浓度大于 0.3125 g•L^-1 时,其抑菌环直径随浓度的增加而增大,其中 40 g•L^-1CMCT-Ag⁺ 抑菌环直径可达 9.5 mm,与 0.005 g•L^-1 替硝唑相当;当 CMCT-Ag⁺ 浓度大于 40 g•L-1 时,抑菌环直径明显下降,表明 CMCT-Ag⁺ 的抑菌范围为大于 0.3125 g•L^-1。在菌斑实验中,当 CMCT-Ag⁺ 浓度大于 0.3125 g•L^-1 时,培养基表面 Pg 的生长明显受到抑制;而当浓度大于 1.25 g•L^-1 时,培养基表面无 Pg 生长,表明 CMCT-Ag⁺ 最低抑菌浓度为1.25 g•L^-1。结论：CMCT-Ag⁺ 对 Pg 的生长有明显抑制作用,可用于进一步研制治疗牙周炎药物。     

牙龈卟啉单胞菌牙龈素在牙周炎发病信号通路的研究进展

牙周炎是口腔临床实践中最为常见的疾病之一。革兰阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌与牙周炎密切相关,牙龈卟啉单胞菌表面的牙龈素（gingipains）和脂多糖被认为是其最重要的毒力因子,是近年来牙周炎机制研究热点,引起研究者的广泛关注。本文结合近年来的研究进展,就牙龈卟啉单胞菌牙龈素引起牙周炎症的机制和所涉及的信号通路作一综述。     

丝线结扎及局部涂抹牙龈卟啉单胞菌对小鼠牙槽骨骨吸收的影响

目的： 比较丝线结扎和涂抹牙龈卟啉单胞菌诱导小鼠牙周炎模型的牙槽骨骨吸收程度、激活破骨细胞及去除诱因后成骨的过程。方法： 48只C57BL6小鼠随机分配,采用分口设计,根据涂抹2%（质量分数）羧甲基纤维素（carboxymethylcellulose, CMC）或109个菌落形成单位（colony-forming units, CFU）的牙龈卟啉单胞菌以及是否丝线结扎分为4组（n= 24）,分别为对照组（右上第二磨牙单纯涂抹CMC）、丝线结扎组（围绕左上第二磨牙结扎9-0丝线）、涂菌组（右上第二磨牙单纯涂抹牙龈卟啉单胞菌）和丝线结扎+涂菌组（结扎左上第二磨牙并涂抹牙龈卟啉单胞菌）,测量釉牙骨质界至牙槽骨嵴顶（cementoenamel junction to the alveolar bone crest,CEJ-ABC）的距离,监测牙槽骨的吸收。48只C57BL6小鼠设计和分组同上,牙槽骨骨面的破骨细胞采用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）染色并计数。36只C57BL6小鼠随机分配,其中30只小鼠在左侧上颌第二磨牙结扎9-0丝线,观察3周,有12只小鼠在丝线结扎1周后拆除丝线,继续观察2周,分别在丝线结扎1、2、3周以及丝线拆除1周和2周共5个时间点（n=6）各处死6只小鼠,检测CEJ-ABC距离;未行丝线结扎的小鼠CEJ-ABC距离（n=6）为基线水平。采用单因素方差分析（ANOVA）法对所有数据进行统计学分析。结果： 丝线结扎组的小鼠牙周炎,在3、6、9和12周后的CEJ-ABC距离分别为（0.16±0.04） mm、（0.16±0.02） mm、（0.18±0.03） mm、（0.17±0.02） mm,与对照组［（0.09±0.03） mm、（0.10±0.01） mm、（0.12±0.04） mm、（0.12±0.01） mm］和涂菌组［（0.09±0.03） mm、（0.12±0.01） mm、（0.12±0.02） mm、（0.10±0.01） mm］相比差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组［（0.09±0.03） mm］相比,丝线结扎组第3周的CEJ ABC距离为（0.16±0.04） mm,比涂菌组［（0.09±0.03） mm］诱导的牙槽骨骨吸收更迅速,丝线结扎和涂抹牙龈卟啉单胞菌结合并未进一步增加牙槽骨的吸收破坏。在丝线结扎1 d后,牙槽骨表面的破骨细胞即被激活,与对照组［（2±2）个］相比在第3天达到高峰［（12±4）个,P<0.01］。丝线结扎诱导的小鼠牙周炎,在丝线去除2周后CEJ-ABC距离为（0.07±0.02） mm,与去除丝线前［（0.13±0.01） mm］相比显著降低,提示有显著的牙槽骨再生（P<0.01）。结论： 丝线结扎术是一种迅速且有效的诱导小鼠牙周炎牙槽骨骨吸收的方式,其诱导的破骨细胞活化在丝线结扎后24 h内发生,3 d达到高峰,去除实验性牙周炎的诱导因素即去除结扎的丝线有助于牙槽骨骨再生。     

唾液牙龈卟啉单胞菌、MMP-8及TIMP-1水平与牙周炎的相关性分析

目的 探讨唾液生物标志物牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）、基质金属蛋白酶-8（MMP-8）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）水平与牙周炎的相关性。方法 选取2020 年10 月至2021 年1 月首都医科大学附属北京口腔医院牙周科收治的牙周炎患者25 例作为牙周炎组,另外同期该院牙周健康者22 名作为牙周健康组。记录所有研究对象牙周临床参数,收集非刺激性唾液,实时定量PCR 测定P.gingivalis 水平,ELISA 测定MMP-8 及TIMP-1 水平。比较牙周炎组和牙周健康组唾液P.gingivalis、MMP-8、TIMP-1 水平及MMP-8/TIMP-1 比值,分析生物标志物单独或联合应用对牙周炎的诊断效能。结果 牙周炎组唾液P.gingivalis、MMP-8 水平及MMP-8/TIMP-1 比值高于牙周健康组,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组TIMP-1 水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。唾液P.gingivalis、MMP-8 水平及MMP-8/ TIMP-1 比值与牙周临床参数均呈正相关。P.gingivalis 和MMP-8 单独对Ⅱ期及以上牙周炎的预测价值中等,MMP-8/TIMP-1 比值单独、P.gingivalis 联合MMP-8 和P.gingivalis联合MMP-8/TIMP-1 比值对Ⅱ期及以上牙周炎的预测价值均较高。结论 唾液P.gingivalis,MMP-8,尤其是MMP-8/TIMP-1 比值及其联合是检测Ⅱ期及以上牙周炎的潜在候选,唾液生物标志物的联合应用进一步提高了牙周诊断的准确性。     

不同牙周状态下牙龈卟啉单胞菌唾液酸酶基因的表达

目的 检测不同牙周状态下牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)唾液酸酶基因表达的差异,探讨唾液酸酶在慢性牙周炎发生发展中的作用.方法 通过Clustal W将PG0352编码的氨基酸与已知功能的氨基酸做同源比对,明确编码唾液酸酶的基因,选择不同牙周状态下的龈下菌斑样本104例,PCR检测唾液酸酶基因,RT-PCR法比较不同条件下唾液酸酶基因表达的差异.结果 同源比对结果显示PG0352含有3个唾液酸酶基因特有的功能基序.病变重部位、病变轻部位及健康部位P.gingivalis的检出率分别为85.70％、76.19％和40.00％,唾液酸酶基因的检出率分别为91.67％、87.5％和87.5％.慢性牙周炎患者病变重部位唾液酸酶表达水平高于病变轻部位和健康部位(P＜0.05).结论 PG0352编码唾液酸酶,P.gingivalis唾液酸酶的表达水平与牙周状态有关,推测P.gingiwlis唾液酸酶可能与慢性牙周炎的发生发展关系密切.     

野菊花提取物对牙龈卟啉单胞菌胰酶样蛋白酶活性的抑制作用

目的:探讨野菊花提取物对牙龈卟啉单胞菌(P.g)胰酶样蛋白酶(TLP)活性的影响,为野菊花治疗牙周炎提供理论依据。方法:配制牛心脑浸液培养基(BHI),低、中、高浓度对倍稀释的野菊花提取物(0.1563、0.3125和0.6250 g·L^-1)和一定浊度的P.g菌悬液,实验分为低、中、高浓度野菊花提取物组、阳性对照组(不加野菊花提取物)和阴性对照组(加入低浓度野菊花提取物,不加P.g)。各组含溶液的EP管在37℃恒温条件下厌氧培养48 h,测定培养物上清液和菌细胞破碎后上清液中TLP活性和蛋白水平,计算TLP比活。结果:与阳性对照组比较,中、高浓度野菊花提取物组上清液中TLP活性(游离态和结合态)均降低(P<0.05);与低浓度野菊花提取物组比较,中、高浓度野菊花提取物组上清液中TLP活性(游离态和结合态)均降低(P<0.05);与中浓度野菊花提取物组比较,高浓度野菊花提取物组上清液中TLP活性(游离态和结合态)降低(P<0.05),各组上清液中蛋白水平和TLP比活无明显变化(P<0.05)。结论:野菊花提取物对TLP活性有抑制作用。     

牙龈卟啉单胞菌感染致患者慢性牙周炎发病的可能机制研究

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌感染致患者慢性牙周炎发病的可能机制。方法:选取行慢性牙周炎拔牙治疗的患者128例作为观察组,以同期进行健康体检的牙周健康的128例健康人员作为对照组。采用实时荧光PCR对两组牙龈卟啉单胞菌进行检测,于无菌条件下刮取超过1/3的牙周膜组织,部分细胞采用牙龈卟啉单胞菌ACTT33277进行感染,部分不进行感染处理。采用Western Blot对NLRP3蛋白进行检测,采用酶联免疫吸附法对白细胞介素-1β(IL-1β)与IL-18的表达情况进行检测。结果:观察组牙龈卟啉单胞菌阳性率为82.0%,显著高于对照组牙龈卟啉单胞菌阳性率(18.0%),差异有统计学意义(P<0.01);在5 mm、6 mm、7 mm的探诊深度时,观察组牙龈卟啉单胞菌浓度均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组进行人工牙龈卟啉单胞菌感染的牙周膜细胞的NLRP3、IL-1β与IL-18表达水平显著高于未进行人工牙龈卟啉单胞菌感染的牙周膜细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:牙龈卟啉单胞菌感染可能导致慢性牙周炎,NLRP3、IL-1β与IL-18的高表达可能参与其发病机制。     

蜂胶对牙龈卟啉单胞菌及牙龈成纤维细胞的影响

目的了解蜂胶对牙龈卟啉单胞菌（porphyromonas gingival，Pg）生长的抑制作用及对人牙龈成纤维细胞的毒性作用。方法采用液体稀释法测定蜂胶对Pg的最小杀菌浓度（MBC），用MTT法测定不同浓度蜂胶作用24h后牙龈成纤维细胞的细胞相对增殖率（RGR），了解蜂胶作用24h后细胞连续7d的增殖回复情况。结果蜂胶对取的MBC为1．56g／L，相当于0．125～0．25mg／L的奥硝唑。蜂胶浓度为MBC时RGR达到70％以上；4g／L蜂胶组的RGR为52．1％，作用细胞24h后，连续7d细胞数持续增加，吸光度逐渐接近阴性对照组。结论蜂胶对Pg的生长有显著抑制作用，且细胞毒性较小，毒性作用可逆。     

牙龈卟啉单胞菌感染血管内皮细胞对NF-κB和p38MAPK信号通路的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞茵(P.gingivalis)ATCC 33277和W83感染血管内皮细胞对NF-κB和p38 MAPK信号通路的影响.方法 建立体外P.gingivalis感染血管内皮细胞模型,蛋白质印迹技术和免疫荧光法检测NF-κB和p38 MAPK信号通路表达的变化;多组均数之间的比较采用重复测量资料的方差分析.结果 P.gingivalis ATCC 33277和W83感染血管内皮细胞后迅速导致p38 MAPK磷酸化、IκB-α降解及NF-κB p65核移位.结论 P.gingivalis感染血管内皮细胞导致NF-KB和p38MAPK信号通路的激活,在慢性牙周炎致病机制的研究中具有一定的提示意义.     

氦氖激光对牙龈卟啉菌杀菌作用及形态影响的实验研究

目的：研究氦氖激光照射对牙龈卟啉菌杀菌及形态的影响，以期寻求治疗牙周炎的新手段。方法：用功率为6．3mW的氦氖激光照射牙龈卟啉菌，将细菌分为1个空白对照组和5个实验组。分别用不同照射时间（16、32、48、64、80min）的氦氖激光（波长632．8nm，功率6．3mW）进行照射，数活菌数和透射电镜下观察其形态学改变。结果：氦氖激光照射前后活细菌数无显著变化，但菌体的形态产生明显固缩。结论：单纯氦氖激光照射Pg，无明显的杀菌作用，但能使菌体形态发生变化。     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Pg)对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响，探讨Pg对牙龈血管内皮细胞的毒性作用。方法：以厌氧袋法培养Pg，原代培养HUVEC，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）观察HUVEC的增殖状态。结果：活的和灭活的Pg都剂量依赖性地抑制HUVEC的增殖，活的Pg作用比灭活的Pg更为强烈，而Pg毒力株W83和非毒力株ATCC33277对HUVEC增殖的影响无显著差异。结论：Pg可能通过损伤牙龈组织的血管内皮细胞加重局部的炎性反应，可能是Pg诱导牙周组织破坏的病理机制之一。     

牙龈卟啉单胞菌fimA基因型在高原和平原地区慢性牙周炎患者中分布差异的研究

目的 分析高原地区和平原地区慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)Fimbrilline(fimA)基因分型的差异.方法 采用分层抽样方法选取高原人群(海拔3700m,高原组)和平原人群(海拔400 m,平原组)各80例慢性牙周炎患者.采用16S rRNA PCR法分别检测高原和平原组慢性牙周炎患者龈下菌斑中的P.gingivalis,应用fimA基因引物特异性的PCR方法对P.gingivalis阳性样本进行基因分型检测.结果 高原组检测出P.gingivalis 77例,平原组检测出70例,高原组检出率高于平原组,差异有统计学意义(P＜0.05).高原组牙周炎P.gingivalis各fimA基因型总检出率:Ⅰ型27例(35.1％),Ⅰb型24例(31.2％),Ⅱ型66例(85.7％),Ⅲ型10例(13.0％),Ⅳ型16例(20.8％),V型未检出,其中,ⅡfimA型的检出率最高,与其他各型比较,差异有统计学意义(P＜0.05);平原组样本中,Ⅰ型13例(18.6％),Ⅰb型21例(30.0％),Ⅱ型39例(55.7％),Ⅲ型8例(11.4％),Ⅳ型19例(27.1％),V型未检出,其中,ⅡfimA型的检出率最高,与其他各型比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与平原组ⅡfimA型基因的检出率比较,高原组的检出率更高(P＜0.05).结论 高原组龈下菌斑中P.gingivalis的fimA基因型以Ⅱ型为主,且检出率高于平原组,但同时存在多态性,可能与高原地区慢性牙周炎的发生、发展关系密切.     

聚肌苷酸-聚胞苷酸对人髓核细胞基质金属蛋白酶-1、13表达的影响

目的 探究聚肌苷酸-聚胞苷酸[polyinosinic-polycytidylic acid,Poly(I:C)]对人髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPC)基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)-1、13表达的影响.方法 取人椎间盘组织,采用酶消化法分离并体外培养NPC.不同时间不同剂量的Poly(I:C)刺激NPC,利用qPCR和Western blot方法检测MMP-1、13的mRNA和蛋白质表达情况;siRNA分别沉默TLR-3、RIG-1和MDA-5后,Poly(I:C)刺激NPC,qPCR检测MMP-1、13的mRNA表达情况.结果 分离培养的NPC 5~6 d后,贴壁生长;Poly(I:C)刺激NPC后,MMP-1、13的mRNA和蛋白质表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);siRNA沉默TLR-3后,MMP-1、13的mRNA 表达水平受到明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05);siRNA沉默RIG-1和MDA-5后,MMP-1、13的mRNA 表达水平不受影响(P>0.05).结论 Poly(I:C)通过TLR-3受体途径促进NPC表达MMP-1、13.     

环孢素A对肾小管上皮细胞MMP-2和 MMP-9表达和活性的影响

 【目的】 观察环孢素A(CSA)对近端肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2 和 MMP-9)表达和活性的影响&;#65377;【方法】 体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E细胞至完全融合时,分别给予不同浓度的CSA 0,0.42,0.84,4.2,8.4 μmoL/L,实验观察48 h和72 h&;#65377;收集培养液,用明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性&;#65377;提取总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MMP-2和MMP-9的mRNA水平&;#65377; 【结果】 CSA刺激NRK52E细胞呈剂量依赖性抑制MMP-2活性和mRNA表达&;#65377;与对照组(CSA 0 μmoL/L)比较,CSA0.42,0.84,4.2,8.4 μmoL/L的MMP-2活性分别下降为27%,24%,11%,9%;差异均有统计学意义,P < 0.05&;#65377;CSA刺激NRK52E细胞增加MMP-9活性和mRNA表达&;#65377;与对照组比较,CSA 4.2 μmoL/L 刺激48 h MMP-9活性上调为438%,72 h上调为237%,差异均有统计学意义,P < 0.05&;#65377; 【结论】 CSA对肾小管上皮细胞MMP-2表达和活性呈剂量依赖性抑制,以及对MMP-9表达和活性的诱导作用可能与CSA所致肾小管间质损害相关&;#65377;     

锌对SD大鼠膝骨关节炎早中期关节软骨的作用及对MMP-13表达的影响

目的探讨不同剂量的锌对SD大鼠膝骨关节炎早中期软骨的作用及对MMP-13表达的影响。方法 64只SD大鼠均行改良Hult法复制骨关节炎（OA）模型,随机分为对照组、低锌组、中锌组和高锌组,于术后第2天开始每天分别灌胃给予生理盐水、锌5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg,用药干预直到实验处死。分别于术后4周、8周光镜下对HE染色软骨组织标本行组织形态学观察及行Mankin评分比较,术后8周对软骨组织MMP-13免疫组化染色切片的灰度值行半定量分析。结果术后4周与8周,对照组术侧的软骨损伤明显比对照组健侧严重,Mankin评分比较差异有显著性（P〈0.05）;术后4周,低锌组术侧、中锌组术侧和高锌组术侧软骨损伤与对照组术侧比较无明显差异,均为轻度软骨损伤,Mankin评分比较无统计学意义;术后8周,高锌组术侧的软骨损伤轻于对照组术侧,Mankin评分比较差异有显著性（P〈0.05）,MMP-13免疫组化染色切片的灰度值比较差异有显著性（P〈0.05）,其它各组在软骨损伤及MMP-13灰度值比较均无统计学意义。结论 SD大鼠膝骨关节炎造模成功;高剂量锌（每天20 mg/kg）给予8周对SD大鼠OA软骨具有保护作用,且能减少软骨组织MMP-13的表达。     

MMP13在骨性关节炎患者滑膜细胞中的表达

目的 观察在膝关节骨性关节炎（osteoarthritis，OA）患者的滑膜细胞中是否有基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinases-13，MMPl3）的mRNA表达。方法 分别取临床上5例确诊为膝关节骨性关节炎患者的滑液培养滑膜细胞，经形态学和免疫组化法鉴定其为成纤维细胞后，用RT-PCR检测其中MMPl3的mRNA表达。结果 所培养的细胞呈成纤维细胞样，Vimentin蛋白表达阳性，RT-PCR可检测到MMP13的mRNA表达，片断大小和文献报道的相一致。结论 骨性关节炎患者滑膜细胞中有MMP13的mRNA表达。     

重组人白细胞介素-13对巨核细胞系-Dami细胞原癌基因c-mpl表达的影响

目的:研究重组人白细胞介素-13(rhIL-13)对巨核细胞系-Dami细胞原癌基因c-mpl表达的影响.方法:实验组细胞培养系统中分别加入25 ng/ml,50 ng/ml,100ng/ml rhIL-13,对照组不加任何细胞因子.用RT-PCR法检测c-mpl mRNA的表达.结果:经25 ng/ml、50 ng/ml、100ng/ml rhIL-13处理过的实验组Dami细胞较之对照组其c-mpl mRNA的表达分别提高24.8%、27.9%和31.5%.结论:rhIL-13增强了Dami细胞原癌基因c-mpl表达;rhIL-13促进Dami细胞增殖的部分机制可能是通过上调c-mpl的表达来实现的.