促性腺激素释放激素拮抗剂对大鼠睾丸支持细胞雄激素受体和Fas配 …

本实验利用注射促性腺激素释放激素拮抗体剂（ＧｎＲＨ－Ａ）引起睾丸生精细胞程序化死亡的大鼠模型，用地高辛标记的大鼠雄激素受体和Ｆａｓ配体的ＲＮＡ探针对大鼠睾丸石蜡发片进行原位杂交，观察雄激素受体和Ｆａｓ配本基因在生精细胞凋亡中的变化。结果显示，ＧｎＲＨ－Ａ处理后曲细精管有退行性变，原位杂交表明此时Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞的雄激素受体表达明显减低，而Ｆｓａ配体表达显著升高。提示Ｆａｓ配体的表达可能与生精上皮     

大鼠颌下腺雄激素受体的免疫定位及与促性腺激素释放激素受体的共定位关系

目的 :研究大鼠颌下腺雄激素受体 (AR)的存在及其与促性腺激素释放激素受体 (GnRHR)的免疫共定位关系 ,证明颌下腺是雄激素和GnRH的一个靶器官。　方法 :制备大鼠颌下腺石蜡连续切片 ,以免疫组化SABC法分别研究AR和GnRHR的免疫定位。　结果 :大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有AR免疫反应性物质存在。阳性物质分布于胞质内 ,胞核阴性。邻片双标记染色结果显示 :GnRHR免疫反应性物质也存在于上述细胞内。阳性物质分布在胞质 ,胞核阴性。　结论 :大鼠颌下腺存在AR ,是雄激素的靶器官 ,而且 ,雄激素和GnRH在颌下腺有相同的靶细胞 ,雄激素对颌下腺可能具有潜在的生理调节功能     

大鼠颌丰腺雄激素受体的免疫定位及与促性腺激素释放激素受体的共定位关系

目的：研究大鼠下腺雄激素受体（AR）的存在及其与促性腺激素释放激素受体（GnRHR）的免疫共定位关系，证明颌下腺是雄激素和GnRH的一个靶器官。方法：制备大鼠颌下腺石蜡连续切片，以免疫组化SABC法分别研究AR和GnRHR的免疫定位。结果：大鼠颌下腺奖浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有AR免疫反应性物质存在。阳性物质分布于细胞内，胞核阴性。邻片双标记染色结果显示：GnRHR免疫反应性物质也存在于上述细胞内。阳性物质分布在胞质，胞核阴性。结论：大鼠颌下腺存在AR，是雄激素的靶器官，而且，雄激素和GnRH在颌下腺有相同的靶细胞，雄激素对颌下腺可能具有潜在的生理调节功能。     

成年糖尿病大鼠睾丸、附睾和前列腺内雄激素受体的表达研究

目的:观察糖尿病大鼠睾丸、附睾和前列腺内是否存在雄激素受体(AR)的异常表达。方法:用链脲菌素(STZ)诱导成年大鼠糖尿病模型,实验分正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)及胰岛素治疗组(ID组),分别以Northern印迹及放射配基法检测睾丸、附睾和前列腺内AR的mRNA及蛋白质水平。结果:D和ID组血清睾酮水平低于C组(P<0.05);附睾内D和ID组AR的mRNA水平低于C组(P<0.05),睾丸和前列腺内D组AR的蛋白质水平低于C组(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠睾丸、附睾和前列腺内AR的表达降低,从而削弱了雄激素的生物利用度,这可能是导致患病大鼠性与生殖功能障碍的原因之一。     

雄激素对前列腺癌细胞PAR基因表达的影响及其机制

目的观察在前列腺癌特异性高表达的癌基因前列腺雄激素调节基因（PAR）对雄激素的反应及其机制，探讨通过抑制PAR基因治疗雄激素非依赖性前列腺癌的可能性。方法用细胞计数检测双氢睾酮对LNCaP、PC3细胞增殖的刺激效应，以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测双氢睾酮对LNCaP、PC3细胞PAR基因mRNA表达水平的影响及双氢睾酮和其拮抗剂联合作用对LNCaP细胞PAR基因mRNA表达水平的影响。结果低浓度（0．001～1nmol／L）双氢睾酮刺激可促进LNCaP细胞增殖，且刺激效应随双氢睾酮浓度升高而增强，在0．1nmol／L浓度时达最大，细胞计数为（27、54±0．71）×10。爪／孔，为对照组（16．13±1．03）×10。爪／孔的（170．74±0．78）％；同时使PAR基因mRNA表达水平上调在0．1nmol／L浓度时最高，为对照组的（272．42±8．24）％，P〈0．05）；高浓度（10、100nmol／L）双氢睾酮则抑制其增殖和PAR基因表达，在10nmol／L和100nmol／L浓度，细胞计数分别为（12．02±0．41）×10。／孔、（11．13±1．92）×10^4／孔（P〈0．05）；PAR基因mRNA表达水平分别为对照组的（76．64±2．47）％和（52．97±1．07）％，（P〈0．05）。这一调节效应可以为氟他胺所阻断。双氢睾酮对PC3细胞生长及PAR基因mRNA表达无明显影响（P〉0．05）。结论PAR可能是雄激素．雄激素受体通路下游的前列腺癌特异性癌基因，有望成为雄激素非依赖性前列腺癌基因和药物治疗的潜在靶点。     

Fas配体阳性睾丸细胞和环孢素A对移植胰岛细胞存活起协同保护作用

目的　探讨Fas配体 (FasL)阳性睾丸细胞与胰岛细胞共移植后联用环孢素A(CsA)对移植胰岛细胞存活的协同保护作用。　方法　将同种大鼠胰岛细胞与睾丸Sertoli细胞同侧或异侧共移植于 4 1只糖尿病SD大鼠受体肾包膜下。实验大鼠分 7组 ,术后酌用CsA ,观察各组大鼠移植物存活情况。　结果　单纯胰岛细胞移植 (对照组 )后胰岛细胞的平均存活期为 (4 6± 1 1)d ,加用CsA存活期明显延长至 (2 1 8± 4 7)d(P <0 0 1)。与 1× 10 7个睾丸细胞同侧共移植的胰岛细胞平均存活期超过 (5 7 5± 4 0 )d ,但如移植前先封闭睾丸细胞表达的FasL后 ,移植的胰岛细胞平均存活期缩短为(5 8± 2 6 )d。胰岛细胞与 1× 10 5个睾丸细胞分别共移植于两侧肾包膜下 ,术后联用CsA ,胰岛细胞的平均存活期超过 (5 5 0± 6 5 )d ,与 1× 10 7个睾丸细胞同侧共移植的存活期相近 ,但比对照组或CsA组则显著延长 (P <0 0 1)。当胰岛细胞与 1× 10 6个睾丸细胞分别共移植且不用CsA时 ,胰岛细胞存活期平均仅为 (11 5± 3 1)d ,但仍较对照组延长 (P <0 0 5 )。　结论　表达FasL的睾丸细胞与CsA联用后可通过不同机制抑制胰岛细胞移植排斥反应而起到全身的协保护作用。     

胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/Fas配体表达在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的作用

目的探讨大鼠胰腺移植后细胞凋亡的变化、Fas/Fas配体(FasL)的表达及其与急性排斥反应的关系。方法实验分为同基因移植组和异基因移植组。分别于术后第3、5、7天处死受体,取移植胰腺,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI),应用免疫组织化学及Westernblot检测Fas/FasL的表达。结果细胞凋亡主要发生在胰腺腺泡细胞,同基因移植组有散在的腺泡细胞凋亡,AI在术后无明显变化,Fas/FasL表达阴性;异基因移植组在术后第3、5、7天胰腺腺泡细胞凋亡发生率逐渐增加(28.40±3.75,39.40±5.59,57.30±8.53,P<0.01),Fas/FasL表达逐渐增强,AI与急性排斥反应程度呈显著正相关(rs=0.932,P<0.01)。结论胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/FasL表达在胰腺移植急性排斥反应中发挥重要作用,凋亡指数对胰腺移植急性排斥反应的诊断有一定的参考价值。     

雄激素对体外成骨细胞QPG及其配体基因表达的影响

目的检测小鼠胎鼠成骨细胞体外培养并将不同浓度雄激素干预后,OPG和OPGLmRNA表达的变化,探讨雄激素在成骨细胞介导破骨细胞分化、活化过程中的调控机制。方法分离得到小鼠胎鼠颅盖骨成骨细胞,培养传代并选择第二代细胞用于实验;对第二代成骨细胞实施含10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L3种浓度雄激素的培养液干预;抽提细胞RNA,采用RT-PCR方法半定量观察成骨细胞中OPG和OPGL基因mRNA表达的变化。结果实验选用的各浓度组均未出现细胞毒性反应,雄激素干预使成骨细胞中OPG基因表达上调,而OPGL与OPG比率随时间呈递减趋势。结论雄激素可以特异性地在转录水平调节成骨细胞中OPG和OPGL基因的表达。     

雌激素及雄激素对去睾丸大鼠骨质疏松 形成的干预研究

目的　研究雌、雄激素对去睾丸大鼠腰椎、股骨颈、粗隆部、股骨近端的骨密度及股骨颈骨微结构的变化。方法　选用 39只 3～ 4月龄的Wistar雄性大鼠 ,随机分成假去睾丸组 (Sham)、去睾丸组 (Orch)、去睾丸 +雌激素组 (Orch +E2 )和去睾丸 +雄激素组 (Orch +T) ,同条件下饲养 1 8w。处死前用HologicQDR 2 0 0 0 +DEXA测量大鼠腰椎、股骨颈、粗隆部、股骨近端的骨密度。处死前第 1 4 ,1 3d和第 3 ,2d行骨荧光标记 ,大鼠处死时收集血清行T和E2 放免检测 ,同时取左侧股骨近端行塑料包埋的骨组织切片及组织形态计量学分析。结果　Orch组大鼠 1 8w后腰椎、股骨颈、粗隆部、股骨近端的骨密度均下降 ,与Sham组比较差异有显著性 (P <0 0 1 )。Orch +E2 组大鼠的 4个部位骨密度均最高 ,但与Sham组比较无差异 ,Orch组股骨颈的骨小梁面积百分率和骨小梁数目与Sham组比较均减少 (P<0 0 1 ) ,骨小梁分离度增加 (P <0 0 1 ) ;Orch +E2 和Orch +T组大鼠的各静态参数维持在Sham组水平 ;Orch组的骨荧光标记周长百分率、骨形成率BFR/BS、BFR/BV和BFR/TV均增加 (P <0 0 1 ) ,代表骨吸收的骨小梁面积破骨细胞数和骨小梁周长破骨细胞数均增加 (P <0 0 1 ) ;Orch +E2 和Orch +T组大鼠的各动态参数维持在Sham组水平。结论　     

雄激素受体在睾丸内的分布及与生精调节的关系

睾丸间质细胞合成和分泌的雄激素主要有睾酮（testosterone，T）、双氢睾酮。（dihydrotestosterone，DHT）、脱氢异雄酮（dehydroisoandrosterone，DHIA）和雄烯二酮（androstenedione）。在各种雄激素中，双氢睾酮的生物活性最强，睾酮次之。雄激素的作用广泛，在雄激素的诱导下，含有Y染色体的胚胎向男性化方面分化，促进内生殖器发育，而双氢睾酮则主要刺激外生殖器的发育。     

Suppression of androgen receptor gene expression by testosterone undecanoate in rats

Long--termtestosteroneisanidealmalecontraceptive,whichdoesnotneedtosupplyandrogentomaintainlibidoandsexfunctionasLHRHanalogueorprogestogen.WHO(1990)organizedamultiplecenterclinicaltrial.Thetrialrecuited217healthyfertilemen,whowereinjected200mgtestosteroneenanthate(TE)weekly.After12monthsexposure,azoospermiawasinducedin157men.Therewasoneofpregnancyinl,486effectivemonths(0.8/100womenyear)[IJ.Testosteroneundecanoate(TU)isalong--termtestosterone,whichcanmaintainabout60dayswithonedose.Itisapr…     

Fas配体mRNA在正常睾丸组织及精原细胞瘤中的表达

为明确Fas配体mRNA在正常睾丸组织及精原细胞瘤中的表达情况，采用原位杂交，反转录PCR（RT－PCR）法检测正常睾丸组织8例Fas配体mRNA的表达，采用原位杂交法检测33例精原细胞瘤组织中的Fas配体mRNA的表达。结果RT－PCR方法证明正常人睾丸组织中有Fas配体mRNA的表达；原位杂交法证明8例正常睾丸组织中均有Fas配体mRNA的表达，且表达局限于睾丸Sertoli细胞，正常生殖细胞中无Fas配体mRNA的表达；原位杂交方法在33例精原细胞瘤组织中检测到Fas配体mRNA表达阳性11例，阳性率为33．33％，多呈现小片状或点状表达。提示Fas配体mRNA仅表达于人类睾丸的Sertoli细胞中，Fas配体mRNA在精原细胞瘤组织中的出现可能是精原细胞瘤形成及进展的原因。     

FasL逆转录病毒转移体系的建立及其在肝癌细胞中的表达

目的　研究Fas/FasL系统的生物学功能,探讨转FasL基因治疗肿瘤的可行性。方法将大鼠FasL全长cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,获得FasL正向单拷贝插入子pLXSN/FasL     

血管内皮生长因子和Fas配体共表达质粒的构建及其在细胞中的表达

目的 构建血管内皮生长因子(VEGF)和Fas配体(FasL)共表达质粒，并鉴定其在细胞中的表达情况。方法 根据入VEGFl65和FasL的cDNA序列分别设计、合成引物，经扩增、连接、酶切、插入等得到重组表达质粒pCI-VEGFl65和pCI-FasL。再以此为基础构建得到编码FasL和VEGFl65的共表达质粒pCI-FasL-IRES-VEGFl65(简称pCI-FIV)。用脂质体将各表达质粒(2μg)转染NIH3T3细胞，用流式细胞术、ELISA和Western-blot检测其FasL和VEGFl65表达情况。结果 细胞裂解液的Western-blot检测表明，重组质粒pCI-VEGFl65和pCI-FIV能表达VEGFl65。分子量与预期kD一致。细胞培养上清的ELISA检测表明，pCl-VEGFl65和pCI-FIV均能分泌性表达vEGFl65。流式细胞仪检测表明，质粒pCI-FasL、pCI-FIV稳定转染的NIH3T3细胞表面的绿色荧光阳性率分别为98．0％和96．5％，而空载体转染细胞的阳性率为3．2％。ELISA检测结果显示，pCI-FasL、pCI-FIV转染NIH3T3细胞培养上清中均存在可溶性FasL。结论 成功构建的FasL和VEGFl65共表达质粒可成功转染细胞并能分泌性表达VEGFl65，同时可表达膜结合形式的FasL和可溶性FasL，为将来血管内膜增生的基因治疗奠定了基础。     

Fas配体表达对同种胰岛移植的影响

目的探究睾丸细胞FasL表达能否对共移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用以及胰岛细胞FasL基因转染对同种胰岛移植的影响.方法将同种大鼠胰岛及睾丸细胞同时移植于糖尿病受体,重组腺病毒AdV-FasL感染胰岛细胞后移植,观察移植物存活情况、胰岛功能,并检测移植物内浸润淋巴细胞以及基因转染胰岛细胞凋亡情况.结果单纯移植胰岛组平均存活期为(6.3±0.56)?d.与胰岛细胞同时移植的睾丸细胞数增加至1×107时,存活期大于50?d(P＜0.05).表达FasL的睾丸细胞在移植物内诱导浸润淋巴细胞凋亡.FasL基因转染组出现排斥加速,存活期缩短至(3.4±0.24)?d.FasL转染的胰岛细胞在移植后24h见FasL表达,48h表达增强,移植后FasL转染胰岛细胞凋亡.结论表达FasL的睾丸细胞与胰岛同时移植可诱导活化的淋巴细胞凋亡,使胰岛移植物获得免疫豁免、存活期延长,但通过FasL基因转染使胰岛细胞直接表达FasL引起胰岛细胞凋亡和粒细胞浸润,导致排斥加速.     

Response of the testis to gonadotrophin replacement in young hypophysectomized vs. gonadotrophin-releasing hormone antagonist-treated rats

Summary.  We have studied the response of atrophic Leydig cells to gonadotrophin replacement in young hypophysectomized (HX) and GnRH antagonist (GnRH-ANT)-treated rats. Hypophysectomy was performed at 28 days of age. Age-matched rats were treated with GnRH-ANT from 28 to 51 days of age. From 45 to 51 days of age, animals were injected with 5IU recFSH, 10 IU hCG or vehicle. Body and testicu-lar weights, as well as the diameter of the seminiferous tubules were significantly higher in GnRH-ANT-treated than in HX rats. Both recombinant FSH and hCG treatments induced a similar increase in testicular weight and tubule diameter in HX and GnRH-ANT-treated rats. However, hCG treatment induced a significantly higher increase in Leydig cell size in HX (3.2–fold) than in GnRH-ANT-treated (1.4–fold) rats. These results suggest that the response of atrophic Leydig cells to gonadotrophin supplementation was partially inhibited in the presence of GnRH antagonist, whereas Sertoli cell-mediated responses seem not to be affected.     

食管癌的Fas配体表达及意义

目的 检验Fas配体在食管癌细胞的表达,及其与食管癌浸润淋巴细胞、与食管癌浸润与转移的关系和对病人术后生存的影响。方法 采用免疫组化方法检测30例原发食管癌标本中Fas配体的表达,用CD45标记肿瘤浸润巴细胞。结果 76.6％的标本有Fas配体的表达,且不同TNM分期的病人表达水平差异显著,Fas配体的表达与食管癌中肿瘤浸润淋巴细胞数呈负相关,但Fas配体的表达与病人术后生存无显著关系。结论 Fas配体的表达有利于食管癌逃避免疫攻周,有利于其浸润与转移。     

Developmental expression of c-kit protooncogene in the rat testis

IntroductionInmammalianembryos,thegermcelllinebeginswithprimordialgermcelIs,andinmales,primordialgermcellsbecomegono-cytes,thece1lprecursorsofthespermatogoni-a.ThedevelopmentofanormaltestisdependsupontheproliferationofprimordialgermcellsandtheiraggregationwithSertolicellprecur-sorsLl:.Theseeventshavebeenshowntobeassociatedwiththeexpressionofthec-kitProtooncogenemappedtothe"whitespottinglocus(W)~ofthemouse[2,3j.Thec-kitPro-tooncogeneencodesatransmembranetyrosinekinasereceptor(4,5).Thestructu…     

锤头状核酶阻断雄激素受体基因表达的研究

目的　探讨核酶 (RZ)在细胞水平调节雄激素受体 (AR)基因表达的作用。方法　设计并合成针对AR的锤头状核酶序列 ,分子克隆技术构建活性核酶和无活性核酶表达载体 ,脂质体介导下转染雄激素受体表达阳性细胞株T47D。转染第 1～ 3天 ,应用免疫组织化学和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测细胞内AR基因表达水平。结果　AR活性核酶表达载体转染后 ,T47D细胞ARmRNA水平降低 2 2 .4%～ 50 .7% (P <0 .0 5) ,AR蛋白阳性细胞减少 7.1 0 %～1 1 .90 % (P <0 .0 5)。而无活性核酶对细胞AR基因表达差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　成功构建AR锤头状核酶表达载体 ,能特异性切割ARmRNA ,阻断雄激素受体基因表达