蛋白激酶C抑制剂对脑缺血大鼠突触体游离钙的影响

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ,ＰＫＣ）参与神经损伤机制。方法：采用大鼠全脑缺血模型,观察脑缺血／再灌流后突触体游离钙的变化及ＰＫＣ的抑制剂灯盏花对突触体游离钙的影响。结果：脑缺血／再灌流可以导致突触体游钙增加的抑制剂灯盏花可以阻止脑缺血／再灌流导致突触体游离钙增加。结论：ＰＫＣ参与神经元缺血性损伤可能与其促进钙内流有关。     

蛋白激酶C在缺血预处理大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的表达

目的 探讨蛋白激酶Ｃ在缺血预处理大鼠肾脏因再灌注损伤中的作用。方法 将大鼠随要分组,观察大鼠肾脏病理组织学变化,用免疫组织化学方法检测不没灌注时间蛋白激酶Ｃ水平。结果 预处理后缺血再灌注组病理组织学肾小管评分均低于缺血再灌注,而预处理后缺血再灌注组和对照组之间无显性差异;预处理后缺血再灌注组蛋白激酶Ｃ的表达高于缺血再灌注组,并且在再灌注２小时和６小时时,预处理后缺血再灌注组中的表达高于对照组。结     

新生儿缺氧缺血性脑病血清心肌肌钙蛋白Ⅰ检测的诊断价值

目的:探讨血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)时对心肌损伤的诊断价值.方法:测定19例HIE患儿的血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和cTnI水平.结果:在HIE时血清cTnI水平高于正常,且轻度、中度与重度HIE间的血清cTnI水平差异均有显著性(P＜0.01),但轻度与中度、轻度与重度、中度与重度HIE间的CK-MB水平差异均无显著性(P＞0.05).结论:HIE患儿病情愈重,其心肌损伤程度愈重,血清cTnI水平愈高.     

MK801对缺氧缺血性脑损伤的保护作用

[目的 ]探讨MK 80 1对缺氧缺血性脑损伤的防治作用 .[方法 ]用生后 7d的Wistar大鼠制作缺氧缺血性脑病模型 ,并分为缺氧缺血性脑损伤组、MK 80 1治疗组和正常对照组 .缺氧缺血性脑损伤后2 4h ,经苏木精和伊红染色 ,在光学显微镜下观察海马CA 1,CA 3区内的坏死细胞 .[结果 ]MK 80 1治疗组海马CA 1,CA 3区坏死细胞数百分率明显低于缺氧缺血性脑损伤组 .[结论 ]MK 80 1保护神经细胞 ,使其免受缺氧缺血性损伤 .     

Roles of Protein Kinase C and Fructose in Hepatic Injury Caused by Obstructive Jaundice

Summary： The regulating mechanism in hepatic injury caused by obstructive jaundice （OJ） was examined in this study. Rat hepatocytes were harvested by in situ collagenase perfusion and subjected to primary culture. The heptocytes were pre-treated with various concentrations of protein kinase C （PKC） agonist PMA and its inhibitor chelerythrine and cultured for 20 min. After the treatment, 50μmol/L glycochenodeoxycholate （GCDC） was added and the cells were cultured for an additional 24 h. Cells were then detected by flow cytometry （FCM） and TUNEL. After hepatocytes were treated with different concentrations of fructose and 100μM GCDC, the cells were examined by FCM and TUNEL. Experimental obstructive jaundice （BDL） was induced by double ligation of the bile duct. After BDL, the rats were fed with or without fructos and sacrificed 3, 7, 14 and 21 days after the ligation. The apoptotic status was observed in liver of all rats with TUNEL and PKC protein in liver of OJ was studied by immunohistochemical method. Our results showed that PMA increased GCDC-induced apoptosis and chelerythrine decreased GCSX-induced apoptosis in a concentration-dependent manner. After the treatment with fructose of different concentrations, 100μM GCDC decreased the apoptotic rate and the apoptotic rate decreased with the increase of fructose concentration. The apoptotic rate of liver was related to the time of OJ. Without the treatment of fructose, PKC and apoptosis index （AI） were highest 14 days after the bile duct ligation. With the treatment of fructose, apoptosis index （AI） and PKC were decreased from the 14th day after the bile duct ligation. It is concluded that PKC is involved in the regulation of apoptosis in the liver cells with OJ and plays important roles in the development and progression of liver injury caused by OJ. Fructose can protect hepatocytes in the bile salt-induced apoptosis by regulating PKC.     

新生鼠缺氧缺血再灌注后海马p-CREB的表达

目的 :探讨新生鼠缺氧缺血再灌注后 ,c AMP反应元件结合蛋白 (CREB)磷酸化在海马的表达变化及其与海马神经元损伤后修复、存活的关系 .方法 :选用 7d龄SD鼠 16只 (不同窝 ) ,随机分入假术对照组、缺氧缺血脑损伤组 .经弹性管穿线法阻断右颈总动脉 3h ,予低氧 1h ;制备缺氧缺血脑损伤 (HIBD)模型 .3h后剪开扎线予再灌注 2 4h ,彩色多普勒监测血流 .应用免疫组织化学检测磷酸化的CREB (p CREB)在新生仔鼠HIBD再灌注 2 4h后海马区的表达 .结果 :HIBD组再灌注 2 4h仔鼠右侧海马CA1,CA3,DG区p CREB的表达明显增加 ,左侧相应区的增加低于右侧 ,但明显高于假术对照(P <0 .0 1) .缺血敏感区CA1低于耐受区CA3,DG(P <0 .0 1) .对照组p CREB两侧有基础表达 ,但无差别 .结论 :磷酸化CREB在HIBD再灌注 2 4h后海马区高表达 ,可能对保护CA1,CA3,DG区锥体神经元有重要作用     

镁对缺氧缺血新生鼠脑保护作用的研究

目的 探讨镁离子对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的保护作用。方法 7日龄Wistar大鼠36史,随机分成3组,（1）假手术组,仅作颈正中切口,不作颈总动脉结扎;（2）对照组（生理盐水组）HIBD后即刻腹腔注射生理盐水0.5ml/只,每6小时1次,共6次;（3）观察组（硫酸镁组）HIBD后即刻腹腔注射硫酸镁450mg/kg,每6小时1次,共6次。（1）于手术后,（2）、（3）于最后1次用药后48小时断头取脑,分别测定脑组织中NO和MDA的水平,并作HE和Tunel染色,光镜下检测脑细胞凋亡数。结果 对照组大鼠脑组织中NO和MDA水平明显高于观察组,脑细胞凋亡数目两组比较差异有显著性意义。结论 镁离子对HIBD确有一定的保护作用,其可能的机理是拮抗兴奋性氨基酸NMDA受体,减少NO的合成,抑制自由基的活性,阻止脑细胞凋亡。     

缺血后适应对大鼠大脑缺血再灌注脑损伤的S-100B蛋白、超敏感性C反应蛋白表达的影响

目的 探讨缺血后适应对脑缺血大鼠再灌注损伤(IRI)的S-100B蛋白、超敏感性C反应蛋白含量表达的影响,比较在不同时间位点的作用特点.方法 采用线栓法制作大鼠动脉缺血再灌注动物模型.Wistar大鼠随机分为6组:假手术组(Sham组),IRI组,缺血后适应(IP)Ⅰ~Ⅳ组.检测脑损伤标志物S-100B蛋白、超敏感性C反应蛋白(h-CRP)含量变化.结果 与IRI组比较,IPⅠ~Ⅳ各组大鼠神经功能缺损评分、S-100B及C反应蛋白(h-CRP)显著降低,且IPⅠ~Ⅳ各组依次递增,数据均有统计学意义.结论 缺血后适应可改善大鼠术后神经功能缺损评分,下调S-100B蛋白、超敏感性C反应蛋白含量表达,对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用.     

逼尿肌不稳定大鼠蛋白激酶C蛋白的表达

目的探讨逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌细胞蛋白激酶C(PKC)蛋白的表达及与DI的关系.方法建立DI大鼠模型,原代培养DI与逼尿肌稳定(DS)大鼠膀胱逼尿肌细胞,应用Western-blotting方法检测培养细胞PKC蛋白的表达.结果DI大鼠逼尿肌培养细胞PKC蛋白表达明显高于DS大鼠(P＜0.01).结论DI大鼠逼尿肌细胞PKC蛋白表达明显升高,逼尿肌细胞PKC信号通路的改变与DI逼尿肌自发兴奋性升高可能有着密切联系.     

生长相关蛋白在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马中的表达变化

目的 研究7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后海马神经组织生长相关蛋白(growth-associated protein,GAP-43)及其mRNA的表达变化.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBD模型,并以正常新生大鼠为对照.以免疫组织化学和RT-PCR法检测不同时相点海马组织GAP-43及其mRNA的表达.结果 新生大鼠HIBD后海马GAP-43及其mRNA表达较同日龄正常大鼠明显增高,表达高峰分别在损伤后第2周和第3周.结论 新生大鼠HIBD后海马GAP-43及其mRNA表达增高,可能与海马损伤后修复有关.     

缺血后处理对肝缺血再灌注损伤后磷脂酰肌醇-3激酶和细胞外信号调节激酶的影响和意义

目的观察缺血后处理对肝缺血再灌注后磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的影响,探讨肝缺血后处理的作用机制。方法采用大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型,进行3次循环的再灌注1 min-阻断1 min的缺血后处理,观察假手术(S)组、LY294002+假手术(LY+S)组、PD98059+假手术(PD+S)组、缺血再灌注(IR)组、缺血后处理(IPO)组、LY294002+缺血后处理(LY+IPO)组和PD98059+IPO(PD+IPO)组的肝功能、细胞凋亡、Akt和ERK1/2磷酸化程度的变化。结果缺血后处理能明显减轻缺血再灌注造成的肝功能损害,增加Akt和ERK1/2的磷酸化程度,应用LY294002或PD98059后都可以取消IPO的作用。结论缺血后处理可能通过激活PI3K和ERK1/2减轻肝缺血再灌注损伤。     

脑细胞生长肽对缺氧缺血新生鼠脑保护作用的实验研究

目的 探讨脑细胞生长肽对缺氧缺血新生鼠（HIBD）脑的保护作用。方法 7日龄Wistar大鼠，72只，随机分成3组，（1）假手术组（n=12）；（2）观察组（n=30）：HIBD模型后即刻给脑细胞生长肽10mg腹腔注射；（3）对照组（n=30）HIBD模型后即刻腹腔注射等体积的生理盐水。于处置后0、24、48、72h检测脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）水平；并于处置后24h作HE和Tunel染色光镜下检测脑细胞凋亡数。结果 观察组脑组织SOD、MDA、NO水平及脑细胞凋亡数与对照组比较均有显著性差异。结论 脑细胞生长肽可通过拮抗氧自由基、抑制NO合成和阻止神经细胞凋亡，发挥对HIBD时脑的保护作用。     

蛋白激酶C在兔肺缺血预处理保护中的作用

目的 :探讨蛋白激酶C(PKC)在兔肺缺血预处理保护中的作用。方法 :采用在体兔单肺原位缺血再灌注模型。 5 0只日本大耳兔随机均分为 5组。假手术组 (S)、缺血 /再灌注组 (I/R)、缺血预处理组 (IPC)、多粘菌素B组 (PMB)和缺血预处理加多粘菌素B组 (IPC +PMB)。实验末测血浆SOD活力和MDA含量 ,肺湿干重比和肺泡损伤数比值 ,观察肺超微结构变化。结果 :①I/R组与假手术组相比 ,SOD活力下降 ,MDA含量、湿干重比及肺泡损伤数比值增加 (P均 <0 .0 1)。IPC组与I/R组相比 ,SOD活力增加 ,MDA含量、湿干重比及肺泡损伤数比值下降 (P均 <0 .0 1)。I/R组、PMB组及IPC +PMB组之间的检测指标对比无明显变化 (P均 >0 .0 5 )。②电镜显示I/R组、PMB组及IPC +PMB组均有明显的肺超微结构损伤 ,而IPC组损伤不明显。结论 :缺血预处理对肺缺血再灌注损伤有明显的保护作用 ,且可被PKC抑制剂多粘菌素B取消 ,提示PKC参与肺缺血预处理的保护作用     

蛋白激酶C和丝裂原活化的蛋白酶家族对缺血预处理肝脏的保护作用及其机制

目的 研究在肝脏缺血预处理保护效应中蛋白激酶C（PKC）活性改变及细胞内信号转导机制。方法 建立大鼠肝脏缺血预处理模型,应用PKC抑制剂、激动剂和丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）抑制剂,通过检测PKC和P44／42MAPKs磷酸化水平、HSP70表达量等的变化,同时观察光镜下细胞形态学损害。对相关数据进行统计学处理。结果 与缺血再灌注组比较．预处理组和PKC激动剂组的PKC磷酸化水平显著增高（P〈0.01）,P44／42MAPKs磷酸化水平、HSP70表达量明显增加．肝细胞结构改变较小。与缺血预处理组相比,PKC抑制剂组相应的观察指标呈相反变化,PKC磷酸化水平显著降低（P〈0.01）;MEK抑制剂组的P44／42MAPKs磷酸化激活显著减少,HSP70表达量降低,肝组织细胞结构出现较明显的改变。结论 体内缺血预处理保护作用中,PKC激活对P44／42MAPKs通路激活起到至关重要的作用,PKC对P44／42MAPKs起正性调控作用．HSP70表达受P44／42MAPKs调控。     

蛋白激酶C在瑞芬太尼预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用中的角色

目的采用大鼠离体心脏模型观察蛋白激酶C(PKC)激活在瑞芬太尼预处理(RPC)的心脏保护机制中的作用。方法建立Langendorff离体心脏模型,2种PKC阻断剂Chelerythrine(CHE,浓度5×10-4mol/L)和GF109203X(GF,浓度1×10-5mol/L),分别从RPC前10min到缺血后5min给予(CHE+RPC和GF+RPC组)。观察心肌缺血梗死区(IS/AAR)、冠脉流量(CF)及乳酸脱氢酶(LDH)。结果IS/AAR在RPC组减小,RPC这种作用被CHE和GF所消除:IS/AAR在GF+RPC组和GF+RPC组分别为50·4%±5·4%和53·1%±2·1%。相似的情况表现在LDH。结论PKC的激活介导了RPC对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性作用的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)活性的影响,来探讨氯沙坦(Losartan)对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制.方法大鼠随机分为正常对照组(C组)、糖尿病对照组(D组)和糖尿病氯沙坦治疗组(DL组).于24周后,筛洗肾小球,提取肾小球胞浆和胞膜蛋白,利用[γ-32P]ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性;同时测量血、尿肌酐和计算内生肌酐清除率(Ccr).结果D组胞膜PKC的活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、Ccr、24h尿蛋白定量分别与C组相比明显升高,氯沙坦治疗后,DL组胞膜PKC的活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、Ccr、24h尿蛋白定量均明显低于D组(P＜0.05).结论AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏病变有部分保护作用,其机制可能是部分通过下调肾脏PKC活性.     

蛋白激酶C在肺缺血预处理保护中的作用

目的:建立大鼠肺缺血/再灌注(I/R)损伤模型,探讨蛋白激酶C(PKC)在肺缺血预处理(IPC)保护中的作用。方法:建立在体单侧肺原位I/R模型。50只SD大鼠随机均分为假手术(S)组、I/R组、IPC组、多黏菌素B(PMB)组和缺血预处理加多粘菌素B(IPC+PMB)组5组。实验结束时测定各组肺组织SOD活力、MDA含量、肺湿干重比和肺泡损伤数比值,观察肺超微结构变化。结果:(1)与S组相比,I/R组SOD活力下降,MDA含量升高,肺湿干重比升高,肺泡损伤数比值升高(均P<0.01);与I/R组比较,IPC组SOD活力升高,MDA含量降低,肺湿干重比降低,肺泡损伤数比值降低(均P<0.01);与I/R组比较,PMB组和IPC+PMB组各项指标差异无统计学意义(均P>0.05)。(2)肺组织病理学改变:I/R组、PMB组和IPC+PMB组肺组织损伤明显,IPC组肺组织损伤较I/R组明显减轻,S组肺组织结构基本正常。结论:IPC对肺I/R损伤有明显的保护作用,而且这一作用可被PKC抑制剂PMB抑制。     

几种不同药物对缺氧缺血新生大鼠神经元凋亡的影响

目的：探讨7—硝基吲唑(7—NI)、N—乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、硫酸镁、脑细脆生长肽(bFGF)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时神经细胞凋亡的影响。方法：72只Wistar大鼠随机分成6组，(1)假手术组(n＝12)，仅作正中切口，不作颈总动脉结扎；(2)空白对照组(生理盐水组)(n＝12)，HIBD后即刻腹腔注射生理盐水(NS)0．5ml；(3)7—NI组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射7—NI 25mg/kg；(4)NAC组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射NAC200μg/只；(5)硫酸镁组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射硫酸镁450mg／kg；(6)bFGF组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射bFGF 10mg。各组均于处置后24小时(h)处死断头取脑，取丘脑中1／3平面行冠状切片，常规石蜡包埋后切片6um,用HE和Tunel染色检测脑细胞凋亡数目。结果：假手术组末见有凋亡特征的阳性细胞；7—NI、NAC硫酸镁和bFGF组脑细胞凋亡数均明显低于对照组；各组与对照组分别经统计学处理差异有显著意义。结论：7—NI、NAC硫酸镁和bFGF对HIBD时脑细胞凋亡确有显著的影响。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性一氧化碳变化及锡原卟啉的干预作用

目的 探讨内源性一氧化碳 (CO)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)中的作用机制及锡原卟啉的保护作用。方法 取7日龄新生SD大鼠30只 ,平均分成3组,1组为正常对照组 ,另2组为干预组和非干预组 ,分别于HIBD模型建立后立即腹腔注射锡原卟啉和9g/L氯化钠溶液 ,24h后用分光光度法检测全血一氧化碳血红蛋白 (COHb)水平 ,然后对脑组织进行HE染色 ,在光镜下观察脑组织病理变化。 结果 非干预组血COHb水平为7.54 %±0.72% ,高于正常对照组 (0.88%±0.07% )和干预组 (1.15%±0.21% ,均P<0.01)。干预组脑组织病变发生率 (30% )低于非干预组 (80% ,P<0.01)。结论 CO可能作为一种内源性介质参与新生大鼠HIBD的发病过程 ,锡原卟啉对HIBD具有保护和治疗作用。     

培养大鼠皮层神经元缺氧损伤与蛋白激酶活化关系的研究

目的检测神经元缺氧后膜性PKA(蛋白激酶A)和PKC(蛋白激酶C)活性变化,以及它们的特异性抑制剂对神经元凋亡率的影响.方法建立培养的神经元"缺血"模型,然后用不同浓度的特异性PKA抑制剂Rp-cAMP和特异性PKC抑制剂Calphostin C预孵育培养神经元再进行"缺血"实验,用放射酶分析法测定神经元缺氧后的膜性蛋白激酶活性,各组缺氧神经元的凋亡百分率由TUNEL荧光试剂盒测定.结果随着神经元缺氧时间的延长,神经元膜性PKA和PKC活性均增加;随着Calphostin C浓度的增加,细胞凋亡率显著增加;相反随着Rp-cAMP浓度的增加,细胞凋亡百分率显著减少.结论①PKA和PKC信号转导通路均参与了缺氧神经元损伤;②缺氧后培养神经元PKA和PKC对凋亡的调控功能相反,提示在培养的缺氧神经元中PKA和PKC信号转导属于单相控制系统,可能二者在细胞中的比例决定着缺氧神经元的存亡.