脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的　探讨大鼠脊髓损伤后诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）基因表达变化规律。方法参考Ｎｙｓｔｒｏｍ方法建立的大鼠脊髓压 迫伤模型,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定伤段脊髓组织ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达情况。结果正常脊髓组织内未 见ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达,脊髓压迫伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强,伤后２４ｈ达到高峰。结论ｉＮＯＳ未参与脊髓 组织正常生理调节,脊髓损伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强,提示ｉＮＯＳ参与了继发性脊髓损伤过程。     

脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义

目的探讨脊髓损伤后早期伤段脊髓组织一氧化氮合酶（NOS）活性的动态变化规律。方法通过伤段脊髓组织催化［3H］标记的精氨酸转化生成［3H］标记的瓜氨酸的量,测定脊髓压迫伤后0～60min伤段脊髓组织NOS的活性。结果脊髓压迫伤后,NOS活性明显增加,伤后5min达最高点;然后又迅速下降．于伤后1h恢复至正常水平。结论在脊髓伤后1h内,伤段脊髓组织NOS活性迅速而短暂升高。     

大鼠脊髓损伤后内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达

目的研究大鼠脊髓损伤后内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的变化规律。方法建立大鼠脊髓压迫伤模 型,用逆转录聚合酶链反应法测定伤段脊髓组织 ｅＮＯＳ ｍＡＮＡ的表达情况。结果正常脊髓组织内存在 ｅＮＯＳ ｍＲＮＡ 的表达,脊髓压迫伤后 ｅＮＯＳ ｍＲＮＡ表达迅速增强,在伤后 ６ ｈ达到高峰。结论 ｅＮＯＳ可参与脊髓组织正常的生理调 节,并可能在继发性脊髓损伤过程中起保护作用。     

脊髓伤后早期NOS活性变化及其组织细胞来源

目的：探讨脊髓伤后早期伤段脊髓组织一氧化氮合酶(NOS)活性动态变化的规律及其组织细胞来源。方法：检测伤段脊髓组织中3H标记的精氨酸转化生成3H-瓜氨酸的量,了解脊髓压迫伤后0-60min伤段脊髓组织NOS的活性变化;并应用免疫组织化学方法研究其细胞定位。结果：脊髓压迫伤后,NOS活性明显增加,伤后5min达最高点,后又迅速下降,于伤后1h恢复至正常水平。免疫组化可见脊髓灰质中间外侧细胞柱、中央管周围及背角和腹侧角有大量的NOS-Ⅰ型阳性细胞,而未见NOS-Ⅲ型阳性细胞。结论：在脊髓伤后1h内,伤段脊髓组织NOS活性迅速而短暂升高;其来源可能主要是脊髓灰质的神经细胞。     

一氧化氮对伤段脊髓水电解质及超微结构的影响

目的为了探讨一氧化氮（NO）在继发性脊髓损伤中的作用机制。方法通过伤前蛛网膜下控注射一氧化氮合成酶（NOS）底物及其不同剂量抑制剂，采用原子吸收分光光度法测定脊髓伤后24h伤段脊髓组织电解质含量和含水量的变化，并观察其超微结构的改变。结果伤前蛛网膜下腔注射NOS底物或大剂量抑制剂均导致伤段脊髓H2O、Na+、Ca2+含量明显升高，K+含量明显降低，且导致脊髓组织超微结构严重紊乱。而注射小剂量NOS抑制剂则导致H2O、Na+、Ca2+含量下降，K+含量升高，并减轻脊髓组织超微结构损害。结论脊髓伤后NO过度释放与抑制均可造成伤段脊髓水、电解质紊乱和组织损害；而NO适当产生则有利于内环境的稳定及脊髓结构完整性的维持。     

脊髓冲击伤后应用低剂量FK506抑制iNOS表达及神经细胞凋亡

目的观察大鼠脊髓冲击伤后应用低剂量FK506对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达及神经细胞凋亡的抑制作用。方法45只成年雄性wIstar大鼠，根据改良Allen法制备大鼠脊髓冲击伤模型。暴露脊髓T10节段，以重量为10g的铁锤从4cm高处自由落下，造成T10段脊髓冲击伤。假手术组5只、对照组和实验组各20只。实验组在脊髓损伤后5min一次性经尾静脉注射FK506（0．3mg／kg），其余两组以相同方法给予0．9％的生理盐水。于伤后不同时间点取材，行苏木精一伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化，原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记技术检测神经细胞凋亡，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学染色检测iNOSmRNA和蛋白的表达，同时采用BBB评分法进行后肢运动功能评价。结果实验组病理学观察和行为学评分明显优于对照组（P〈0．05，P〈0．01）；神经细胞凋亡在实验组较对照组明显减少（P〈0．05）；i—NOSmRNA和蛋白的表达均于伤后7d迭高峰，两者表达实验组明显低于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。结论FK506能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及神经细胞凋亡，减轻继发性损害从而改善脊髓损伤后的功能恢复。     

继发性脊髓损伤中一氧化氮作用机制的探讨

目的：探讨一氧化氮在继发性脊髓损伤中的作用及机制。方法：采用闭合性液压损伤装置致大鼠脊髓（Ｔ９）中度损伤，分别静脉注射生理盐水及一氧化氮合成酶抑制剂Ｌ－ＮＡＭＥ（８，２０，４０ｍｇ／ｋｇ），利用多功能生理仪、手术显微镜、激光多谱勒血流仪、神经肌电图仪分别监测损伤前及后不同时间点平均动脉压、软脊膜小动脉直径、局部血流量、脊髓诱发电位变化、神经行为学评分、组织病理学改变。结果：８ｍｇ／ｋｇＬ－ＮＡＭＥ对大鼠全身血流动力学影响不大，但可促进神经功能恢复；２０ｍｇ／ｋｇＬ－ＮＡＭＥ组神经功能无改善；４０ｍｇ／ｋｇＬ－ＮＡＭＥ明显升高平均动脉压、收缩软脊膜小动脉（９０ｍｉｎ时直径减少１０％）、减少局部血流量（９０ｍｉｎ时减少２２％），局部离子分布紊乱、水肿严重，神经功能障碍不能恢复、甚至加重，体重进行性减轻，死亡率增加。结论：提示一氧化氮在继发性脊髓损伤中，既可起到保护作用又可以起到破坏作用。适当控制一氧化氮生成，有利于组织保护及神经功能恢复。     

一氧化氮合成酶神经化学重塑在脊髓损伤大鼠下尿路功能障碍中的机制及应用

目的 观察完全性脊髓损伤(SCI)大鼠下尿路传入神经一氧化氮合成酶(NOS)的表达及鞘内注射NOS抑制剂对SCI大鼠膀胱测压参数的影响.方法 ①选取SD大鼠24只,随机分为正常对照A组、SCI 1周组、SCI 4周组和SCI 8周组(n=6),SCI1周组、SCI 4周组和SCI 8周组大鼠横断胸10脊髓节段建立完全性SCI模型,免疫组织化学法检测各组大鼠L6～S1脊髓节段神经型NOS(nNOS)和诱导型NOS(iNOS)的表达.②另选取SD大鼠16只,随机分为正常对照B组(n=9)和损伤组(n=7),损伤组大鼠横断胸10脊髓节段建立完全性SCI模型4周后,两组大鼠分别鞘内注射0.1 mL生理盐水、1μmol nNOS抑制剂和1μmoliNOS抑制剂,观察给药前后两组大鼠膀胱测压参数的变化.结果 ①SCI 1周组和SCI 4周组大鼠脊髓后角nNOS阳性表达细胞数[(5.5±2.7)/视野和(10.3±7.9)/视野]显著大于正常对照A组[(2.0±1.5)/视野](P＜0.05),SCI 8周组大鼠脊髓前角nNOS阳性表达细胞数[(6.7±1.5)/视野]显著大于正常对照A组[(4.3±1.5)/视野](P＜0.05).②损伤组大鼠鞘内注射nNOS抑制剂后最大膀胱测压容积[(1.58±0.94)mL]显著大于给药前[(1.06±0.70) mL] (P ＜0.05).结论 脊髓水平一氧化氮可能不参与正常排尿反射过程,一氧化氮相关的神经化学递质的可塑性改变与SCI后自主排尿反射的触发有关,鞘内注射药物调节脊髓水平神经化学递质的表达为SCI后下尿路功能障碍的治疗提供了新思路.     

大鼠脊髓组织一氧化氮合酶显微及超微结构特征

目的 探讨脊髓组织中一氧化氮合酶（NOS）的来源、分布特征及其与脊髓微血管的关系。方法 应用免疫组化及免疫电镜技术研究大鼠脊髓组织中NOS的显微及超微结构特征。结果 脊髓组织含有NOS的神经细胞主要位于脊髓灰质的中间外侧细胞柱、中央管周围及背角和腹侧角,许多含有NOS的神经细胞及其突起与脊髓微血管紧邻。结论 NOS的区域性分布可能与NO调节脊髓运动、感觉及内脏运动等多种不同的功能有关;其超微结构特征有利于半衰期极短的NO弥散至微血管,从而调节脊髓微循环。     

Attenuation of Nitric Oxide Synthase Gene Expression in Rat Lung Induced by Hypoxia

ＡｔｔｅｎｕａｔｉｏｎｏｆＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＲａｔＬｕｎｇＩｎｄｕｃｅｄｂｙＨｙｐｏｘｉａＤＡＩＡｉｇｕｏ（戴爱国）；ＺＨＡＨＧＺｈｅｎｘｉａｎｇ（张珍祥）；ＮＩＵＲｕｊｉ（牛汝辑）；ＸＵＹｏｎｇｊ...     

光化学局灶性颈髓缺血损伤诱导大鼠NOS的表达

目的:建立局灶性颈髓缺血损伤大鼠模型及探讨NOS表达在损伤中的作用机制. 方法:95只SD大鼠分成两大组:①对照组20只;②实验组75只. 实验组按照射时间分成5,10和15 min 3小组,每小组又按存活时间分为1, 3, 7, 14和21 d 5组. 应用光化学方法制造局灶性颈髓缺血损伤, 用改良Menzies法评价大鼠行为学,以及应用NADPH染色和中性红复染技术,观察大鼠行为学改变,颈髓组织学改变,以及NOS表达的变化. 结果:对照组及5 min组未见病灶及行为异常,可见后角及中央导水管周围少量NOS样阳性神经细胞;10 min组可见局部色素沉着,神经功能中度缺损,可见缺血侧脊髓前角运动神经元及中间带神经元大量NOS样阳性神经元, 而且有时间依赖性,缺血损伤3 d后出现,7 d达到高峰,14 d减退,21 d基本消失;15 min组可见脊髓组织明显塌陷及空腔形成,神经功能重度缺损,缺血侧可见少许NOS样阳性神经元. 结论:光化学颈髓损伤是一种较理想的局灶性颈髓缺血损伤大鼠模型,其病理机制可能与NOS表达有关.     

鞘膜内注射一氧化氮合酶抑制剂对损伤脊髓血流及功能的影响

目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）在继发性脊髓损伤中的作用。方法：伤前３０ｍｉｎ鞘膜内注射不同剂量的一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯（Ｌ－ＮＡＭＥ），观察其对伤段脊髓血流量及神经功能的影响。结果：小剂量的Ｌ－ＮＡＭＥ降低了伤段脊髓早期局部血流量，但改善了损伤脊髓的神经功能；而大剂量的Ｌ－ＮＡＭＥ则长时间内严重地减少了伤段脊髓血流量，加重了伤段脊髓神经功能损伤。结论：脊髓损伤早期伤段脊髓ＮＯ适度产生有利于神经功能恢复，而其过度产生则加重继发性脊髓损害     

诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体的构建

目的 构建含有人诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体pcDNA3-iNOS。方法 采用分子生物学技术，以Hind Ⅲ和XbI I双酶切pSPORT-iNOS，电泳回收3．96kb编码人iNOS cDNA序列．克隆入真核表达栽体pcDNA3的Hind Ⅲ和XbI I位点。结果 重组真核表达载体pcDNA3-iNOS经酶切鉴定证明iNOS基因正向插入真核表达载体中，用人iNOS基因特异性引物，PCR分析重组质粒和进行碱基序列的测定均证明重组质粒中含有人iNOS基因序列。结论 构建的真核表达栽体携有人iNOS cDNA序列，并且含有巨细胞病毒强启动子、ploy(A)加接信号和neo标志基因，具有转染多种哺乳类细胞通用性，可用于iNOS基因的真核表达及调控的研究。     

特发性脊柱侧凸竖脊肌组织中神经元型和诱导型一氧化氮合酶的表达

目的通过比较脊柱侧凸患者胸弯顶点处凸侧、凹侧竖脊肌的神经元型一氧化氮合酶(nNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,探讨竖脊肌在脊柱侧凸中的可能的机制.方法选取2001年8～12月间我院收治的胸椎侧凸畸形患者10例,于术中取顶椎凸侧、凹侧竖脊肌组织各一块,另有2例胸腰椎爆裂骨折行后路固定融合的患者作为正常对照,于T10处取正常竖脊肌组织,采用免疫组织化学和Western印迹检测竖脊肌组织中nNOS、iNOS的表达和定位.结果脊柱侧凸患者脊柱凸侧竖脊肌组织与凹侧竖脊肌组织和正常对照相比,10例患者中9例nNOS的表达明显下调,8例iNOS的表达也有所下调,但iNOS表达总量较低.结论脊柱侧凸患者双侧竖脊肌nNOS、iNOS蛋白表达不均衡,可能对特发性脊柱侧凸发生起促进作用.     

急性白血病一氧化氮合酶表达与多药耐药的关系

目的：探讨急性白血病（AL）患者NOS表达与Pgp/mdr-1的关系。方法：采用免疫组织化学法检测iNOS,eNOS,Pgp表达;RT-PCR检测iNOS基因,mdr-1基因表达。结果：AL患者NOS表达较对照升高, iNOS与Pgp/mdr-1基因表达之间呈高度正相关（r=0.680,P<0.01）。结论：NO对AL多药耐药可能有一定影响。     

瑞舒伐他汀对损伤动脉一氧化氮合成酶的影响

目的观察瑞舒伐他汀对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生及内皮化的影响,探讨瑞舒伐他汀对内皮型一氧化氮合酶（eNOS）及诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的影响,评价瑞舒伐他汀对再狭窄的影响与一氧化氮合成酶的关系。方法 48只大鼠随机分为3组,每组24只,即瑞舒伐他汀组：于术前3d开始连续每天予瑞舒伐他汀5mg/kg？d灌胃;损伤组：予等量生理盐水灌胃;对照组（对照组与损伤组共用大鼠,损伤组取材左侧损伤颈总动脉,对照组取右侧正常颈总动脉）。3组各于术后即刻、7d、14d、28d麻醉并处死大鼠,留取两侧颈总动脉标本,应用组织形态学方法检测内膜增生并进行计算机图像分析,RT-PCR方法检测eNOS及iNOS的表达情况。结果瑞舒伐他汀组内膜面积低于损伤组;损伤组eNOSmRNA术后明显低于对照组,iNOSmRNA表达高于对照组;瑞舒伐他汀组eNOSmRNA表达明显高于损伤组,iNOSmRNA表达明显低于损伤组（p〈0.05）。结论瑞舒伐他汀可抑制内膜增生,对球囊损伤具有修复作用,这可能与瑞舒伐他汀调节一氧化氮合成酶的表达,促进大鼠颈总动脉球囊损伤后再内皮化有关。     

转染人诱导型一氧化氮合酶基因对鼠颈动脉新生内膜增生的抑制作用

目的 研究腺病毒介导的人诱导型NO合酶基因经内膜转染对球囊损伤后鼠颈动脉新生内膜的抑制作用及对血一氧化氮(NO)浓度的影响。方法 建立鼠颈动脉球囊损伤模型，将LacZ重组腺病毒(AdLacZ)和人诱导型一氧化氮合酶基因重组腺病毒(Adinos)在体内分别转染损伤动脉节段，以HE染色、计算机图像处理方法观察转染动脉节段新生内膜增生情况；用硝酸还原酶法测定动脉血中NO浓度。结果 与AdLacZ转染组及未转染组比较，Adinos基因转染组鼠颈动脉血中NO浓度在转染后7天和14天都显著提高；转染4周后未转染组、AdLacZ转染组、Adinos基因转染组的新生内膜面积分别为0．78mm^2、0．75mm^2及0．17mm^2；管腔狭窄率分别为74．9％、79．5％及24。6％。结论 转染Adinos基因可显著提高NO浓度并显著抑制损伤动脉节段新生内膜增生及管腔狭窄。     

诱导型一氧化氮合酶基因在3T3成纤维细胞中的转染和意义

目的观察人诱导型一氧化氮合酶基因(iNOS)转染3T3成纤维细胞的可能性.方法用阳性脂质体将含人诱导型一氧化氮的真核表达载体pcDNA3.0-iNOS转染至3T3细胞,用G418筛选,通过RT-PCR、免疫组化的方法鉴定.结果 pcDNA3.0-iNOS基因转染的3T3细胞有人iNOS基因mRNA的表达,细胞中有iNOS蛋白的表达,空载体和对照组没有表达.结论人iNOS基因能够在3T3成纤维细胞得到稳定转染和表达.     

胰岛素对大鼠脊髓损伤后HSP70、NOS表达的影响及抗凋亡作用

[目的]评估胰岛素对SD大鼠急性脊髓损伤的保护作用,并通过分析热休克蛋白70（HSP70）和一氧化氮合酶（NOS）在损伤脊髓组织中的表达情况来说明胰岛素保护作用的部分机理。[方法]将45只成年SD大鼠随机分为3组：A组（正常对照组,5只）、B组（损伤对照组,生理盐水治疗组,20只）、C组（实验组,胰岛素治疗组,20只）。将B、C组的实验大鼠分别在T9—T11处建立Allen’s重物坠落脊髓打击模型,并按所在组的要求给予不同的治疗。同时在损伤后12 h、1 d、3 d、7 d 4个时间点取材,每次5只,观测脊髓组织中HSP70和NOS的表达情况,以及损伤脊髓组织神经纤维细胞的凋亡情况。[结果]将A组和C组分别与B组比较,凋亡指数的差异均具有显著性意义（P〈0.01）。HSP70表达,A组与B组比较,差异具有显著性意义（P〈0.01）;C组与B组比较,差异具有显著性意义（12 h,P〈0.05;1 d、3 d、7 d,P〈0.01）。NOS表达,A组与B组比较,差异具有显著性意义（P〈0.01）;而C组与B组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）。[结论]胰岛素对损伤脊髓组织具有明显的保护作用,这些作用可能是通过增加HSP70表达和抑制NOS表达来实现的。     

创伤性脑损伤后人脑组织中诱导性一氧化氮合酶蛋白水平的研究

目的:探讨创伤性脑损伤(Traumatic Brain Injury,TBI)后诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide syn-thase,iNOS)在人脑组织中的表达变化及意义。方法:把38例脑损伤患者以及对照组患者分为7组(包括对照组,伤后0￣6h组、6￣12h组、12￣24h组、24￣48h组、48￣72h组,72h以上组)。用尼氏法染色观察脑损伤后神经细胞病理变化过程,免疫组织化学染色方法观察iNOS阳性细胞的表达变化。结果:尼氏法染色发现损伤区神经细胞减少;免疫组化检测发现伤后不同时相iNOS阳性细胞表达增加,伤后12￣24h达到高峰。结论:脑损伤后神经元的数量减少,损伤区及周围皮质出现iNOS阳性神经元,iNOS阳性细胞的表达与伤后时程有关。