p27Kip1,Skp2蛋白在大肠癌表达的临床研究

目的 检测p27Kip1及Skp2在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠癌组织中的表达,探讨p27Kip1,Skp2在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠癌之间的表达差异及其表达与大肠癌临床病理特征的关系.方法 用免疫组化S-P法检测15例正常大肠黏膜、15例大肠腺瘤、50例结直肠癌组织中p27Kip1,Skp2的表达情况.结果 ①p27Kip1在大肠癌组织中的表达明显低于大肠黏膜、大肠腺瘤组(P＜0.05),在各病理分化程度的大肠癌组织中表达差异无显著性(P＞0.05),在有淋巴结转移的大肠癌组织中p27Kip1表达明显低于无淋巴结转移组(P＜0.05),DukesC,D期大肠癌组织中p27Kip1表达明显低于DukesA,B期大肠癌组织(P＜0.05).②Skp2在大肠癌组织中的表达明显高于正常大肠黏膜、大肠腺瘤组(P＜0.05),在低分化大肠癌组织中的表达明显高于高分化大肠癌组织(P＜0.05),在有无淋巴结转移大肠癌组织中表达差异无显著性(P＞0.05),在DukesA,B期及DukesC,D期大肠癌组织表达差异无显著性(P＞0.05).③在大肠癌中p27Kip1与Skp2表达呈显著负相关(r=-0.470,P＜0.01).结论 ①p27Kip1表达的降低及Skp2表达的升高与大肠癌的发生有一定关系.②p27Kip1的低表达与大肠癌淋巴结转移、Dukes分期存在相关性,p27Kip1低表达可能合并淋巴结转移或高Dukes分期.③Skp2在低分化大肠癌组织中高表达,Skp2可作为大肠癌分化程度的辅助判断指标.④在大肠癌组织中Skp2与p27Kip1的表达呈负相关.     

p57Kip2在鼻咽癌中的表达及意义

目的揭示p57Kip2在鼻咽癌中的表达情况和临床意义,并分析其可能的机制。方法收集广州军区武汉总医院耳鼻喉科2005-06/2010-05月收治的鼻咽癌组织标本133例,对照组选取相同时间段该科室采集的鼻咽黏膜慢性炎症组织43例,实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,Realtime-PCR）法检测标本中p57Kip2以及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tension homolog deleted on chro-mosome ten,PTEN）的表达情况,分析p57Kip2在鼻咽癌中表达的意义及其与PTEN表达的相关性。结果 p57Kip2在鼻咽癌组织中的表达低于对照组织（P〈0.01）,p57Kip2水平与鼻咽癌转移呈显著负相关（P〈0.01）,但是与患者性别、年龄等因素无关（P〉0.05）,且p57Kip2在鼻咽癌中的表达与PTEN水平正相关。结论 p57Kip2可能在抑制鼻咽癌侵袭转移中发挥了重要作用,其机制可能是通过促进抑癌基因PTEN的表达。     

右半结肠癌p27Kip1蛋白的表达及预后意义

目的:研究p27Kip1蛋白在右半结肠癌组织中的表达并探讨其预后应用价值.方法:通过免疫组化S-P方法对76例右半结肠癌组织标本进行p27Kip1蛋白表达的检测.结果:p27kip1染色阳性40例,占52.6% .p27kip1 蛋白水平与右半结肠癌临床分期、浸润深度、淋巴结转移、病理分级及复发均显著相关.结论:检测p27Kip1表达为判断右半结肠癌恶性程度及预后提供有价值的分子生物学指标.     

p57Kip2在水泡状胎块组织中的表达及意义

目的:观察p57Kip2在正常绒毛及水泡状胎块组织中的表达,探讨其在水泡状胎块诊断及鉴别诊断中的作用及意义。方法:应用免疫组织化学方法检测p57Kip2在完全性水泡状胎块(CHM)、部分性水泡状胎块(PHM)以及正常绒毛组织(HA)中的表达。结果:28例CHM中,2例表达p57Kip2;14例PHM中,12例表达p57Kip2;10例HA中,9例表达p57Kip2。CHM与PHM、HA组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:p57Kip2可以作为CHM、PHM鉴别诊断的重要参考指标。     

大肠癌组织PBR、p27Kip1、Cyclin E的表达及临床意义

目的观察大肠癌组织及正常结直肠组织标本中外周型苯二氮受体(PBR)、p27Kip1、Cyclin E的表达,探讨大肠癌可能的临床预后影响因素。方法收集85例手术治疗大肠癌组织及15例正常结直肠组织标本,进行免疫组化染色,观察p27Kip1、Cyclin E蛋白的表达;收集40例大肠癌患者的癌组织及10例正常结直肠组织新鲜冰冻标本,蛋白质印迹分析检测PBR、p27Kip1和Cyclin E蛋白表达,RT-PCR检测PBR、p27Kip1、Cyclin E mRNA的表达。结果大肠癌组织中PBR、Cyclin E高表达,p27Kip1低表达,且Cyclin E与p27Kip1蛋白表达负相关;Cyclin E阴性和p27Kip1阳性患者的5年生存率明显增加;p27Kip1和Cyclin E的表达进入Cox风险比例模型。结论大肠癌组织PBR、p27Kip1、Cyclin E异常表达。     

鼻咽癌中p27Kip1蛋白表达及其临床意义

目的 本研究旨在检测p27Kip1蛋白在鼻咽癌组织中的表达,探讨它在鼻咽癌发生发展中的作用机制,为阐明鼻咽癌发生的分子机制提供实验依据,为鼻咽癌的诊断和预后的评估提供新指标.方法 收集广州医学院第二附属医院病理科2002年～2003年存档的60例手术活检切取的鼻咽癌组织组织蜡块,与30例非肿瘤鼻咽组织石蜡标本作比较.应用免疫组织化学技术(SABC)检测鼻咽癌组织中p27Kip1蛋白的表达.结果 检测发现p27Kip1蛋白在鼻咽癌细胞核和细胞浆中均有表达.在细胞核表达阳性率为46.7%,非肿瘤鼻咽组织胞核表达为86.7%,前者明显降低,p<0.01;而在细胞浆中表达丰富,阳性率为68.3%,后者为20%,显著高于非肿瘤鼻咽组织的胞浆表达,p<0.01.鼻咽癌中p27Kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的胞核和胞浆表达与定位,可见p27Kip1蛋白胞核表达与临床病理的关系更为密切.结论 与非肿瘤鼻咽组织相比,p27Kip1蛋白为细胞核低表达、细胞浆高表达.鼻咽癌中p27Kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的错误的核浆定位,其在细胞核中表达的减少或丢失可能与鼻咽癌的恶性发展有关.研究提示p27Kip1蛋白的异常表达和定位可能涉及鼻咽癌的分期和转移等;p27Kip1蛋白核表达可作为预测鼻咽癌病期和转移的新指标.     

肝细胞癌p53及c-myc mRNA的表达

目的探讨p53及cmycmRNA表达在原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)发生发展过程中的作用。方法应用原位杂交方法检测63例HCC癌及其癌周组织中p53和cmyc基因mRNA的表达状况。结果p53基因mRNA在HCC中阳性表达率显著高于癌周组织(P<0.05),癌周组织中p53基因表达仅见于癌周增生结节,癌周肝硬化及正常肝组织内未见p53mRNA阳性表达;cmyc基因mRNA的阳性表达率在HCC与癌周增生结节中相近(P>0.05),且两者均显著高于癌周肝硬化和正常肝组织(分别为P<0.05,P<0.01);p53及cmyc基因mRNA表达均与HCC分化程度呈显著正相关,低分化组p53及cmyc基因的mRNA阳性表达率均显著高于高分化组(P均<0.05)。结论p53及cmyc基因mRNA过度表达可能参与了人肝细胞癌的发生发展过程。     

p14和p57蛋白在膀胱移行细胞癌中表达的意义

目的：探讨p14和p57在膀胱癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：应用免疫组化SP法检测62例膀胱移行细胞癌和20例癌旁正常组织中p14、p57蛋白的表达情况。结果：p14蛋白膀胱癌中的阳性表达率为25.8%（16/62）,在癌旁正常组织中的阳性表达率为95.0%（19/20）,两者相比差异有统计学意义（P〈0.001）。p14蛋白的表达与膀胱癌的病理分级、临床分期均成负相关。p57蛋白膀胱癌中的阳性表达率为41.9%（26/62）,在癌旁正常组织中的阳性表达率为100%（20/20）,两者相比差异有统计学意义（P〈0.001）。p57蛋白的表达与膀胱癌的病理分级和临床分期均成负相关。p14和p57蛋白在膀胱癌中的表达没有相关性（P=0.541）。结论：p14和p57蛋白的异常表达在膀胱癌的发生发展中可能起着不同的作用。     

应用RT-PCR分析食管癌组织中lrig1基因的表达

目的:观察lrig1基因在食管鳞癌中的表达及意义.方法:采用RT-PCR检测36例食管鳞状细胞癌癌组织、相应的癌旁组织和远癌组织中lrig1 mRNA的表达情况.PCR产物经凝胶电泳,比较3种组织中lrig1与GAPDH条带的灰度值之比,半定量分析lrig1 mRNA的表达水平.结果:36例食管癌组织中有15例(42%)lrig1 mRNA检测到阳性表达,21例(58%)lrig1 mRNA表达缺失,其阳性表达率低于相应的癌旁组织(92%)和远癌组织(100.0%,P＜0.05);癌组织中lrig1 mRNA表达水平(0.76±0.22)低于相应的癌旁组织(0.89±0.33)和远癌组织(1.13±0.40);随着肿瘤分化程度的升高,lrig1 mRNA在癌组织中的阳性表达率也增加(P＜0.05),但lrig1 mRNA表达缺失与食管癌临床分期(TNM),淋巴结有无转移和病理类型均无统计学差异(P＞0.05).结论:lrig1 mRNA在食管癌组织中存在表达缺失和低表达,提示lrig1基因在食管癌的发生发展中可能具有抑癌基因的作用.     

p57~（Kip2）、Ki-67在鉴别孕早期葡萄胎和水肿性流产中的应用价值

目的探讨p57Kip2和Ki-67蛋白在妊娠早期鉴别诊断水肿性流产和完全性葡萄胎、部分性葡萄胎的应用价值。方法免疫组织化学染色法检测早期妊娠的12例水肿性流产、22例完全性葡萄胎和16例部分性葡萄胎石蜡组织切片中p57Kip2蛋白和Ki-67蛋白的表达。结果水肿性流产、完全性葡萄胎和部分性葡萄胎组织中,p57Kip2蛋白的阳性表达率分别为83.3%（10/12）、0（0/22）、81.3%（13/16）,完全性葡萄胎组阳性表达率与部分性葡萄胎组和水肿性流产组比较,组间差异有显著统计学意义（P〈0.01）,部分性葡萄胎组与水肿性流产组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;Ki-67蛋白的阳性表达率分别为8.3%（1/12）、72.7%（16/22）、43.8%（7/16）,完全性葡萄胎组阳性表达率与部分性葡萄胎组和水肿性流产组比较,组间差异有显著统计学意义（P〈0.01）,部分性葡萄胎组与水肿性流产组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论联合检测p57Kip2和Ki-67蛋白对鉴别诊断早期妊娠中水肿性流产、完全性葡萄胎、部分性葡萄胎有重要临床应用价值。     

野生型及Thr187突变型p27Kip1 蛋白对HepG2细胞周期的影响

目的p27kip1氨基端第187号位置的苏氨酸(Thr187)磷酸化位点是该蛋白分子中重要的磷酸化位点,探讨人工诱变该位点苏氨酸为丙氨酸(T187A)后对肝癌细胞株HepG2细胞周期以及细胞增殖的影响。方法应用脂质体转染法将含人野生型和突变型p27kip1基因质粒DNA转染HepG2细胞,免疫细胞荧光化学检测p27kip1蛋白的表达,并用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果野生型和突变p27kip1基因转染HepG2细胞后均能在细胞核表达,并且可以明显抑制细胞增殖。p27kip1基因转染的HepG2细胞发生G0期阻滞,且突变型G0期阻滞作用明显强于野生型(P<0.01)。结论转染的p27kip1能够在HepG2细胞过度表达并能抑制HepG2细胞的增殖,Thr187磷酸化位点的人工诱变可能有利于p27kip1蛋白促使细胞G0期阻滞。     

p27Kip1基因shRNA表达质粒的构建鉴定及功能研究

目的 构建细胞周期性激酶抑制剂p27Kip1的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响.方法 设计有发夹状结构的3条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照.转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGenSil-1质粒,构建重组质粒pGenSil-1/p27Kip1-1、pGenSil-1/p27Kip1-2、pGenSil-1/p27Kip1-3、pGenSil-1/HK.转化DH5α菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定.以脂质体法将4个重组质粒分别导入牛角膜内皮细胞.转染后48 h以Western blot法检测p27Kip1蛋白水平及MTT法检测各实验组和对照组细胞增殖情况.结果 酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功.3个实验组p27Kip1蛋白水平分别下降了66.41%、61.51%、71.32%,shRNA可显著促进牛角膜内皮细胞增殖.结论 成功构建了针对p27Kip1的RNA干扰表达载体.     

p27Kip1、cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的 研究口腔鳞癌组织中p27Kip1及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达以及与临床生物学特性和细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化方法检测53例原发性口腔鳞癌组织及20例正常口腔黏膜组织中p27Kip1及cyclin D1蛋白的表达水平,Ki-67作为细胞增殖活性的指标也被检测.结果 p27Kip1在口腔鳞癌中阳性表达率显著低于正常口腔黏膜组织(P＜0.05),cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中阳性表达率显著高于正常口腔黏膜组织(P＜0.05) ;cyclin D1蛋白过表达与临床分级及淋巴结转移有关(P＜0.05),p27Kip1缺失表达与淋巴结转移有关(P＜0.05);p27Kip1负表达和cyclin D1过度表达与细胞增殖评价因子Ki-67呈负相关(r=-0.587和-0.667,P＜0.05).结论 在鳞癌的发生发展过程中,p27Kip1的缺失表达和cyclin D1的过度表达两者可能单独或共同参与.p27Kip1的缺失可能还与口腔鳞癌细胞的分化、转移及增值和预后有关.     

鼻咽癌中p27^Kip1蛋白表达及其临床意义

目的本研究旨在检测p27^Kip1蛋白在鼻咽癌组织中的表达,探讨它在鼻咽癌发生发展中的作用机制,为阐明鼻咽癌发生的分子机制提供实验依据,为鼻咽癌的诊断和预后的评估提供新指标。方法收集广州医学院第二附属医院病理科2002年～2003年存档的60例手术活检切取的鼻咽癌组织组织蜡块,与30例非肿瘤鼻咽组织石蜡标本作比较。应用免疫组织化学技术（SABC）检测鼻咽癌组织中p27^Kip1蛋白的表达。结果检测发现p27^Kip1蛋白在鼻咽癌细胞核和细胞浆中均有表达。在细胞核表达阳性率为46.7%,非肿瘤鼻咽组织胞核表达为86.7%,前者明显降低,p〈0.01;而在细胞浆中表达丰富,阳性率为68.3%,后者为20%,显著高于非肿瘤鼻咽组织的胞浆表达,p〈0.01。鼻咽癌中p27^Kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的胞核和胞浆表达与定位,可见p27^Kip1蛋白胞核表达与临床病理的关系更为密切。结论与非肿瘤鼻咽组织相比,p27^Kip1蛋白为细胞核低表达、细胞浆高表达。鼻咽癌中p27^Kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的错误的核浆定位,其在细胞核中表达的减少或丢失可能与鼻咽癌的恶性发展有关。研究提示p27^Kip1蛋白的异常表达和定位可能涉及鼻咽癌的分期和转移等;p27^Kip1蛋白核表达可作为预测鼻咽癌病期和转移的新指标。     

胃癌中P27Kip1、P53表达与其浸润、转移和预后的关系

目的研究胃癌组织中P27Kip1和P53的表达与胃癌浸润、转移和预后的关系.方法用免疫组化(二步法)检测100例胃癌组织中的P27Kip1蛋白和P53蛋白的表达.结果P27Kip1蛋白阳性表达检测率44%;P53蛋白阳性表达检测率49%.在胃癌浸润浆膜组、淋巴结转移组和5年内死亡组中P27Kip1低表达与P53高表达均与相应组比较差异有显著性(P<0.05).单变量生存分析结果显示P27Kip1高表达组5年生存率为70.59%,显著高于低表达组54.55%和阴性组26%;P53高表达组5年生存率为19.23%,显著低于低表达组43.75%和阴性组53.19%.多变量Cox回归模型分析显示P27Kip1、P53均是判断胃癌独立的预后指标,但低P27Kip1表达对患者预后差的相对危险度(RR=3.06)显著大于高P53表达对患者预后差的相对危险度(RR=2.33).结论P27Kip1低表达与P53高表达的癌细胞常更能浸润与转移,使患者生存率明显降低.P27Kip1和P53是判断胃癌预后的独立指标,其中P27Kip1表达降低对胃癌预后的影响作用更大.     

非小细胞肺癌p57/Kip2和cyclin E的表达及与临床病理和预后的相关性

目的探讨p57／Kip2和cyclin E在非小细胞肺癌中的表迭情况。方法选取132例非小细胞肺癌手术切除标本，采用ABC法进行了免疫组织化学染色。结果p57／Kip2和cyclin E的阳性表达率分别为59．8％和43．9％。p57／Kip2的表迭与肿瘤的侵袭性显著相关，低分化（P=0．0001）、肿瘤体积较大（P=0．0064）、淋巴结转移（P=0．0252）、高分期（P=0．0138）时，p57／Kip2的表达显著降低。cyclin E的过表迭与肿瘤的分化程度（P=0．0476）、淋巴管浸润（P=0．0114）、肿瘤体积（P=0．0210）和高TNM分期（P=0．0176）相关。患者的生存期与p57／Kip2和cyclin E的表迭均有显著的相关性。结论p57／Kip2的低表迭和cyclin E的过表达可能在非小细胞肺癌的发生发展中起重要作用，且可能提示预后不良。     

Effect of p27Kip1 Inhibition on Proliferation of Bovine Corneal Endothelial Cells by RNA Interference

Three plasmids （pGenesil-P1, pGenesil-P2, pGenesil-P3） with different p27Kip1-shRNA sequences were designed and synthesized. Their effects on the proliferation of bovine corneal endothelial cells （bCEC） were investigated. Plasmid expressing irrelevant shRNA with a random combination was used as negative control （pGenesil-HK）. The recombination of four plamids was confirmed by restrictive enzyme digestion and sequence analysis. The expression of mRNA and protein of p27Kip1 was detected by RT-PCR and Western blotting after stable transfection. The expressions of p27Kip1 mRNA and p27Kip1 protein of pGenesil-P1 group, pGenesil-P2 group and pGenesil-P3 group were all lower than those in the pGenesil-HK group and the blank group （non-transfected group）, pGenesil-P3 had the strongest inhibitory effect and was selected for the next steps. The proliferation rates of the pGenesil-P3 group, the pGenesil-HK group and the blank group were assessed by MTT. The influence of shRNA-p27Kip1 on bCEC cell cycle was detected by flow cytometry （FCM）. Compared with the control groups, the proliferation rate of the pGenesil-P3 group was increased significantly, and the ratio of S-phase also increased. It is concluded that shRNA-p27Kip1 could down-regulate the expression of p27Kip1 effectively and increase the proliferation of bCEC. RNA interference （RNAi） may be an effective means to promote the proliferation of CEC.