流行性出血热病毒结构多肽的研究

用差速离心和蔗糖密度梯度离心技术从鲁宁—84刘株流行性出血热病毒(EHFV)的细胞培养液中浓缩和提纯出病毒颗粒。病毒经SDS裂解后,进行其结构多肽的SDS—Disc—PAGE。结果表明,EHFV鲁宁—84刘株具有六种结构多肽,分子量分别为VP_1128K、VP_2104K、VP_379K、VP_459K、VP_51K、VP_610K道尔顿,其中VP_1、VP_2和VP_4是三种主要结构多肽,VP_1和VP_4是糖多肽。     

酪氨酸激酶相关蛋白-2(180-188)表位的修饰和初步鉴定

目的修饰人黑色素瘤分化抗原酪氨酸激酶相关蛋白-2的HLA—A2．1限制性的优势表位（180-188)(SVYDFFVWL),提高其与HIA—A2．1分子的结合能力。方法采用MHC主要和次要锚着位的优势氨基酸替换天然表位的相应位点,用多项式方案、量化基序法和QSAR法初步扫描并筛选出与HLA—A2．1亲和力可能较高的多肽,进一步在体外鉴定多肽与HLA—A2．1分子的结合亲和力和结合稳定性。结果与天然肽相比,SML多肽与HLA—A2．1分子的亲和力和结合稳定性较天然表位显著提高。结论SML多肽可能是TRP-2（180-188）天然表位的激动剂。     

WH-1和WH-2滴眼液对实粒性过敏性葡萄膜炎的影响

观察了麝香中分离出来的水溶性多肽WH—1和相当于从WH—1中分离出来的第一色带成份的人工合成代用品WH—2对牛血清的蛋白诱发的过敏性葡萄膜炎(EAU)的影响。结果显示,2％WH—1滴眼液对EAU无抑制,甚至有一定的刺激作用;0.5％WH—2滴眼液降低了房水中抗体反应和房水蛋白含量,眼球病理也证实其明显地抑制了EAU的炎症反应。     

β_2微球蛋白检测在肾病诊断中的临床意义

β_2—微球蛋白(β_2—M)是一种小分子蛋白质,分子量11,800,由一条100多个氨基酸的多肽链所组成,在很大程度上与免疫球蛋白的轻链与重链具有同源区,是HLA—抗原的小分子多肽,细胞表面的重要组成部分。以低浓度存在于尿液、血浆、脑脊液、唾液、乳汁、羊水等各种体液内,由细胞的更新释放所致。健康人产生β_1—M的速率相当恒定,能自     

一种抑制蛋白激酶CK_2活性的新多肽的分离和鉴别

从猪肾上腺髓质嗜铬细胞分泌颗粒裂解物中纯化出 3种新多肽 ,经N 末端降解分析和质谱测定 ,它们分别位于猪嗜铬颗粒蛋白A(CgA) 3 0 8— 3 2 4、3 0 8— 3 2 8及 3 0 8— 3 2 9肽段 ,具有相同N 端区 ,而C 端长度不同。合成的CgA 3 0 8— 3 2 4肽段 ,即GN 1 7在浓度低于 6μmol/L时即可竞争性抑制CK2 活性 ,IC50 为 5 0 μmol/L。     

小鼠组蛋白去乙酰化酶2多肽抗血清的制备

目的利用人工合成小鼠组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)多肽制备特异性抗HDAC2抗血清,用于相关疾病的体内外诊断。方法根据HDAC2基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA、Western blot及免疫组织化学方法鉴定。结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多肽抗原发生阳性反应,效价1∶4 000;Western blot结果显示抗血清可与多肽抗原及APP/PS1转基因小鼠的脑组织发生反应;免疫血清1∶100,1∶200,1∶400,1∶800四个稀释度均能与小鼠脑组织中的HDAC2反应。结论所制备的多肽抗血清可识别组织及血清中的HDAC2,可应用于相关领域的体内外研究。     

β2微球蛋白与透析相关性淀粉样变性

β2微球蛋白(β2m)是由100个氨基酸残基组成的单链多肽,在25位和80位有两个半胱氨酸残基形成二硫键以维持球状结构,相对分子量为11 815.其三维结构及氨基酸序列与免疫球蛋白的稳定区具有同源性,在稳定重链的结构以及在细胞表面主要组织相容性抗原Ⅰ类分子(MHC-Ⅰ)的表达中发挥作用[1].     

病毒性肝炎111例血清β_2——微球蛋白初步观察

β_2微球蛋白(β_2—MG)是由100个氨基酸残基组成的单链多肽,由于其分子量小,电泳又在β_2区,故命名为β_2—MG。有人报道,肾脏疾患,恶性肿瘤,自身免疫性疾病血清β_2—MG 增加,本文观察到病毒性肝炎,肝硬化患者β_2—MG 亦明显增高,与正常人相比,有极显著性差异,现将结果报道如下:对象与方法一、对象观察组:111例均为住院病人,男性85例,女性26例,年龄:3～59岁,平均年龄28     

caveolin-1脚手架样结构域多肽对HEp2细胞迁移和侵袭能力的影响

目的研究caveolin-1脚手架样结构域(caveolin-scaffolding domain,CSD)多肽对HEp2细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法 CSD多肽和乱序多肽由人工合成得到,并在N'末端用生物素标记。用免疫细胞化学法检测CSD多肽在HEp2细胞中的渗透情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell细胞体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力;免疫印迹法检测HEp2细胞中FAK蛋白的表达水平及磷酸化程度。结果免疫细胞化学检测显示CSD多肽能够较好地进入HEp2细胞内;CSD多肽组HEp2细胞迁移能力明显低于乱序组和空白对照组(P均0.01),而乱序肽组与空白对照组之间差异无统计学意义(P0.05);CSD多肽组发生侵袭的细胞数明显低于乱序组和空白对照组(P均0.01),而乱序肽组与空白对照组之间差异无统计学意义(P0.05);免疫印迹法检测结果显示,CSD多肽组FAK相对磷酸化程度明显低于乱序组与空白对照组(P均0.01)。结论 caveolin-1脚手架样结构域多肽可顺利进入HEp2细胞内,而且可以抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,FAK磷酸化水平的下调可能是其中重要的分子机制。     

抗ds—DNA抗体、抗ENA多肽抗体联合检测在SLE诊断中的应用

目的为探讨抗ds—DNA抗体、抗ENA多肽抗体联合检测在系统性红斑狼疮（SLE）诊断中的应用。方法应用抗ds—DNA抗体（间接免疫荧光法IIF）、抗ENA多肽抗体试剂盒（免疫印迹法IBT）分别检测抗ds—DNA抗体及抗ENA多肽抗体谱。结果156例SLE患者中共检出抗ds—DNA抗体阳性98例（62．8％），抗ENA多肽抗体阳性112例（71．8％），SLE患者组抗ds—DNA抗体及抗ENA多肽抗体指标均高于正常对照组（P〈0．01）。结论抗ds—DNA抗体及抗ENA多肽抗体在SLE诊断中具有互补作用，并能提高对SLE诊断符合率，在观察治疗及预后中具有重要的临床价值。     

扇贝多肽对H2O2诱导HaCaT细胞氧化损伤的作用

目的了解扇贝多肽对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法取对数生长期HaCaT细胞,随机分为正常对照组（细胞正常培养）、模型组（200μmol/L的H2O2作用12h）、扇贝多肽不同浓度组（低、中、高浓度,分别用1.42、2.84、5.68mmol/L的扇贝多肽预处理2h后,再给予200μmol/L的H2O2作用12h）,应用Hochest33258染色方法检测各组细胞凋亡率,CCK8检测细胞存活率,以二氢荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）为荧光探针、流式细胞术检测细胞内的活性氧（ROS）含量,蛋白印迹法检测生长阻滞和DNA损伤诱导修复基因45a（Gadd45a蛋白）的表达。结果与正常对照组比较,模型组的细胞凋亡率明显升高（F=439.80,q=38.24,P〈0.01）,细胞存活率下降（F=191.40,q=214.10,P〈0.01）,细胞内ROS含量增加（F=121.10,q=31.02,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达升高（F=66.59,q=14.57,P〈0.01）;与模型组比较,扇贝多肽各浓度组细胞凋亡率明显降低（q=9.60～25.82,P〈0.01）,细胞存活率升高（q=13.47～54.86,P〈0.01）,细胞内ROS减少（q=4.20～12.14,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达降低（q=4.04～15.55,P〈0.01）;扇贝多肽各浓度组间比较,随扇贝多肽浓度升高,细胞凋亡率下降,细胞存活率升高,细胞内ROS含量降低,Gadd45a的表达降低,差异有显著性（q=3.96～23.36,P〈0.05）。结论 1.42～5.68mmol/L扇贝多肽能够清除细胞内的ROS,抑制Gadd45a蛋白的表达,从而保护H2O2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤。     

人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域的折叠识别和结构模拟

目的 对人类多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域进行三维结构预测。方法 利用网络结构模拟SWISS-MODEL服务器进行结构模拟。结果 发现其采用的是β-三叶草折叠方式，二级结构主要为8链，通过与模板蛋白的结构比较，对其可能的活性位点进行了预测。结论 该酶具有蓖麻蛋白样结构域。     

白血病、淋巴瘤患者血清β_2微球蛋白测定的临床意义

早在1968年Beaggard等从肾脏病人的尿液中发现一种分子蛋白质,其分子量为11,800dal,其电泳图位于β_2带,故命名为β_2微球蛋白(β_2-MG)。近年来,经进一步研究,已知β_2—MG系100余种氨基酸的单体多肽组成的蛋白质。起源于人体间质、上皮细胞和造血系统的正常细胞。恶性细取也能合成。它广泛存在于血清、脑脊液、羊     

人类轮状病毒RNA的分离纯化及其在体外的翻译

本文报告筛选人轮状病毒阳性粪便样品的方法和分离纯化有模板活性的HRV ss RNAs,然后在麦胚无细胞蛋白合成系统中进行翻译。结果每毫克HRV ss RNA能合成2～3.5×10~6cpmTCA不溶的HRV各类多肽;经凝胶电泳分析,在1.1×10~6cpm的各种多肽中,相当于McCrae等人报道的VP_1—VP_4四种多肽位置的放射性为5.4×10~5cpm,相当于VP_5—VP_(12)八类多肽位置的放射性为5.3×10~5cpm左右,其数量的分布趋势也相似。     

多肽突变体Cbf-14-2抗青霉素耐药细菌的活性研究

本研究主要探讨了新型多肽突变体Cbf-14-2对携带NDM-1基因重组菌(E.coli BL21(DE3)-NDM-1)的抗菌活性及机制。实验采用肉汤倍比稀释活菌计数法测定多肽对E.coli BL21(DE3)-NDM-1重组菌的MIC/MBC和杀菌曲线,评价多肽的体外抗菌活性;采用重组菌腹腔感染法建立小鼠败血症模型,评价多肽的体内抗菌活性;通过Zeta电位分析和流式细胞术探讨Cbf-14-2抗耐药细菌感染的作用机制。结果表明,多肽Cbf-14-2对携带NDM-1基因的耐药细菌具有良好的抗菌活性(MIC=16 μg/mL),能在2 h内快速杀灭细菌;同时,多肽能显著降低感染小鼠肝、脾、肺和肾脏等组织的细菌负载量,对细菌显示出强效清除能力,将小鼠存活率由10%提高至70%。这主要由于Cbf-14-2能与细菌细胞膜表面负电荷发生静电结合,增加对膜的穿透能力。因此,Cbf-14-2有望成为治疗NDM-1耐药细菌诱发感染的潜在抗菌剂。     

人新型C5a受体C5L2结合域的信息学及其结合力的初步研究

目的 通过生物信息学分析人C5L2受体的配体结构域,并进一步利用生物分子相互作用测定技术(biomolecular interaction analysis,BIA)研究其与配体C5a分子间的相互作用.方法 以人C5L2蛋白的氨基酸序列为基础,利用网络分析软件以及Goldkey计算机分析软件对人C5L2蛋白二级结构及亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、表位等参数进行综合分析,确定可能与rhC5a结合的区域肽段序列,Fmoc方法固相多肽合成候选的结合位多肽,采用IAsys Plus生物传感器系统,以rhC5a为固定相,分别以这些候选结合位多肽为流动相,测定与rhC5a的结合力.结果 合成多肽N2(第12～22位)、C3(第265～275位)可与C5a发生特异性结合,结合率分别为53%和23%.结论 人C5L2分子第3～22、179～183、190～195、265～275位等区域满足各项指标,最可能是其配体C5a的结合域.     

研究胰高血糖素样多肽-1在2型糖尿病治疗中的运用

近年来,治疗2型糖尿病药物中胰高血糖素样多肽-1是广大学者研究的重点。胰高血糖素样多肽-1通过进食刺激肠道L细胞分泌的肠促胰素,与胰高血糖素样多肽-1受体(GLP-1R)相结合让胰腺内、胰腺外的功能得到发挥。GLP-1R广泛分布在人体的肾脏、垂体、肠道、中枢神经系统、肺脏、心脏以及血管内皮等部位。有研究发现,胰高血糖素样多肽-1不但具有促胰岛素分泌、促进胰岛β细胞增生与抑制其凋亡、抑制胰高血糖素分泌等作用,还具有抑制胃排空、增加外周组织对胰岛素的敏感性、增加饱腹感以及对心血管和神经系统的保护作用。本研究胰高血糖素样多肽-1在2型糖尿病治疗中的运用。     

人乳头状瘤病毒16型E2基因的克隆表达

采用分子克隆技术在大肠杆菌中表达HPV16 E2 ORF。用Cfol和BamHI将含有E2基因的3.2kb片段从HPV16基因组中切出来,用S1核酸酶修平末端;同时,表达性载体pBD2 DNA用HindⅢ切开后也用S1核酸酶修平末端.两者连接后转化E coli BMH71—18.用原位杂交技术筛选出阳性重组子,进行DNA酶切分析和蛋白质SDS-PAGB分析及免疫学鉴定.我们认为表达的蛋白质为β-gal与E2的融合多肽。     

TFF2基因调控相关因子在胃癌中的作用及调控机制

三叶因子家族(trefoil factor family,TFF)是胃肠道黏液细胞分泌的具有一个或多个三叶结构域的小分子蛋白质多肽,主要功能是保护黏膜、促进损伤黏膜修复.近年来的研究表明,TFF2与肿瘤尤其是胃癌关系密切.现就TFF2的结构及其调控相关因子在胃癌发生、发展中的作用机制做一综述.     

蝎毒素BmK M2的分离鉴定及其电生理活性研究

从东亚钳蝎蝎毒中分离鉴定出新型的Na⁺通道毒素,采用Sephadex-G-50分子筛、高效液相色谱、多肽指纹图谱及氨基酸测序等技术从野生东亚钳蝎毒液中分离鉴定了一种长链多肽毒素BmK M2,其相对分子质量为7 235.5,由64个氨基酸组成,包含4对二硫键。序列比对显示,BmK M2的序列与已发现的Na⁺通道毒素BmK M1、BmK M3、BmK M9等具有较高的序列和结构相似性,是一种潜在的新型Na⁺通道调节剂。全细胞膜片钳实验结果显示,BmK M2可显著增强电压门控Na⁺通道Nav1.7的激活,延迟Nav1.7的稳态失活及关闭状态失活,但对Nav1.8无活性。实验结果表明BmK M2可作为一种新型的Na⁺通道探针,用于Nav1.7结构功能研究以及靶向药物的开发。