胶体金免疫层析法检测弓形虫循环抗原的研究

目的：建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法（GICA）用于检测血清中弓形虫循环抗原（CAg）。方法：用胶体金颗粒标记弓形虫单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中的弓形虫循环抗原与测试条上的金标记单克隆抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果：用GICA与ELISA比较检测105份小鼠血清中循环抗原，两法符合率为95％（P〉0．05）。结论：GICA检测血清中的弓形虫循环抗原特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

应用胶体金免疫层析法检测人群甲型流感病毒抗原阳性率

目的 应用胶体金免疫层析法调查无锡地区甲型流感病毒(FLUA)的流行状况.方法 采用以胶体金标记的双抗体夹心免疫学检测方法,对无锡地区2009年6月-2010年3月,15 890例鼻咽拭子样本进行特异性FLUA抗原检测.结果 应用胶休金免疫层析法检测15 890例鼻咽拭子样本,FLUA抗原总阳性率为4.29%;按年龄分组统计,1～3、4～6、7～9、10～12、13～15、16～18、19～20、21～25、26～30、31～40、41～50、≥51岁年龄组FLUA抗原总阳性率分别为3.31%、2.67%、3.99%、4.10%、4.86%、4.84%、7.19%、5.39%、3.57%、3.06%、3.83%、2.36%,其中19～20岁组中FLUA抗原阳性率最高,统计学分析显示,不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),不同性别间阳性率差异无统计学意义;按时间段统计,200g年6-12月和2010年1-3月FLUA抗原总阳性率在0～6.88%之间,其中8月份FLUA抗原阳性率最高.结论 采用胶体金免疫层析法检测呼吸道标本中的FLUA抗原,可用于人群FLUA病例筛查和疫情监测,为预防控制流感疫情提供流行病学资料.     

全血乙肝表面抗原胶体金层析法的研制及应用

建立一种简便、快速、准确的检测乙肝表面抗原的方法。采用单克隆抗体 ,胶体金标记技术 ,运用双抗体夹心法 ,免疫层析原理 ,建立全血快速乙肝表面抗原胶体金层析。与ELISA法进行对比。乙肝全血试纸条的特异性与ELISA法接近 ,灵敏度比ELISA法稍低 ,符合率为 99.3 %。乙肝全血试纸条具有简便、快速、结果易懂 ,无需特殊仪器 ,末梢全血可即采即测等优点 ,能满足急诊检验的需要 ,尤其为无偿献血者现场采血前检测HBsAg提供了便利条件。适合于广大基层门诊推广 ,并且适合大面积的儿童体检普查     

免疫胶体金层析法快速检测食品中吗啡

食品中罂粟的测定采用液相色谱法,因仪器价格昂贵,不易推广,基层常采用薄层层析法,但该法操作繁杂,而且由于被测样品中往往含有多种香料,对实验造成严重干扰,可能得到不准确结果.本实验采用免疫胶体金层析法进行食品中吗啡分析,该法特异性强、灵敏度高,取得了良好效果.现报告如下.     

胶体金免疫层析法在卫生检疫医学实验中的应用

[目的]研究适用于口岸快速通关放行要求的传染病病原体和标志物的快速检测方法。[方法]采用胶体金免疫层析测定法(GICA)对HIV抗体、HBsAg、丙型肝炎抗体、梅毒螺旋体抗体进行检测。[结果]该方法可在15min内检测出上述病原体和标志物，大大提高了检测速度，可满足部分出入境人员快速通关放行的要求，但在使用时还必须注意9个方面的问题。[结论]CICA快速检测方法仅供出入境传染病监测体检初筛检测使用，最终的确诊应由检疫医师综合各检测指标、临床症状及流行病学调查后作出。     

胶体金免疫层析法在霍乱弧菌诊断中的应用初探

胶体金免疫层析法是目前国内外所建立的一种快速诊断方法,在许多项目的应用中取得了较为理想的效果.霍乱弧菌传统诊断方法是细菌培养法.本文用胶体金免疫层析法与细菌培养法相结合的方式对疫区180份标本进行同步试验,比较分析并摸索出一些经验.现报道如下.     

应用胶体金免疫层析法检测水产品中霍乱弧菌的研究

〔目的〕应用胶体金免疫层析法,研究水产品中霍乱弧菌的快速检测方法。〔方法〕通过模拟水产品棉拭子标本比对试验及现场应用比对试验,比较不同检验方法的差异。〔结果〕70份增菌液中霍乱弧菌理论浓度为1.5×10CFU/ml的模拟水产品棉拭子标本分别按检验方法1、检验方法2检验,同时检出阳性51份,检验方法2的检出率(87%)显著高于检验方法1的检出率(74%);30份增菌液中霍乱弧菌理论浓度为1.5×101CFU/ml的“模拟水产品棉拭子标本”按检验方法2进行检验的检测结果均为阳性。对2000份水产品进行检测的现场应用对照实验结果显示:检验方法3的检出率(0.4%)与检验方法1的检出率(0.3%)差异无显著性;胶体金试纸条实验的假阳性率为8%。〔结论〕在胶体金免疫层析法实验中,增菌液增菌前霍乱弧菌含量为1CFU/ml,通过增菌后可被检出;增菌液霍乱弧菌含量为10CFU/ml,增菌12h后均可被检出;水产品棉拭子标本增菌12h检测阴性者可报告阴性,阳性者则参照《霍乱防治手册》[1]进一步分离鉴定。鱼贝类霍乱弧菌污染菌数较少(103CFU/100g以下)[2],无法满足使用胶体金免疫层析法所要求的含菌量(106CFU/ml)[3],可以通过改良增菌培养液成分,以提高待检菌繁殖能力,在短时间内提高增菌液待检菌浓度,使胶体金免疫层析法的灵敏性高于或接近常规的分离鉴定法。     

建立快速检测鼠疫耶尔森菌的胶体金免疫层析法

〔目的〕　建立检测鼠疫耶尔森菌 (鼠疫杆菌 )的胶体金标记免疫层析方法。〔方法〕　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,并标记鼠疫杆菌的抗体 ,制成免疫层析检测试纸条 ,进行特异性和敏感性评价 ,并对面粉、土壤、奶粉、淀粉等不同材料进行模拟添加鼠疫菌检测。〔结果〕　用多种不同的常见细菌或近缘细菌进行测试 ,未出现非特异性反应 ,检测鼠疫杆菌的灵敏度为 1× 10 5cfu/ml,对水、土壤、奶粉、面粉、淀粉、酵母粉等不同材料中鼠疫杆菌进行检测也取得同样结果 ,10～ 15min即可得到结果。〔结论〕　建立了 1种可以用于现场快速检测鼠疫杆菌的胶体金免疫层析方法 ,为进一步大规模应用奠定了基础。     

胶体金免疫层析法检测葡萄球菌B型肠毒素

目的通过优化制备中各关键步骤的实验条件,建立快速检测葡萄球菌B型肠毒素的胶体金免疫层析法。方法采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备直径16nm的胶体金溶液,葡萄球菌B型肠毒素多克隆抗体制备免疫胶体金复合物,组装胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果用柠檬酸三钠还原法制备的16nm胶体金溶液呈亮红色,其颗粒大小比较均一。胶体金标记抗体蛋白的最低稳定量为15μg／mL,最适稳定量为18μg／mL,标记的最适pH为7．8。此方法检测限为0．2μg/mL,准确度为94．9％。结论制备了葡萄球菌B型肠毒素胶体金免疫试纸条,该方法简便、快速,而且灵敏度高、稳定性强,适用于食品中葡萄球菌B型肠毒素的快速检测。     

鼠疫监测中胶体金免疫层析法的应用效果评价

目的 了解胶体金免疫层析法在鼠疫监测中的作用及其影响因素.方法 对2006年自广西隆林县、西林县鼠疫监测中收集的鼠脏器、鼠血清以及既往鼠疫阳性病人血清,利用胶体金免疫层析技术进行鼠疫菌F1抗原(脏器)与F1抗体(血清)检测.结果 鼠肝脏120份、鼠脾脏99份,胶体金法检测鼠疫菌F1抗原均为阴性;鼠血清235份胶体金法检测鼠疫菌F1抗体为阴性、既往鼠疫阳性病人27例胶体金检测鼠疫菌F1抗体灭活组阳性2例,阳性率为7.41%(2/27),升汞组均为阴性.结论 升汞对鼠疫菌F1抗体的检测有抑制作用;胶体金免疫层析法具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速等优点,在鼠疫监测中具有重要的流行病学意义.     

抗人血白蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制

目的:制备抗人血白蛋白单克隆抗体并对其抗体特性进行鉴定,将其标记胶体金,研制一种快速准确检测尿中人血白蛋白试纸条的方法。方法:用99.8%纯度的人血白蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并对其单克隆抗体的相关性质进行鉴定,制备胶体金,并标记所制备的单克隆抗体,按竞争法制备试纸条。结果:得到两株能够稳定分泌抗体,效价高的杂交瘤细胞系4C2,2F10。结论:建立的免疫层析试纸条,简便、可靠,有望通过进一步改进应用于临床检验。     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌H及Vi抗原基因的应用研究

应用巢式聚合酶链反应技术，通过两种引物（共四对）分别对伤寒沙门氏菌鞭毛Ｈ和Ｖｉ抗原基因扩增，并用非伤寒沙门氏菌作对照。实验表明，两种基因的扩增产物均是特异的，Ｈ抗原基因引物仅对伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因扩增，Ｖｉ抗原基因引物对伤寒沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原基因扩增，余均为阴性。扩增Ｖｉ抗原基因比扩增Ｈ抗原基因敏感，当反应体系中达０．５个菌细胞时，Ｖｉ抗原基因就可检出，而鞭毛抗原基因则需５个菌细胞。检测９２例伤寒患者血液标本，血培养阳性２８例（３０．４３％），巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因阳性３３例（３５．８６％），Ｈ抗原基因阳性３１例（３３．７０％）。伤寒发病早期，当机体伤寒特异性抗体尚处于低水平时，应用巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因，可提高伤寒的诊断率，使该病得到早期治疗     

2008—2013年北京市17株伤寒和副伤寒沙门菌耐药和分子分型研究

目的分析2008—2013年北京市17株伤寒、副伤寒沙门菌耐药及分子分型。方法对2008-2013年通过对北京市肠道门诊监测系统分离到的17株伤寒、副伤寒沙门菌进行生化鉴定、血清分型并运用纸片法进行药敏检测;利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果 17株伤寒、副伤寒沙门菌对三代头孢菌素类药物头孢他啶敏感率达100%,头孢噻肟和头孢曲松敏感率均为93.75%,对氟喹诺酮类药物环丙沙星敏感率为93.75%,萘啶酸耐药率达31.25%。其中16株伤寒、副伤寒沙门菌可分为15种PFGE带型,带型分布较分散。结论北京市伤寒、副伤寒沙门菌分离株对3代头孢类抗生素及环丙沙星敏感;PFGE分子型别较多,无聚集性。     

酶免法检测从业人员伤寒杆菌抗原及临床意义

目的：探讨伤寒杆菌抗原酶免法（ELISA）在伤寒早期诊断中的应用价值。方法：抽取检测对象静脉血，用酶免法检测血清中伤寒杆菌抗原，同时运用肛拭采便作增菌培养，参照GB16001～1995《伤寒、副伤寒诊断标准及处理原则》方法进行伤寒杆菌分离与生化鉴定。结果：酶免法检测从业人员5819人份血清，检出伤寒杆菌抗原阳性205份，检出率为3．5％；肛拭培养5819人份，检出11株伤寒杆菌，检出率为0．2％；ELISA法检出率显著高于肛拭培养（P〈0．01）。结论：伤寒杆菌抗原酶免法特异性较差，阳性结果提示可能存在伤寒杆菌或伤寒抗原，但敏感性高，阴性结果可靠，可作为伤寒杆菌带菌者的监测方法，在早期发现带菌者上具有一定的临床意义。     

伤寒沙门菌的脉冲场凝胶电泳分型方法研究

目的：运用脉冲场凝胶电泳研究宁波市伤寒沙门菌的分子流行病学。方法：选择XbaⅠ酶对伤寒沙门菌染色体DNA进行酶切，采用脉冲场凝胶电泳技术分析电泳酶切指纹图谱，了解其流行状况。结果：14株伤寒沙门菌，根据电泳图谱分析，可分为3个带型。结论：PFGE具有分辨力高，重复性好的特点，是研究伤寒沙门菌分子流行病学较好的基因分型方法。     

云浮市城市污水中沙门菌调查

目的 了解宾馆和饭店污水中沙门菌污染状况。方法 于2003年1-6月采集宾馆和饭店的327件污水样以及部分居民生活区的176件污水样按国家标准检验方法检测沙门菌。结果 宾馆和饭店污水沙门菌阳性率(3．67％)高于居民生活区(0.57％),经确切概率法检验,P=0．04,差异有统计学意义。宾馆和饭店污水检出沙门菌阳性的有12件,共12株菌,共有4个血清群,9个血清型;居民生活区污水检出沙门菌阳性的有1件,菌株是B群鼠伤寒型沙门菌。宾馆和饭店的327件污水水样中,1—3月沙门菌阳性率(5．47％)高于4-6月(0．79％),经确切概率法检验,P=-0．033,差异有统计学意义。结论 云浮市区内宾馆和饭店污水中沙门菌的污染及其对人潜在的致病危险性应引起重视。     

单核吞噬细胞应答伤寒沙门菌的实验研究

目的 研究单核吞噬细胞应答伤寒沙门菌的机理。方法 采用体外培养的PMA分化的THP－1细胞，检测其内化和杀伤胞内伤寒沙门菌的活性，以及伤寒沙门菌诱导PMA分化的THP－1细胞产生TNF－α和IL－12的情况。结果 PMA分化的THP－1细胞内化和杀伤Vi阴性伤寒沙门菌的活性明显高于内化和杀伤Vi阳性伤寒沙门菌的活性。IFN－γ明显中此活性。伤寒沙门菌诱导PMA分化的THP－1细胞可以产生一定量的TNF－α和IL－12，然而，IFN－γ活化的PMA分化的HTP－1细胞产生TNF－α和IL－12的量明显增加。结论 伤寒沙门菌在单核吞噬细胞中的存活可能与Vi抗原的存在有关；IFN－γ在调节机体细胞免疫，防循伤寒沙门菌感染中起着重要的作用。     

福建省首次检出1株赖氨酸脱羧酶阴性的伤寒菌

[目的]防止漏检赖氨酸脱羧酶阴性的伤寒菌株。[方法]2012年5月在一发热病人血液标本中检出1株沙门菌,用沙门菌显色培养基、强、弱选择培养基分离,对菌株进行系统生化、AP120E、美国BD全自动细菌鉴定仪及血清学试验确认。[结果]分离培养、生化特性、血清学试验均符合伤寒沙门菌,只有赖氨酸脱羧酶阴性。经微量生化等系统鉴定为1株赖氨脱羧酶阴性的伤寒菌。[结论]必须注意鉴别赖氨酸脱羧酶阴性的伤寒菌。     

免疫球蛋白在胃液中对伤寒杆菌的杀灭作用

目的观察免疫球蛋白在胃液中对伤寒杆菌的杀灭作用. 方法将含有免疫球蛋白的抗血清与相应的细菌在3种不同pH胃液内和伤寒杆菌混合,一方面以观察胃液对抗体有无破坏作用,另一方面观察其对伤寒杆菌的杀灭作用. 结果胃液在pH为4～5时不但不破坏抗体,还可协助抗体完全杀灭所试细菌. 结论口服特异性抗体防治伤寒杆菌感染具有美好的前景.