miR-146a-5p靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6抑制缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬

目的探究miR-146a-5p靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬的影响。方法将mimic-NC质粒、miR-146a-5p mimic质粒、pc-TRAF6质粒、miR-146a-5p mimic质粒联合pc-TRAF6质粒分别转染N2a细胞,然后构建氧、葡萄糖剥夺(OGD) 1 h/再灌注(R) 24 h模型进行体外实验观察。另取雄性C57BL/6小鼠90只,分为6组(n=15),将上述不同的质粒分别注射至小鼠右脑室,制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型进行体内实验观察。采用qRT-PCR方法检测miR-146a-5p和TRAF6表达,苏木精-伊红染色观察脑组织损伤情况,并进行神经功能评分,流式细胞术检测N2a细胞凋亡,TUNEL检测海马神经元凋亡,蛋白免疫印迹法检测TRAF6、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Beclin1、Atg7和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达。结果①OGD/R和MCAO后miR-146a-5p低表达,而TRAF6高表达,且miR-146a-5p靶向负调控TRAF6;②miR-146a-5p过表达后,MCAO致中脑损伤显著减轻、神经功能改善(P 0. 01);③miR-146a-5p过表达后,可明显降低OGD/R和MCAO神经元凋亡率,下调cleaved caspase-3、Bax、Beclin1、Atg7和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达(P 0. 01)。结论 miR-146a-5p过表达通过靶向负调控TRAF6抑制缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬。     

miR-146a通过靶向TRIB3调节癫痫大鼠海马神经元凋亡及炎症反应

目的探讨miR-146a靶向调控Tribble同源蛋白3(TRIB3)对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响,以及对炎症反应的调控作用。方法体外培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠的海马神经元,制备癫痫海马神经元模型,采用免疫荧光双染法和膜片钳技术检测癫痫海马神经元模型。将海马神经元随机分为四组:空白对照组(control组):正常海马神经元;癫痫组(EP组):癫痫海马神经元;阴性对照组(miR-146a NC组):转染100 nM miR-146a NC至癫痫海马神经元;miR-146a mimic组:转染100 nM miR-146a mimic至癫痫海马神经元,采用脂质体介导法进行转染;流式细胞术检测各组海马神经元细胞的凋亡情况;Western blot检测各组海马神经元中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)以及肿瘤抑制基因p53的蛋白表达;ELISA法检测各组海马神经元细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平;双荧光素酶报告基因实验确定miR-146a与TRIB3的靶向作用情况。结果癫痫组大鼠海马神经元与正常组大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P0.05);与空白对照组比较,癫痫组miR-146a表达水平升高,海马神经元凋亡数目显著增加,海马神经元中caspase-3、Bax及p53的蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白表达减少,TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平与细胞培养液中的含量均升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。与癫痫组比较,miR-146a mimic组海马神经元凋亡数目下降,caspase-3、Bax及p53的蛋白表达显著减少,Bcl-2蛋白表达增加,TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平与含量均下降,差异均有统计学意义(P 0.01)。TRIB3与miR-146a存在靶向关系,在野生型TRIB3-WT中,miR-146a mimic组荧光素酶活性较miR-146a NC组显著降低(P0.01)。结论高表达miR-146a通过靶向调节TRIB3 mRNA表达来抑制海马神经元凋亡的发生,并减少TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症因子的释放。     

MicroRNA-124对帕金森病中多巴胺能神经元的神经保护作用

目的 研究microRNA(miR)-124对帕金森病模型小鼠中脑多巴胺能神经元的神经保护作用,并探讨其免疫炎性调控机制. 方法 采用小胶质细胞系BV2细胞制备炎性反应的细胞模型,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-21、miR-124、miR-155、miR-146a、miR-181c、miR-221-3p等中枢炎性相关rniRNAs表达;腹腔内注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病小鼠模型,尾静脉注射miR-124治疗,免疫组织化学染色观察治疗前后多巴胺能神经元凋亡情况(TH蛋白表达)、小胶质细胞活化情况(Iba1蛋白表达),Western blotting及qRT-PCR检测治疗前后细胞凋亡相关蛋白酶caspase-3、caspase-8的表达情况. 结果 miR-124在BV2细胞中表达量明显高于其他5种miRNAs,差异有统计学意义(P＜0.05),且致炎后表达下调幅度最大;与帕金森病模型鼠相比,miR-124治疗后黑质区TH阳性细胞数明显增多,而Iba1阳性细胞数明显减少,caspase-3、caspase-8的表达量亦明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 miR-124可通过抑制黑质区小胶质细胞活性缓解多巴胺能神经元凋亡进程,可能是帕金森病发病机制中的一个关键因子.     

microRNA-34a靶向调控血管内皮生长因子对U87脑胶质瘤细胞侵袭、增殖的影响

目的探究microRNA-34a靶向调控血管内皮生长因子(VEGF)对U87脑胶质瘤细胞侵袭、增殖的影响。方法将microRNA-34a NC、microRNA-34a inhibtor、microRNA-34a mimic分别转染至U87脑胶质瘤细胞,依次设为NC组、miR-34a inhibtor组、miR-34a mimic组,比较三组脑胶质瘤细胞U87增殖、侵袭、迁移情况,荧光素活性,VEGF mRNA与蛋白表达情况。结果转染后,miR-34a mimic组细胞增值抑制率高于NC组和miR-34a inhibtor组(P0.05);转染48 h后,miR-34a mimic组细胞侵袭、迁移能力低于NC组和miR-34a inhibtor组(P0.05),miR-34a inhibtor组高于NC组(P0.05);转染48 h后,miR-34a inhibtor组、miR-34a mimic组VEGF mRNA、蛋白相对水平分别高于、低于NC组[mRNA:(2.34±0.32)、(0.49±0.03)vs(1.00±0.06);蛋白:(2.42±0.16)、(0.43±0.06)vs(1.00±0.10)](F=256.230、83.750,均P0.05)。结论 microRNA-34a可以抑制脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制VEGF基因表达有关。[国际神经病学神经外科学杂志, 2021, 48(2):143-148]     

lncRNA LINC01089对氧糖剥夺/复氧损伤后小胶质细胞极化的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01089对小胶质细胞氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤后表型和炎症反应的影响及其机制。方法 体外培养小鼠小胶质细胞B-V2细胞,OGD/R损伤后,转染lncRNA LINC01089过表达质粒及其空载质粒、沉默质粒siRNA及阴性对照,以及miR-449c-5p模拟物、抑制剂及其阴性对照寡核苷酸。采用qRT-PCR检测M1型小胶质细胞标记物iNOS mRNA和CD86 mRNA、M2型小胶质细胞标记物Arg1 mRNA和CD206 MRNA、lncRNA LINC01089、miR-449c-5p的表达水平;采用ELISA检测细胞上清液炎性因子的含量;采用免疫印迹法检测细胞STAT6蛋白表达水平。荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC01089与miR-449c-5p以及miR-449c-5p与STAT6的靶向关系。结果 OGD/R损伤后,B-V2细胞lncRNA LINC01089表达水平显著下调,miR-449c-5p表达水平显著上调。荧光素酶报告基因实验结果显示,lncRNA LINC01089靶向负调控miR-449c-...     

Gap19介导Cx43半通道抑制JAK2/STAT3通路活化对急性脑梗死大鼠的保护作用

目的探究Gap19通过介导Cx43半通道活性和JAK2/STAT3通路对急性脑梗死(ACI)大鼠的影响。方法 24只SD大鼠随机分为3组:对照组、MCAO组和MCAO+Gap19组,每组8只。建立ACI大鼠模型(MCAO)和氧葡萄糖剥夺(OGD)体外模型。TTC染色检测大鼠脑梗死面积;mNSS法检测大鼠神经功能缺损;CCK-8检测星形胶质细胞活力;Western blot检测NVU模型Cx43、Cleaved caspase-3、Bcl、Bax和JAK2/STAT3通路相关基因的蛋白表达;溴化乙锭摄取实验检测星形胶质细胞中半通道活性;免疫荧光法检测星形胶质细胞中pSTAT3和Cx43的共定位。结果 MCAO处理导致大鼠脑梗死面积和神经功能缺损均显著上调(P 0.05),Gap19处理显著下调大鼠脑梗死面积和神经功能缺损(P 0.05)。OGD处理导致NVU模型Cx43的蛋白表达和半通道活性显著上调(P 0.05),细胞活力显著下调(P 0.05),促进细胞凋亡;Gap19处理显著上调OGD处理后NVU模型细胞活力(P 0.05),显著下调Cx43的蛋白表达和星形胶质细胞的半通道活性(P 0.05),抑制细胞凋亡,促进JAK2/STAT3通路活化,其中Cx43与pSTAT3存在共定位关系。结论 Gap19通过抑制Cx43半通道和活化JAK2/STAT3通路发挥对ACI大鼠的保护作用。     

刺槐素通过自噬调控ROS/NLRP3信号通路对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用

目的 基于自噬/ROS/NLRP3炎症小体信号通路，探讨刺槐素(Acacetin)对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤后的小胶质细胞保护作用机制。方法 培养小鼠小胶质细胞(BV2),分为正常对照组、OGD模型组和OGD+Acacetin组(10μmol)。缺氧6 h复氧24 h后采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测BV2细胞活性；乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞的死亡率；活性氧(ROS)试剂盒测定细胞内ROS水平；Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1、NLRP3、caspase-1和IL-1β等蛋白的表达。结果 刺槐素能增加OGD/R损伤后小胶质细胞的存活率，减少LDH的释放，降低ROS的生成，增加LC3-Ⅱ和beclin-1蛋白的表达，进一步下调NLRP3、caspase-1和IL-1β的表达。结论 Acacetin能减轻OGD/R后小胶质细胞的损伤从而对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用，其作用机制可能与抑制ROS的产生、激活自噬、抑制NLRP3炎症小体有关。     

MicroRNA-143-3p对缺糖缺氧的大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用及机制

目的 探讨MicroRNA-143-3p(miR-143-3p)对缺糖缺氧的大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用及机制。方法 建立大鼠脑微血管内皮细胞(rBMECs)缺糖缺氧(OGD)损伤模型,分为正常培养组和OGD组,qRT-PCR检测各组不同时间rBMECs中miR-143-3p的相对表达水平; 干扰rBMECs中miR-143-3p表达的实验将细胞分为正常培养组、OGD组、NC inhibitor+OGD组和miR-143-3p inhibitor+OGD组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-143-3p相对表达水平; MTT、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、周期和凋亡情况。结果 与正常培养组比较,OGD组OGD处理2、4、6、8和10 h后rBMECs中miR-143-3p相对表达水平明显上调,且呈明显上升趋势; 转染miR-143-3p inhibitor能够显著降低OGD条件下rBMECs中miR-143-3p相对表达水平; 与正常培养组比较,OGD组细胞的增殖能力、周期转化能力显著降低,而细胞凋亡比例显著增加; 与NC inhibitor+OGD组比较,miR-143-3p inhibitor+OGD组细胞的增殖能力、周期转化能力显著增强,而细胞凋亡比例显著降低。结论 OGD处理显著抑制rBMECs的增殖、周期转化、促进凋亡; 干扰miR-143-3p表达对OGD条件下的rBMECs具有保护作用。     

CircCDC14A沉默保护星形胶质细胞免受OGD/R诱导的损伤作用机制分析

目的 探讨CirCDC14A沉默通过调节miR-153-3p/JAK1轴保护星形胶质细胞免受氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的损伤机制。方法 体外培养新生大鼠脑皮质星形胶质细胞,采用CCK-8法法检测各组细胞活力;采用Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况;采用Western blot法检测各组p53、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验分析CirCDC14A与miR-153-3p、miR-153-3p与JAK1的关系。结果 随着时间的延长,细胞活性呈上升趋势;pcDNA3.0 CirCDC14A+si JAK1组48 h及72 h细胞活力低于si-NC组、OGD/R组、OGD/R+Si+Con mimcs组(P<0.05);与si-NC组相比,OGD/R组、OGD/R+Si+Con mimcs组、pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组细胞凋亡明显增加,且pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组细胞凋亡高于GD/R+Si+Con mimcs...     

miR-433通过JAK2/STAT3信号通路调控氧化应激在大鼠术后认知障碍中的作用研究

目的 探讨miR-433对术后认知障碍(POCD)大鼠海马氧化应激和认知功能的影响及其作用机制。方法 将大鼠随机分为4组,Control组、POCD组、POCD+NC mimic组、POCD+miR-433 mimic组。构建大鼠POCD模型,实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR)检测miR-433在POCD大鼠海马组织中的表达;Morris水迷宫试验评价大鼠认知功能;苏木精-伊红(HE)染色检测海马组织病理学变化;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氧化应激水平;双荧光素酶报告基因系统检测miR-433和JAK2的靶向关系;Western blotting检测海马组织中cleaved caspase-3、Bad、Bcl-2、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。结果 与Control组比较,POCD组大鼠海马组织中miRNA-433表达显著降低,逃避潜伏期延长,穿越目标平台次数减少,POCD组神经细胞紊乱,细胞数量明显减少,神经元细胞凋亡率显著升高,cleaved caspase-3和Bad蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达...     

左旋丁基苯酞对乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧后脑胶质细胞数量及IL-1β蛋白表达的影响

目的观察左旋丁基苯酞(L-3-n-butylphthalide,l-NBP)对原代培养乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后脑胶质细胞数量及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达的影响。方法采用DMEM培养基体外培养乳鼠脑胶质细胞,免疫细胞化学鉴定培养细胞类型,建立脑胶质细胞OGD/R损伤模型,通过测定细胞OGD/R时乳酸脱氢酶(LDH)释放量,评估脑胶质细胞OGD模型。OGD 24h/R 24 h后,采用MTT法测定脑胶质细胞数量,并观察l-NBP对OGD 24 h/R 24 h后脑胶质细胞数量的影响;采用间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组脑胶质细胞IL-1β蛋白表达。结果 OGD 4 h组、OGD 8 h组、OGD 12 h组、OGD 24 h组脑胶质细胞LDH释放量均比正常对照组明显增多(P<0.01);OGD不同时间组组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。OGD 24 h/R 24 h后脑胶质细胞数量较对照组明显增加(P<0.01);l-NBP 500μmol/L组脑胶质细胞数量较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P<0.05)。OGD 24 h/R 24 h组IL-1β蛋白表达比对照组明显增多(P<0.05);l-NBP 100和500μmol/L组IL-1β蛋白表达较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P<0.05)。结论 l-NBP能减少乳鼠脑胶质细胞OGD/R后细胞数量以及IL-1β蛋白的表达。     

线粒体自噬参与NLRP3介导的炎症反应在脑卒中康复中的作用

目的 分析线粒体自噬和NLRP3介导的炎症反应在脑卒中康复中的作用。方法 雄性SD大鼠随机分为6组：假手术组(Sham)、Sham+雷帕霉素(RAPA)组、再灌注后6 h组(I/R 6 h)、I/R 6 h+RAPA组、再灌注后24 h(I/R 24 h)和I/R 24 h+RAPA组。建立短暂性大脑中动脉闭塞模型,以刺激大鼠的缺血/再灌注(I/R)损伤。分析缺血核心皮质区域不同类型神经细胞中caspase-1阳性细胞表达情况。以BV2细胞为研究对象,在缺氧-葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)条件下检测NLRP3表达,并测定线粒体膜电位。结果 I/R损伤后6 h,切割的caspase-1主要在小胶质细胞中表达[(88.4±1.1)%],而在24 h时主要在神经元[(63.4±2.2)%]中表达。在OGD/R后,BV2细胞中LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化随着时间的推移而减少。暴露于OGD/R后24 h, BV2细胞表现出低膜电位的百分比。与OGD/R组相比,RAPA能够挽救线粒体的损伤(P<0.05),并且RAPA可抑制OGD/R诱导的BV2细胞中NLRP3、切割的caspase-1和切割...     

Dex基于CREB/PGC-1α信号通路调控星形胶质细胞线粒体功能在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 探究右美托咪定(Dex)基于CREB/PGC-1 α信号通路调控星形胶质细胞线粒体功能在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 采用改良的Zen-land法制作大鼠脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,分别在造模后评估假手术(Sham)组、脑缺血再灌注模型(MCAO)组,脑缺血再灌注加药(MCAO+Dex)组大鼠神经功能损伤,脑梗死面积,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白印迹检测环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)的mRNA及蛋白表达;透射电子显微镜检测线粒体形态,免疫荧光法检测星形胶质细胞活性氧物质(ROS)及细胞凋亡。制备氧糖剥夺/复氧(OGD/R)星形胶质细胞模型,分为对照组(Control)、溶剂组(OGD/R-Dex0)、低剂量组(OGD/R-Dex-L)、高剂量组(OGD/R-Dex-H),qPCR检测CREB、PGC-lα的mRNA水平,免疫荧光和WB检测CREB、PGC-1α的蛋白表达。在OGD/R星形胶质细胞模型Dex处理的基础上过表达CR...     

miR-26a-5p通过靶向KCNJ2在β-淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞炎症及氧化应激损伤

目的 揭示miR-26a-5p对β-淀粉样蛋白诱导的炎症及氧化应激损伤的作用机制。方法选取2018-01—2020-01江苏省人民医院老年科实验室70例阿尔茨海默病（AD）患者外周血样本,同时采集80例健康体检者外周血作对照,通过qRT-PCR检测miR-26a-5p在AD患者体内的表达情况,并采用ELISA分析AD患者和健康体检者中炎性因子和活性氧（ROS）水平。通过Aβ1-42(10μmol/L)刺激BV2小胶质细胞构建AD细胞模型,以等体积的DMSO刺激BV2细胞为对照组。采用ELISA检测正常BV2细胞和AD细胞模型的炎性和ROS水平,并通过qRT-PCR检测AD细胞模型中miR-26a-5p的表达趋势。转染miR-26a-5p调控质粒,采用CCK-8和ELISA分析检测miR-26a-5p对BV2细胞增殖、炎性因子表达和氧化应激的影响,生物信息分析和双荧光素酶报告基因预测miR-26a-5p的作用靶点并检测其对靶分子的影响,qRT-PCR、CCK-8和ELISA分析检测KCNJ2对BV2细胞增殖、炎性因子和氧化应激的影响,通过共同调控miR-26a-5ps和KCNJ2的表达,...     

CircTLK1通过miR-424-5p/FBXO3轴对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨环状RNA TLK1(CircRNA TLK1,CircTLK1)对氧糖剥夺/复氧(Oxygen glucose deprivation/Reoxygenation,OGD/R)诱导的神经元HT22损伤的影响以及对微小RNA(microRNA,miR)-424-5p/F-box蛋白3(F-box protein 3,FBXO3)的调控作用。方法 将HT22细胞分为对照组、OGD/R组、sh-NC组、沉默环状RNA TLK1(Silencing circular RNA tlk1,sh-circTLK1)组、sh-circTLK1+抑制剂NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组,除对照组外其余各组细胞均行OGD/R操作,细胞计数试剂盒8(Cell counting Kit 8,CCK-8)法测定HT22细胞活力; 脂连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Adiponectin V-fluorescein isothiocyanate,Annexin V-FITC)细胞凋亡试剂盒测定HT22细胞凋亡; 测定HT22细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)漏出率; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qRCR)法测定HT22细胞miR-424-5p,FBXO3 mRNA水平; 蛋白免疫印记法(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2关联基因X(B lymphoma-2 gene association X,Bax)、活化半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)、FBXO3水平; 双荧光素酶测定CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3靶向关系,并使用RNA下拉实验验证CircTLK1与miR-424-5p关系。结果 与对照组比较,OGD/R组miR-424-5p,HT22细胞活力降低(P<0.05),circTLK1,FBXO3 mRNA水平,HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与OGD/R组比较,sh-circTLK1组HT22细胞活力增加(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平,LDH漏出率降低(P<0.05); 与sh-circTLK1组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组细胞活力降低(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组细胞活力升高(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率降低(P<0.05); CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3均存在靶向关系。结论 CircTLK1沉默可能通过调控miR-424-5p/FBXO3对OGD/R诱导的HT22细胞损伤来发挥保护作用。     

L型Ca2+通道阻断剂通过抑制NLRP3炎症小体激活对MPP+诱导的小胶质细胞炎症模型发挥神经保护作用

目的 在MPP⁺诱导的帕金森(PD)细胞炎症模型中,使用L型Ca²⁺通道阻断剂伊拉地平对BV2小胶质细胞进行干预,观察其炎症反应的影响探讨L型Ca²⁺通道阻断剂伊拉地平是否可以调控NLRP3炎症小体通路。方法 使用PD造模药物MPP⁺在BV2小胶质细胞上制备PD炎症细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度MPP⁺和伊拉地平处理后对BV2的小胶质细胞具体活性影响,选择合适的药物实验浓度。将BV2的小胶质细胞变为4组,分别为空白对照组、MPP⁺造模组、伊拉地平预处理组和MCC950预处理组(即阳性对照组),采用实时的荧光定量PCR检测BV2小胶质细胞中IL-1 β、NLRP3、CASPASE-1、GSDMD、NOX2基因mRNA表达水平;细胞免疫荧光检测BV2小胶质细胞中IL-1 β、NLRP3、CASPASE-1、GSDMD、NOX2蛋白表达水平;Western blot检测小胶质细胞IL-1 β、NLRP3、CASPASE1、GSDMD、NOX2蛋白表达水平。...     

淫羊藿苷对脂多糖+γ-干扰素复合诱导的BV2小胶质细胞的调节作用

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)加γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)复合诱导小鼠小胶质细胞系BV2细胞炎性反应模型的调节作用。方法采用LPS+IFN-γ复合诱导小鼠小胶质细胞系BV2细胞,构建拟神经炎性反应的小胶质细胞活化的体外细胞模型。将传代培养的BV2细胞分为对照组、LPS+IFN-γ模型组(模型组)以及不同浓度ICA 1、2、4、8、16、32、64、128、256μmol/L干预组。采用CCK8法检测各组细胞存活率,采用ELISA法检测各组细胞培养上清中NO水平,采用免疫荧光染色技术观察BV2细胞CD16/32蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组BV2细胞培养上清中NO水平明显高[(16.46±0.73)μmol/L vs.(2.55±0.41)μmol/L;t=16.59,P0.01],与模型组比较,ICA 16、32、64μmol/L干预组其NO表达水平明显降低[分别为(13.76±0.55)、(12.66±0.51)、(10.60±0.46)μmol/L;P0.05,P0.01,P0.01)]。与对照组比较,模型组CD16/32表达增加[(5823.00±109.99)vs.(118.60±89.04);t=48.77,P0.01];与模型组比较,ICA 32、64μmol/L干预组小胶质细胞CD16/32蛋白表达均明显降低(分别为3327.67±126.73、2725.00±139.37,均P0.01)。结论 ICA能够显著抑制活化的小胶质细胞释放NO,抑制小胶质细胞CD16/32表达,对LPS+IFN-γ复合诱导BV2小胶质细胞具有调节作用。     

MicroRNA-21靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探究MicroRNA-21 (miR-21)通过靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路对胶质瘤细胞的增殖和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot分别检测胶质瘤及瘤旁组织标本、人脑正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞U251、U87中miR-21和PDCD4的表达水平;将miR-21 inhibitor、inhibitor-NC、miR-21 mimics组、miR-NC组、PDCD4 siRNA、siRNA-NC分别转染至U87细胞中,记为miR-21 inhibitor组、inhibitor NC组、PDCD4 siRNA组和siRNA-NC组;将inhibitor-NC与siRNA-NC共转染至U87细胞,记为inhibitor NC+siRNA NC组;将miR-21 inhibitor分别与siRNA NC组和DCD4 siRNA组共转染,记为miR-21 inhibitor+siRNA-NC组、miR-21 inhibitor+PDCD4 siRNA组。采用qRT-PCR检测转染后细胞miR-21和PDCD4的表达;CCK-8检测细胞增殖能力;T...     

miR-140对缺血性脑卒中水通道蛋白4表达水平的影响

目的 探讨miR-140对缺血性脑卒中水通道蛋白4(Aquaporin4, AQP4)表达水平的影响。方法 通过栓塞大鼠大脑中动脉24 h来建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型; 构建包含有人和大鼠的miR-140结合位点的AQP4 mRNA 3’非翻译端(3’UTR)的双荧光素酶报告基因质粒,检测miR-140对AQP4 mRNA 3’UTR的靶向作用; 培养乳鼠原代星形胶质细胞,建立体外原代星形胶质细胞氧糖剥离(OGD)模型,转染miR-140拟似物(mimics)和miR-140抑制剂(inhibitor)观察过表达和沉默miR-140对AQP4的调控作用; 免疫印迹法(Western blot)检测AQP4的表达水平; 荧光实时定量PCR(Real-time PCR)检测miR-140的表达水平。结果 与假手术组比较,MCAO模型大鼠脑组织中miR-140表达水平降低(59.3±10.0)%(P<0.05),而AQP4蛋白表达水平升高(1.8 ±0.3)倍(P<0.05); 与对照组比较,原代星形胶质细胞氧糖剥离(OGD)模型miR-140表达水平降低(51.6±15.3)%(P<0.05),而AQP4蛋白表达水平升高(1.7±0.4)倍(P<0.05); 双荧光素酶报告基因检测显示miR-140 拟似物能显著降低荧光素酶活性(P<0.05),miR-140抑制剂能显著升高荧光素酶活性(P<0.05); 星形胶质细胞中过表达miR-140能够抑制AQP4蛋白表达,与对照组比较过表达miR-140组AQP4蛋白表达水平降低(37.7±16.9)%(P<0.05),沉默miR-140可诱导AQP4蛋白表达水平升高(1.5±0.1)倍(P<0.05)。结论 缺血性脑卒中脑组织及星形胶质细胞中miR-140表达水平降低,AQP4表达水平升高; miR-140能够靶向作用于AQP4 mRNA 3’非翻译区来抑制AQP4蛋白的表达。