干扰FTO蛋白对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的 观察干扰脂肪量和肥胖相关蛋白（FTO）对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法 取对数生长期SKOV3细胞,分为siFTO-1组、siFTO-2组、si-NC组,siFTO-1组转染第一条靶向FTO的小干扰RNA(siFTO-1),siFTO-2组转染第二条靶向FTO的小干扰RNA(siFTO-2),si-NC组转染无靶向作用的小干扰RNA(si-NC),CCK-8法检测细胞增殖能力（增殖率）,细胞划痕实验检测细胞迁移能力（相对迁移率）,Transwell实验检测细胞侵袭能力（穿膜细胞数）,Western blotting法检测细胞AKT、p-AKT/AKT、PI3K、p-PI3K/PI3K蛋白相对表达量。结果 与si-NC组比较,siFTO-1组和siFTO-2组细胞增殖率、相对迁移率、穿膜细胞数高（P均<0.05）;与si-NC组比较,siFTO-1组和siFTO-2组p-AKT/AKT和P-PI3K/PI3K蛋白相对表达量升高（P均<0.05）,PI3K、AKT蛋白相对表达量无显著变化（P均>0.05）。结论 干扰FTO可促...     

LINC01615表达下调对膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨下调LINC01615表达对膀胱癌细胞（T24细胞）增殖、侵袭、迁移的影响。方法 常规培养T24细胞，取对数生长期细胞随机分为si-LINC01615组、si-NC组，分别转染si-LINC01615、si-NC，继续培养48 h。用实时荧光定量PCR法检测细胞中LINC01615表达，用MTT实验检测细胞增殖能力（OD值），用Transwell实验检测细胞侵袭能力，用划痕实验检测细胞迁移能力（24 h愈合度）。结果 转染后si-LINC01615组、si-NC组T24细胞LINC01615相对表达量分别为0.60±0.03、1.08±0.02，比较差异有统计学意义（P<0.05），表明转染成功。培养0、24 h，两组细胞活力差异均无统计学意义（P均>0.05）；培养48、72 h,si-LINC01615组细胞活力均低于si-NC组（P均<0.05）。si-NC组侵袭细胞数为（148.30±1.76）个，si-LINC01615组为（74.33±3.18）个，比较差异有统计学意义（P<0.05）。si-NC组24 h愈合度为（98.33±0.88）%...     

miR-1306-5p在AML患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对HL60细胞增殖凋亡和迁移侵袭调控作用观察

目的 观察微小RNA-1306-5p(miR-1306-5p)在急性髓系白血病（AML）患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对人白血病细胞株HL60增殖凋亡和迁移侵袭调控作用。方法 分别提取初诊AML患者和再生障碍性贫血（AA）患者骨髓组织单个核细胞，采用qRT-PCR法检测单个核细胞miR-1306-5p；(2)取HL60细胞，分别转染过表达和敲低miR-1306-5p质粒（mimics control、miR-1306-5p mimics、inhibitor control、miR-1306-5p inhibitor，计为1、2、3、4组），转染48 h后采用CCK8法检测各组细胞OD值，流式细胞术和Transwell法分别检测各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数。结果 AML患者和AA患者miR-1306-5p相对表达量分别为0.27±0.07、1.00±0.08，两者比较，P<0.05。与mimics control组比较，miR-1306-5p mimics组OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数降低，凋亡率升高（P均<0.05）；与inhibitor control组比较...     

HVEM基因干扰后非小细胞肺癌细胞的迁移、侵袭能力变化及其机制

目的 观察疱疹病毒侵入介体(HVEM)基因干扰对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 通过Western blotting法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC`细胞系SKMES-1、H1299、H460、H226、H520中HVEM蛋白表达,筛选出HVEM蛋白表达升高最明显的H1299细胞进行后续实验。将H1299细胞分为si-NC组、si-HVEM-1组和si-HVEM-2组,分别用Lipofectamine 2000瞬时转染si-NC、siHVEM-1和si-HVEM-2干扰序列,转染48 h。采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测HVEM、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA和蛋白相对表达量。结果 与si-NC组比较,si-HVEM-1组和si-HVEM-2组迁移、侵袭细胞数及HVEM mRNA、蛋白相对表达量均减少,且si-HVEM-2...     

鼻咽癌组织中 ERK1／2、p-ERK1／2和 MMP-9蛋白的表达变化及其相关性

目的：观察细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在鼻咽癌（NPC）组织中的表达及相关性,并探讨其意义。方法采用免疫组织化学染色SP法检测75份NPC组织（ NPC组）和27份鼻咽黏膜慢性炎组织（炎性组）中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白的表达,分析三者在NPC组织中表达的相关性。结果 NPC组ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白阳性表达率均显著高于炎性组（P均＜0．01）,χ2值依次为19．8、17．1、21．3;NPC组织中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白三者间的表达呈正相关（P均＜0．01）,其中ERK1/2与p-ERK1/2、MMP-9蛋白的r值分别为0．58、0．34,p-ERK1/2、MMP-9蛋白的r值为0．34。结论 ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白在NPC组织中呈高表达且三者间呈正相关,p-ERK1/2可能通过调节MMP-9表达参与NPC侵袭、转移。     

UCA1在AML患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对AML细胞增殖凋亡调节作用观察

目的 观察长链非编码RNA(long non-coding RNAs,LncRNA)尿路上皮癌胚抗原（urothelial carcinoma associated gene 1, UCA1）在急性髓系白血病（AML）患者骨髓组织单个核细胞中的表达情况及对人AML不同亚型细胞株U937、HL60增殖凋亡的调节作用，并探讨其可能作用机制。方法 (1)30例AML患者、30例缺铁性贫血患者的骨髓标本，采用RT-PCR检测骨髓组织单个核细胞UCA1。(2)将U937及HL60细胞各分为1、2、3组。1、2组分别用UCA1-siRNA（可抑制UCA1表达）和空载siRNA转染，3组为空白对照（不作任何处理）。分别于转染24、48、72 h取各组细胞，MTT法测算细胞增殖活力。转染48 h时采用流式细胞术观察各组细胞凋亡情况。转染48 h时采用WESTERN Blotting法检测各组细胞Wnt、β-连环蛋白（β-catenin）、p-gsk-3?蛋白。结果 AML及缺铁性贫血患者骨髓组织单个核细胞UCA1相对表达量分别为4.96±1.51、1.09±0.93，二者比较，P<0.05。与2...     

抑制lncR-HOXA-AS3表达的人前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT相关蛋白表达变化

目的 观察抑制长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncR)HOXA-AS3表达的人前列腺癌（prostate cancer, PCa）细胞系LNCaP增殖、迁移、侵袭能力及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关蛋白的表达变化。方法 本研究受试细胞为人PCa细胞系LNCaP。将对数生长期LNCaP细胞分为2组，分别转染lncRHOXA-AS3沉默质粒si-HOXA-AS3（观察组）和阴性对照质粒si-NC（对照组），转染48 h时采用qRT-PCR法检测lncR-HOXA-AS3，分别于转染24、48、72 h时采用CCK8实验测算细胞增殖活性（光密度OD值），转染48 h时采用细胞划痕实验观察细胞迁移能力，转染48 h时采用Transwell实验观察细胞侵袭能力，转染48 h时采用WESTERN Blotting法检测两组EMT相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤维连接蛋白（Fibronectin）。结果与RWPE-1相比，DU-145、LNCaP、C4-2B中l...     

氧化苦参碱对喉癌细胞株Hep-2抑制增殖及诱导凋亡的实验研究

目的观察氧化苦参碱（Oxy）对喉癌细胞株（Hep-2）的抑制增殖及诱导凋亡作用。方法培养喉癌细胞株（Hep-2）,MTT比色法及流式细胞术测定Oxy对喉癌细胞株Hep-2抑制增殖及诱导凋亡的作用。免疫沉淀法纯化蛋白并ERK1／2试剂盒测定细胞外调节信号激酶（ERK）活性;Western blot测定p-ERK、Bax及Bcl-2表达。结果Oxy明显抑制Hep-2细胞增殖,诱导Hep-2细胞凋亡;Oxy可抑制ERK活性及p-ERK表达,同时上调Bax表达,降低Bcl-2表达。结论Oxy可以抑制Hep-2增殖,机制与抑制ERK活性及p-ERK表达有关;同时可诱导凋亡,其途径与上调Bax表达,降低Bcl-2表达有关。     

GLP-1类似物利拉鲁肽对高糖诱导胰岛细胞凋亡及HSP72表达、ERK1/2通路活性的影响

目的 探讨胰高血糖素样多肽(GLP)-1类似物利拉鲁肽对高糖诱导胰岛细胞凋亡及热休克蛋白(HSP)72表达、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2通路的影响。方法 体外培养大鼠胰岛INS-1细胞，分为对照组、高糖组、利拉鲁肽低剂量组(1 nmol/L)、利拉鲁肽中剂量组(3 nmol/L)和利拉鲁肽高剂量组(5 nmol/L)。检测各组INS-1细胞凋亡、HSP72、ERK1、ERK2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达和HSP72、p-ERK1/2、ERK1/2、Bax蛋白表达情况。结果 与对照组相比，高糖组INS-1细胞凋亡率、HSP72、ERK1/2、Bax mRNA及HSP72、p-ERK1/2/ERK1/2、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与高糖组相比，利拉鲁肽低、中、高剂量组INS-1细胞凋亡率、HSP72、ERK1/2、Bax mRNA及HSP72、p-ERK1/2/ERK1/2、Bax蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);随着利拉鲁肽使用剂量升高，INS-1细胞凋亡率、HSP72、ERK1/2、Bax mRNA及HSP72、p-ERK1/2...     

ERK信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的调控作用

目的本研究旨在探讨细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase,ERK）信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells,ASMCs）增殖中的调控作用。方法以体外分离、培养的ASMCs为研究对象,加入不同浓度组胺（histanmine,Hist）和PD98059对其进行处理,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）微量比色法检测Hist及ERK信号通路对ASMCs增殖的影响,Western blot检测ERK1／2、磷酸化ERK1／2（phosphorylated-ERK1／2,p-ERK1／2）蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定ASMCs核内NF—κB水平,并对各组进行比较。结果低浓度和高浓度的Hist均能不同程度刺激ASMCs增殖,100μmol／L时细胞存活率达201．3％;Hist组ASMCs增殖反应与对照组相比显著增加,而Hist＋PD980059组ASMCs的增殖反应显著低于Hist组;Hist组ASMCs中的p-ERK1／2蛋白表达较正常对照组明显增强,在加入PD980059后Hist诱导的活化ERK1／2相对于Hist组表达显著下降;Hist处理组NF—κB吸光度值显著高于对照组,Hist＋PD98059组NF—κB吸光度值较Hist处理组显著降低。结论Hist可显著诱导ASMCs增殖,ERK信号通道在此调控中起重要作用,而且还可能参与ASMCs中Hist诱导的NF—κB活化。     

转化生长因子β1对不同阶段支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞外信号调节激酶通道的影响

目的 本文旨在探讨转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)对不同阶段(急性和慢性)支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMC)上细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2 mRNA、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平的影响.方法 建立2周、6周哮喘大鼠模型,用TGF-β1和ERK的特异性抑制剂PD98059干预哮喘大鼠ASMC的培养.用RT-PCR检测不同阶段哮喘大鼠模型ASMC上ERK1/2 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测p-ERK1/2蛋白的表达及定位.结果 与正常对照组ASMC比较,2周、6周哮喘组ERK mRNA、ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达量以及ERK活化率显著增高.经PD98059干预之后,2周、6周哮喘组ASMC的ERKmRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量以及ERK活化率均显著降低.经TGF-β1干预后,2周、6周哮喘组ASMC的ERK mRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量较各自哮喘组显著增高,而这一作用可以被PD98059部分抑制.但以上结果 2周和6周哮喘模型组之间差异无统计学意义.结论 TGF-β1可上调不同阶段哮喘大鼠ASMC上ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2表达.在哮喘的不同阶段,TGF-β1可能持续通过促进ERK信号转导通道的活性对ASMC的增殖进行调控.     

ARG1基因对染砷后293T细胞MAPK信号通路的影响

目的观察ARGl基因对染砷后293T细胞MAPK信号通路表达的影响,探讨其在肿瘤细胞耐药中的作用。方法取pcDNA3．1-ARG1．293T细胞（观察组）、pcDNA3．1-293T细胞（空白组）、293T细胞（对照组）,均以0、1、4、8μmol／L的NaAsO,染毒处理48h,采用Westernblot检测JNK、ERK蛋白。结果JNK表达量在转染前后各组均随着NaAsO,浓度的升高而增加,但观察组JNK明显低于空白组、对照组（P均〈0．05）;观察组ERK表达量在NaAsO：浓度1、4μmol／L随浓度升高而增加,在8μmol／L表达量有所下降,但各浓度仍均高于空白组、对照组（P均〈0．05）。结论ARG1基因可能通过参与ERK信号通路的激活,抑制JNK信号通路的表达,破坏MAPK信号通路对细胞增殖凋亡的精确调节,参与肿瘤细胞耐药的产生。     

骨形态发生蛋白9对肝细胞癌肿瘤干细胞干性、增殖和侵袭的影响及机制

目的 探讨骨形态发生蛋白9 (BMP9)对肝细胞癌（HCC）肿瘤干细胞（CSCs）干性、增殖和侵袭的影响及机制。方法 取对数生长期的正常肝细胞、肝癌细胞、肝癌CSCs,采用RT-qPCR法检测BMP9 mRNA表达,采用Western blotting法检测BMP9蛋白表达。采用慢病毒干扰载体转染肝细胞癌肿瘤干细胞（HepG2-CSCs）以敲低BMP9表达,并分成HepG2-CSCs组、HepG2-CSCs-BMP9敲低组。加入MAPK/ERK信号激动剂（DIPQUO）后,将细胞分为三组：HepG2-CSCs组、HepG2-CSCs敲低组及HepG2-CSCs敲低+DIPQUO组。采用RT-qPCR实验检测HepG2-CSCs干性相关分子CD44、SOX2和OCT4表达,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用蛋白印迹法检测MAPK/ERK通路关键蛋白表达。结果 与正常肝细胞比,肝癌细胞和肝癌肿瘤干细胞（HepG2-CSCs）中BMP9表达上调（P<0.05）。HepG2 CSCs细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达高于HepG2细胞（P...     

ERK1/2通路在TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路是否参与基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)抑制大鼠肾小球系膜细胞的凋亡。方法选择大连医科大学附属第一医院2005年8月至2006年2月应用人正、反义TIMP-1转染大鼠肾小球系膜细胞,分别用高糖(25mmol/L)和MEK1特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激24h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)观察细胞外信号调节激酶信使RNA(ERK1 messenger RNA)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测胞浆中p-ERK1/2的表达情况。结果(1)未加PD98059的未转染组、空载体组、正义转染组及反义转染组各组细胞的凋亡率分别为(12.10±2.21)%、(11.90±3.34)%、(5.50±0.50)%和(20.70±3.41)%;正义转染组的凋亡率明显低于未转染组(P<0.01);反义转染组凋亡率高于未转染组(P<0.05)。加入PD98059后各组细胞的凋亡率明显增加。(2)加入PD98059后,各组细胞ERK1mRNA的表达较相应未加PD98059各组明显上调;以正义转染组上调最为明显。(3)ELISA结果显示:加入PD98059后,p-ERK1/2较相应未加PD98059各组明显下调(P<0.05),以正义组下调最为明显(P<0.01)。结论ERK1/2信号传导通路是TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的主要途径之一。     

缺氧后适应与心肌营养素-1对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及机制探讨

目的 探讨缺血后适应与心肌营养素-1（CT-1）对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及其机制.方法 将体外培养的H9C2细胞株分为正常对照组（a组）、缺氧复氧组（b组）、缺氧复氧＋缺氧后适应组（c组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋ CT-1组（d组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋CT-1＋ ERK抑制剂组（e组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋CT-1＋二甲基亚砜组（f组）,MTS法检测各组细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测细胞外调节激酶（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达、Q-PCR检测Bad mRNA的表达.结果 与a组比较,其他各组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA和p-ERK1/2（除外e组）表达量增加,P均＜0.05;与b组比较,c组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,Bad mRNA表达、凋亡率下降,P均＜0.05;与c组比较,d组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,细胞Bad mRNA表达、凋亡率下降（P均＜0.05）;与d组比较,e组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA表达量增加,p-ERK1/2表达量下降;d、e组各项指标指标比较差异无统计学意义.结论 缺氧后适应可减少心肌细胞缺氧复氧损伤,联合CT-1后保护作用明显加强,而ERK1/2抑制剂可阻断这种保护作用;该保护机制可能与CT-I激活ERK1/2信号通路,下调Bad mRNA的表达有关.     

miR-375-3p过表达的甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭能力变化

目的 探讨miR-375-3p过表达后甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭能力以及PI3K/AKT/EMT信号通路相关蛋白的变化。方法 取人甲状腺上皮细胞系Nthy-ori3-1和人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1、BHP5-16、BHP2-7、K-1,采用RT-qPCR法检测细胞miR-375-3p表达。以四种甲状腺乳头状癌细胞中miR-375-3p表达最低的细胞为研究对象,将其分为转染组和阴性对照组,转染组通过转染miR-375-3p模拟物miR-375-3p-mimics上调细胞中miR-375-3p表达,阴性对照组转染阴性对照序列scramble。采用MTT法检测两组细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,Western blotting法检测细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT和上皮间质转化（EMT）相关蛋白E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。取甲状腺乳头状癌细胞,随机分为阴性对照组、miR-375-3p过表达组和miR-375-3p过表达+IGF-1组,miR-375-3p过表...     

甲基转移酶样蛋白14对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用

目的 探讨过表达和敲低甲基转移酶样蛋白14(METTL14)对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用。方法 取人急性早幼粒白血病细胞NB4进行培养,分为过表达对照组、过表达组、干扰对照组、干扰组,过表达对照组及过表达组分别转染空白质粒和METTL14质粒,干扰对照组和干扰组分别转染si-NC和si-METTL14质粒。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Dot Blotting法检测细胞N-6甲基腺苷（m6A）修饰水平。结果 与过表达对照组相比,过表达组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低、细胞迁移数、细胞侵袭数升高,NB4细胞m6A修饰水平提高（P均<0.05）;与干扰对照组相比,干扰组细胞增殖率降低、细胞凋亡率增加、细胞迁移数、细胞侵袭数降低,NB4细胞m6A修饰水平降低（P均<0.05）。结论 METTL14可促进NB4细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与提高m6A修饰水平有关。     

沉默lncRNA TPT1-AS1对非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及对沉默lncRNA TPT1-AS1非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制。方法检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织lncRNA TPT1-AS1表达情况,做细胞培养及lncRNA TPT1-AS1转染,分为空白组、过表达组、沉默组,过表达组转染si-TPT1-AS1-NC质粒,沉默组转染si-TPT1-AS1质粒,空白组细胞不做任何处理,转染24h后鉴定转染效率。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及PTEN-PI3K-AKT信号通路蛋白表达情况。结果与癌旁组织相比,癌组织TPT1-AS1 mRNA表达量升高(P0.05)。与空白组相比,过表达组TPT1-AS1 mRNA表达量升高,沉默组TPT1-AS1 mRNA表达量降低(P0.05),说明转染成功。与过表达组相比,沉默组各时间点细胞增殖率、细胞迁移数、侵袭数、p-PI3K、p-AKT、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,凋亡率、PTEN、Bax蛋白表达量升高(P0.05)。结论 lncRNA TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织高表达,沉默lncRNA TPT1-AS1可抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与调控PTEN-PI3K-AKT信号通路相关。     

PCa组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡观察

目的 观察前列腺癌（PCa）组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡情况。方法 体外培养人PCa细胞株（PC3细胞和DU145细胞），分别转染Mfn2过表达质粒、空白载体质粒及不转染质粒，PC3细胞分别记为A、B、C组，DU145细胞分别记为D、E、F组。CCK-8实验检测各组细胞OD值，细胞集落形成实验测算各组细胞集落数目，以OD值和细胞集落数目表示细胞增殖能力。细胞划痕实验测算各组细胞迁移率，以细胞迁移率表示细胞迁移能力。Transwell实验测算各组细胞侵袭数目，以细胞侵袭数目数表示细胞侵袭能力。流式细胞术测算各组细胞凋亡率，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、caspase-3及PI3K/AKT通路相关蛋白（p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT）。结果 PCa、癌旁组织Mfn2 mRNA相对表达量分别为0.36±0.32、0.72±0.35，两者比较，P<0.05。与同组24 h比较，A、B、C组48和72 h的OD值增加（P均<0.05）；与同组48 ...     

siRNA介导COX-2基因沉默对大肠癌LoVo细胞侵袭及上皮间质转化的影响

目的探讨靶向沉默环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达对大肠癌LoVo细胞侵袭能力及上皮间质转化的影响。方法在体外COX-2 siRNA转染大肠癌LoVo细胞,RT-PCR及免疫印迹法验证转染后COX-2 mRNA及蛋白表达,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变;免疫印迹法检测EMT标志物(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin)、ERK/MAPK和PI3K/Akt通路相关蛋白(Akt、p-Akt、p-GSK-3β、ERK、p-ERK)及MMP-9表达的变化情况。结果 COX-2 siRNA转染大肠癌LoVo细胞后,COX-2 mRNA及蛋白表达下调,同时细胞侵袭能力降低;上皮标记物E-cadherin表达上调,同时间叶标记物Vimentin和Fibronectin表达下调;细胞总的ERK、Akt蛋白表达水平无明显改变,而p-ERK、p-Akt表达降低,同时,Akt下游效应蛋白p-GSK-3β表达也下调; MMP-9表达下调。结论 COX-2 siRNA转染有效抑制了大肠癌LoVo细胞COX-2表达,并可能通过阻滞细胞ERK/MAPK和PI3K/Akt通路,进而抑制EMT,下调MMP-9表达,降低细胞侵袭能力。