Oncolytic herpes simplex virus vectors for the treatment of human breast cancer

Background Oncolytic herpes simplex virus (HSV) vectors can be used for cancer therapy as direct cytotoxic agents, inducers of anti-tumor immune responses, and as expressers of anti-cancer genes. In this study, the efficacy of HSV vectors, G47△ and NV1023 were examined for the treatment of the human breast cancer.Methods Human breast cancer MDA-MB-435 cells were cultured or implanted subcutaneously in BALB/c nude mice. The cells or tumors were inoculated with G47△ or NV1023, and cell killing or inhibition of tumor growth determined. Both viruses contained the LaeZ gene and expression in infected cells was detected with X-gal histoehemistry.Results G47△ and NV1023 were highly eytotoxie to MDA-MB-435 cells in vitro at very low multiplicities of infection. X-gal staining of infected tumor cells in vitro and in vivo illustrated the replication and spread of both viruses. G47△ and NV1023 inoculation inhibited tumor growth and prolonged mouse survival. Both vectors behaved similarly.Conclusions Oncolytic HSV vectors, G47△ and NV1023, were extremely effective at killing human breast cancer cells in vitro and in tumor xenografts in vivo. This novel form of cancer therapy warrants further investigation and consideration of clinical application.     

Cytotoxic genes from traditional Chinese medicine inhibit tumor growth both in vitro and in vivo

OBJECTIVE： Little effort has been made to study the protein-encoding genes isolated from traditional Chinese medicine（TCM） drugs, and the delivery of these genes into malignant cells through recombinant adeno-associated virus（r AAV） vectors has not been attempted. METHODS： We synthesized the c DNAs of five known cytotoxic proteins isolated from TCM drugs and the FLAG epitope-tagged c DNAs were subcloned into a r AAV plasmid vector. The protein expression was confi rmed by Western blot assay. Various cancer cell lines were transfected with the above plasmids and cell growth was monitored both in vitro and in vivo. The best cytotoxic gene was further packaged into r AAV vectors, under the control of a liver cancer-specifi c promoter. The liver tumor growth was then monitored following intratumor administration of the r AAV vectors.RESULTS： The expression plasmids, encoding individual potential cytotoxic genes tagged with FLAG epitope, were successfully generated and sequenced. Among these genes, trichosanthin（TCS） gene yielded the most promising results for the inhibition of cancer cell growth in vitro. The over-expressed TCS functioned as a type I ribosome-inactivating protein, followed by inducing apoptosis that is associated with the Bcl-PARP signaling pathway. Furthermore, intratumor injection of r AAV vectors containing the TCS gene signifi cantly inhibited the growth of human hepatocellular carcinoma tumors in a murine xenograft model.CONCLUSION： Our studies suggest that the use of TCM cytotoxic genes is a useful therapeutic strategy for treating human cancers in general, and liver tumors in particular.     

放疗联合溶瘤病毒治疗对肿瘤细胞的影响

溶瘤病毒治疗是近年来兴起的一种新的肿瘤基因治疗途径。在溶瘤腺病毒被批准用于临床治疗肿瘤的情况下,溶瘤病毒治疗与放疗相结合将对恶性肿瘤的治疗产生重要影响。文章就放疗联合溶瘤病毒治疗对肿瘤细胞的杀伤作用作一综述。     

携带抑癌基因的重组腺相关病毒载体的构建及病毒包装滴定方法探讨

目的　构建携带多肿瘤抑制基因p16 (mts 1)及抑癌基因p2 1WAF1的腺相关病毒 (AAV)载体 ,通过病毒包装、纯化及滴定 ,获得高纯度高感染性的病毒液 ,为进行肝癌基因治疗的实验研究奠定基础。方法　以p16cDNA及p2 1cDNA全长为目的基因 ,构建AAV载体prAAV AFP p16 ,prAAV AFP p2 1,prAAV CMV p16及prAAV CMV p2 1。其中前两种载体能在人肝癌细胞中特异表达目的基因。应用脂质体将重组载体与辅助质粒PspRC72、腺病毒粘粒共转染包装细胞 ,2d后感染野生型腺病毒 ,至细胞裂解病变明显时收获。纯化后用聚合酶链反应法扩增倍比稀释后病毒液内的甲胎球蛋白或巨细胞病毒启动子DNA ,进行病毒DNA颗粒滴度测定。然后用重组腺相关病毒与腺病毒 (MOI均为 10 )共感染C12细胞 ,至细胞裂解病变明显时再收获。结果　重组载体经酶切鉴定测序证实。 2 93细胞、C12细胞包装病毒效果良好 ,病毒颗粒滴度介于 10 13 ～ 10 14 个 /ml之间。携带GFP的感染性AAV滴度为 5× 10 10 个 /ml。电镜下病毒呈小圆形空斑状 ,直径 2 5～ 30nm。MOI值 10 0时 ,rAAV AFP GFP病毒感染肝癌细胞的阳性率达 70 % ,为携带目的基因的AAV病毒用于肝癌细胞的促凋亡研究提供了定量指标。结论　成功构建了AAV载体 ,探讨了病毒包装方法 ,即第一次转染成功后 ,     

慢病毒介导的双自杀基因对大肠肿瘤细胞的靶向杀伤作用

目的 研究慢病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK双自杀基因系统对大肠肿瘤细胞选择性杀伤作用.方法 构建的重组FGW-KDRP-CD/TK慢病毒载体在293T细胞包装扩增后,获得病毒颗粒,体外感染表达KDR的LOVO细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,以RT-PCR方法检测转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-FC及GCV处理,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应.结果 重组体对各细胞株的感染率相似,RT-PCR方法检测发现:除LS174T细胞外,LOVO细胞有目的基因CDglyTK的表达.LOVO与LS174T细胞株对前药敏感性有显著性差异(P＜0.001),双自杀基因的疗效优于任一单自杀基因的疗效(P＜0.001).结论 KDR启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR的大肠肿瘤细胞.     

Effects of multiple tumor suppressor 1 on the proliferation of human ovarian cancer HO-8910 cells

In1994,tworesearchteams,oneinSaltLakeCity[']andtheotherinSanDiego['jfirstreportedanewinhibitorofcancercells,whichencodedapro-tein,ofl6kDandsowasnamedp16gene.Previousresearchesindicatedthatthepl6genewasdeletedormutatedin75%celllinesderivedfromawidevarietyofcancers.Wehavesuccessfullytransfectedthewildtypepl6geneintohumanovariancancerHO-891Ocellsandproveditsgeneexpression.Inthepresentstudy,theeffectsofMTSlonthepro-liferationofovariancancerHO-89lOcellswerefur-therinvestigated.MATERIALSAN…     

Endothelial progenitor cells homing to the orthotopic implanted liver tumor of nude mice

This study investigated the "homing" phenomenon in hepatocellular carcinoma (HCC).The "homing" specificity of endothelial progenitor cells (EPC) by establishing an orthotopic implantation model in nude mice.EPCs harvested from the marrow cells were separated by density gradient centrifugation.Fluorescence microscope,flow cytometry (FCM) and double fluorescence staining with FITC-UEA-I and DiI-ac-LDL,were employed to identify the cells.4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) labelling and real-time PCR were used for detecting the expression of CD133 and chemokines to trace and observe the distribution of EPCs.Our results showed that the distribution rate of EPCs was obviously higher than that in other important organs and the negative control group.Detection of CD133 and chemokines yielded similar results in difference tissues.Our experiment confirmed that the chemotaxis of EPCs does exist in HCC.Moreover,HIF-1α,SDF-1 and VEGF might play important roles in the "homing" of EPCs in HCC.EPCs might be a potential candidate for targeting vector of HCC for gene therapy.     

海洋微藻PUFAs 及合成酶基因在肿瘤预防和治疗中的应用

多不饱和脂肪酸（PUFAs）对人类的健康至关重要,参与了人体内许多重要的生理反应,尤其是体内n-3 PUFAs 和n-6 PUFAs 的相对含量与肿瘤预防和治疗有关.除了在饮食中添加富含n-3 PUFAs 和n-6PUFAs 外,利用PUFAs 合成关键酶基因作用于底物在体内合成也是一个重要的途径.研究已获得海洋微藻中多个PUFAs 合成关键酶基因,转入肿瘤的宿主细胞后发现该基因在肿瘤细胞内能进行有效异源表达,抑制肿瘤细胞的增殖且导致凋亡,展示了该类基因在肿瘤的基因治疗中具有良好的应用价值.     

小鼠白介素-12在人卵巢癌SKOV3中的抗肿瘤作用

目的观察转染至SKOV3卵巢癌细胞中小鼠IL-12全长基因的质粒能稳定表达相关细胞因子基础上,在脾细胞存在的情况下对SKOV3肿瘤细胞的杀伤作用.方法MTT方法检测对SKOV3卵巢癌细胞增殖的影响,免疫组化法检测SKOV3卵巢癌细胞表面IL-12蛋白的表达.结果转染后癌细胞免疫组化可见IL-12表达,在脾细胞的作用下,MTT结果显示IL-12对SKOV3卵巢癌细胞有抑制其增殖的作用,P＜0.05.结论成功地将IL-12基因转染至SKOV3卵巢癌细胞中并稳定表达相关细胞因子,在脾细胞存在情况下对SKOV3细胞有抑制其增殖作用,从而杀伤卵巢癌细胞,具有抗肿瘤作用.     

miR-340在膀胱尿路上皮癌中的表达及其靶基因预测的生物信息学分析

目的探讨miR-340在膀胱尿路上皮癌中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miR-340在膀胱尿路上皮癌发生中的作用机制研究提供理论基础。方法采用miRNA芯片技术检测膀胱尿路上皮癌及正常膀胱黏膜组织中miRNA表达谱,用实时定量PCR法进行验证,挑选具有显著表达差异的miR-340为进一步研究对象,利用生物信息学方法,对miR-340的靶基因进行预测,并对其靶基因进行基因本体（GO）功能富集分析及KEGG信号转导通路富集分析。结果miRNA表达谱芯片、实时定量PCR法均提示miR-340在膀胱尿路上皮癌中较癌旁正常膀胱组织中表达明显降低。miR-340预测靶基因集合功能富集于细胞黏附（celladhesion）、生物黏附（biologicaladhesion）和细胞间黏附（cell-celladhesion）等,KEGG通路分析涉及癌通路（pathwaysincancer）和细胞周期通路（pathwaysincellcycle）等。结论miR-340在膀胱尿路上皮癌中呈低表达,miR-340预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中。     

氨肽酶N：肝癌干细胞的治疗靶点

肝癌干细胞（liver cancer stem cells,LCSC）在肝癌的发生发展过程中起重要作用。LCSC 具有自我更新和肿瘤起始能力,并且处于静息期、慢生长阶段或低分化状态,与肝癌耐药、复发、转移等关系密切。为研究 LCSC 的生长特点,可以通过特异性标志物分选法鉴别分选 LCSC。早期研究表明,细胞表面抗原分子 CD133、细胞黏附分子免疫球蛋白（CD90、CD44、CD24）、上皮细胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule,EpCAM）等均可作为 LCSC 的特异性标志物。近年发现肝癌中表达氨肽酶 N （aminopeptidase N,APN,CD13）的细胞具有干细胞的生物学特性,认为 CD13可作为 LCSC 的特异性标志物。本文将介绍 CD13的结构和主要功能、LCSC 的来源和鉴别、CD13+细胞在肝癌中的作用以及联合用药治疗肝癌等。     

生殖细胞基因编辑与基因治疗的问题与展望——以CCR5基因为例

医学科学研究和医学临床实践,需要遵守人类的国际准则和国家的具体法规。最近报道的基因编辑婴儿,是一起破坏人类医学伦理底线的非法行医事件的结果。本文以CCR5基因为例,探讨基于基因编辑或基因治疗受精卵的技术局限性和未来需要发展的技术路径。     

逆转录病毒介导人肿瘤坏死因子-α基因抑制胆管癌细胞的生长

[目的 ]研究逆转录病毒介导的人肿瘤坏死因子α(TNFα)基因转染对人胆管癌细胞生长的抑制作用。 [方法 ]构建逆转录病毒 -TNFα(pLNCX -TNFα)复合体 ,转染人胆管癌细胞得到稳定表达 ,通过聚合酶链式反应 (PCR)、流式细胞仪 (FCM )、免疫组织化学等方法检测基因表达、细胞生长增殖和细胞凋亡等情况。 [结果 ]pLNCX -TNFα基因转染人胆管癌细胞后 ,pLNCX空质粒转染组、pLNCX -TNFα基因转染组的细胞均能扩增出 70 8bp的基因片断 ,而未转染组则无 ;pLNCX -TNFα基因转染组的细胞克隆抑制率为 6 4% ,与对照组和 pLNCX空质粒转染组相比 ,差异性非常显著 (P <0 .0 1 ) ;转染的人胆管癌细胞G1期比例从 2 9.0 7%增加到 5 4.2 4 % ,G2 -M期和S期比例分别从 5 2 .0 3%下降到 2 .0 2 % ,1 8.32 %下降到 1 0 .34% ;凋亡细胞数从 5 .83%增加到34.76 %。[结论 ]TNFα基因通过诱导胆管癌细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞抑制胆管癌细胞的生长。     

运用“虚毒致癌”理论指导肺癌患者饮食治疗

中医食疗是中医药治疗肿瘤的重要组成部分,本文从机理和具体操作上探讨运用笔者提出的“虚毒致癌”理论,并用于指导肺患者饮食治疗。从肿瘤的发病机理上看,阴阳失调是总因,具体可分为“因虚致毒成,毒聚使癌生”。针对肿瘤（肺癌）的病机,在其食疗应用上主张从补虚扶正气和解毒攻癌毒两方面着手操作,同时主张遵循辨证施膳等原则以提高肺癌的食疗疗效。     

结直肠癌靶向治疗耐药机制的研究进展

结直肠癌在恶性肿瘤中发病率和死亡率均位居第3,其复发、转移和耐药已成为临床治疗的主要问题.靶向药物虽能更加精确、特异地治疗肿瘤,但研究显示其治疗效果并不显著.与传统化疗药物相似,靶向药物也存在天然或获得性耐药,从而导致治疗失败.本文综述了近年来结直肠癌靶向治疗耐药机制的研究进展.     

携带HBV C基因重组MVA假病毒颗粒的构建及其抗原性鉴定

目的 构建携带HBV C基因的重组MVA假病毒颗粒并鉴定其抗原性.方法 将HBV C基因通过基因重组构建入穿梭载体pSC11,得到质粒pSC11-C,将此质粒转染MVA病毒通过同源重组得到MVA-C.结果 利用基因测序,PCR鉴定证实所得假病毒颗粒携带HBVC基因,并且具有良好的抗原性.经过9次传代得到单克隆重组病毒.结论 成功构建了携带HBV C基因的重组MVA假病毒颗粒MVA-C,为研究HBV慢性感染的基因治疗提供了新途径.     

单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用的研究

目的：观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。方法：采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞,得到带有HSV-TK基因的Hela／TK细胞,并将其用于体外实验。结果：载体HSV-TK导入了PA317细胞。体外实验结果显示,当Hela／TK细胞数占混合细胞10％时,低浓度(10mg／L)的GCV就可将50％左右的肿瘤细胞杀死。GCV作用后的实验组Hela／TK细胞基因组经琼脂糖凝胶电泳后可观察到典型的DNA梯状条带。结论：逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入人宫颈癌Hela细胞并获稳定表达,HSV-TK／GCV自杀基因系统在体外对宫颈癌细胞有杀伤作用,且存在明显的旁观效应。     

GPER：雌激素相关疾病治疗的新靶点

G蛋白耦联雌激素受体 (GPER)是一种G蛋白偶联受体家族的新型雌激素受体,可与雌二醇等雌激素结合,但其信号途径及作用机制与经典核雌激素受体（ERα和ERβ）不同,是一种既能够介导非基因型快速反应也可通过第二信使系统发挥间接转录调控作用的膜性受体。由于GPER可能与雌激素相关疾病的发生、发展密切相关,很可能成为治疗相关疾病的新靶点,近年来备受关注。本文就GPER的发现、结构、亚细胞定位、配体、信号转导途径及与相关疾病之间的关系等方面进行阐述。     

以黑色素瘤抗原基因mRNA为特异标记检测乳腺癌患者外周血肿瘤细胞

目的：以黑色素瘤抗原-A1(MAGE-A1)和MAGE-A3基因mRNA为特异性标记物，检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞，并探讨其临床意义。方法：采集40例乳腺癌患者及20例非肿瘤患者的外周血，用巢式RT-PCR方法检测外周血单核细胞(PBMC)中MAGE—A1和MAGE-A3基因mRNA。同时用RT-PCR方法检测乳腺癌患者肿瘤组织中上述MAGE基因的表达。结果：12．5％(5／40)和17．5％(7／40)乳腺癌患者的PBMC中可分别检测到MAGE-A1和MAGE-A3基因的mRNA，而相应乳腺癌组织中MAGE-A1和MAGE—A3的表达率分别为15．0％(6／40)和22．5％(9／40)，在25．0％(10／40)的乳腺癌患者PBMC中至少可检测到一种MAGE基因mRNA，癌旁组织、乳腺癌组织中不表达MAGE基因的患者以及20例非肿瘤疾病患者的PBMC中均未测出MAGE基因mRNA。乳腺癌患者PBMC中两种MAGE基因mRNA的检出率与肿瘤TNM分期密切相关。结论：MAGE-A1和MAGE-A3基因mRNA可作为特异性肿瘤标记物用于检测乳腺癌患者PBMC中的乳腺癌细胞，巢式RT-PCR的敏感性及特异性较高，其检测结果可能有助于判断乳腺癌患者的预后。