芹菜素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢紊乱的作用及机制研究

目的研究芹菜素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢紊乱的作用及机制。方法 8周龄雄性db/db小鼠随机分组分为模型组、芹菜素组(50 mg·kg~(-1)·d~(-1)),以雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组。各干预8周后,检测小鼠体质量、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、成纤维细胞生长因子-19(FGF-19)、空腹胰岛素水平(Fins)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);肝组织HE染色观察肝细胞脂质蓄积; RT-PCR检测肝脏SREBP1c、FAS、Sirt1、PGC1α、CPT1基因表达; Western blot检测PPARα蛋白表达。结果与模型组比较,芹菜素组小鼠体质量、FBG、CHO、TG、FFA显著降低(P0.05,P0.01),FGF-19显著升高(P0.01); HE染色肝细胞脂肪变性程度减轻,胞内脂滴数量减少,细胞排列整齐;肝脏SREBP1c、FAS mRNA表达降低(P0.05,P0.01),Sirt1、PGC1α、CPT1αmRNA表达显著升高(P0.05); PPARα蛋白表达显著升高(P0.01)。结论芹菜素可以改善糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂肪代谢紊乱,可能是通过下调肝脏SREBP1c、FAS mRNA表达,上调肝脏Sirt1、PGC1α、CPT1α、PPARα表达实现的。     

定喘汤对哮喘模型小鼠肺组织炎性病变及Th2细胞相关炎性因子的影响

目的:研究定喘汤对哮喘模型小鼠气道炎症及气道阻力的干预作用及其可能的作用机制。方法:104只雄性C56BL/6小鼠随机均分为生理盐水对照组、定喘汤对照组、哮喘模型组、定喘汤治疗组,每组26只。哮喘模型组与定喘汤治疗组小鼠予卵蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型。末次激发24h后,每组取10只小鼠测定气道阻力;每组取8只小鼠右下肺组织行HE染色及肿瘤坏死因子α(TNF-α)免疫组化观察肺组织炎性病变,同时取左上肺组织提取蛋白,行蛋白印迹试验(westernblot)检测肺组织中GATA-3蛋白表达;每组取8只小鼠采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素(IL)-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量,计数BALF及外周血中炎性细胞。结果:与生理盐水对照组比较,哮喘模型组小鼠气道阻力显著升高,肺组织出现炎性病变,TNF-α表达升高,BALF及外周血的炎性细胞比例上升,BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量升高,肺组织中GATA-3蛋白表达水平上升。与哮喘模型组比较,定喘汤治疗组小鼠气道阻力显著降低,肺组织炎性病变缓解,TNF-α表达降低,BALF及外周血的炎性细胞比例下降,BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量降低,肺组织中GATA-3蛋白表达水平下降。上述指标在生理盐水对照组与定喘汤对照组间无显著性差异。结论:定喘汤可减轻哮喘小鼠的气道炎性病变,降低气道高反应性,可能与经GATA-3介导抑制Th2细胞相关炎性因子有关。     

阿胶对哮喘大鼠气道炎症及外周血Ⅰ型/Ⅱ型T辅助细胞因子的影响

目的 探讨阿胶对哮喘大鼠Th1／Th2细胞因子的影响及其防治哮喘的作用机制。方法60只Wistar大鼠随机分为生理盐水（NS）对照组（A），低剂量阿胶组（B），中剂量阿胶组（C），高剂量阿胶组（D），斯奇康组（E），哮喘对照组（F）。用酶联免疫吸附试验（EIASA）检测血液中自介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）水平的变化。HE染色观察肺组织病理学变化。结果与NS对照组比较，哮喘模型组血液中IFN-γ水平显著降低（P＜0．01）。与哮喘模型组比较，阿胶低、中剂量组和斯奇康组IL-4水平显著降低（P＜0．01），NS对照组、阿胶低、中剂量组和斯奇康组人鼠肺组织嗜酸性细胞浸润程度也明显减轻。结论哮喘大鼠存在Th2型细胞优势反应，而阿胶可能具有抑制哮喘Th2细胞优势反应的作用，从而调节Th1／Th2型细胞因子平衡，同时，可减轻哮喘大鼠肺组织嗜酸性细胞炎症反应。     

咳喘宁对病毒诱发哮喘模型大鼠CD4+、CD8+T细胞内信号转导子和转录激活子6表达的影响

目的通过观察咳喘宁对呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘模型大鼠CD4+、CD8+T细胞内信号转导子和转录激活子6(STAT6)表达的影响,阐明咳喘宁防治RSV诱发支气管哮喘的机理。方法分别从磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、模型组大鼠外周血中提取单个核细胞,采用免疫磁珠法分离获得CD4+、CD8+T细胞并对其行纯度鉴定与活力检测。采用免疫荧光法,使用流式细胞仪测定T细胞内STAT6蛋白的表达水平,以中药咳喘宁进行干预,动态观察细胞培养过程中,咳喘宁对CD4+、CD8+T细胞中STAT6蛋白表达的调节作用。结果免疫磁珠法获得的CD4+、CD8+T细胞纯度与活力均支持实验的下行进展。与 PBS 对照组比较,模型组 CD4+T 细胞含量显著升高(P＜0.01),CD8+T 细胞含量升高不明显(P＞0.05)。模型组大鼠CD4+T与CD8+T细胞内STAT6的表达增高,咳喘宁治疗组CD4+与CD8+T细胞内STAT6的表达水平比模型组显著下降,差异有统计学意义(P＜0.01);与地塞米松、沙丁胺醇组比较,咳喘宁组 CD4+、CD8+T 细胞内 STAT6的表达水平略高,但差异无统计学意义(P＞0.05)。结论咳喘宁通过下调哮喘模型大鼠CD4+、CD8+T细胞内STAT6的表达,纠正哮喘中Th2细胞的过度增殖分化,影响Th2免疫应答优势,从而减少伏痰的产生,达到防治支气管哮喘的目的。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠肺组织STAT1的调控作用

目的:研究固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠肺组织中转录激活因子和信号转导子1(STAT1)的调控作用。方法:用卵蛋白(OVA)和RSV对BALB/c小鼠反复致敏刺激复制哮喘缓解期小鼠模型(正常组除外),随机分为模型组、预防组、固本防哮饮组和孟鲁司特钠组(每组15只)。观察各组小鼠的一般行为活动和病理学变化特点,用Real-time PCR法测定肺组织STAT1、IL-5 m RNA表达,Western Blot检测肺组织STAT1蛋白表达。结果:模型组小鼠肺组织可见支气管壁水肿、增厚,周围有嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润。预防组、固本防哮饮组及孟鲁司特钠组小鼠肺脏病理改变显著改善,支气管壁充血水肿减轻,管壁和平滑肌厚度减小,且嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润也显著减少。模型组肺组织中STAT1、IL-5 m RNA及STAT1蛋白显著高表达(P<0.01),预防组、固本防哮饮组及孟鲁司特钠组均能降低其表达,且孟鲁司特钠组降低肺组织STAT1 m RNA及蛋白表达更明显。结论:固本防哮饮可以降低哮喘缓解期小鼠肺组织IL-5、STAT1 m RNA及STAT1蛋白表达,减轻气道炎症,抑制哮喘发作并能预防哮喘的发作。     

肝郁对哮喘大鼠辅助性T细胞17和调节性T细胞的影响

目的 研究肝郁(肝气郁结证)对哮喘大鼠辅助性T淋巴细胞17 (Th17)、调节性T细胞(Treg)、白细胞介素-17 (IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)及气道炎症反应的影响,阐明肝郁型哮喘发病的免疫机制.方法 利用中医肝郁证动物模型和西医哮喘动物模型的建模方法,建立大鼠肝郁型哮喘的病证结合模型.收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并进行细胞总数及分类计数、肺组织进行病理学观察;流式细胞术检测外周血中Th17和Treg细胞占CD4+T细胞比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中IL-17、IL-10的水平.结果 肝郁哮喘组、哮喘模型组炎性细胞总数为[(96.86±4.43)×107/L、(88.22±3.22)×107/L]、嗜酸性粒细胞比例为[(27.58±4.65)％、(22.67±2.43)％]、Th17细胞比例为[(6.86±0.98)％、(6.01±0.77)％]、IL-17水平为[(48.88±8.06) pg/ml、(43.24±6.32) pg/ml]均高于正常对照组[(30.58±2.49)×107/L、(0.78±0.12)％、(2.80±0.82)％、(24.11±3.40) pg/ml];肝郁哮喘组和哮喘模型组Treg细胞比例[(3.09±0.55)％、(3.96±0.66)％]及IL-10水平[(19.79±2.80) pg/ml、(20.29±3.12) pg/ml]均低于正常对照组[(8.02±1.26)％、(30.79±4.01) pg/ml].肝郁哮喘组炎性细胞总数(96.86±4.43)×107/L、嗜酸性粒细胞比例(27.58±4.65)％、Th17细胞比例(6.86±0.98)％、L-17水平(48.88±8.06) pg/ml均高于哮喘模型组[(88.22±3.22)×107/L、(22.67±2.43)％、(6.01±0.77)％、(43.24±6.32) pg/ml];肝郁哮喘组Treg细胞比例(3.09±0.55)％低于哮喘模型组(3.96±0.66)％;肝郁哮喘组肺组织病理学观察症状较哮喘模型组严重.结论 肝气郁结证可促进哮喘的炎症反应、Th17/Treg平衡失调和IL-17水平增加而加重哮喘.合并肝郁证是哮喘反复发作的重要内在因素之一.     

芹菜素对人肝癌细胞Hepg2增殖与葡萄糖摄取的影响

目的:探讨芹菜素对人肝癌Hepg2细胞增殖与葡萄糖摄取的影响。方法:以Hepg2细胞为研究对象,实验均用0.625~10μmol·L~(-1)不同浓度芹菜素作用于细胞,细胞密度以6×10~3个/m L接种于96孔培养板,5复孔/组,分别培养24,48,72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制情况;同时,取96孔板培养24,48,72 h的细胞上清液,用葡萄糖测定试剂盒检测Hepg2细胞葡萄糖摄取情况;细胞密度以10~6个/m L接种于6孔培养板中,培养48 h后,Western blot检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的变化。结果:与对照组比较,芹菜素各浓度组均能抑制Hepg2细胞的增殖,且抑制作用呈时间和浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);芹菜素各浓度组作用后Hepg2细胞对葡萄糖的摄取明显减少(P0.05,P0.01);与对照组比较,GLUT1蛋白随着芹菜素浓度的升高表达减少(P0.05,P0.01)。结论:芹菜素具有抑制人肝癌Hepg2细胞增殖与葡萄糖摄取的作用,为肝癌的预防和治疗提供新的思路。     

儿童支气管哮喘中医证型及证素的文献研究

目的:探讨儿童支气管哮喘中医证型及证素的分布规律。方法:对国内三大数据库知网、维普、万方自建库至2015年12月的全部期刊进行检索,对符合要求的儿童支气管哮喘证型和证素进行归纳总结,原始数据用Excel表建立数据库,利用频数分析法进行统计分析。结果:共纳入文献311篇,其中哮喘发作期193篇,缓解期118篇。经统计得出儿童支气管哮喘发作期证型包括热哮、寒哮、痰热壅肺等11个证型;缓解期包括肺脾气虚、肾气亏虚等16个证型。证素分布情况:发作期病位在肺,其次为肾、脾;病性为热与寒,其次为痰、瘀等。缓解期主要病位在肺,其次为脾、肾;病性主要为气虚,其次为阴虚、阳虚、痰湿等。结论:儿童支气管哮喘发作期以实证为主,病性以热、寒、痰、瘀多见,病位在肺;缓解期以虚证为主,病性以气虚多见,病位主要在肺、脾、肾。     

芹菜素抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用研究

目的探讨芹菜素对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法运用细胞培养、光镜观察及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测芹菜素对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析芹菜素对SKOV3细胞增殖周期的影响。结果 10～80μmol/L芹菜素均能抑制SKOV3细胞的生长,且呈明显的时间、剂量依赖关系。细胞周期分析显示芹菜素组G2/M期细胞比例明显增多,呈量效关系。结论芹菜素抑制SKOV3细胞增殖,可能通过使SKOV3细胞停滞在G2/M期而诱导其凋亡。     

雷公藤多甙对哮喘患者Th1、Th2细胞因子产生的影响

目的：了解雷公藤多甙对哮喘患者Th1,TH2细胞因子的影响，进一步探讨雷公藤多甙治疗哮喘的,机制。方法：选12例中，重度哮喘患者，口服雷公藤多甙每日40mg 或60mg治疗4周，治疗前后取外公藤甲素处理24h，收集培养上清，用酶联免疫吸附试验（ELISA）对患者血清及PBMC培养上清IL－2，IL－4，IL－5，γ干扰素（IFN－γ）水平进行检测。结果：（1）雷公藤多甙治疗后哮喘患者血清中IL－2，IL－4，IL－5水平较治疗前降低（P＜0．01），而IFN-γ治疗前后均在检测灵敏度（25pg/ml)以下。（2）雷公藤甲素处理后哮喘患者PBMC分泌IL－2，IL－4，IL－5减少（P＜0．01，P＜0．05），而IFN－γ也在检测灵敏度以下。结论：雷公藤多甙对哮喘患者Th2细胞因子的产生具有明显的抑制作用，是治疗哮喘的重要机制，但雷公藤多甙对Th1细胞因子的产生也有抑制作用，说明雷公藤抑制Th2,Th1 细胞因子产生的作用无特异性。     

艾迪注射液对食管鳞癌放疗患者Th1/Th2转录因子和细胞因子表达的影响

目的 探讨艾迪注射液对食管鳞癌放疗患者Th1/Th2转录因子和细胞因子表达的影响。     

灯盏细辛注射液通过调节JAK2/STAT3信号通路抗脑卒中大鼠神经损伤的研究

[目的] 探讨灯盏细辛注射液（EBI）对脑卒中大鼠的神经保护作用及在该过程中对Janus激酶2（JAK2）/信号转导子和转录激活子3（STAT3）信号通路的调节机制。[方法] 通过大脑中动脉闭塞（MCAO）建立缺血性脑卒中大鼠模型,然后将造模成功的大鼠随机分为模型组、尼莫地平组、EBI组、JAK2抑制剂组（AG490组）和EBI+JAK2激动剂组（EBI+CA1组）,每组20只,另外选取20只大鼠只暴露颈动脉不进行结扎作为假手术组。利用神经功能缺损评分评估大鼠神经功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色检测大鼠脑梗死面积;苏木精-伊红（HE）和尼氏（Nissl）染色检测大鼠脑组织的病理性形态;TUNEL染色检测大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）的水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠脑组织中Bax、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。[结果] 与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死面积增大,神经元细胞凋亡率增加,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均升高（P＜0.05）,同时脑组织中神经元退化,神经元数量减少,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）;与模型组相比,EBI组、尼莫地平组和AG490组大鼠脑梗死面积减小,神经元细胞凋亡率减少,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均降低（P＜0.05）,同时脑组织中神经元损伤减轻,神经元数量增加,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达升高（P＜0.05）;进一步利用JAK2激动剂进行回补实验发现,EBI对大鼠神经损伤的保护作用被逆转（P＜0.05）。[结论] EBI能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脑卒中大鼠的神经损伤。     

平喘方及其拆方对支气管哮喘小鼠肺组织转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的：观察平喘方及其拆方对支气管哮喘模型小鼠转录因子T—bet、GATA－3表达的影响,研究平喘方及其拆方防治支气管哮喘的作用机理。方法：通过对BALB／C小鼠用卵蛋白等腹腔注射致敏、雾化吸入激发,建立支气管哮喘动物模型。将120只清洁级雄性BALB／C小鼠,随机分为6组：对照组、模型组、平喘方组、拆方1组、拆方2组、拆方3组。各组分别于雾化激发哮喘后7d、21d分两批处死、取样、检测,动态观察。采用RT—PCR（Real Time PCR）法检测小鼠肺组织T—bet、GATA-3 mRNA的表达。结果：哮喘激发7d,拆方1、2、3组T—bet升高（P〈0．05）;平喘方组和拆方2、3组GATA-3降低（P〈0．05）;拆方3组T—bet／GATA-3比值升高（P〈0．05）。哮喘激发21d,平喘方及拆方1、2、3组T—bet升高（P〈0．01）,GATA-3降低（P〈0．01）,T—bet／GATA-3比值升高（P〈0．01）;其中平喘方组、拆方3组T—bet表达高于拆方1、2组（P〈0．05）,GATA-3低于拆方1、2组（P〈0．01）,T—bet／GATA-3的比值高于拆方1、2组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：平喘方及拆方各组均能不同程度地调节支气管哮喘小鼠Th1／Th2上游因子T—bet／GATA-3 mRNA的表达,对Th1／Th2细胞的失衡有纠正作用,拆方3组疗效接近平喘方组。     

淫羊藿苷对哮喘小鼠肺内嗜酸性粒细胞凋亡和Bcl-2、Bax基因蛋白表达的影响

目的 观察淫羊藿苷对支气管哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡及相关基因蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。     

黄芪对卵蛋白致敏大鼠肺组织中信号转导子和转录激活子6及mRNA表达的影响

 目的观察黄芪(Radix Astragali,RA)对支气管哮喘大鼠支气管信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA表达的影响。方法用卵清白蛋白建立哮喘模型,SD大鼠随机分成4组:正常对照组、模型组、低剂量RA组和高剂量RA组。留取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞(EOS)和分类计数;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达。结果①模型组BALF中EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS％)均显著高于正常对照组(P<0.01), 黄芪组上述指标均显著低于模型组(P<0.01);②免疫组化和原位杂交显示,模型组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA表达均显著高于正常对照组,黄芪组较模型组均明显减弱(均为P<0.01),其主要表达细胞是上皮细胞;③支气管STAT6蛋白、STAT6 mRNA分别与BALF中的EOS绝对值呈显著正相关。结论黄芪有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,其机制可能与其下调 STAT6及其mRNA的表达有关。     

电针对脑缺血大鼠缺血灶区信号转导与转录激活子3表达的影响

目的:研究信号转导与转录激活子3(STAT 3),在脑缺血后不同时间段的变化、信号转导以及电针的干预作用。方法:采用随机数字表法将150只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组又分为2h、1d、3d、1周和3周5个时间段组,共15组。电凝闭大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血模型。电针组电针刺激"百会"大椎"穴,每次30min,每日1次。采用免疫组化和蛋白印迹的方法检测大鼠缺血侧皮质区STAT 3表达水平。结果:局灶性脑缺血2h后,模型组和电针组STAT 3表达水平开始增加,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。缺血1d后,STAT 3水平达到高峰,电针组与模型组的差异具有统计学意义(P<0.001),电针能下调脑缺血后病灶区STAT 3水平的表达,且这种效应一直持续到脑缺血3周(P<0.001,P<0.05)。结论:电针治疗可以通过下调脑缺血后病灶区STAT 3表达水平,持续地参与机体的自我保护机制。