不同严重程度阿尔茨海默病患者血清miR-128,miR-223表达水平变化与炎症反应及认知功能的相关性分析

目的 探讨不同严重程度阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者血清微小RNA(MicroRNA,miR)-128,miR-223表达水平变化与炎症反应及认知功能的相关性。方法 选择2018年6月-2020年1月本院收治的200例AD患者(AD组),根据临床痴呆评定量表(Clinical dementia rating scale,CDR)评分将AD患者分为轻度组(CDR评分1分,66例)、中度组(CDR评分2分,83例)、重度组(CDR评分3,51例)3个亚组,另选择207例体检健康志愿者为对照组; 采用简易智能精神状态检查量表(Mini-mental state examination,MMSE)评估AD患者认知功能; 检测所有受试者血清miR-128,miR-223表达水平; 检测AD患者血清白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(Interleukin-1,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-,TNF-α)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平; 分析血清miR-128,miR-223表达水平与TNF-α,IL-1β,IL-6,CRP水平、MMSE总分的相关性。结果 AD组血清miR-128表达水平高于对照组(P<0.05),miR-223表达水平低于对照组(P<0.05)。重度组血清miR-128表达水平、TNF-α,IL-1β,IL-6,CRP水平高于中度和轻度组(P<0.05),且中度组高于轻度组(P<0.05); 重度组血清miR-223表达水平、MMSE总分低于中度和轻度组(P<0.05),且中度组低于轻度组(P<0.05)。miR-128表达水平与TNF-α,IL-1β,IL-6,CRP呈正相关(r≥0.496,P<0.05),与MMSE总分呈负相关(r =-0.571,P<0.05); miR-223表达水平与TNF-α,IL-1β,IL-6,CRP呈负相关(r ≤-0.572,P<0.05),与MMSE总分呈正相关(r=0.531,P<0.05)。结论 AD患者血清miR-128表达水平上调,miR-223表达水平下调,两者异常变化可能诱导炎症反应,进而参与AD患者认知功能损伤过程。     

外周血miRNA的表达水平在无症状性颅内动脉狭窄患者5年脑血管事件中的预测价值

目的 探讨外周血miRNA的表达水平在无症状性颅内动脉狭窄(asymptomatic intracranial artery stenosis,AIAS)患者5年脑血管事件中的预测价值。方法 回顾性分析2013年10月—2014年6月在本院进行颅多普勒超声(TCD)检查发现的AIAS患者110例的病例资料,并将其纳入观察组,选取同期经TCD检查未发现有颅内动脉狭窄且一般资料与观察组均衡可比的健康者20例作为对照组; 比较2组的血清miRNA-223相对表达水平差异; 根据观察组患者5年随访期间出现脑血管事件的患者纳入阳性组,未出现的归纳于阴性组; 通过ROC曲线分析血清miRNA-223相对表达水平对预测患者预后的效能。结果 观察组血清miRNA-223相对表达水平显著低于对照组(P<0.05); 阳性组的TG水平高于阴性组(P<0.05),阳性组的miRNA-223相对表达水平低于阴性组(P<0.05); ROC曲线分析及最大约登指数计算出血清miRNA-223表达水平及TG水平的最大AUC面积截断值分别为miRNA-223的截断值为0.56(敏感度=71.50%,特异性=91.60%)、TG的截断值为1.98(敏感度=55.20%,特异性=65.20%)。结论 外周血miRNA-223的表达水平对AIAS患者5年脑血管事件的预测具有较高的特异性,在临床中检测AIAS患者外周血miRNA-223的相对表达水平对诊治及预后判断具有一定的指导价值。     

颅内破裂动脉瘤手术时机的临床研究

目的 探讨颅内破裂动脉瘤不同手术时机患者的血清炎性因子水平变化及其临床意义。方法 回顾性分析2017年6月-2019年12月在本院神经外科确诊的颅内动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者180例,根据医师建议和患者自愿分为早期治疗组(入院1～3 d进行手术治疗)和延期治疗组(入院4～14 d进行手术治疗),比较2组患者手术前后血清炎性细胞因子水平变化,并对2组患者的疗效和术后并发症发生情况进行比较。结果 手术前2组血清TNF-α,IL-6,IL-1β水平无显著差异(P>0.05); 2组术后第8 d血清TNF-α,IL-6,IL-1β水平均较术前有所降低(P<0.05); 早期治疗组术后第8 d血清TNF-α,IL-6,IL-1β水平显著低于延期治疗组(P<0.05)。早期治疗组的总有效率显著高于延期治疗组(P<0.05); 早期治疗组的恢复良好率显著高于延期治疗组(P<0.05); 早期治疗组的致残率显著低于延期治疗组(P<0.05)。2组重残率、植物生存率及病死率无显著差异(P>0.05)。早期治疗组的颅内感染和脑血管痉挛的发生率明显低于延期治疗组(P<0.05),脑积水和再出血的发生率没有显著差异(P>0.05)。结论 早期治疗的颅内破裂动脉瘤患者的术后血清炎性指标水平变化较显著,疗效及预后均较好,并发症发生率低; 血清炎性指标水平可能与患者的疗效和预后有关,可作为aSAH发生发展的预测指标。     

前列地尔注射液对糖尿病合并脑梗死患者血清IL-6及sICAM-1水平的影响

目的 研究前列地尔注射液治疗2型糖尿病合并脑梗死患者的临床疗效及其对血清炎性因子白细胞介素6(IL-6)及可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)表达的影响。方法 选取2013年7月～2015年3月本院收治的2型糖尿病合并脑梗死患者98例,随机均分为对照组和治疗组,对照组进行常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用前列地尔注射液,观察患者的总体疗效、神经功能与生活能力改善情况、炎性因子表达、不良反应。结果 治疗后治疗组总有效率(91.84%)明显高于对照组(77.55%),差异具有统计学意义(P<0.05); 与对照组治疗后比较,治疗组患者生活活动能力评分显著增加,神经功能缺损评分显著减小,差异均具有统计学意义(P<0.05); 与对照组治疗后比较,sICAM-1、IL-6水平明显下降(P<0.01); 治疗组与对照组药物治疗安全性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 前列地尔注射液治疗2型糖尿病合并脑梗死患者效果显著,改善患者神经功能,可能与抑制炎性因子表达有关。     

急性缺血性脑卒中患者血清miR-103,miR-29b的表达水平变化及其临床意义

目的 探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清miR-103,miR-29b的表达水平变化及其临床意义。方法 收集2016年1月-2019年12月本院神经内科收治的126例AIS患者(AIS组),根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(45例)、中度组(57例)和重度组(24例),根据改良Rankin量表(mRS)评分将其分为预后良好组(78例)和预后不良组(48例),另选择56例同期于本院门诊体检健康者为对照组,检测血清miR-103,miR-29b表达水平,Spearman秩相关性分析miR-103,miR-29b表达水平与NIHSS,mRS评分的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-103,miR-29b表达水平对神经功能预后的预测价值。结果 AIS组血清miR-103表达水平高于对照组(P<0.05),miR-29b表达水平低于对照组(P<0.05),血清miR-103表达水平随着AIS患者神经缺损程度加重而升高(P<0.05),miR-29b表达水平则降低(P<0.05)。预后不良组血清miR-103表达水平高于预后良好组(P<0.05),miR-29b表达水平低于预后良好组(P<0.05)。Spearman秩相关性分析显示AIS患者血清miR-103表达水平与NIHSS评分、mRS评分呈正相关(r₂=0.636、0.794,P<0.05),miR-29b表达水平与NIHSS评分、mRS评分呈负相关(r₂=-0.664、-0.659,P<0.05)。ROC分析显示miR-103,miR-29b表达水平预测AIS患者神经功能预后的曲线下面积(AUC)为0.713、0.741,联合miR-103,miR-29b表达水平预测AIS患者神经功能预后的AUC为0.918,高于单独miR-103,miR-29b表达水平(P<0.05)。结论 AIS患者血清miR-103表达水平升高,miR-29b表达水平降低,miR-103表达上调、miR-29b表达缺失均与AIS患者神经功能缺损程度和神经功能恶化有关,可以为患者神经功能预后评估提供参考。     

急性脑梗死患者血清MMP-9、TNF-α、hs-CRP、IL-1β、IL-17水平与颈动脉粥样硬化斑块类型的关系

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-17(IL-17)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)斑块类型的关系。方法选取本院收治的52例ACI患者作为研究组,另选取同期在本院进行健康体检的50例健康者作为对照组,检测两组的颈动脉内膜中层厚度(IMT),确定CAS斑块类型。同时采集静脉血进行MMP-9、TNF-α、hs-CRP、IL-1β、IL-17水平检测。结果研究组急性期、恢复期的MMP-9、TNF-α、IL-17、IL-1β、hs-CRP水平均显著高于对照组(P0.05);研究组恢复期的MMP-9、TNF-α、IL-17、IL-1β、hs-CRP水平均显著低于急性期(P0.05)。在脑梗死急性期与恢复期,小梗死灶组、中梗死灶组、大梗死灶组的各项炎性因子水平比较差异均有统计学意义,无斑块组、稳定性斑块组、不稳定性斑块组的各项炎性因子水平比较也存在显著性差异(P0.05),大梗死灶组的MMP-9、TNF-α、IL-17、IL-1β、hs-CRP水平最高,小梗死灶组最低;不稳定性斑块组的MMP-9、TNF-α、IL-17、IL-1β、hs-CRP水平最高,无斑块组最低。结论 ACI患者的血清MMP-9、TNF-α、hs-CRP、IL-1β、IL-17水平与CAS斑块性质有着密切联系,斑块稳定性越差,血清MMP-9、TNF-α、hs-CRP、IL-1β、IL-17水平越高。     

重症肌无力患者血清中miR150-5p与IL-10、IL-17水平的相关性研究

目的 检测miR150-5p在重症肌无力患者血清中的表达水平并分析与炎症因子水平的相关性。方法 收集符合本研究要求的重症肌无力患者62例和体检的健康志愿者30例,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者血清中miR150-5p的相对表达水平; 用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清中炎症因子的水平; 采用pearson相关性分析法分析miR-150-5p与炎症因子水平的相关性。结果 重症肌无力患者血清中miR-150-5p的相对表达水平明显高于对照组(P<0.001); 重症肌无力患者血清中IL-2和IL-17的水平低于对照组(P<0.01),IL-10的水平高于对照组(P<0.01),而IL-19、IL-20和IL-35的水平与对照组比较无明显差异(P>0.05); 重症肌无力患者血清中miR-150-5p与IL-10的水平呈正相关(r=0.891,P<0.001),与IL-17的水平呈负相关(r=-0.836,P<0.001); 经过药物治疗后重症肌无力患者血清中miR-150-5p和IL-10的水平有所降低(P<0.001),而IL-2和IL-17的水平有所升高(P<0.001)。结论 重症肌无力患者中miR-150-5p的相对表达水平增加,且与IL-10的水平呈正相关,IL-17的水平呈负相关     

α-硫辛酸联合甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变的疗效及对血清SOD、MDA和AOPPs水平的影响

目的 探讨α-硫辛酸与甲钴胺联合治疗糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)患者的临床疗效及对氧化应激和炎性因子水平的影响。方法 回顾性分析74例DPN患者的临床资料,根据患者治疗方法的不同分为2组(对照组和实验组),对照组单用甲钴胺治疗,实验组接受α-硫辛酸和甲钴胺联合治疗; 治疗前后检测其氧化应激和炎症反应各指标水平的变化情况,同时对2组患者的临床疗效和不良反应进行评价。结果 所有受试者治疗后异常感觉、麻木等症状均明显改善(P<0.05),实验组治疗后各症状评分及总评分降低幅度明显大于对照组(P<0.05); 2组患者经过治疗后血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和(AOPPs)水平较治疗前均明显下降(P<0.05),且实验组降低更明显(P<0.05); 治疗后实验组血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)和白细胞介素-6(IL-6)水平显著低于治疗前以及同期对照组(P<0.05); 2组患者恶心、恶吐等副作用发生率比较无显著差异(P=0.112)。结论 α-硫辛酸联合甲钴胺治疗DPN患者具有显著疗效,氧化应激及炎症反应明显改善,且不良反应发生率低     

帕金森病患者和健康对照者的纵向CSF生物标志物对比研究

目的 探讨帕金森病(Parkinson's disease,PD)患者脑脊液(CSF)生物标志物的水平变化及其临床意义。方法 选取本院2018年3月-2019年3月收治的70例PD患者,并根据改良PD综合评分量表(UPDRS量表)及Hoehn-Yahr评分标准将患者分为轻度组(n=38)、中度组(n=18)和重度组(n=14)。另选择同期于本院接受体检健康人员70例作为对照组,检测并比较4组研究对象CSF生物标志物蛋白α-突触核蛋白(α-syn)、磷酸化Tau蛋白(P-Tau)及总Tau蛋白(T-Tau),微小RNA133 b(miR-133b)及C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-8(IL-8)水平。结果 各组性别、年龄比较无明显差异(P>0.05); 不同病情严重程度PD患者UPDRS评分比较有明显差异,且均显著高于对照组(P<0.05); PD患者轻度组、中度组及重度组H-Y评分比较有明显差异(P<0.05)。各组α-syn、P-Tau、T-Tau、miR-133b、CRP及IL-8水平比较有明显差异(P<0.05),且随着PD患者病情严重程度加重,α-syn水平显著降低,P-Tau、T-Tau、miR-133b、CRP及IL-8水平显著升高(P<0.05)。Pearson相关分析显示,α-syn与UPDRS评分呈显著正相关,P-Tau、T-Tau、miR-133b、CRP及IL-8与UPDRS呈显著负相关(P<0.05)。受试者工作曲线(ROC)显示α-syn、P-Tau、T-Tau、miR-133b、CRP及IL-8水平诊断PD的曲线下面积(AUC)分别为0.755、0.785、0.742、0.746、0.779、0.755,联合诊断的AUC为0.905。结论 脑脊液生物标志物的水平变化是PD发生与发展的重要参考指标,其对于PD的诊断和病情严重程度判断具有重要价值     

瑞香素通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路来减轻OGD/R诱导的海马神经元炎症反应和凋亡

目的 探讨瑞香素通过抑制硫氧还蛋白结合蛋白(Thioredoxin-interacting protein,TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)信号通路来对氧糖剥夺/复氧(Oxygen-glucose deprivation/Reoxygenation,OOGD/R)诱导的海马神经元炎症反应和凋亡的影响。方法 对体外培养的小鼠海马神经元HT-22做OGD/R处理诱导建立细胞损伤模型,采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting Kit-8,CCK-8)实验检测0、5、10、20、40、80 μmol/L的瑞香素对其细胞活力的影响,筛选出最佳作用水平; 将体外培养的HT-22细胞随机分为对照组、模型组、瑞香素(40 μmol/L)组、TXNIP空载(转染TXNIP空载质粒)组、TXNIP过表达(转染TXNIP过表达质粒)组、瑞香素(40 μmol/L)+TXNIP过表达组,以瑞香素和质粒提前处理12 h后进行OGD/R诱导建立细胞损伤模型; 采用二苯甲亚胺、三氯化氢2'-(4-羟基苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5'-二-1H-苯并咪唑(2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5'-bi-1H-benzimidazole,trihydrochloride,Hoechst)33258染色及流式细胞实验检测各组HT-22细胞凋亡情况; 采用试剂盒检测各组HT-22细胞线粒体膜电位; 应用酶标仪测量各组HT-22细胞肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(Interleukin,IL)-6、IL-1β、IL-18、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)及乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)释放水平; 采用免疫印迹实验检测各组HT-22细胞TXNIP/NLRP3通路蛋白表达水平。结果 选择40μmol/L瑞香素处理OGD/R诱导HT-22细胞进行后续实验; 与对照组比较,模型组HT-22细胞凋亡率、细胞TNF-α,IL-6,IL-1β,IL-18及ROS水平、细胞LDH释放水平、细胞TXNIP,NLRP3及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)蛋白表达水平明显升高(P<0.05),线粒体膜电位、细胞SOD及CAT水平明显降低(P<0.05)。分别与模型组、瑞香素+TXNIP过表达组比较,瑞香素组HT-22细胞凋亡率、细胞TNF-α,IL-6,IL-1β,IL-18及ROS水平、细胞LDH释放水平、细胞TXNIP,NLRP3及Caspase-1蛋白表达水平均降低(P<0.05),线粒体膜电位、细胞SOD及CAT水平均升高(P<0.05); TXNIP过表达组HT-22细胞凋亡率、细胞TNF-α,IL-6,IL-1β,IL-18及ROS水平、细胞LDH释放水平、细胞TXNIP,NLRP3及Caspase-1蛋白表达水平均升高(P<0.05),线粒体膜电位、细胞SOD及CAT水平均降低(P<0.05); TXNIP空载组HT-22细胞各指标水平均无明显变化(P>0.05)。结论 瑞香素可通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路来降低OGD/R诱导的ROS和炎性因子过量表达,抑制炎症和氧化应激反应,缓解海马神经元线粒体损伤,减轻神经元凋亡。     

帕金森病患者血清微小RNA-128、221的表达水平变化及其临床意义

目的 探讨帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者血清微小RNA(miR)-128,miR-221的表达水平变化及其对疾病的辅助诊断价值。方法 选取2016年1月-2019年12月本院收治的PD患者210例作为PD组,均根据Hoehn-Yahr分级进行分组,4～5期的患者纳入到重度组(60例),2.5～3期的患者纳入到中度组(82例),1～2期患者纳入到轻度组(68例); 收集同期本院的体检志愿者60例作为对照组; 检测所有研究对象的血清miR-128,miR-221表达水平,收集患者的病程以及统一帕金森病评定量表(Unied parkinson disease rating scale,UPDRS)评分。结果 PD组血清miR-128水平低于对照组,血清miR-221水平高于对照组(P<0.05); 重度组血清miR-128水平低于中度组和轻度组,血清miR-221水平高于中度组和轻度组(P<0.05),中度组血清miR-128水平低于轻度组,血清miR-221水平高于轻度组(P<0.05); 经Pearson分析显示,PD患者血清miR-128水平与UPDRS II评分、UPDRS III评分、Hoehn-Yahr分级均呈负相关(-0.5<r<0,P<0.05),血清miR-221水平与UPDRS II评分、UPDRS III评分、Hoehn-Yahr分级均呈正相关(0<r<0.5,P<0.05); 受试者操作特征曲线(Receiver operating characteristic curves,ROC)分析显示,血清miR-128,miR-221对PD有较高的早期辅助诊断价值,其曲线下面积均大于0.7; 联合诊断的敏感度和约登指数均有所提升,联合诊断对PD的早期辅助诊断价值更高。结论 PD患者血清miR-128水平呈异常低表达、miR-221水平呈异常高表达,二者均与患者的病情严重程度存在一定的相关性,且对PD有较高的早期辅助诊断价值。     

下调PAR-1对脑出血模型大鼠的干预效果及作用机制

目的 探讨下调蛋白酶激活受体-1(Proteinase activated receptor-1,PAR-1)对脑出血模型大鼠的干预效果及相关作用机制。 方法 选取40只健康清洁级雄性大鼠,建立脑出血模型,分为假手术组10只,模型组、对照(pcDNA3-PARls)组、下调PAR-1(PcDNA3-PARlas)组各9只,表达载体构建,评估神经功能评分,检测脑水肿体积、脑组织含水量,脑组织HE染色,检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性、炎症因子及PAR-1相对表达水平。结果 模型组、对照组、下调PAR-1组神经功能评分、脑组织含水量、MDA水平,MMP-9,TNF-α,IL-1β,PAR-1相对表达水平高于假手术组,SOD活性低于假手术组(P<0.05); 对照组神经功能评分、脑水肿体积、脑组织含水量、MDA水平,MMP-9,TNF-α,IL-1β,PAR-1相对表达水平高于模型组,SOD活性低于模型组(P<0.05); 下调PAR-1组神经功能评分、脑水肿体积、脑组织含水量、MDA水平,MMP-9,TNF-α,IL-1β,PAR-1相对表达水平低于模型组和对照组,SOD活性高于模型组和对照组(P<0.05)。结论 下调PAR-1对脑出血模型大鼠干预效果显著,能减轻大鼠脑水肿,可能通过下调PAR-1表达来降低MMP-9,TNF-α,IL-1β水平和调控氧自由基代谢,从而对脑出血后的脑组织起到一定的保护作用。     

芍药苷对蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠NLRP3炎性小体表达的影响

目的 探究芍药苷(Paeoniflorin,PAE)对蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)早期脑损伤大鼠NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family Pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体表达的影响。方法 将60只大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、芍药苷低剂量(PAE-L)组、芍药苷高剂量(PAE-H)组; Sham组不刺破血管,其余各组采用血管内穿孔法构建SAH大鼠模型; PAE-L组、PAE-H组腹腔注射对应剂量的芍药苷(10、20 mg/kg),Sham组、SAH组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,2次/d,共3 d; 采用Garcia评分法评估大鼠神经功能; SAH评分法评估蛛网膜下腔出血情况; 脑组织含水量测定评估脑水肿; 伊文思蓝(Evans blue,EB)染色评估血脑屏障通透性; 苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠脑组织病理损伤; TdT介导的dUTP末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色检测神经元凋亡; 免疫荧光染色检测NLRP3、离子钙结合衔接分子-1(Ionized calcium binding adapter molecule-1,Iba-1)和髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)表达水平; 免疫组化染色检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Cysteinyl aspartate-specific proteinase,Caspase-1)表达水平; Western Blot检测B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X的蛋白质(Bcl-2-Associated X protein,Bax)、Caspase-3,NLRP3,ASC,Caspase-1、白介素-1β(Interleukin-1 β,IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Iba-1和MPO表达水平。采用氧化血红蛋白(Oxygenated hemoglobin,OxyHb)构建原代皮层神经元体外SAH模型,并将其分为对照(Control)组、模型(OxyHb)组、芍药苷低剂量(PAE-L)组和芍药苷高剂量(PAE-H)组; Control组正常培养,OxyHb组、PAE-L组、PAE-H组神经元在含20 uM OxyHb的神经元培养基中培养,PAE-L组、PAE-H组分别加入对应剂量的芍药苷(10、20 uM); 各组神经元孵育48 h; 采用细胞计数试剂盒8(Cell counting kit 8,CCK8)法和TUNEL染色检测神经元活性及凋亡; Western Blot检测Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达水平。结果 动物模型显示,Sham组大鼠脑组织未见积血,脑组织细胞结构清晰可辨; 与Sham组比较,SAH组脑组织可见大量积血,脑组织细胞排列松散,Garcia评分降低(P<0.05),SAH评分、脑含水量、EB渗出量升高(P<0.05),神经元TUNEL阳性细胞数增加(P<0.05),Bcl-2表达水平降低,Bax,Caspase 3,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18,TNF-α表达水平升高(P<0.05),Iba-1和MPO阳性细胞数增加(P<0.05); 与SAH组比较,PAE-L组、PAE-H组脑组织积血减少,脑组织细胞状态趋于正常,Garcia评分升高(P<0.05),SAH评分、脑含水量、EB渗出量降低(P<0.05),神经元TUNEL阳性细胞数减少(P<0.05),Bcl-2表达水平升高,Bax,Caspase 3,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18,TNF-α表达水平降低(P<0.05),Iba-1和MPO阳性细胞数减少(P<0.05)。细胞模型显示,Control组神经元形态正常; 与Control组比较,OxyHb组神经元肿胀,突触丧失,神经元活性降低,凋亡率增高(P<0.05),Bcl-2表达水平降低,Bax,Caspase 3表达水平升高(P<0.05); 与OxyHb组比较,PAE-L组、PAE-H组细胞损伤减轻,神经元活性升高,凋亡率降低(P<0.05),Bcl-2表达水平升高,Bax,Caspase 3表达水平降低(P<0.05)。结论 芍药苷能够减轻SAH后大鼠脑水肿、细胞凋亡和神经损伤,其机制可能为通过抑制NLRP3炎性小体的激活,并抑制小胶质细胞和中性粒细胞浸润,改善SAH后早期脑损伤。     

不同病情严重程度阿尔茨海默病患者血清IL-33,Il-1β的水平变化及其临床意义

目的 探讨不同病情严重程度阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者血清白介素-33(Interleukin-33,IL-33)、白介素-1β(Interleukin-1β,Il-1β)的水平变化及其临床意义。方法 选取60例阿尔茨海默病住院患者(AD组)和40例健康老年者(N组)作为研究对象,进行回顾性病例-对照研究; 采用简易精神状态量表(Mini-mental state examination,MMSE)评价标准将AD组分为轻度组、中度组、重度组; 用酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测患者血清IL-33和IL-1β水平。结果 与N组比较,轻度组IL-1β水平升高(P<0.05),IL-33水平降低,但无明显差异(P>0.05); 随病情加重,IL-33水平呈降低趋势,IL-1β水平呈升高趋势(P<0.05)。回归分析显示,IL-33水平与AD的严重程度呈独立负相关(P<0.001); Il-1β水平与AD的发生风险和AD的严重程度呈独立正相关(P<0.001)。采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)分析显示IL-33的曲线下面积(Area Under Curve,AUC)是0.807,敏感性和特异性最好的截断值是30 ng/L(P<0.01); IL-1β的AUC是0.913,敏感性和特异性最好的截断值是1.77 ng/L(P<0.01)。结论 在体内IL-33和IL-1β水平异常变化可能是导致AD发生或程度加重的危险因素之一; 对于已经发生AD的患者,IL-33和IL-1β水平均可以作为评估病情严重程度的指标。     

中性鞘磷脂酶-2(Neutral sphingomyelin-2 N-SMase2)对大鼠脑缺血再灌注损伤中IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的影响

目的研究中性鞘磷脂酶-2(Neutral sphingomyelin-2 N-SMase2)对大鼠脑缺血再灌注损伤中IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的影响。方法采用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注(ischemia reperfusion I/R)损伤模型,侧脑室注射N-SMase2激活剂(daunorubicin DNR)或抑制剂GW4869,免疫组织化学技术检测蛋白神经酰胺(Ceramide Cera)和N-SMase2的表达,RT-PCR技术检测IL-6、IL-1β、TNF-α等炎性因子的mRNA表达水平。结果与对照组相比,再灌注组(I/R)大鼠脑组织Ceramide和N-SMase2的蛋白表达阳性细胞较对照组增多(P0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的mRNA表达水平升高(P0.05),侧脑室注射GW4869可显著降低IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA水平(P0.05)。结论脑缺血再灌注模型中,N-SMase/Cera通路激活,参与调控神经细胞再灌注损伤,而N-SMase2抑制剂GW4869可明显降低IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的表达。     

长链非编码RNATUG1调控miR-137参与局灶性脑缺血大鼠神经损伤的作用机制

目的 探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(Long non-coding RNA taurine upregulation gene 1,LncRNA TUG1)调控微小RNA(MicroRNA,miR)-137参与局灶性脑缺血大鼠神经损伤的作用机制。方法 将大鼠分为假手术组、模型组、过表达LncRNA TUG1组、敲低LncRNA TUG1组、空质粒(NC)组; Longa法评估大鼠神经功能; 大鼠脑组织称重,计算脑组织含水量; 脑组织2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察脑梗死情况; 脑组织尼氏染色观察海马CA1区神经细胞受损情况; 比色法检测脑组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Cysteing aspartate-spe-cific protease,Caspase)-3和Caspase-9活性; 实时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测脑组织中LncRNA TUG1和miR-137的表达水平; 双荧光素酶法检测TUG1和miR-137靶向关系; 蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)检测脑组织中丝裂原活化蛋白激酶激活蛋白激酶2(Mitogen-activated protein kinase activated protein kinase 2,MK2)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的表达水平。结果 与假手术组比较,模型组、NC组神经功能损伤评分、脑梗死占比、Caspase-3和Caspase-9活性、LncRNA TUG1以及MK2,TNF-α,IL-6表达水平均显著升高,miR-137表达水平显著降低(P<0.05); 与模型组比较,过表达LncRNA TUG1组神经功能损伤评分、脑梗死占比、Caspase-3和Caspase-9活性、LncRNA TUG1以及MK2,TNF-α,IL-6表达水平均显著升高,miR-137表达水平显著降低(P<0.05),敲低LncRNA TUG1组神经功能损伤评分、脑梗死占比、Caspase-3和Caspase-9活性、LncRNA TUG1以及MK2,TNF-α,IL-6表达水平均显著降低,miR-137表达水平显著升高(P<0.05)。结论 LncRNA TUG1通过抑制miR-137表达来调控MK2介导的炎症反应,从而促进局灶性脑缺血大鼠神经损伤。     

联合检测CRP,IL-6,Procalcitonin水平在成人脑膜炎诊断中的应用价值

目的 探讨联合检测C-反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、降钙素原(Procalcitonin)水平在成人脑膜炎诊断中的应用价值。方法 选取病毒性脑膜炎患者30例为病毒组,结核性脑膜炎患者30例为结核组,化脓性脑膜炎患者30例为化脓组; 同时选取体检健康者30例为对照组,检测4组血清中CRP,IL-6,Procalcitonin的表达水平; 用ROC曲线下面积分析CRP,IL-6,Procalcitonin水平对成人脑膜炎的诊断价值。结果 健康人群血清中CRP和IL-6的表达水平均比成人脑膜炎患者低,且在病毒性脑膜炎、结核性脑膜炎和化脓性脑膜炎患者中表达水平有明显差异,血清中Procalcitonin的表达水平在化脓性脑膜炎患者中最高(P<0.05),结核性脑膜炎患者次之(P<0.05),健康人群再次之(P<0.05),病毒性脑膜炎患者中最低(P<0.05)。CRP高表达与成人脑膜炎患者脑脊液中蛋白水平呈正相关(r=0.826,P<0.001); Procalcitonin高表达与成人脑膜炎患者脑脊液中葡萄糖水平呈正相关(r=0.866,P<0.001)。诊断病毒性脑膜炎患者与体检健康者CRP,IL-6,Procalcitonin水平的灵敏度分别为83%、87%、87%,特异度为83%、87%、87%; 诊断结核性脑膜炎患者与体检健康者CRP,IL-6,Procalcitonin水平的灵敏度分别为93%、87%、87%,特异度为67%、73%、87%; 诊断化脓性脑膜炎患者与体检健康者CRP,IL-6,Procalcitonin水平的灵敏度分别为87%、87%、87%,特异度为87%、73%、87%; CRP,IL-6和Procalcitonin水平对成人脑膜炎的联合诊断的灵敏度为88.89%,特异度为83.33%,准确度为87.50%。结论 CRP,IL-6,Procalcitonin水平可作为辅助诊断成人脑膜炎的潜在标志物。     

急慢性注射地卓西平马来酸盐对小鼠额叶microRNA-181b表达的影响

目的研究急慢性注射地卓西平马来酸盐(MK-801)对小鼠额叶中与精神分裂症相关的微小RNA(microRNA,miRNA)-181b表达的影响,探讨其参与精神分裂症病理学的可能机制。方法急性注射实验中40只小鼠随机分成四组,分别腹腔注射不同剂量(0.125 mg/kg,0.25 mg/kg,0.50 mg/kg)的MK-801和生理盐水(简称急性对照组),15 min后用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测额叶miRNA-181b的相对表达量;慢性注射实验中22只小鼠随机分成两组,分别腹腔注射0.25 mg.kg-1.d-1的MK-801和生理盐水(简称慢性对照组),连续14 d,然后检测miRNA-181b的相对表达量。结果急性注射0.125 mg/kg、0.25 mg/kg、0.50 mg/kgMK-801的各组小鼠额叶miRNA-181b的相对表达水平分别为0.65±0.05、0.61±0.05和0.91±0.08。前两个剂量组miRNA-181b的表达明显低于对照组(1.00±0.13),P<0.05,而0.5 mg/kg的MK-801则对miRNA-181b表达无影响(P>0.05)。慢性MK-801注射组miRNA-181b的相对表达量为1.86±0.19,显著高于慢性对照组(1.00±0.10),P<0.05。结论急性和慢性MK-801对额叶中miRNA-181b表达的影响不同,结合miR-181b的分子功能,提示miRNA-181b在急性和慢性模型鼠的构建中起到不同的作用。     

CircTLK1通过miR-424-5p/FBXO3轴对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨环状RNA TLK1(CircRNA TLK1,CircTLK1)对氧糖剥夺/复氧(Oxygen glucose deprivation/Reoxygenation,OGD/R)诱导的神经元HT22损伤的影响以及对微小RNA(microRNA,miR)-424-5p/F-box蛋白3(F-box protein 3,FBXO3)的调控作用。方法 将HT22细胞分为对照组、OGD/R组、sh-NC组、沉默环状RNA TLK1(Silencing circular RNA tlk1,sh-circTLK1)组、sh-circTLK1+抑制剂NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组,除对照组外其余各组细胞均行OGD/R操作,细胞计数试剂盒8(Cell counting Kit 8,CCK-8)法测定HT22细胞活力; 脂连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Adiponectin V-fluorescein isothiocyanate,Annexin V-FITC)细胞凋亡试剂盒测定HT22细胞凋亡; 测定HT22细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)漏出率; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qRCR)法测定HT22细胞miR-424-5p,FBXO3 mRNA水平; 蛋白免疫印记法(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2关联基因X(B lymphoma-2 gene association X,Bax)、活化半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)、FBXO3水平; 双荧光素酶测定CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3靶向关系,并使用RNA下拉实验验证CircTLK1与miR-424-5p关系。结果 与对照组比较,OGD/R组miR-424-5p,HT22细胞活力降低(P<0.05),circTLK1,FBXO3 mRNA水平,HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与OGD/R组比较,sh-circTLK1组HT22细胞活力增加(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平,LDH漏出率降低(P<0.05); 与sh-circTLK1组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组细胞活力降低(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组细胞活力升高(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率降低(P<0.05); CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3均存在靶向关系。结论 CircTLK1沉默可能通过调控miR-424-5p/FBXO3对OGD/R诱导的HT22细胞损伤来发挥保护作用。