南宁市O157大肠埃希菌的监测研究

目的探讨南宁市肠出血性O157大肠埃希氏菌人感染、动物和媒介昆虫带菌状况。方法2008年所采集的腹泻病人粪便、动物粪便和苍蝇等标本,经处理后接种mEC肉汤增菌,先用免疫胶体金标法做初筛,阳性标本用免疫磁珠浓缩目标菌,划线接种CHROMagarO157显色琼脂平板,纯化后进行血清学诊断,然后集中进行系统生化鉴定和毒力检测等。结果共检测1083份标本,检出10株O157大肠埃希菌,总阳性率为0．92％,其中猪粪便为9．38％,牛粪为4．00％。苍蝇为4．35％,鸡粪为0．49％,腹泻病人粪便和鸭粪均未能出O157大肠埃希菌,部分标本中检出与0157大肠埃希菌有相关抗原的致病性大肠埃希菌（EPEC）和未能定型的大肠埃希氏菌;对所检出10株O157菌做SLT1、SLT2、eaeA、hlv44种毒力基因的检测,发现3株菌（同一猪场的1份猪粪便和2份苍蝇中检出eaeA＋hly44阳性,未见含有SLT1 SLT2基因,其他菌株SLT1 SLT2eaeAhlyA．均为阴性。结论南宁市养殖场部分动物体携带有一定程度致病力的O157大肠埃希菌,并已造成了周围环境污染,威胁人们的生命健康,提示加强宿主动物O157大肠埃希菌监测和研究是防止未来大流行的关键。     

商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中E.coli O157:H7的鉴定

目的：对商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中首次分离的E.coliO157:H7进行生物学特性等方面的研究。方法：采集疫区患者，外环境，家畜和家禽粪便标本1895份，采用mEC肉汤增菌，胶体金免疫卡快速测定法，免疫磁珠集菌法，CHROMAGAR-O157：H7菌株，在CHROMAGAR-O157：H7显色培养基生长形态，颜色，生化反应出现多样化，rfbO157,stx2,hlyA,eaeA基因检测均阳性的有58株，stx2阳性1株，eaeA阳性4株，72株无毒力基因。结论：为本省实验室诊断E.coliO157:H7提供了理论依据；不同种类的家禽，家畜分离的产毒菌株比例差别显著，以波尔山羊最为突出；为今后在制定对该菌的诊断标准，传染源的追踪和控制及细菌毒力学等方面的研究提供了重要线索。     

携带毒力岛大肠杆菌性小儿腹泻

目的：探讨携带毒力岛大肠杆菌（HPIEC）在小儿腹泻中的病原学地位。方法：采用PCR扩增和菌落原位杂交检测HPIEC－irp2毒力岛基因,并用血清学分型和聚合酶链反应（PCR）法检测各类致泻大肠杆菌。结果：从1032例腹泻患者粪便中分离出652株大肠杆菌,经血清学和PCR毒力基因分型,检出各类致泻大肠杆菌225株,其中肠致病性大肠杆菌（EPEC）20株,ETEC81株,产志贺样毒素大肠杆菌（SLTEC）47株,产志贺样毒素侵袭性大肠杆菌（ESIEC）74株,产毒素大肠杆菌（EIEC）3株。所有致泻大肠杆菌和未能分型的普通大肠杆菌株,再用HPIEC－irp2探针作菌落原位杂交,共检出携带毒力岛大肠杆菌（HPIEC－irp2)112株,总阳性率为17．2％。其中41例是从致泻大肠杆菌ESIEC（24／74）和SLTEC（17／47）中检出。携带毒力岛大肠杆菌性小儿腹泻的主要临床表现为食欲不振（87．5％）,腹痛（58．0％）,腹泻（＞6次／d,75．9）,发热（50．9％）,以粘液便为主（69．6％）。结论：携带毒力岛大肠杆菌是引起小儿腹泻的重要病原菌之一。     

Multiplex Polymerase Chain Reaction for Rapid Identification of Diarrheagenic Escherichia coli

Despite the fact that diarrhaegenic Escherichia coli (DEC) has been identified as a major etiologic agent of childhood diarrhea which represent a major public health problem in developing countries, only a few studies have been performed in Bangladesh to identify these organisms. To detect DEC in patients with acute diarrhea, a total of 300 stool specimens were tested by multiplex polymerase chain reaction (PCR). The multiplex PCR was designed for the detection of target genes of "eae" for enteropathogenic E. coli (EPEC), "stx" for enterohemorrhagic E. coli (EHEC), "ipaH" for enteroinvasive E. coli (EIEC), "aspU", "CVD432" and "aggR" for enteroaggregative E. coli (EAEC) as well as "elt" and "est" for enterotoxigenic E. coli (ETEC). Out of 300 stool specimens collected from patients with acute diarrhea, the DEC was detected in 18% (54/300) cases. The dominating strain was ETEC (13%, 39/300), followed by EAEC (5%, 15/300) and no EHEC, EIEC and EPEC could be detected. Both heat-stable toxin (ST) and heat-labile toxin (LT) genes of ETEC were detected in 66.68% (26/39) strains and only ST or LT as single gene was detected in 23.07% (9/39) or 10.25% (4/39) strains respectively. The multiplex PCR assay could be used as a rapid as well as efficient diagnostic tool for identification of DEC in the clinical laboratory settings.     

南宁市致泻性大肠杆菌病原监测与研究

目的：了解南宁市食品及腹泻病人、奶牛致泻性大肠杆菌污染、感染状况。方法：对４６６份各类标本（肉类、奶类、海产品、蔬菜及腹泻者肛拭、奶牛粪便等）进行致泻性大肠杆菌病原分离培养。结果：未检获Ｏ１５７：Ｈ７，检获其他致泻性大肠杆菌１１５株，检出率为２３．１％，其中ＥＰＥＣ３５株（３０．４３％），ＥＩＥＣ１７株（１４．７８％），ＥＴＥＣ２１株（１８．２６％），ＥＳＩＥＣ４２株（３６．５２％）。结论：食品被     

河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC O157:H7)感染之流行与基因特征研究

目的 :了解河南省肠出血性大肠杆菌 (enterohemorrhagicescherichiacoli,EHEC)的流行状况与流行菌株的志贺毒素基因型。方法 :采集河南省 14个监测点上腹泻病人、家畜家禽粪便和肉食品等标本分离E HEC菌株。应用分子生物学技术检测EHEC菌株的rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2 和stx1等毒力基因和志贺毒素基因亚型 ,应用细胞培养技术检测菌株Vero细胞毒性。结果 :从腹泻病人、家畜家禽、肉食品、苍蝇、蜣螂中均分离出EHECO15 7:H7菌株 ,波尔山羊的带菌率最高达到 2 9.8%。 13 8株携带志贺毒素基因的菌株中 ,EHECO15 7:H7计 95株 ,占产毒菌株的 68.8% ;EHEC非O15 7菌株 43株 ,占 3 1.2 %。菌株可分为 5种毒素基因型 ,EHECO15 7:H 7仅含stx2 基因 ,以stx2 vha亚型为主 ,不含有stx1基因。EHEC非O15 7血清型毒素基因型较复杂。携带stx1和 /或stx2 的菌株均具有Vero细胞毒性。结论 :河南省腹泻病人和家畜家禽中存在EHEC感染。EHECO15 7:H7血清型是优势菌型 ,羊是主要宿主动物。目前河南省EHECO15 7:H7菌株毒素基因型为stx2 并以stx2 vha亚型为主。     

江苏省徐州市分离的大肠杆菌O157:H7菌株携带志贺毒素2型别的变化

目的 研究我国分离的大肠杆菌O157：H7菌株的志贺毒素型别的变化。方法使用针对志贺毒素2及其变种的引物对进行PCR检测、细菌染色体DNA的PstⅠ酶切后的Southern印迹实验和PCR产物的HaeⅢ、RasⅠ酶切分析,以及：PCR产物克隆后的序列分析方法以及致病性大质粒的PstⅠ酶切分析。结果1999年分离自徐州市的人的5株菌均携带slt1、slt2,而2000年从江苏省徐州市患者分离的10株和蜣螂标本分离的4株共计14株大肠杆菌O157：H7菌株仅携带slt2vha毒素基因,其致病性质粒的限制性酶切图谱与1999年的菌株相比也发生了改变。结论鉴于江苏省徐州市1999年的分离的5菌株全部携带slt1和slt2基因,结果提示该地的优势菌型发生了改变,可能当地大肠杆菌O157：H7感染的流行病学特点有关。针对slt2变异基因而设计的引物及其以此为基础进行的限制性片段长度多态性分析的方法对于研究O157：H7菌株的志贺毒素型别的变化能够满足特异性及灵敏性的要求。     

淮安市2013-2015年致泻大肠埃希氏菌的检测和流行特征分析

目的：了解2013-2015年淮安市致泻大肠埃希氏菌的检出情况和流行特征,为疾病的防治提供依据。方法于2013-2015年从淮安市各哨点医院和社区医院腹泻门诊患者的795份粪便标本中分离大肠埃希氏菌,使用多重PCR方法筛查致泻大肠埃希氏菌,再结合生化实验验证。结果在795份腹泻标本中共检出致泻大肠埃希氏菌80株,检出率为10.06%。其中ETEC 34株,检出最高,其余依次为EAEC 18株、EPEC 16株、EIEC 7株和EHEC 5株。按季节分布统计,差异有统计学意义(P<0.05),夏秋两季为主要流行时段。城市和农村的地域分布则差异无统计学意义(P>0.05);从人群分布分析,不同性别阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),但不同年龄组之间比较则差异有统计学意义(P<0.05)。结论淮安市致泻大肠埃希氏菌主要流行型别为ETEC,夏秋两季为主要流行时段,≤5岁和6~18岁为易感人群,今后应加强对重点时段和人群的监测。     

Study of the identification of enterotoxigenic Escherichia coli by LT-DNA gene hybridization.

Reference strains of enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC), non-ETEC, and other enteropathogenic bacteria were used to prove the reliability of LT-DNA gene hybridization. In the test, LT-DNA gene hybridization was compared with plate immunohemolytic test (PIHT) in identifying LT-ETEC. The results obtained by both methods showed no significant differences. 791 strains of E. coli isolated from 1,875 children with acute diarrhea in Taiyuan Children's Hospital were examined for LT-ETEC by LT-DNA gene hybridization and PIHT. 289 strains examined by LT-DNA gene hybridization were LT positive, while 205 strains examined by PIHT were LT positive. Three different assays were done: colony hybridization, PIHT and fecal direct blot hybridization on each of 74 fecal specimens from children with acute diarrhea. It was found that identification of LT-ETEC using fecal direct blot hybridization is a simple, sensitive and more practical method.

     

产ESBLs大肠埃希菌基因型分析

目的分析大肠埃希菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的主要基因型。方法用表型确定的临床分离产ESBLs的大肠埃希菌47株，分别用TEM、SHV、CTX—M-1、CTX—M-2和CTX—M-9扩增引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增，并对PCR产物进行序列分析。结果PCR扩增结果显示TEM、SHV、CTX—M-1、CTX—M-2和CTX—M-9的阳性率分别为59.57％、4.26％、17．02％、19.15％和82．98％，CTX—M型总阳性率为93.62％，序列分析证实扩增为目的产物。结论47株ESBLs大肠埃希菌的主要基因型是CTX—M型和TEM型，且同时携带2种以上基因的菌株占所测菌株的63．83％，需引起临床的高度重视。     

从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出质粒介导的AmpC DHA-1型β内酰胺酶基因

目的 了解产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型.方法 收集2002年1月-2004年5月间我院呼吸科临床标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共110株,用酶提取物三维试验检测AmpC酶;用等电聚焦电泳、耐药质粒电转化试验、聚合酶链反应(PCR)及测序确定AmpC酶基因型.结果 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC酶检出率分剐为9.30%和4.48%.药敏试验显示产酶株对头孢西丁全部耐药,对第三代头孢菌素、酶抑制剂、氨曲南、阿米卡星及环丙沙星均有不同程度耐药,对头孢吡肟及亚胺培南较敏感.7株产AmpC酶菌株中有5株通过电转化试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌,经PCR扩增和测序证实为质粒介导DHA-1型AmpC酶.结论 我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中已经出现产质粒介导AmpC酶菌株,其耐药性能够水平传播,给临床抗感染治疗带来重大威胁.     

四种致泻性大肠埃希氏菌实验室检测研究进展

肠致病性大肠埃希氏菌（EPEC）、肠产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）、肠侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）四种致泻性大肠埃希氏菌是引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病的常见病原菌,也是我国绝大多数地区引起腹泻的主要病原菌,因此快速准确地检测这四种病原菌对预防和控制由其引起腹泻有着十分重要的作用。本文介绍了这四种致泻性大肠埃希氏菌实验室检测技术的研究进展,主要包括细菌分离培养、免疫学检测、多重PCR、实时荧光PCR等分子生物学方法。     

Ⅰ类整合子在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的分布探讨

目的了解耐多药产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带情况。方法纸片扩散法(K-B法)测定大肠埃希菌对6种3类抗生素的敏感性并筛选出产ESBLs酶菌株;聚合酶链反应(PCR)检测整合子遗传标记qacE△1sul1。结果 71株大肠埃希菌中QacE△1-sul1共检出阳性菌株55株(74.46%),其中多耐模式检出率最高为88.89%(40株)。不同耐药模式中遗传标记基因的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);产酶菌株在不同耐药模式中检出差异有统计学意义(P<0.05);非产酶菌株中检出差异无统计学意义(P>0.05)。结论耐多药产ESBLs大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带率高。     

41株大肠埃希菌和克雷伯菌耐药性的研究

目的:了解我院临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌的耐药性及耐药机制.方法:以双纸片确证试验、三维试验对头孢西丁耐药的大肠埃希菌和克雷伯菌测定产β-内酰胺酶(ESBLs)及C类头孢菌素酶(p-AmpC)的情况;K-B法测定受检菌对15种抗菌药物的耐药性;采用聚合酶链反应(PCR)分析ESBLs和p- AmpC基因型.结果:41株头孢西丁(FOX)耐药的受检菌中共检出产ESBLs 29株,阳性率为70.7%;产p-AmpC 19株,阳性率为46.3%.药敏试验结果显示,产酶组对一～三代头孢均存在不同程度的耐药(43.8%～93.8%),耐药率明显高于非产酶组,差异有统计学意义(P<0.05).所有细菌对头孢匹美的敏感性近70%,对亚胺培南全部敏感.基因检测结果提示,FOX 耐药大肠埃希菌和克雷伯菌ESBLs基因型以TEM和SHV为主,分别占61%和39%;DHA和ACT型p-AmpC检出率分别为41.5%和51.2%.结论:我院临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌为多重耐药菌,ESBLs及p-AmpC基因携带率较高.碳青霉烯类抗生素亚胺培南可作为治疗产ESBLs和AmpC菌感染的有效药物.     

南京地区儿童肠道感染致病性大肠埃希菌血清型的分布及耐药性

目的:了解南京地区儿童细菌性腹泻中致病性大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的主要血清型和对抗生素的敏感性.方法:对5 409例粪便标本进行分离培养并用血清学方法鉴定E.coli血清型,采用纸片扩散法测定E.coli对常用抗生素的敏感性.结果:5 409例粪便标本中分离出633株E.coli,检...     

双重实时荧光PCR检测肠出血型大肠埃希菌stx1和stx2基因方法的建立

目的建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法。方法根据GenBank公布的EHECstx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ1标记。建立双重实时荧光PCR反应体系并对反应条件进行优化,对方法的灵敏度、特异性及其重复性进行分析。结果建立了EHEC双重实时荧光PCR检测方法。菌液浓度为102～108cuf/ml时,均可观察到扩增曲线,且扩增曲线平滑;检测30份模拟临床样品,均检测到stx1和stx2基因,且均培养出EHEC,该方法灵敏度为100%;3次重复测定108、105、102cfu/ml3个高、中、低浓度的菌液DNA模板,得到其扩增曲线,计算各浓度的Ct值标准差及变异系数,均小于5%,在误差允许范围内。结论建立的双重实时荧光PCR法可快速、灵敏、特异、有效地检出EHEC。     

临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌质粒介导AmpCβ内酰胺酶的研究

目的 研究儿科临床大肠埃希菌和克雷伯菌中质粒介导AmpC β内酰胺酶的检出率和基因型.方法 收集2009年1至12月北京儿童医院住院患儿中分离的大肠埃希菌和克雷伯菌.采用头孢西丁纸片扩散法进行大肠埃希菌和克雷伯菌AmpC酶表型初筛,对AmpC酶表型阳性大肠埃希菌和克雷伯菌用多重聚合酶链反应(PCR)方法测定质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR及FOX基因型.结果 大肠埃希菌和克雷伯菌中,共筛选出65株对头孢西丁不敏感的菌株,经多重PCR扩增,有17株AmpC酶DHA型基因阳性,DHA型质粒AmpC酶的总检出率为26.2%.其中,肺炎克雷伯菌14株DHA-1基因阳性,检出率为38.9%(14/36);大肠埃希菌2株DHA-1基因阳性,检出率为7.7%(2/26);产酸克雷伯菌1株DHA-1基因阳性,检出率为33.3%(1/3).其余48株质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR及FOX型基因均为阴性.结论 儿科临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌中,均有质粒介导DHA-1型AmpC酶的产生,其中肺炎克雷伯菌的产生率更高.     

Studies on shiga-like toxin produced by enterohemorrhagic Escherichia coli: purification and characterization of the toxin and development of methods for identifying the toxin

A simple purification method using DEAE cellulose column chromatography and immunoaffinity column chromatography was developed for purifying Shiga-like toxin produced by Escherichia coli O157:H7. About 0.75 mg of purified toxin was obtained from 5 liters of culture (62% recovery). The purified toxin was demonstrated to be immunologically, biologically and structurally indistinguishable from Shiga toxin. A sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of Shiga-like toxin. In the ELISA assay, Shigella dysenteriae type 1, Escherichia coli O157:H7 and some strains of Escherichia coli isolated from traveller's diarrhea were positive. Shiga toxin-resistant Vero cells were isolated by treatment of the cells with nitrosoguanidine. Immunofluorescence studies showed that the mutant Vero cells had lost toxin binding capacity. Samples of S. dysenteriae type 1 and E. coli O157:H7 showed cytotoxicity to the parent cells, but not to the mutant cells. Samples of other organisms showed either no cytotoxicity or cytotoxicity to both cell lines. The results suggested that (1) the presence of a receptor for Shiga-like toxin on Vero cells is essential for expression of cytotoxicity of the toxin, (2) the mutant Vero cells could be used to identify Shiga-like toxin producing organisms.     

临床大肠埃希氏菌耐药性检测及超广谱β-内酰胺酶流行病学调查

目的了解广州地区临床大肠埃希氏菌耐药及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的流行情况。方法对临床分离鉴定的57株大肠埃希氏菌进行5大类15种抗菌药物的耐药性检测。通过表型确认试验筛选出产ESBLs菌株,采用PCR法检测15种临床重要且常见的耐药基因。结果 57株大肠埃希氏菌对15种抗菌药物产生了不同程度的耐药性。其中有23株产ESBLs,ESBLs产生率为40.4%;24株产TEM,13株产CTX-M(其中,8株产CTX-M-55、4株产CTX-M-14、1株产CTX-M-27),2株产OXA-1。结论广州地区大肠埃希氏菌耐药情况依然严峻。同时,ESBLs流行趋势发生了变化:以前以流行CTX-M-9型为主,现在以CTX-M-1型和CTX-M-9型同时流行为主要特征。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药机制研究

目的研究临床分离产ESBLs大肠埃希菌的耐药机制和分子流行病学情况。方法PCR检测大肠埃希菌的I类整合酶、插入序列共同区(ISCR/orf513)、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因;以肠杆菌科间的重复序列(ERIC)为引物进行基因扩增,SPSS13.0分析其遗传多态性。结果102株产ESBLs的大肠埃希菌中,I类整合酶阳性菌有59株(57.8%),orf513阳性菌有6株(5.9%),ESBLs中的TEM型有91株(89.2%),SHV型有0株,CTX-M型有35株(34.3%)。根据指纹图谱,可以把102株大肠埃希菌基因型分为82种,经SPSS系统聚类分析,可归为17个大类。结论产ESBLs大肠埃希菌的整合酶阳性率较高;整合子和ISCR可以共存;ERIC-PCR是一种效果较好的基因分型方法。