HGF对大鼠移植小肠粘膜细胞增殖及凋亡的作用研究

目的：了解肝细胞生长因子(HGF)对大鼠移植小肠粘膜细胞增殖及凋亡状态的影响。方法：Wistar(RT1k )大鼠行异位全小肠移植后第2天开始给予肠外营养至第10天，对照组(n=10)行常规TPN支持，HGF组(n=10)行常规TPN支持并加HGF，采用流式细胞技术及原位末端标记技术观察各组实验前后移植肠粘膜细胞增殖指数的变化。结果：两组移植前基准增殖指数及凋亡指数无显著差异(P>0.05)，实验后对照组移植肠粘膜细胞增殖指数较移植前明显下降，HGF组增殖指数较移植前明显升高，对照组凋亡指数较移植前明显升高，HGF组凋亡指数增加不明显。结论：HGF能明显促进大鼠移植小肠粘膜细胞增殖，并减轻其凋亡，构成了其对移植肠形态及功能维护作用的物质基础。     

肝移植术后应用重组生长激素对急性排斥反应的影响

目的　探讨临床肝移植术后早期应用rhGH对排斥反应的影响。方法　对 30例肝移植患者随机抽取其中 15例作为观察组 ,15例作为对照组 ,观察组于术后第 1天开始连续 7d每天 1次皮下注射重组人生长激素10u ,其他治疗与对照组相同。术后 1,4 ,8,14d测定免疫学指标及临床观察。结果　观察组血清GH及IGF - 1水平较对照组显著升高 (n=15 ,P <0 0 5 ) ,同时两组血清IgG ,IgM ,IgA ,IL - 2水平CD4 /CD8值及急性排斥发生率差异均无显著性 (n=15 ,P >0 0 5 )。结论　观察组与对照组的细胞免疫与体液免疫指标及急性排斥发生率差异无显著性。     

Th17细胞相关细胞因子在大鼠小肠移植急性排斥反应中的作用

目的 通过对大鼠小肠移植FK506预处理模型研究,探讨Th17细胞相关细胞因子在大鼠小肠移植急性排斥反应中的表达。根据病理表现及相关细胞因子表达,进一步探究Th17细胞相关因子在大鼠小肠移植急性排斥的作用机理,试图为预防小肠移植急性排斥损伤提出新思路。方法 雄性健康F344大鼠5对及Lewis大鼠10对,6~8周龄,采用数字表法随机分为对照1组(F344 5只、Lewis 5只)、对照2组(Lewis大鼠5对)和实验组(F344 5只、Lewis 5只)。采用供体肠系膜上动脉-受体腹主动脉端侧、供体门静脉-受体下腔静脉端侧吻合法,供体肠管近端旷置远端回肠-回肠端侧吻合的异体全段性小肠移植术式。实验组:FK506按2 mg/Kg的剂量实验前3日每日肌肉注射,手术当日及术后7 d,按0.3 mg·kg^-1·d^-1肌肉注射。术后7 d处死受体大鼠或濒死大鼠,取供体肠管行HE染色及免疫组织化学染色观察病理变化,右心室穿刺取血用ELISA方法检测血清中IL-17、IL-23、IL-6、TGF-β、IFN-γ的含量。结果 在大鼠小肠移植急性排斥反应模型中,移植肠管的黏膜发生明显的病理形态学改变。对照1组小肠黏膜的病理形态学改变最明显,实验组病理学改变相对较轻,对照2组大鼠小肠黏膜改变最轻。免疫组织化学染色提示巨噬细胞浸润以对照1组最明显,其次为实验组,对照2组浸润最轻。实验组和对照组的大鼠静脉血血清中的IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β平均浓度大体趋势相同,各种细胞因子以对照1组最高,实验组次之,对照2组最低。结论 在大鼠小肠移植模型中,FK506预处理能减轻小肠移植急性排斥反应造成的黏膜损伤,有利于移植受体的存活。其机理与减少移植肠管巨噬细胞的浸润有关。对照1组和实验组大鼠血液中IL-17、IL-23等细胞因子水平均值都高于对照2组,提示Th17相关因子参与急性排斥反应过程。阻断Th17相关因子产生可能会减轻小肠移植急性排斥反应损伤。     

显微镜下大鼠小肠移植模型的建立

目的在传统的小肠移植(SBT)模型基础上建立一个操作简便、并发症少、稳定和实用的大鼠小肠移植模型。方法供、受体手术均在显微镜下进行。切取供肠的范围包括全小肠、门静脉(PV)及其带肠系膜上动脉(SMA)的腹主动脉(AO)袖。动脉吻合采用供体带SMA的AO袖与受体的AO端侧吻合,静脉吻合采用供体的PV与受体的下腔静脉(IVC)端侧吻合,移植肠近端结扎远端造瘘。结果在大量预实验的基础上共进行正式实验33次,手术成功率为84．8％,供体手术时间控制在60min以内,受体手术时问控制在100min以内。结论完全在显微镜下建立大鼠SBT模型具有手术视野清晰、术中操作定位准确、局部创伤小、手术时间短、并发症少、存活率高、模型稳定和实用等优点,是一种较好的模型制作方法。     

活体部分小肠移植的植入技术

目的探讨临床带有残余肠道吻合口瘘活体小肠移植手术经验。方法我们对一例带有残余肠道吻合口瘘的57岁短肠综合征的男性病人，进行了一期活体小肠移植，供体为其32岁的次子，切取供体时完成修剪工作，受体在剔出原吻合口瘘后，移植物血管吻合于肾下腹主动脉、腔静脉。结果病人术后恢复顺利，移植肠功能良好，生活自理。结论对带有残余肠道吻合口瘘的短肠综合征病人可以进行小肠移植，改进手术方式可缩短手术冷缺血时间。     

改进技术的大鼠异体全小肠移植术

目的：为了减少并发症，提高成活率，通过改进外科技术，建立成功的大鼠小肠移植模型。方法：１９６只大鼠施行异位全小肠移植，术前缩短禁食时间，补充能量，术中静脉输液，保持血压稳定，以增加对手术的耐受性；减少对供肠的机械和缺血性损伤，改善供肠生机；重建供肠血管采用腹主动脉－腹主动脉吻合及门静脉－左肾静脉套管法吻合，缩短热缺血时间，保证供肠血供充足与回流通畅。结果：９８只接受小肠移植大鼠的存活率为８９％，最长存活已超过２９６天。结论：改进外科技术后的大鼠小肠移植术具有并发症少、存活率高的特点，并且稳定、实用     

供、受者细胞因子及其受体单核苷酸多态性对肾移植近期急性排斥反应的影响

目的研究肾移植供受者的细胞因子和细胞因子受体单核苷酸多态性对术后早期移植物急性排斥反应的影响。方法（1）根据有无急性排斥发生,129例肾移植受者分成急性排斥组和无排斥组（6个月内）,根据HIJA—A—B—DR错配、神经钙蛋白抑制剂、肾功能延迟恢复、ATG或MAb诱导治疗、冷缺血时间等情况,对两组患者进行比较,并比较两组5种细胞岗子及5种受体的21个位点的基因型分布情况。（2）根据HLA—DR配型情况分成0～1个HLADR位点错配组（0—1MM）、HLA—DR完全错配组（2MM）,比较两组基因多态性的分布情况。结果（1）129例肾移植受者中,39例（30．2％）发生急性排斥反应。（2）急性排斥组HLA—DR错配数和无排斥组中差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）细胞因子和细胞因子受体位点的多态性在急性排斥组和无排斥组中的分布有明显不同,差异有统计学意义。（4）HIA—DR完全错配组（2MM组）和0～1个位点错配组（0～1MM组）进行比较,两者多态性分布亦有不同。结论肾移植供受者不同基因多态性对预测排斥的发生有指导意义。     

建立肝肠联合移植大鼠模型及移植肝对小肠的免疫保护作用

目的：建立新型肝肠联合移植大鼠模型，并研究移植肝是否对移植肠具有免疫保护作用。方法：肝肠联合移植切取移植物时，保留门静脉完整性，利用供体胸段下腔静脉在门静脉侧壁上建立～袖套，并安置套管。受体手术时，将此袖套与受体门静脉残端套管法吻合。动脉重建通过供体肠系膜上动脉与受体右肾动脉端端吻合。免疫保护作用通过术后病理学检查评估。结果：用此法建立肝肠联合移植大鼠模型手术无肝期显著缩短，与Kamada双套管法肝移植无肝期相同，血流动力学影响小，手术成功率高。术后7、14天异基因小肠移植组出现重度排斥反应，而肝肠联合移植组仅表现为中度排斥。结论：用该方法建立一期大鼠肝肠联合移植模型方便可行，且成功率高。肝肠联合移植时移植肝对移植小肠具有免疫保护作用。     

一种新型肝肠联合移植大鼠模型的建立及肝对小肠免疫保护作用初探

目的建立一种新型的大鼠肝肠联合整体移植模型,并研究移植肝是否对移植肠具有免疫保护作用.方法肝肠联合移植在切取移植物后,利用供体胸段下腔静脉在门静脉侧壁建立一袖套,并安置套管.受体手术时,将此门静咏侧壁袖套与受体门静脉残端套管法吻合.供体肠系膜上动脉与受体右肾动脉吻合.免疫保护作用通过术后病理学检查评估.结果本法使受体手术无肝期与Kamada双套管法肝移植无肝期相同,血流动力学影响小,手术成功率高.术后肝肠联合移植组排斥反应程度较小肠移植组轻.结论用本方法建立大鼠肝肠联合移植模型是可行的.肝肠联合移植时肝对小肠具有保护作用.     

小肠移植后淋巴管重建促进移植肠对血浆游离脂肪酸吸收

目的：研究异位双造口小肠移植（SBT）后进行淋巴管重建（lymphatic reconstruction,LR）对移植肠脂肪酸吸收影响。方法：近交系雄性Brown Norway(BN）大鼠分为和BN→LEW＋FK506（n=12)两组。用气相色谱法测定大鼠SBT术前和术后1，4，7，10和14d血浆中游离脂肪酸（FFAs)C14,C16,C18:1,C18:2和C20：4浓度。结果：在SBT后行立即淋管重建的大鼠，术后血浆FFAs浓度较未行淋巴管重建的SBT大鼠血浆FFAs浓度显高，特别是在术后早期（7d内），而术后早期对于移植物和受体机体及肠功能的恢复是关键的。在10－14d后，两组动物血浆FFAs的浓度趋向接近，可能为此时未行淋巴管重建大鼠移植物淋巴管网较多侧枝代偿性建立有关，但其血浆FFAs的浓度仍低于淋巴管重建大鼠。结论：SBT后行立即淋巴管重建、早期肠内营养，可为机体提供充分的能量，有效地纠正低血浆FFAs，防止SBT后早期必需脂肪酸的缺乏，改善移植物和宿主的生存及功能的恢复。     

力肽及精氨酸在大鼠移植肠缺血再灌注损伤治疗中的作用

目的：探讨L－精氨酸（L-Arginine,L-Arg)和力肽在大鼠小肠移植（small bowel transplantation,SBT)缺血再灌注损伤中的治疗作用和协同效应。方法：将64只大鼠随机分为4组，对照组（n=16)行虚拟手术，给予普通饲料喂养；sTPN组（n=16)行同系小肠移植（syngeneic SBT)，接受力肽强化的全胃肠外营养;dTPN组（n=16)行同系小肠移植，接受力肽强化的全胃肠外营养（total parenteral nutrition,TPN);aTPN组（n=16)行小肠移植，给予加用L－Arg和力肽的肠外营养。各组于术后20min和术后8d(POD8）取材。结果：小肠移植术后20min，移植肠中度缺血再灌注损伤表现，移植肠粘膜一氧化氮（nitric oxid,NO)水平降低，丙二醛（malondialdehyde,MDA)含量升高，术后8d,aTPN组移植肠粘膜NO水平高于对照组及dTP组（P＜0．05，P＜0．01），dTPN组及aTPN组移植肠粘膜谷氨酰胺（glutamine,Gln)含量均高于sTPN组（P＜0．01，P＜0．01）；aTPN组较显著；dTPN组及aTPN组移植肠的绒毛高度、粘膜厚度均明显大于sTPN组。结论；大鼠在接受同系异体小肠移植术后，力肽强化的肠外营养液可促进移植小肠粘膜结构的修复，L－Arg可增强力肽对移植肠粘膜修复的作用。     

大鼠肾移植后移植肾内树突状细胞的早期观察

目的 观察大鼠肾移植后早期移植肾内树突状细胞(DC)的变化规律,藉此探讨排斥反应的防治.方法 受体Wistar大鼠30只,按5只/组随机分为6组,35只SD大鼠作为供体,其中5只供肾作为对照组,不行受体手术.其余均行同种异体原位肾移植术,并分别于开放供肾循环后1、6、12、24、48、72 h切取移植肾,行石蜡包埋切片,抗S-100蛋白免疫组化染色和HE染色.观察移植肾病理学改变及肾小球内DC数量变化.结果 各组切片均未见肾小管肾炎、动脉内膜炎等AR表现.对照组及术后1 h组肾小球内DC数量基本为零;此后逐渐增加;24 h组达到顶峰,其均数与其他各组相比,差异显著(Pmax=0.038);随后DC数量缓慢下降.结论 大鼠肾移植术后72 h内,供肾肾小球DC数量呈单峰曲线变化:受体DC不断迁入、迁出供肾是其变化的主要原因;揭示移植肾内DC变化规律有助于进一步完善免疫抑制剂及抗炎药物的使用方案.     

小鼠原位小肠移植模型的建立

目的:探索原住小肠移植的手术技术,为研究移植小肠功能及排斥反应提供良好的动物模型.方法:采用小肠供体的门静脉与受体下腔静脉端侧吻合,供体带主动脉片的肠系膜上动脉与受体腹主动脉端侧吻合,受体相应长度肠管切除,供体近、远端肠管与受体相应肠管切除后近、远端以端端吻合的方式建立原位小肠移植模型.术后禁食4d,不禁饮,每天分2次...     

添加生长激素肠外营养对短肠大鼠代谢效应的影响

目的　研究单纯肠外营养 (PN)与添加生长激素 (GH)的PN对短肠大鼠的代谢作用。方法　建立PN短肠大鼠模型 ,随机分成普通肠外营养组 (STD组 )及添加GH的肠外营养组 (rhGH组 )。测各组大鼠每日体重及氮平衡 ,计算其累积氮平衡。实验结束后测各组织器官重量变化 ,并测大鼠总体水、脂肪及蛋白含量。结果　PN结束后rhGH组大鼠体重、每日氮平衡及累积氮平衡均显著高于STD组 ,P <0 .0 1。各器官重量分析显示rhGH组大鼠腓肠肌重量显著高于STD组 ,P <0 .0 5 ,但与对照组无明显差异。机体组成分析表明rhGH组大鼠总体蛋白及所占机体百分比较STD组显著升高 ,而总体脂肪则明显下降 ,P <0 .0 5。结论　PN时辅助添加rhGH具有显著的促代谢合成作用 ,蛋白合成增加是rhGH作用的显著特点。     

Strong additive effect of calcitriol and cyclosporine A on lymphocyte proliferation in vitro and rat liver allotransplantations in vivo

Background Vitamin D3 and its metabolites have been found to exert immunosuppressive effects both in vivo and in vitro. We investigated the synergistic effect of calcitriol and cyclosporine A (CsA) on lymphocyte proliferation in vitro and graft rejection following rat liver allotransplantations in vivo.Methods Alloantigen driven, human peripheral mononuclear cells’ proliferation and cytokine production capacity were tested in the presence or absence of various concentrations of calcitriol or CsA. In vivo, liver allografts were transplanted in a high responder strain combination (SD to Wistar) rats and combination of subtherapeutical dose of CsA and calcitriol was administered in recipients, whereas the control recipients received single or no immunosuppressant. Proliferation of splenocyte from recipient was tested with mixed lymphocyte reaction. Serum interleukin-2 (IL-2) and interferon gamma (IFN-γ) concentrations were measured with enzyme linked immunosorbent assay. Results Combined medication of 10(-9) mol/L calcitriol and 100 ng/ml CsA inhibited human peripheral mononuclear cells’ proliferation to alloantigen and the production of IL-2 and IFN-γ but promoted that of IL-4 and IL-10. Similarly, combination of 250 ng·kg(-1)·d(-1) calcitriol and 1.0 mg·kg(-1)·d(-1) CsA showed an additive effect in liver transplant model. It restrained splenocyte proliferation to alloantigen from donor and significantly reduced serum concentration of IL-2 and IFN-γ in recipients. Consequently, allograft rejection in combined medication group was minor (median William’s grade was 1.0 vs 3.0 in combined medication group and in the control group, P&lt;0.05) and the recipients’ survival was evidently prolonged [(93.7±5.8) days vs (12.6±1.4) days in combined medication group and in the control group, P&lt;0.01].Conclusion A combination of calcitriol and CsA has an additive effect on limiting lymphocyte proliferation and prolonging liver graft survival. With its additional immunomodulating property, calcitriol is a potent immunosuppressant that can extend the therapeutic window of classical immunomodulators in prevention and treatment of liver graft rejection.     

重组人生长激素对心脏手术后疲劳综合征的影响

目的 观察重组人生长激素（rhGH)对心脏手术后疲劳综合征（POFS）的治疗效果。方法 按随机、对照、双盲的原则收集心脏手术后病人60例,分为A组（rhGH治疗组）和B组（对照组）,每组30例。对两组病人作疲劳记分（Christensen记分）,并测定血清生长激素（GH）的水平和血浆蛋白等指标;计算术后氮平衡。结果 A组术后疲劳程度明显轻于B组（P＜0.01）,脱离呼吸机时间早于B组（P＜0.01）;血清GH水平升高程度强于B组（P＜0.01）;术后第1天,视黄醇结合蛋白（RBP）水平显著高于B组（P＜0.05）;术后第4、8天血浆转铁蛋白（TFN）、前白蛋白（PA）和RBP水平均显著高于B组（P＜0.01）;术后第1－7天氮平衡的改善明显好于B组（P＜0.01）。结论 （1）使用外源性rhGH,能减轻POFS的程度,有助于病人及早脱离呼吸机,能在较短时间内改善病人营养状况,较快达到正氮平衡。（2）血浆急性期蛋白（RBP、PA和TFN等）的水平是判断POFS的一种可靠的生化判断旨标,它们的减少与POFS的发生有关。     

Risk factors for graft survival in sensitized recipients of kidney transplantation.

OBJECTIVE: To investigate the independent prognostic factors for graft survival in sensitized recipients undergoing kidney transplantation, so as to identify the individuals at high risk of graft loss before transplantation. METHODS: A retrospective investigation was conducted in 102 sensitized kidney transplant recipients and 31 relative variables were analyzed with SPSS10.0 software. Using log-rank method, the influence of these variables on short- and long-term graft survivals was evaluated, and Kaplan-Meier analysis was performed to estimate the 1-, 3- and 5-year graft survival rates and half-life. Proportional hazards regression analysis (Cox model) was used to assess the relative risks of the potential variables. RESULTS: In the recipients with a mean half-life of 8.9 years, the 1-, 3- and 5-year graft survival rates were 90%, 85%, and 75%, respectively. By log-rank analysis, the factors affecting short- and long-term graft survivals were identified, namely the recipient age, times of transplantation, levels of panel reactive antibody and the post-operative anti-HLA-IgG antibody, HLA mismatch, renal function, time needing for graft function recovery, presence of acute rejection, delay of graft function recovery and infection, which affected the graft survival demonstrated by Cox model multivariate analysis. CONCLUSION: High-quality donor kidney and minimization of the risk factors for graft survival may insure successful kidney transplantation in sensitized recipients.     

丙型肝炎病毒感染对肾移植术后影响的临床研究

OBJECTIVE: To study the influence of hepatitis C virus (HCV) infection on the clinical outcome of kidney transplantation. METHODS: The recipient/graft survival, the incidence of acute/chronic rejection and cause of death in 86 HCV-infected recipients of renal transplantation were compared with those in another 86 recipients without HCV infection. RESULTS: HCV-infected recipients had significantly shorter 5-year survival (74.4%) than those without HCV infection (87.2%, P<0.01). The 1-year (94.2%/90.7% vs 96.8%/96.0%) and 3-year recipient/graft survival rates (88.4%/79.1% vs 90.7%/87.2%), the incidence of acute/chronic rejection (31.3% vs 21.2%, and 12.5% vs 6.5%) and the 5-year graft survival (73.3%/81.4%) were comparable between the two groups (P>0.05). Hepatic disease was identified as the primary cause of mortality. CONCLUSIONS: HCV infection may affect the long-term survival of the recipients with kidney transplantation, and therefore should be considered as a relative contraindication of kidney transplantation.     

Endothelial cell chimerism by fluorescence in situ hybridization in gender mismatched renal allograft biopsies

Background  The blood vessels of a transplanted organ are the interface between donor and recipient. The endothelium in the blood vessels is thought to be the major target for graft rejection. Endothelial cells of a transplanted organ can be of recipient origin after transplantation. In this study, we tested whether endothelial chimerism correlated with the graft rejection and cold ischemia.
Methods  We studied the biopsy samples from 34 renal transplants of female recipients who received the kidney from a male donor for the presence of endothelial cells of recipient origin. We examined the tissue sections of renal biopsy samples by fluorescence in situ hybridization (FISH) for the presence of endothelial cells containing two X chromosomes using a biotinylated Y chromosome probe and digoxigenin labelled X chromosome probe, and then analyzed the relationship between the endothelial cell chimerism and the rejection and cold ischemia.
Results  Endothelial chimerism was common and irrespective of rejections (P>0.05). The cold ischemic time of chimerism group was longer than no chimerism group ((14.83±4.03) hours vs (11.27±3.87) hours, P<0.05).
Conclusions  There is no correlation between the percentage of recipient endothelial cells in vascular endothelial cells and the type of graft rejection. The endothelium damaged by ischemic injury might be repaired by the endothelial cells from the recipient.

     

NBD多肽预处理的树突状细胞延长移植心存活时间的实验研究

目的 探讨NBD多肽预处理的供体源性树突状细胞(DC)在诱导心脏移植免疫耐受中的作用及可能机制.方法 体外培养供体源性BALB/c小鼠骨髓树突状细胞并以NBD多肽预处理(NBD多肽-DC,在小鼠心脏移植前7 d,将NBD多肽.DC输至受者C57BL/6小鼠体内.应用Cu-T建立小鼠颈部异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,病理分析检测排斥反应程度.混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性,并用ELISA方法测定受者血清Thl型细胞因子(IFN-γ和IL-12)和Th2型细胞因子(IL-4和IL-10)水平的变化.结果 NBD多肽-DC可使移植心脏存活天数延长至(21.83±3.54)d,较PBS对照组的(6.66±1.21)d明显延长(P＜0.01),降低排斥反应病理分级(Stanford 1～2级),能诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,使受者小鼠血清INF-γ和IL-12水平显著降低(P＜0.01).而IL-4和IL-10水平明显升高(P＜0.01).结论 NBD多肽预处理的供体源性DC能够诱导针对移植供者产生的特异性免疫耐受现象,其机制可能与诱导受者T细胞的抗原特异性低反应性及Th1/Th2免疫偏移有关.