细胞角蛋白19基因诊断淋巴结微转移癌灶的意义

目的研究淋巴结转移情况以判断肿瘤预后,指导综合治疗。方法应用细胞角蛋白19（cyto－keratin19,CK19）RT－PCR方法对上皮性肿瘤及淋巴结进行CK19mRNA检测。结果5例正常淋巴结无CK19mRNA表达;15例乳腺癌、10例胃癌、11例大肠癌均表达CK19mRNA;82个淋巴结中,组织学检查11个有肿瘤转移,其CK19RT－PCR也为阳性,其余71个无肿瘤浸润淋巴结,经CK19RT－PCR发现16个表达CK19mRNA。结论CK19RT－PCR方法提高了淋巴结转移的检出率,在上皮性肿瘤患者的其它部位（外周血、骨髓）微转移癌灶的检测中有推广应用价值。     

细胞角蛋白在检测胃癌淋巴结微转移中的应用价值

方法：选取50例经常规病理学检查无淋巴结转移的胃癌根治术后患者的胃周淋巴结的常规石蜡包埋组织块242个,分别应用免疫组织化学方法检测HE染色和癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白（CK19、CK20）的表达。随访患者28例,随访时间48～90月。结果：242个淋巴结常规HE染色均为阴性。经免疫组织化学染色后,有11例患者（22%）、18个淋巴结（7.44%）发现微转移,CEA、CK19、CK20表达阳性的淋巴结数分别为10、17、16个。CEA检出微转移患者6例。CK19和 CK20检出微转移患者均为10例。28例随访患者中,复发及死亡组微转移阳性率（3/7）明显高于无复发组（2/21）。微转移阳性组无病生存期明显短于阴性组,而总生存期无显著性差异。结论：CEA、CK均可用来检测胃癌淋巴结微转移,但CK比CEA敏感性高。CK20与CK19在检测淋巴结微转移方面有相同的敏感性,CK20具有更强的特异性。胃癌淋巴结微转移阳性者复发和死亡率高。     

卵巢癌淋巴结微转移的检测及临床意义

目的：检查卵巢癌患者淋巴结内有无微小转移。方法：33例原发性卵巢癌共获淋巴结187个，将石蜡包埋癌组织块和淋巴结连续切片2张，分别作H－E染色及用抗细胞角蛋白（cytokeratin,CK）单克隆抗体进行免疫组化染色。结果：34例中33例原发灶呈CK阳性反应，CK染色发现33例187例淋巴结中12例（36.4%）31个淋巴结（16.6%）CK阳性，有微转移者12例（36.4%）17个淋巴结（8.0%）；而H－E 色仅发现7例（21.2%）14个淋巴结转移（7.5%），其中有微转移者仅2例（6.1%）2个淋巴结（1.1%）（P＜0.01），H－E阳性者CK全部阳性，H－E阴性的32例中用CK－IHS检出5例有淋巴结微转移。淋巴结微转移与卵巢癌患者的临床期别、细胞分化和生存时间有关。结论：CK染色可大大提高淋巴结微转移的检出率，对卵巢癌患者具有预后意义。     

体外法前哨淋巴结活检在结直肠癌分期中的应用

目的:探讨体外法结直肠癌前哨淋巴结(SLN)定位活检的可行性及其对肿瘤分期的影响.方法:结直肠癌患者26 (男14,女12)例,年龄37～83岁,应用10 g/L异硫蓝(IB)染料于肿瘤离体5 min内用体外定位的方法对其SLN进行定位,蓝染的第1～4个淋巴结为SLN.常规HE染色蓝染的SLN行组织病理学检查;对常规检查为阴性的SLN进行抗细胞角蛋白免疫组织化学染色,检测阳性染色的淋巴结.结果:体外SLN定位法共检测出SLN者23例(88.5%,23/26); 其中11例患者SLN微转移灶常规HE染色及抗细胞角蛋白免疫组织化学染色检测均为阴性,其根治性切除的标本中非SLN的区域淋巴结亦均为阴性(假阴性率为0);常规HE染色在8例患者SLN中检测出微转移灶(30.7%),另4例患者为HE染色阴性而抗细胞角蛋白免疫组化染色证实存在微转移灶(15.3%).结论:体外结直肠癌SLN定位活检术准确性高,同时联合应用抗细胞角蛋白免疫组化染色可以提高肿瘤分期,为应用辅助化疗改善患者预后提供依据.     

细胞角蛋白18基因诊断胃癌淋巴结微转移

目的:建立RT-PCR检测细胞角蛋白-18（CK18）mRNA表达的方法,判断胃癌淋巴结内微转移状况,探讨18 mRNA表达在胃癌患者淋巴结微转移中的临床意义。方法:以细胞角蛋白18 mRNA为标志基因,用RT-PCR法检测35例胃癌的298枚淋巴结及良性胃病变的淋巴结20枚。结果:对照的良性胃病变淋巴结无CK18 mRNA表达,胃癌组的298枚淋巴结病理检查阳性99枚（33.2%）,而RT-PCR法检测细胞角蛋白阳性133枚（44.6%）,差异有显著性（P<0.05）。病理检查为阴性的199枚中,经CK18 mRNA RT-PCR法检测有34枚阳性（17.1%）。 结论:用RT-PCR法检测胃癌淋巴结CK18 mRNA是诊断胃癌淋巴结微转移敏感而特异的方法,对判断预后、指导术后治疗有重要意义。     

肝外胆管癌淋巴结微转移的检测及其对预后的影响

目的 观察CK19和CK20在肝外胆管癌(EHCC)淋巴结微转移中的表达,探讨淋巴结微转移与临床病理特征和CA19-9、癌胚抗原(CEA)的关系,以及淋巴结微转移对预后的影响.方法 选取59例行手术切除EHCC患者的279枚淋巴结,分别以CK19、CK20单克隆抗体进行免疫组化染色和常规HE染色,确定有无淋巴结转移与微转移,并与各病例的临床病理及随访资料进行比较,分析微转移与临床病理因素的关系及对生存率的影响.结果 59例患者的淋巴结转移率,HE诊断仅23.72%(14/59),而CK诊断为35.59%(21/59,P<0.05);淋巴结转移发生率由HE染色的5.37%提高到CK染色的13.98%(P<0.05);在常规HE染色诊断没有淋巴结转移的45例患者中,微转移的发生率为15.56%(7/45).淋巴结微转移术前血清CA19-9浓度显著高于无淋巴结微转移者(对照组)(P<0.05);淋巴结微转移与血清CA19-9浓度呈正相关(r_s=0.371,P<0.05).对12个因素进行Logistic回归分析,结果显示肿瘤的组织学类型和淋巴浸润对淋巴结微转移有重要影响(P<0.05).结论 CK免疫组化染色能检测出HE染色阴性淋巴结中隐匿的癌细胞,淋巴结微转移能够更准确地判断EHCC患者的预后.     

非小细胞肺癌患者淋巴结分子分期的临床病理研究

目的探讨逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测非小细胞肺癌淋巴结微转移的可行性。方法术中将每枚淋巴结平均分成两半,一半淋巴结进行HE染色病理检查;另一半淋巴结,按区域混合,用于RT-PCR。如果一枚淋巴结HE染色证实有显性转移,该患者同一区域的其他淋巴结不再接受RT-PCR。结果（1）25例肺癌患者中共195枚淋巴结接受了HE染色检查,9例共30枚淋巴结中发现有显性转移,无一枚淋巴结检出微转移。（2）39组HE染色阴性的区域淋巴结混合组织中,11组RT-PCR呈阳性。（3）16例常规病理PN现了0期患者中,6例肺门淋巴结出现了微转移;另9例常规病理PN1期患者中,5例出纵隔淋巴结的微转移,差异有统计学意义（x^2=54．063,P=0．0043）。结论（1）HE染色病理能准确地检测出非小细胞肺癌淋巴结中的显性转移灶,而不易发现隐匿性微转移灶。（2）RT-PCR能提高非小细胞肺癌淋巴结微转移的检出率,并可对部分Ⅰ、Ⅱ期患者重新进行分子分期。     

大肠癌前哨淋巴结定位切除及其微转移检测

目的:探讨大肠癌前哨淋巴结定位切除及检测淋巴结微转移的方法,并分析其临床意义。方法:对60例大肠癌患者采用亚甲蓝染法淋巴结示踪,寻找染色的前哨淋巴结,切除后行HE染色和细胞角蛋白20免疫组织化学检测,并与前期直接行淋巴结清扫的60例患者对比。结果:60例中可识别前哨淋巴结者54例,检出率为90.0%,高于前期直接清扫组的24例(40%)(P<0.05);其中常规HE染色检出36例阳性,18例前哨淋巴结阴性者应用免疫组织化学检测,6例检出有微转移灶,其阳性率大大高于对照组(P<0.05)。结论:联合应用亚甲蓝和细胞角蛋白20进行大肠癌前哨淋巴结定位优于单用其中一种方法;免疫组化方法是检测淋巴结微转移的敏感方法;前哨淋巴结定位和微转移的检测对大肠癌的治疗有重要意义。     

Clinical pathology of nodal micrometasteses in non-small cell lung cancer

ObjectiveTo explore whether the conventional pathologic stages of some non-small cell lung cancer (NSCLC) patients were underestimated.Methods195 lymph node samples were taken from 25 NSCLC patients during the operations. Firstly, each resulting tissue block was processed for routine paraffin embedding. Then the 6～10 serial sections were chosen, each 5 μm thick, from every paraffin block of the lymph node. Finally, the first and the second last sections of each lymph node were stained by hematoxylin eosin (HE), and the other serial sections were used for the immunohistochemical (IHC) staining examination with the monoclonal antibody against cyokeratin 19.ResultsWith HE staining, 30 of the 195 regional lymph nodes revealed dominant nodal metastases, and none showed micrometastases. IHC staining was performed on 135 lymph nodes that were identified as free of metastases by HE staining, 31 showed micrometastases; none showed gross nodal metastases. There was a significant difference between HE staining staging and IHC staining staging (P<0.05).ConclusionConventional HE staining can accurately detect gross nodal metastases in the lymph nodes of NSCLC patients, but is unfit for detecting lymph nodal micrometastases. IHC staining analysis can significantly facilitate the detection of occult micrometastatic tumor cells in lymph nodes, and its assessment of nodal micrometastases can provide a refinement of TNM stage for NSCLC patients. Our results provide a rationale for extensive lymph nodes sampling.     

克服RT—PCR法检测肿瘤微转移的假阳性

为探讨克服ＲＴ－ＰＣＲ法检测恶性肿瘤微转移时出现假阳性的方法，作者运用该法检测了４０例非小细胞肺癌和２０例食管癌患者病理证实有转移的淋巴结中角蛋白１９（ＣＫ１９）基因的表达，同时还分别运用套式ＲＴ－ＰＣＥ或ＲＴ－ＰＣＲ法检测了１０例良性肺和食管肿瘤患者正常淋巴结中ＣＫ１９基因的表达。结果发现设立分别以未经逆转录的ＲＮＡ和基因组ＤＮＡ为模板的对照可观察到是否存在ＣＫ１９假基因的干扰所造成的假阳性，而在逆转录前用脱氧核糖核酸酶（ＤＮａｓｅ）消化ＲＮＡ可消除这种假阳性。运用套式ＲＴ－ＰＣＥ法测定ＤＮａｓｅ消化后的正常淋巴结ＲＮＡ可发现ＣＫ１９基因非法转录所致假阳性，调整方法灵敏度，使之刚好能区分正常和转移淋巴结是解决此类假阳性的合适办法。     

CK19及nm23-H1基因联合检测在胃癌淋巴结微转移中的研究

目的 研究胃癌淋巴结微转移情况以判断肿瘤预后，指导肿瘤的综合治疗。方法 采用RT-PCR方法对胃癌上皮及淋巴结进行CK19mRNA的检测及胃癌上皮细胞nm23-H1mRNA的检测。结果 6例正常淋巴结无CK19mRNA表达，20例胃癌组织均有CK19mRNA表达，其中有12例淋巴结存在CK19mRNA表达，占60%，而病理组织学检查只有4例存在淋巴结转移，占20%，另外该12例有淋巴结转移的胃癌组织中有9例nm23-H1mRNA低表达，结论 应用RT-PCR方法对胃淋巴结CK19mRNA及胃癌组织nm-H1mRNA进行联合检测，可提高胃癌淋巴结微转移的早期诊断率。     

CK19在口腔鳞状细胞癌转移淋巴结中的表达研究

目的：检测口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者淋巴结标本中细胞角蛋白19（CK19）的表达情况,寻找发现OSCC淋巴结转移及微转移的有效分子生物学手段。方法应用荧光定量RT- PCR检测8例OSCC患者的119枚淋巴结标本中CK19 mRNA表达水平,并与HE染色及免疫组化进行比较。结果 HE染色及免疫组化同时检测到CK19阳性淋巴结24枚,荧光定量RT- PCR检测到CK19阳性者48枚,HE染色及免疫组化结果CK19阴性而定量RT- PCR阳性的微转移淋巴结主要分布于颈Ⅱ区。淋巴结总体微转移率为20.17%。荧光定量 RT- PCR检测的CK19阳性淋巴结与 HE染色及免疫组化比较有统计学差异（χ2=22.04,P＜0.01）。结论对于OSCC淋巴结转移与微转移的检测,荧光定量RT- PCR对CK19 mRNA的检测较HE染色和免疫组化敏感,分子病理检测方法的应用可以有助于肿瘤的分期判断、预后评估及治疗方案的抉择。     

免疫组织化学染色技术标记CK（AE1/AE3）在乳腺癌前哨淋巴结冰冻剩余组织中表达的意义

［摘要］ 目的探讨免疫组织化学染色CK（AE1/AE3）在乳腺癌患者前哨淋巴结中的表达情况对乳腺癌患者淋巴结转移分析的应用价值。 方法收集乳腺癌患者前哨淋巴结组织1 585枚,前哨淋巴结冰冻剩余组织经过规范化脱水、透明、石蜡包埋组织块、连续切片,做苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining, HE) 染色和免疫组织化学CK（AE1/AE3）标记。 结果1 585枚前哨淋巴结冰冻剩余组织经免疫组织化学染色CK（AE1/AE3）标记显示,有95枚发生淋巴结宏转移,36枚发生淋巴结微转移,有54枚发生孤立性肿瘤细胞（isolated tumour cell,ITC）转移;根据HE染色结果显示,冰冻报告为淋巴结可疑转移5例,经免疫组织化学染色CK（AE1/AE3）标记显示3例未发生转移。 结论在乳腺癌患者前哨淋巴结中进行免疫组织化学染色CK（AE1/AE3）标记,降低HE染色的假阳性率,有助于孤立性肿瘤细胞的检出,提高诊断淋巴结转移的准确率,为临床治疗方案的选取提供依据。     

前哨淋巴结定位在结直肠癌中的研究

目的探讨结直肠癌前哨淋巴结的检测厦其对淋巴结转移的预测，用于指导手术范围。方法术中注射异硫蓝方法对43例结肠癌患者进行手术中前哨淋巴结的临床研究，手术中取前哨淋巴结作快速冰冻病理并与术后常规蜡块病理相对照，观察冰冻病理前哨淋巴结转移与常规病理肠系膜淋巴转移的相关性，厦其对肠系膜淋巴结转移的预测价值。结果43例结直肠癌病人中，42例确定了前哨淋巴结，前哨淋巴结活检成功率97．7％。42例病人共检出淋巴结142个。检出前哨淋巴结35个。将前哨淋巴结冰冻病理与常规病理结果对照，42例结肠癌病人中15例患者证实淋巴结有转移，13例有前哨淋巴结转移，其中9例有非前哨淋巴结转移，4例无非前哨淋巴结转移；29例无前哨淋巴结转移，其中27例无非前哨淋巴结转移，2例有非前哨淋巴结转移。检出特异性为100％（27／27），敏感性为86．7％（13／15），前哨淋巴结假阴性率为13．3％（2／15）。结论前哨淋巴结检测结肠癌对淋巴结转移有重要价值。可以用于指导临床手术。     

结直肠癌周围淋巴结CK20蛋白检测的临床应用研究

目的:探讨免疫组化(IHC)检测结直肠癌区域淋巴结微转移的细胞角蛋白20(CK20)对结直肠癌术后临床分期、预后判断和治疗干预的可行性和临床应用价值。方法:选取40例常规HE病理检查淋巴结转移阴性的结直肠癌患者为研究对象,术前抽取外周血行循环肿瘤细胞(CTCs)测定;术中、后沿亚甲蓝染剂标识的区域淋巴结按4站次淋巴结分别摘除、放置并标记,应用IHC技术检测淋巴结中CK20,统计淋巴结微转移患者的阳性例数及阳性率及其在各不同站次的分布情况,并对HE、CTC和IHC CK20方法检测的结果进行比较。结果:淋巴结CK20测定与HE染色法的淋巴结微转移阳性检出率间差异有统计学意义(P<0.01);不同站次间淋巴结微转移阳性检出率存在统计学差异(P<0.01或P<0.05);全组CK20检测有存在淋巴结微转移11例(11/40,27.5%);7例患者TNM分期提高,HE染色法重新分期率为17.5%(7/40)。全组CTC检测显现阳性7例,阳性表达率为17.5%(7/40),其中6例对应于IHC淋巴结CK20(+)患者,1例为IHC淋巴结CK20(-)患者,且CTCs细胞学分型表达与结直肠癌肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度呈正相关性。结论:CK20免疫组化法是检测淋巴结微转移可靠而敏感的方法,结合亚甲蓝染色法显影淋巴结可简便、快速地发现微转移灶,与CTC检测联用可达互补效能,进一步提高微转移检出率,减少假阴性发生。     

大肠癌淋巴结中CEA、CK20和MMP-7mRNA表达诊断肿瘤微转移的意义

目的探讨大肠癌淋巴结中癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白(CK20)和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)mRNA的表达及其与肿瘤微转移的关系。方法分别用RT-PCR技术检测CEA、CK20、MMP-7基因的mRNA在106例大肠癌患者628个淋巴结及18例良性肠道疾病患者45个淋巴结中的表达情况,并与常规病理学检查进行比较。结果大肠癌患者淋巴结中CEA、CK20、MMP-7mRNA表达阳性率分别为41.6%(261/628)、42.7%(268/628)和56.1%(352/628),病理学检查转移阳性率为22.3%(140/628);CEA、CK20、MMP-7mRNA的阳性检出率均明显高于病理学阳性检出率(均P<0.01)。而18例良性肠道疾病患者45个淋巴结三者表达均阴性。结论RT-PCR技术检测淋巴结CEA、CK20、MMP-7mRNA的表达可用于诊断大肠癌的微转移,其结果较常规病理学检查敏感,对临床分期、预后评估具有重要意义。     

结直肠癌术中前哨淋巴结定位的研究

目的探讨结直肠癌前哨淋巴结的检测及其对淋巴结转移的预测,用于指导手术范围。方法术中注射异硫蓝方法对43例结肠癌患者进行手术中前哨淋巴结的临床研究,手术中取前哨淋巴结作快速冰冻病理并与术后常规蜡块病理相对照,观察冰冻病理前哨淋巴结转移与常规病理肠系膜淋巴转移的相关性,及其对肠系膜淋巴结转移的预测价值。结果43例结直肠癌病人中,42例确定了前哨淋巴结,前哨淋巴结活检成功率97.7%。42例病人共检出淋巴结142个,检出前哨淋巴结35个。将前哨淋巴结冰冻病理与常规病理结果对照,42例结肠癌病人中15例患者证实淋巴结有转移,13例有前哨淋巴结转移,其中9例有非前哨淋巴结转移,4例无非前哨淋巴结转移;29例无前哨淋巴结转移,其中27例无非前哨淋巴结转移,2例有非前哨淋巴结转移。检出特异性为100%(27/27),敏感性为86.7%(13/15),前哨淋巴结假阴性率为13.3%(2/15)。结论检测前哨淋巴结对结肠癌淋巴结转移有重要价值,可以用于指导临床手术。     

定量RT-PCR检测结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达

目的:检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达水平,并探讨其临床价值.方法:采用实时荧光定量RT-PCR法检测51例经病理学确诊的结直肠癌患者和30例健康对照者外周血CK20 mRNA的表达水平.结果:结直肠癌患者中CK20 mRNA阳性率为27.45%,而健康对照组阳性率为6.67%,两者相比差异有统计学意义(P<0.025).随着临床分期的提高,患者外周血中CK20 mRNA的表达率随之提高,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义(P>0.05).Dukes'C期与D期患者中>10拷贝/ml者高于A期与B期患者.结论:检测结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达水平可发现早期脱落的肿瘤细胞,对肿瘤微转移的诊断有一定的提示意义.     

乳腺癌前哨淋巴结转移检测方法的研究

目的探讨乳腺癌前哨淋巴结(SLN)活检的可行性、准确性以及比较几种方法对SLN转移灶检出率的差异。方法对86例乳腺癌患者用亚甲蓝示踪行SLN活检,获取的SLN分别进行常规HE染色、连续病理切片、免疫组化测定CK19和MUCI粘蛋白、RT-PCR法测定CK19和MUCI粘蛋白,比较4种方法对SLN转移灶的检出率。结果86例乳腺癌患者中,80例检出SLN,检出率93.0%,共切除151枚SLN。SLN常规HE染色法预测腋窝淋巴结转移状态敏感性94.74%(36/38),准确率97.50%(78/80),假阴性率5.26%(2/38)。常规HE染色诊断检出率46.36%;连续切片诊断检出率54.30%;免疫组化检测检出率56.29%;RT-PCR法CK19、MUCI粘蛋白联合检测检出率73.50%。结论SLN活检可有效判断乳腺癌腋淋巴结转移状态,RT-PCR法检测乳腺癌SLN转移最敏感。     

RT- PCR检测乳腺癌前哨淋巴结CK19 mRNA 的表达

目的探讨乳腺癌前哨淋巴结定位和检测CK19 mRNA的临床意义。方法对42例乳腺癌患者术中注射美蓝定位前哨淋巴结,用RT-PCR检测前哨淋巴结CK19 mRNA表达以确定转移病灶。结果42例乳腺癌患者中成功确定了前哨淋巴结35例,共63枚,每例1~4枚,平均每例1.8枚,检出成功率为83.33%。35例患者前哨淋巴结中,病理学证实有7例为肿瘤细胞所浸润,阳性检出率为20.00%;RT-PCR检测有20例CK19呈阳性表达,阳性检出率为57.14%,两种检测方法的阳性检出率有显著差异(P<0.05)。结论利用RT-PCR技术检测CK19 mRNA表达可明显提高乳腺癌前哨淋巴结转移病灶的检出率。