黑胸大蠊室内繁殖、发育的生物学特性研究

目的阐明药用昆虫黑胸大蠊室内繁殖、发育的生物学特征。方法系统观察黑胸大蠊在人工饲养条件下生殖产卵、孵化、若虫生长、蜕皮、羽化等生活史全过程。结果统计分析了卵鞘长度、每鞘含卵数及分布、卵孵率、鞘孵率、卵期、若虫发育历期、羽化率、性比、成虫寿命、雌虫产卵期等生物学特征参数。结论实验结果为建立黑胸大蠊的人工饲养及大量繁殖方法提供了重要的科学依据和详细的实验观察资料。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞增殖的影响

目的 探讨藤梨根乙酸乙酯提取物影响肺癌A549细胞生长增殖的作用机制.方法 体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,倒置显微镜观察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后A549细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞增殖活性的影响,集落形成实验观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆原细胞增殖的影响,3H-掺入法检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞DNA合成的影响,免疫组化SP法检测用药后A549细胞Ki-67抗原表达变化.结果 倒置显微镜下观察细胞形态学变化、MTT实验、集落形成实验结果均显示在体外藤梨根乙酸乙酯提取物在一定浓度下可以抑制肺癌A549细胞的生长,当药物浓度在20～160 μg/ml时,抑制呈现出明显的时间和剂量依赖性.并且A549细胞epm值及增殖指数随着药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐降低,仍以40、80、160 μg/ml组作用明显,与对照组比较差异显著,有统计学意义(P＜0.05).结论 藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制肺癌A549细胞的生长、增殖,其机制可能与抑制细胞DNA合成、降低Ki-67抗原表达有关.     

美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制

目的 探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响并探讨其相关机制.方法 取对数生长期状态良好的SMMC-7721细胞分为三组,观察组常规培养24h后加入美洲大蠊提取物,使终浓度分别为300、100、33.3 μg/mL,顺铂组加入顺铂20 μg/mL作用细胞48 h,对照组不做任何处理.采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3活性变化.结果 观察组和顺铂组细胞抑制率明显高于对照组,IC50为100 μg/mL,并呈现时间一剂量依赖关系(P＜0.05);观察组和顺铂组细胞凋亡率明显高于对照组,呈现剂量依赖性(P＜0.05).凋亡过程中线粒体膜电位下降,Caspase-3活性升高(P＜0.05).结论 美洲大蠊提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖并诱导其凋亡作用,线粒体途径可能是其诱导肝癌细胞凋亡的主要机制之一.     

桑黄提取物抑制circ＿0012129表达阻碍结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的 研究桑黄提取物对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其可能的分子机制。方法 体外培养结直肠癌Caco-2细胞，分为低、中、高剂量桑黄提取物组(100、200、400μg/ml桑黄提取物干预Caco-2细胞24 h)、si-NC组(转染si-NC至Caco-2细胞)、si-circ＿0012129组(转染si-circ＿0012129至Caco-2细胞)、高剂量+pcDNA-NC组(400μg/ml桑黄提取物干预转染pcDNA-NC的Caco-2细胞24 h)、高剂量+pcDNA-circ＿0012129组(400μg/ml桑黄提取物干预转染pcDNA-circ＿0012129的Caco-2细胞24 h)和对照组(NC组，细胞常规培养24 h),CCK-8法检测细胞增殖，Transwell检测细胞迁移和侵袭，Western印迹检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的蛋白表达，RT-qPCR法检测circ＿0012129表达。结果 与NC组比较，桑黄提取物组Caco-2细胞A值、迁移数和侵袭数、MMP2、MM...     

夏枯草提取物对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及机制探讨

目的 观察夏枯草提取物对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,并探讨其机制.方法 Raji细胞分别加入不同浓度夏枯草提取物进行培养,MTT法检测Raji细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞学形态,琼脂糖凝胶电泳观察Raji细胞DNA凋亡情况;流式细胞仪检测Raji细胞凋亡率.结果 不同浓度的夏枯草提取物对Raji细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为(18.01±0.92)μg/ml;随夏枯草提取物作用时间的延长Raji细胞DNA凋亡条带增宽变亮,细胞凋亡率升高.结论 夏枯草提取物可抑制Raji细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡有关.     

基于P53、Bax、Caspase-3基因表达探讨竹节参水提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 基于P53、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3基因表达探讨竹节参水提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响。方法 以宫颈癌HeLa细胞为研究对象,给予不同浓度竹节参水提取物(0、50、100、150μg/ml)进行培养(分别为A、B、C、D组),MTT法检测HeLa细胞增殖抑制情况;TUNEL法对比HeLa细胞凋亡率;流式术观察HeLa细胞周期;苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态;RT-PCR法测定P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果 与A组相比,B组宫颈癌细胞增殖活力明显减弱(P<0.05);与B组相比,C组宫颈癌细胞增殖活力明显减弱(P<0.05);与C组相比,D组宫颈癌细胞增殖活力减弱。与A组相比,B组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与B组相比,C组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与C组相比,D组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。HeLa细胞周期在竹节参水提取物的作用下G0/G1期上升,S期下降。A组未添加竹节参水提取物,HeLa细胞细胞核形态为卵圆状...     

三叶青水提取物对NK细胞杀伤胃癌BGC-823细胞的影响

目的探讨三叶青水提取物对人NK细胞杀伤胃癌BGC-823细胞的影响及机制。方法采用干细胞生长培养基(SCGM)体外扩增人外周血NK细胞,不同浓度三叶青水提取物作用于NK细胞后,采用CCK8法检测三叶青水提取物对NK细胞增殖率的影响,流式细胞术(FCM)检测NK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(Gra B)及CD107a的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性。结果三叶青水提取物作用人NK细胞48 h后,三叶青水提取物0.0003~78.125μg/ml浓度组的NK细胞增殖明显(P0.05);三叶青水提取物0.305~4.883μg/ml浓度组人NK细胞PFP、Gra B及CD107a表达高于对照组(P0.05);三叶青水提取物0.305~19.531μg/ml浓度组人NK细胞对胃癌BGC-823细胞杀伤活性较对照组增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论三叶青水提取物能促进NK细胞的增殖,能增强NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性,这可能与三叶青水提取物上调NK细胞PFP、Gra B及CD107a表达有关。     

杜仲叶提取物对人牙周膜干细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的研究杜仲叶提取物对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)体外增殖与成骨分化的影响。方法原代培养hPDLSCs,分别将含10~(-4),10~(-5),10~(-6) g/ml杜仲叶提取物的传统矿化诱导培养基与hPDLSCs作用作为实验组,以DMEM完全培养基为空白对照组,以传统矿化诱导培养基为阳性对照组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的增殖活性、检测碱性磷酸酶(ALP)活性、RT-PCR法检测各组细胞成骨相关基因(Runx2,OPN,OCN)的表达。结果 MTT结果显示,5组细胞分别培养1 d后,OD值均较小,组间无显著差异(P0.05)。各组细胞OD值在3～7 d持续增加,实验组显著高于空白对照组和阳性对照组(P0.05)。浓度为10~(-4),10~(-5),10~(-6) g/ml的杜仲叶提取物均可促进hPDLSCs的增殖,且各实验组OD值随着杜仲叶提取物质量浓度的增加而增加,存在剂量依赖效应。3个实验组和阳性对照组ALP活性均明显增高,且各实验组与阳性对照组差异显著(P0.05)。空白对照组的ALP活性变化不显著。ALP活性变化具有时间依赖性,实验组和阳性对照组从第5天开始显著升高,第7天达到最高值。RT-PCR结果显示,各实验组和阳性对照组的Runx2,OPN,OCN表达均上调,且3个基因的表达量在各实验组均明显高于阳性对照组、空白对照组(P0.05,P0.01)。结论质量浓度为10~(-4),10~(-5),10~(-6) g/ml的杜仲叶提取物可促进hPDLSCs增殖和成骨分化,其中10~(-4) g/ml浓度作用最显著。     

日本血吸虫雄虫抽提物对卵黄培养细胞超微结构的影响

目的观察日本血吸虫雄虫抽提物对卵黄培养细胞超微结构的影响。方法灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体,无菌处理后分离雌、雄虫体。取雌虫卵黄腺段虫体,冷消化法制备细胞悬液,将细胞接种于培养瓶中,随机分为对照组和实验组。对照组以常规培养基培养,实验组以常规培养基含100μg/ml雄虫抽提物培养。培养第7天,取实验组与对照组细胞制备标本并观察。结果实验组成熟卵黄细胞出现概率较对照组高,核和胞质染色均匀;卵黄滴内的卵黄球之间界限清晰,数目可数;线粒体数目较少,电子密度较低。未成熟卵黄细胞胞质中粗面内质网较丰富。对照组中卵黄细胞的核和胞质电子密度降低,脂滴数目增多,空泡化程度严重,未见线粒体;成熟卵黄细胞中卵黄滴内的卵黄球之间已发生融合,有卵黄球从中释放出来,成为裸露体;未成熟卵黄细胞中卵黄球与外面包绕的膜之间空隙增大,粗面内质网扩大和囊泡变,核糖体脱颗粒。结论日本血吸虫雄虫抽提物对雌虫卵黄细胞在体外的发育与存活具有促进作用。     

鼠妇提取物对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨鼠妇水提取物及乙酸乙酯提取物对骨桥蛋白(OPN)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移的影响。方法采用细胞培养、流式细胞术、MTT等方法,观测鼠妇不同浓度的水及乙酸乙酯提取物分别在基础培养情况下及OPN诱导的条件下针对VSMC凋亡、增殖、迁移的影响作用。结果 (1)OPN组及各浓度鼠妇水提取物、鼠妇乙酸乙酯提取物对于晚期平滑肌细胞的凋亡无影响。(2)不加入OPN刺激时,鼠妇水提取物对于细胞增殖起促进作用,且随着鼠妇水提取物浓度的增加,促进作用增强,呈剂量依赖性。鼠妇乙酸乙酯提取物抑制细胞增殖,鼠妇乙酸乙酯提取物各浓度的增加,抑制作用加强,呈剂量依赖性。给予OPN作用细胞后,两种提取物均发挥抑制细胞增殖作用。(3)OPN组、OPN+低浓度(0.5 mg/ml)鼠妇水提取物组、OPN+高浓度(1.00 mg/ml)鼠妇乙酸乙酯提取物组均可使细胞迁移数量增多,均有促细胞迁移的作用,其中OPN组迁移的细胞数量最多,OPN+低浓度鼠妇乙酸乙酯提取物组、OPN+高浓度鼠妇水提取物组次之。结论鼠妇提取物作为一种纯生物制剂,对于正常生长和刺激增殖后的平滑肌细胞作用是不同的;其对动脉粥样硬化的发生发展变化的抑制作用不是通过促进细胞凋亡来实现的。     

氟中毒对体外培养破骨细胞数量及骨吸收功能的影响

目的 观察氟中毒对体外培养破骨细胞数量及骨吸收功能的影响,探讨其作用机制.方法 机械分离法作用于新生SD大鼠四肢长骨,于TC199培养液(含10%胎牛血清)中获得破骨细胞和骨髓基质细胞.将破骨细胞接种于96孔培养板和象牙片培养,而骨髓基质细胞接种于6孔培养板培养,分别于2 h后换液并染氟(氟化钠),对照组、低氟组、中氟组、高氟组染氟剂量分别为0、2.5×10-5、5.0×10-5、10.0×10-5mol/L.培养2、5d后对培养板中破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,光镜下计数破骨细胞数量;培养5 d后象牙片经1%甲苯胺蓝染色,光镜下分析破骨细胞骨吸收陷窝面积.骨髓基质细胞染氟作用8 h后提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测细胞核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(0PG)mRNA表达水平.结果 ①体外培养2 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞数量分别为(337.5 4-70.5)、(447.5 ±43.4)、(472.9±34.8)、(475.3±24-3)个/孔,各染氟组明显高于对照组(P均<0.05);体外培养5 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞数量分别为(92.5±22.1)、(123.0±26.4)、(135.5 ±22.2)、(136.9 ±23.0)个/孔,各染氟组明显高于对照组(P均<0.05).②体外培养5 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞骨吸收陷窝面积分别为(0.088±0.030)、(0.100 ±0.018)、(0.152±0.015)、(0.242±0.031)mm2/片,中氟组和高氟组明显高于对照组(P均<0.05).③对照组、低氟组、中氟组、高氟组骨髓基质细胞RANKL/OPG mRNA表达比值分别为100.00±56.02、144.95±97.21、223.25 ±184.48、193.98 ±137.93,中氟组和高氟组明显高于对照组(P均<0.05).结论 氟中毒可引起体外培养破骨细胞数量增多,促进其细胞分化及骨吸收活性,该作用可能与其上调 RANKL/OPC,mRNA表达比值有关.

Abstract：

Objective To determine the effects of fluoride on osteoclasts's quantity and bone resorption function in vitro and its mechanisms. Methods The osteoclasts and bone marrow stromal cells(BMSCs) isolated from long bone of new born rats were cultured respectively in TC199 medium (containing 10% fetal bovine serum) with fluoride. The osteoclasts were inoculated in 96-well culture plate and ivory slice, BMSCs were inoculated in 6- well culture plate, respectively, medium were changed after 2 hours incubation. They were divided into control group, low-dose fluoride, medium-dose fluoride and high-dose fluoride groups, the doses of sodium fluoride were 0,2.5 × 10-5,5.0 × 10-5,10.0 × 10-5 mol/L, respectively. Tartrate-resistant acid phosphatase(TRAP) staining positive cells were counted under light microscope after TRAP staining on the 2nd and the 5th day and the pit formed in ivory slices were measured by histomorphometry after staining with toludine blue. The expression of receptor activator of NK-κβ ligand(RANKL) and osteoprotegerin(OPC) was detected by real-time fluorescence quantitative (337.5 ± 70.5), (447.5 ± 43.4), (472.9 ± 34.8), (475.3 ± 24.3)/well in the control group, the low-dose, mediumdose and high-dose fluoride groups, respectively. The differences were statistically significant between these groups and the control group (all P < 0.05). After in vitro culture for 5 days, the numbers of osteoclasts were (92.5 ± 22.1), (123.0 ± 26.4), (135.5 ± 22.2), (136.9 ± 23.0) per well in the control group, the low-dose, medium-dose and high-dose fluoride groups, respectively. The differences were statistically significant between these groups and the (0.088 ± 0.030), (0.100 ± 0.018), (0.152 ± 0.015), (0.242 ± 0.031 )mm2 per piece in the control group, the lowdose, medium-dose and high-dose fluoride groups, respectively. The values of medium-dose and high-dose fluoride BMSCs in the control group, the low-dose, medium-dose and high-dose fluoride groups were 100.00 ± 56.02, 144.95 ± 97.21,223.25 ± 184.48,193.98 ± 137.93, respectively. The values of medium-dose and high-dose fluoride groups were significantly higher than that of control group (all P < 0.05). Conclusions Fluoride can cause increase in the number of osteoclasts in vitro and promote their cell differentiation and bone resorption activity, which may be related to increased expression ratio of RANKL/OPG mRNA in BMSCs.     

黑胸大蠊不同发育阶段可溶性抗原特征分析

为了对黑胸大蠊的不同发育阶段蛋白质抗原进行免疫生化特性分析 ,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)对黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白质组分进行分离鉴定通过酶联免疫印迹 (ELIB)技术分析不同发育阶段抗原的免疫学特性。四种抗原蛋白经SDS -PAGE后银染色 ,均得到清晰的蛋白显色带。卵抗原、若虫抗原、雄成虫抗原、雌成虫抗原分别可见 13、2 8、2 6和 4 1条蛋白区带 ,其中主带分别为 2、10、10、13条 ,分子量大多位于 10kDa - 97kDa范围。具有免疫原性的蛋白质大多分布在 4 3kDa以上分子量范围 ,四种抗原组分相互之间有交叉抗原的存在。结果表明不同发育阶段黑胸大蠊的蛋白质组分从卵 -若虫 -成虫出现次第增多现象并趋于复杂化 ,这对研究黑胸大蠊的发育生物学特征具有一定的潜在意义。     

沙利度胺对系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫凋节作用.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Thd对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的影响,用流式细胞术检测T淋巴细胞早期凋亡及CD3~+CD28~+和CD8~+CD152~+的表达,用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-a mRNA的表达,采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 在体外,500 μg/ml Thd组CD3~+CD28~+表达为(48±9)%显著低于对照组(57±9)%(P<0.05)、500μg/ml Thd组T淋巴细胞凋亡率为(36±8)%显著高于对照组(23±5)%(P<0.05);100、300、500μg/ml Thd组A_(570nm)值分别为:0.39±0.05、0.34±0.04、0.30±0.03较对照组(0.51±0.07)均有明显下降(P<0.05);100、500 μg/ml Thd组CD8~+CD152~+表达分别为(5.0±0.6)%、(7.8±0.7)%,明显高于对照组(4.2±0.6)%(P<0.05);500μg/ml Thd能抑制IL-6 mRNA的表达,各剂量组均抑制IL-10、TNF-a mRNA表达.结论 Thd可能通过抑制T淋巴细胞增殖、CD28的表达、IL-6、IL-10、TNF-a mRNA的表达和促进T淋巴细胞凋亡、CD152表达来下调SLE患者的免疫反应.     

脑康Ⅱ号对脑缺血大鼠认知功能及神经发生的作用

目的观察中药脑康Ⅱ号对脑缺血大鼠空间学习记忆功能及海马神经发生的影响。方法将54只SD大鼠按随机数字表法分为对照组,假手术组,模型组,脑康Ⅱ号小、中、大剂量组(小、中、大剂量组用药量分别是成人用量的5、10、20倍),每组各9只。采用永久结扎大鼠双侧颈总动脉法造模。对假手术组大鼠只分离双侧颈总动脉,不予结扎;对照组大鼠不予任何处理;造模后给予治疗组脑康Ⅱ号治疗,给予对照组、假手术组和模型组等量(2 ml)等渗盐水。造模后9周采用Morris水迷宫定向航行实验和空间搜索实验评价大鼠学习记忆能力。采用免疫荧光染色法、免疫组化法进行神经干细胞(NSCs)增殖、分化的观察。采用Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1和LC-3Ⅱ的表达。结果 (1)造模后9周模型组逃避潜伏期第1~5天分别为(100±13)、(98±13)、(82±14)、(72±15)、(46±7)s,较假手术组和对照组明显延长,差异有统计学意义(均P0.05);搜索距离分别为(1239±127)、(1011±122)、(959±123)、(553±66)、(407±29)cm,较假手术组和对照组明显增加(均P0.01);第5天脑康Ⅱ号小、中、大剂量组大鼠逃避潜伏期和搜索距离均较模型组明显缩短(P0.05),逃避潜伏期分别为(20±6)、(19±8)、(15±6)s,搜索距离分别为(234±38)、(297±23)、(199±22)cm。造模后9周模型组大鼠在原平台所在象限搜索时间为(30±9)s,较假手术组明显缩短(P0.01);脑康Ⅱ号小、中、大剂量组在原平台所在象限搜索时间分别为(34±6)、(38±8)、(40±10)s,均较模型组明显延长(P0.01)。(2)造模后9周免疫荧光与免疫组化结果显示,模型组海马齿状回Brd U阳性细胞数、Nestin阳性细胞数多于对照组和假手术组(P0.05);脑康Ⅱ号中、大剂量组Brd U阳性细胞数和Nestin阳性细胞数较模型组明显增多(P0.05)。模型组中LC-3Ⅱ和Beclin-1表达较对照组和假手术组明显升高(P0.01);脑康Ⅱ号中、大剂量组LC-3Ⅱ的表达分别为143±9、129±9,Beclin-1的表达分别为139±10、124±7,明显低于模型组(P0.01)。结论中、大剂量的脑康Ⅱ号能改善脑缺血大鼠的认知功能,促进海马齿状回神经发生,抑制自噬性细胞死亡。     

不同剂量结核病DNA疫苗的电转染免疫原性研究

目的 研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌内注射加电转染免疫小鼠.每2周免疫1次,共3次.最后1次免疫后2周杀死小鼠.用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）水平;用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞（PBMC）分泌IFN-γ的辅助性T细胞（helper T cell,Th）1细胞百分比、分泌IL-4的Th2细胞百分比,以及Th1与Th2的细胞比值.用SAS 9.2软件处理数据,实验数据以“-x±s”表示,对有关数据进行两因素析因设计的方差分析,两两比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平,50 μg[（646.05±342.53） pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]显著高于生理盐水组[（1.73±3.88）pg/ml]（f值分别为4.065、4.647,P值均＜0.05）和10 μg Ag85A DNA组[（87.83±120.82）pg/ml]（t值分别为3.513、4.094,P值均＜0.05）;10 μg Ag85A DNA电转染组[（357.06±105.18） pg/ml]显著高于生理盐水组（t=2.247,P＜0.05）,高于100 μg Ag85ADNA电转染组[（86.08±135.73） pg/ml],但差异无统计学意义（t=1.706,P＞0.05）;50 μg Ag85ADNA电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]显著高于生理盐水组（t=4.081,P＜0.05）和100 μg Ag85A DNA电转染组（t=3.539,P＜0.05）.与直接肌内注射组IFN-γ水平[（87.83±120.82） pg/ml]比较,10 μg Ag85A DNA电转染组增高3倍[（357.06 pg/ml）/（87.83 pg/ml）]; 50 μg Ag85A DNA肌内注射组[（646.05±342.53） pg/ml]与电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]比较,差异无统计学意义（t=-0.016,P＞0.05）;100 μg Ag85A DNA电转染组[（86.08±135.73）pg/ml]较肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]降低88.35％（t=4.105,P＜0.05）.小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.39±0.84）％;50 μg Ag85A DNA：（1.55±0.33）％;100 μg Ag85A DNA：（2.13±0.47）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±0.47）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.88±0.51）％; 100 μg Ag85ADNA：（1.43±0.68）％]均高于生理盐水组[（0.65±0.31）％]（t值分别为2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均＜0.05）,但不同剂量Ag85A DNA电转染组与肌内注射组之间差异均无统计学意义（t值分别为0.081、0.901和-1.91,P值均＞0.05）.小鼠PBMC分泌IL-4的Th2细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±1.18）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.14±0.78）％; 100 μg Ag85A DNA：（1.24±0.76）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.19±1.09）％; 50 μg Ag85A DNA：（2.06±0.96）％;100 μgAg85A DNA：（1.47±0.65）％]均显著低于生理盐水电转染组[（4.14±2.55）％]（t值分别为-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均＜0.05）,但不同剂量DNA肌内注射组与DNA电转染组之间差异无统计学意义（t值分别为0.284、-1.139和-0.292,P值均＞0.05）.结论 DNA电转染免疫可以增强低剂量DNA疫苗的免疫应答,使用少量的DNA疫苗就可以产生较好的免疫效果.     

卡氏肺孢子虫肺炎肺表面活性蛋白A和D的变化

目的 研究卡氏肺孢子虫肺炎（ＰＣＰ）引起的肺泡表面活性蛋白Ａ和Ｄ（ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ）的变化，以探讨其在ＰＣＰ发病机制中的作用和治疗中的意义。方法 采用清洁级ＳＤ大鼠每周２次皮下注射醋酸可的松方法建立ＰＣＰ模型不实验组，并设正常对照组，阴性对照组，细菌性肺炎组。８～１２周分批处死动物，收集支气管肺泡灌洗 液（ＢＡＬＦ），细胞计数分类；采用免疫斑点测定ＢＡＬＦ中ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ含量。结果 根据实验     

慢性氟中毒对大鼠精子活动度的影响

目的 探讨慢性氟中毒对大鼠精子活动度的影响,为氟的生殖毒性研究提供实验依据.方法 健康雄性Wistar大鼠32只,体质量150～180 g,按体质量随机分为4组:生理盐水(对照)组、低、中、高氟组(100、200、300mg·kg~(-1)·d~(-1)NaF),灌胃染毒90 d,每天称体质量.染毒结束后处死大鼠,摘取肝脏、肾脏、睾丸,称质量并计算脏器系数;取附睾游离精子,WLJY-9000型伟力彩色精子质量检测系统测定精子运动参数.结果 染毒第30天低、中氟组大鼠体质量[(235.00±14.56)、(235.44±24.99)g]高于高氟组[(206.00 ±18.16)g,P均<0.05)];第60、90天组大鼠体质量比较差异无统计学意义(F值分别为0.578、1.893,P均>0.05).大鼠肝脏系数、肾脏系数、睾丸系数组间比较差异无统计学意义(F值分别为2.148、0.907、1.801,P均>0.05).精子运动参数,平均路径速度(VAP)高氟组[(25.04 ±4.59)μm/s]较对照组[(20.22 ±3.29)μm/s]升高;直线速度(VSL)低、中、高氟组[(18.82 ±3.19)、(17.84 ±4.54)、(16.46 ±2.63)μm/s]较对照组[(12.48 ±1.73)μm/s]升高;直线性(LIN)低、中、高氟组[(23.84±1.58)%、(24.99±3.37)%、(26.75 ±5.07)%]较对照组[(33.29±4.00)%]降低,摆动性(WOB)中、高氟组[(47.03 ±3.98)%、(49.21±7.73)%]较对照组[(38.09 ±0.48)%]升高;平均移动角度(MAD)低氟组[(68.29 ±5.71)度/s]较对照组[(81.57 ±8.44)度/s]降低;鞭打频率(BCF)高氟组[(11.47 ±0.61)次/s]较对照组[(9.49 ±0.34)次/s]升高;精子密度(p)低、中氟组[(1.26 ±0.24)×10~9、(1.84 ±0.50)×10~9/L]较对照组[(3.94±1.10)×10~9个/L]降低(P均<0.05);曲线速度(VCL)、前向性(STR)、侧摆幅度(ALH),组间比较差异无统计学意义(F值分别为0.264、2.209、1.667,P均>0.05).结论 慢性氟中毒可影响大鼠精子活动度.降低精子密度.损害大鼠生殖系统.     

氧化应激及白细胞介素1β在痛风性关节炎中的作用及丙丁酚对其影响

目的 探讨丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素1B(IL-1β)在急性痛风性关节炎发病中的作用及丙丁酚的治疗作用.方法 在大鼠单侧踝关节腔内注射尿酸钠晶体建立急性痛风性关节炎模型,观察各组不同时间关节肿胀指数的变化及丙丁酚干预72 h后关节液中一些炎症介质和白细胞计数的变化.结果 造模后关节肿胀指数逐渐增高,11 h后达高峰.丙丁酚高剂量组48 h时关节肿胀指数明显低于模型组(P＜0.05),72 h中高剂量组低于模型组(P＜0.05).中高剂量组丙二醛含量分别为(14.45±3.11)和(11.54±3.10)nmol/ml,与模型组(24.46±4.27)nmol/ml比较明显下降(P＜0.01);中高剂量组SoD含量分别为(25.56±4.51)和(44.61±4.11)U/ml,与模型组(13.32±2.02)U/ml比较明显升高(P＜0.01);高剂量组IL-1β含量为(15.41±3.12)pg,较模型组(19.87±3.99)pg明显下降(P＜0.05);中高剂量组白细胞计数分别为(11.08±1.64)×10~7/L和(7.43±1.52)×10~7/L,较模型组(14.18±2.30)×10~7/L明显下降(P＜0.01).结论 急性痛风性关节炎发病中丙二醛、IL-1β明显升高,SOD明显降低.中高剂量丙丁酚能有效控制急性痛风性关节炎的发作.且高剂量组疗效与秋水仙碱组疗效相当.     

复方肝毒清对二甲基亚硝胺诱导小鼠肝损伤模型的保护作用

[目的]探讨复方肝毒清对二甲基亚硝胺（Dimethylnitrosamine,DMN）诱导小鼠肝损伤模型的保护作用。[方法]将60只小鼠随机分为空白对照组、模型组、联苯双酯组及复方肝毒清高、中、低剂量组。空白对照组予0.85%氯化钠10 ml/kg灌胃,其他各组以15 mg/kg DMN腹腔注射建立小鼠肝损伤模型,同时后4组分别按150mg/kg联苯双酯滴丸和20、10、5 g/kg复方肝毒清灌胃,每12 h给药1次,共4次。赖氏法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、清蛋白水平;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）水平;定量PCR法检测肝组织TNF-α、IL-1βmRNA的表达。[结果]复方肝毒清不仅能够显著改善肝功能和肝组织病理,而且能明显降低血清TNF-α、IL-1β水平和肝组织TNF-α、IL-1βmRNA的表达。[结论]复方肝毒清可能是通过减少炎症细胞因子的分泌而达到保护肝脏的作用。     

(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯对类风湿关节炎的免疫调节机制研究

目的 ①研究(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对类风湿关节炎(RA)患者外周血和滑液中T细胞增殖的影响及对RA相关细胞因子的免疫调节作用.②观察EGCG对RA滑膜成纤维细胞(FLS)增殖的影响.方法 ①取RA患者外周血(30份)、滑液(23份)分离单个核细胞,并分设空白对照组,阴性对照组,甲氨蝶呤阳性对照组,EGCG低、中、高剂量组,通过同位素(3H)掺入法,在体外研究EGCG对RA患者外周血及滑液中T细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测EGCG对RA外周血及滑液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素-γ、白细胞介素(IL)-1、IL-6和IL-17A的影响.②取RA患者滑膜组织(8例)进行原代培养,并分设空白对照组,甲氨蝶呤组(阳性对照),EGCG低、中、高剂量组,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在体外研究EGCG对RA患者FLS增殖的影响.统计学处理采用方差分析和SNK-q检验.结果 ①RA患者外周血及滑液中EGCG高剂量组每分钟脉冲数(cpm)值[分别是(15 136±2910),(11587±3135)],较阴性对照组(42 856±2127)(35 748±4512)下降,差异均有统计学意义(P均＜0.01);外周血中ECCG高剂量组TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A吸光度值分别是[(321±13)、(298±20)、(132±12)、(197±7)、(59±8)pg/ml],均较阴性对照组[(458±28)、(505±26)、(346±28)、(405±25)、(109±13)pg/ml]下降,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);滑液中EGCG高剂量组TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A吸光度值分别是[(41.4±2.9)、(182±16)、(56.3±11.0)、(34.2±1.9)、(44±8)pg/ml],均较阴性对照组[(388.3±19.3)、(469±20)、(104.2±17.8)、(114.5±4.8)、(104±11)pg/ml]下降,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).②EGCG高剂量组FLS吸光度值(0.080±0.017),较空白对照组(0.274±0.041)下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EGCG可体外抑制RA患者外周血和滑液中T细胞增殖,抑制TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A分泌;可体外抑制RA FLS增殖.