米非司酮对子宫内膜癌裸鼠移植瘤细胞凋亡调控的研究

目的探讨抗孕激素米非司酮对人子宫内膜癌HHUA细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的调控作用。方法体外培养人子宫内膜癌HHUA细胞,裸鼠皮下接种HHUA细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,随机分为2组,分别应用米非司酮、精制花生油治疗4周,应用流式细胞术(FCM)检测各组裸鼠移植瘤细胞周期时相和凋亡率;免疫组化技术检测凋亡基因bcl2、Fas和FasL蛋白的表达情况。结果米非司酮治疗组裸鼠移植瘤细胞G0/G1期比例升高,S期细胞比例(SPF)降低(P<0.05),移植瘤细胞凋亡率为15.03%±2.19%,明显高于对照组(3.06%±1.13%)(P<0.01);移植瘤细胞bcl2蛋白表达水平明显下降,而Fas蛋白表达水平升高,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论抗孕激素米非司酮通过调节移植瘤细胞周期分布和凋亡基因,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

米非司酮抑制子宫内膜癌细胞体外增殖的作用

 目的 观察抗孕激素米非司酮对人子宫内膜癌细胞体外增殖活性的影响，并探讨其作用机制。方法 体外培养子宫内膜癌HHUA细胞株，不同浓度米非司酮处理细胞24-96h，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察米非司酮对HHUA细胞增殖活性的影响；免疫组化技术观察HHUA细胞Ki-67和c-myc基因表达的变化。结果 米非司酮以时间一剂量依赖性方式，显著地抑制人子宫内膜癌HHUA细胞的体外增殖活性（P〈0．05）；当米非司酮浓度≥5μmol／L作用细胞24h后，子宫内膜癌HHUA细胞Ki-67和c-myc基因表达水平明显降低。结论 抗孕激素米非司酮以时间一剂量依赖性方式显著抑制子宫内膜癌HHUA细胞的体外增殖活性，并与降调Ki-67和c-myc基因表达密切相关。     

丁酸钠对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞增殖影响的研究

目的 :探讨丁酸钠 (NaB)对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞体外增殖的影响及机制。方法 :不同浓度的NaB作用于体外培养的人子宫内膜癌细胞系HHUA ,通过绘制细胞生长曲线观察NaB对细胞生长的抑制作用 ;用流式细胞仪定量分析细胞周期分布 ;用WesternBlot分析p2 1、p5 3、pRb和E2F1蛋白表达。结果 :NaB能诱导HHUA细胞周期G1期阻滞 ,上调p2 1蛋白表达 ,促进pRb去磷酸化 ,下调E2F1和p5 3蛋白表达。结论 :NaB能抑制HHUA细胞体外生长 ,其诱导细胞周期G1期阻滞可能与p2 1等细胞周期调节蛋白的表达改变有关。     

丁酸钠对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞增殖影响的研究

目的：探讨丁酸钠(NaB)对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞体外增殖的影响及机制。方法：不同浓度的NaB作用于体外培养的人子宫内膜癌细胞系HHUA，通过绘制细胞生长曲线观察NaB对细胞生长的抑制作用；用流式细胞仪定量分析细胞周期分布；用Western Blot分析p21、p53、pRb和E2F1蛋白表达。结果：NaB能诱导HHUA细胞周期G1期阻滞，上调p21蛋白表达，促进pRb去磷酸化，下调E2F1和p53蛋白表达。结论：NaB能抑制HHUA细胞体外生长，其诱导细胞周期G1期阻滞可能与p21等细胞周期调节蛋白的表达改变有关。     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响

 目的　研究雌、孕激素对子宫内膜癌HHUA细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法　用TRAP ELISA法和实时荧光定量PCR技术检测雌、孕激素作用前后HHUA子宫内膜腺癌细胞系端粒酶活性及hTERT RNA的表达 ,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化。结果　雌激素对HHUA细胞端粒酶活性和hTERT的表达有明显增强作用 (P <0 .0 5 ) ,而孕激素对其影响不显著。孕激素作用下 ,G1期细胞比例明显增高 ,S期及G2 ～M期细胞比例明显降低 (P <0 .0 5 ) ;细胞的分裂、增殖受到明显抑制 ;凋亡细胞比例明显增加。雌激素的作用则相反。结论　雌激素能增强子宫内膜癌细胞端粒酶活性和hTERT的表达 ,促进其分裂和增殖 ,降低凋亡细胞比例 ,孕激素的作用相反     

米非司酮对子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤生长作用的研究

目的探讨米非司酮(RU486)对人子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤生长的抑制作用。方法体外培养人子宫内膜癌HHUA细胞,裸小鼠皮下接种HHUA细胞建立裸小鼠移植瘤动物模型,将荷瘤裸小鼠随机分为两组,分别应用米非司酮、精制花生油治疗4周。治疗期间观察各组裸小鼠生长情况、移植瘤体积、增殖率和形态,治疗结束后应用流式细胞术(FCM)检测各组裸小鼠移植瘤组织细胞周期时相的变化和细胞凋亡率;应用免疫组化技术检测基因Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果米非司酮组裸小鼠移植瘤体积第3周明显减小,肿瘤增殖率明显降低(P<0.01)。4周治疗结束后米非司酮组裸小鼠移植瘤细胞G0/G1期比例升高(38.17±3.02)%,S期细胞比例(SPF)降低(43.87±4.29)%,与对照组比较差异均有显著性(P<0.05),移植瘤细胞凋亡率为(15.03±2.19)%,明显高于对照组(3.06±1.13)%(P<0.01);治疗组移植瘤细胞Bcl-2蛋白表达明显降低(1.9±0.61),而Bax呈现过度表达(4.0±1.28)(P<0.05)。结论抗孕激素米非司酮(RU486)能显著抑制人子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤的生长,其抗肿瘤作用与调控细胞周期时相和诱导细胞凋亡相关。     

丁酸钠对人卵巢癌KK细胞和子宫内膜癌HHUA细胞生长的抑制作用

目的：探讨丁酸钠（NaB）对人卵巢癌KK细胞和子宫内膜癌HHUA细胞生长的影响和分子机制及其作为新型抗肿瘤药物的潜力。方法：NaB作用于体外培养的人卵巢癌细胞系KK和人子宫内膜癌细胞系HHUA，用HE染色及DNA荧光染色观察细胞形态学及染色质改变，用流式细胞仪定量分析细胞周期分布及细胞凋亡，用2％琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder，用Western blot分析PARP，Fas,Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：NaB处理两种细胞24小时后，低浓度（≤2mol/L）出现细胞周期停止，G1期细胞百分率达70％以上；中浓度（4mol/L和10mol/L）出现典型凋亡细胞的形态学和染色质改变，高浓度（＞10mol/L）则引起细胞坏死。Western blot分析显示NaB能上调HHUA细胞Fas蛋白表达，而Bcl-2和Bax蛋白表达水平不变。结论：NaB通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡而抑制HHUA和KK细胞生长，浓度不同细胞的反应性也不同，低浓度诱导细胞周期G1期阻滞，中浓度诱导细胞凋亡，NaB对细胞生长的抑制作用具有药物浓度和时间依赖关系，其诱导HHUA细胞凋亡的机制可能与上调Fas蛋白表达有关。NaB对HHUA和KK细胞生长的影响提示其有可能成为一种新型抗肿瘤药物。     

米非司酮增加子宫内膜癌细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的：探讨米非司酮作用于人子宫内膜癌HEC-1-B细胞后对顺铂敏感性的影响及可能的作用机制。方法：体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,经不同浓度的米非司酮和顺铂单药或联合作用后,用四甲基偶氮唑蓝比色法（Mr丌法）测定细胞增殖活性作用、流式细胞仪检测细胞周期、免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bel-2和增殖相关抗原Ki-67蛋白的表达。结果：1．25mg／L和2．5mg／L的米非司酮对HEC-1-B细胞的增殖无明显影响,其与1．0—4．0mg／L顺铂联合作用后,明显增强顺铂对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用（P〈0．05）。1．25mg／L和2．5mg／L米非司酮和2．5mg／L顺铂联合作用组与单用2．5mg／L顺铂组比较,HEC-1-B细胞G1期比率明显增高、S期比率明显下降（均P〈0．05）。细胞的Bcl-2和Ki-67蛋白的表达水平明显下降（P〈0．05）。结论：米非司酮能增强顺铂对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用。其作用机制可能与阻滞细胞周期和调控凋亡相关基因的表达、促进细胞凋亡有关。     

米非司酮对人子宫内膜癌HHUA细胞ER、PR及亚型体外作用的研究

目的　探讨抗孕激素米非司酮体外对人子宫内膜癌HHU A细胞ER、PR及亚型的影响及其与抗肿瘤作用的相关性。方法　体外培养子宫内膜癌HHU A细胞,不同浓度米非司酮处理细胞4 8小时,采用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)半定量法检测PR- A m RNA,PR- B m RNA的表达水平;应用免疫组化法检测HHU A细胞ER、PR受体蛋白的表达变化。结果　米非司酮(5 μmol/ L)显著地降低HHU A细胞PR- B m RNA和PR受体蛋白的表达水平(P<0 .0 5 ) ,但增加米非司酮剂量并不能增强其降调作用。抗孕激素米非司酮对HHU A细胞PR- Am RNA和ER受体蛋白表达无明显影响(P>0 .0 5 )。结论　抗孕激素米非司酮可明显降调子宫内膜癌HHU A细胞PR- B m RNA水平和PR蛋白的表达,并与抑制癌细胞增殖密切相关     

米非司酮增加子宫内膜癌细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的:探讨米非司酮作用于人子宫内膜癌HEC-1-B细胞后对顺铂敏感性的影响及可能的作用机制.方法:体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,经不同浓度的米非司酮和顺铂单药或联合作用后,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性作用、流式细胞仪检测细胞周期、免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和增殖相关抗原Ki-67蛋白的表达.结果:1.25mg/L和2.5mg/L的米非司酮对HEC-1-B细胞的增殖无明显影响,其与1.0-4.0mg/L顺铂联合作用后,明显增强顺铂对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用(P＜0.05).1.25mg/L和2.5mg/L米非司酮和2.5mg/L顺铂联合作用组与单用2.5mg/L顺铂组比较,HEC-1-B细胞G1期比率明显增高、S期比率明显下降(均P＜0.05).细胞的Bcl-2和Ki-67蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:米非司酮能增强顺铂对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用.其作用机制可能与阻滞细胞周期和调控凋亡相关基因的表达、促进细胞凋亡有关.     

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE1细胞凋亡及其作用机制的实验研究

 目的研究三氧化二砷（As₂O₃）诱导人鼻咽癌细胞株凋亡作用及其相关机制。方法采用流式细胞术，电镜、TUNEL方法检测As₂O₃诱导CNE1细胞凋亡作用，免疫组织化学法检测As₂O₃对CNE1细胞p53、bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果经As₂O₃处理的CNE1细胞发生凋亡，表现为FCM可检测到“亚二倍体峰”，形态学上可见核固缩，染色质边集，凋亡小体形成等改变；TUNEL法可检测到细胞内呈棕色颗粒的凋亡细胞，随着药物浓度升高，凋亡细胞发生率逐渐增多，As₂O₃目浓度为0．5mg／L、1．0mg／L和2．0mg／L作用48h后，CNE1细胞的凋亡指数分别为2．66±0．64、8．15±0．96和11．59±0．68，显著高于非药物处理组（0．43±0．43，P〈0．05）。经As2O3处理的CNE1细胞内p53和bax蛋白表达较对照组明显增加，与凋亡指数呈正相关关系（r=0．554，P=0．011；r=0．891，P=0．000…）；p53和bax蛋白表达也呈正相关关系（r=0．626，P=0．003）。结论As₂O₃在体外可诱导鼻咽癌CNE1细胞凋亡，其机制可能与上调p53、bax基因表达有关。     

结直肠癌中survivin 、caspase-3 、p21WAF1的蛋白表达及其意义

 目的 探讨结直肠癌中survivin、caspase-3和p21^WAF1的蛋白表达与临床病理参数的联系以及survivin与caspase-3和p21^WAF1蛋白表达之间的关系。方法 采用免疫组织化学SP方法检测15例正常结直肠粘膜和62例结直肠腺癌标本中survivin、caspase-3和p21^WAF1的蛋白表达。结果 结直肠腺癌与正常结直肠粘膜比较,survivin、caspase-3和p21^WAF1的蛋白表达差异均有显著性（P〈0.05）。survivin和caspase-3的蛋白表达与淋巴结转移无明显相关（P〉0.05）;而与分化程度均显著相关（P〈0.05）。survivin蛋白与Dukes分期相关（P〈0.05）;但caspase-3的蛋白表达与Dukes分期无关（P〉0.05）。p21^WAF1蛋白表达与分化程度、淋巴结转移和Dukes分期均显著相关（P〈0.05）。survivin蛋白分别与caspase-3、p21^WAF1蛋白表达之间均呈显著负相关（P〈0.01）。结论 survivin、caspase-3和p21^WAF1蛋白在结直肠癌的发生和进展中都起着重要的作用。p21^WAF1基因与结直肠癌的恶性进展显著相关,此结论鲜见报道。     

食管上皮癌变过程中DNA 含量及细胞周期调控因子表达的定量检测

 目的 探讨食管上皮癌变过程中DNA含量、细胞周期分布的变化及多个相关的细胞周期调控因子的表达状况及其意义. 方法 应用碘化丙啶染色和间接免疫荧光标记方法,采用流式细胞仪对30例食管癌组织及相应的癌旁组织进行定量检测. 结果 与正常黏膜和非典型增生组织相比,癌组织中DNA含量明显增高,异倍体细胞显著增加;G0/G1期细胞明显减少,而S期和G2/M期细胞显著增多,增殖指数（PI）高于癌旁组织;cyclinE、cdk2、p53、E2F基因蛋白过表达,两两之间皆有显著性正相关关系,抑癌基因p21^WAF1基因蛋白表达水平明显降低,与其余基因蛋白之间有明显的负相关. 结论 食管上皮癌变过程中,DNA含量及异倍体率增加,细胞周期分布发生了明显的改变,细胞周期相关基因蛋白表达异常.     

香加皮杠柳苷对MCF-7细胞周期及p21WAF1/CIP1表达的影响

 目的：研究香加皮杠柳苷（CPP）对人乳腺癌MCF-7细胞周期及p21^WAF1/CIP1表达的影响 ,探讨其抗肿瘤作用及作用机制。方法：采用MTT法检测不同浓度CPP（1.25、2.50、5.00、 10.00、20.00 ng/ml）作用不同时间（24、48、72 h）对MCF-7细胞的增殖抑制作用;应用流 式细胞术分析不同浓度CPP （2.50、5.00、10.00 ng/ml）分别作用于MCF-7细胞6、12、24、 48、72 h对肿瘤细胞周期的影响;并采用RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞周期相关因子 p21^WAF1/CIP1的表达。结果：CPP能明显抑制MCF-7细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性,作用 于MCF-7细胞48 h的IC₅₀为（4.88±0.16）ng/ml。流式细胞术结果显示,CPP作用MCF-7细胞24 h时,G₀/G₁期细胞明显增多,而S期和G₂/M期细胞显著减少,与对照组相比差异有统计学意义 （P<0.05）,其中5.00 ng/ml组G₀/G₁期细胞由对照组的（49.33±3.25）%升高至（79.47± 2.40）%,S期和G₂/M期细胞由对照组的（28.47±1.59）%和（22.20±2.09）%分别下降至（10.13±3.26）%和（10.40±1.41）%。经CPP处理的MCF-7细胞中p21^WAF1/CIP1 mRNA的表达明显增强,p21^WAF1/CIP1/β-actin光吸度比值与对照组相比明显增高（P<0.05）。免疫细胞化学结果显示,CPP组MCF-7细胞中p21^WAF1/CIP1 蛋白的表达随作用浓度的增加而增强,其中10.00 ng/ml组肿瘤细胞p21^WAF1/CIP1的表达呈强阳性。结论：香加皮杠柳苷（CPP）具有显著的体外抗肿瘤作用,且有效剂量很小,其IC₅₀仅为（4.88±0.16）ng/ml。CPP可使MCF-7细胞发生G₀/G₁期阻滞,并可使细胞周期相关基因p21^WAF1/CIP1的mRNA及蛋白表达增强,提示阻滞细胞周期可能是CPP体外抗肿瘤的作用机制之一。     

乳腺浸润性导管癌中cyclinD1 、p57 KIP2的表达及意义

 目的 研究cyclinD1、p57^KIP2在乳腺浸润性导管癌（IDC）中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测64例113（2、15例乳腺导管内癌（DCIS）和15例癌旁正常乳腺组织中cyclinD1、p57 ^KIP2的表达。结果 cyclinD1、p57 ^KIP2阳性表达率在IDC与在乳腺不同组织之间、腋窝淋巴结有无转移之间差异均有显著性（P≤0．05，P〈0．01）；cyclinD1阳性表达率与IDC组织学分级有关（P〈0．01）；cyclinD1与p57 ^KIP2之间阳性表达率呈负相关（P〈0．01）。结论 cyclinD1与p57 ^KIP2共同参与了乳腺癌的发生发展过程。cyclinD1异常表达是乳腺癌发生的早期事件。联合检测cyclinD1及p57 ^KIP2对预测乳腺癌淋巴结转移有重要意义。     

塞来昔布对鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制的实验研究

目的 研究环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响。方法 采用MTT法测定细胞代谢率,以流式细胞术观察细胞DNA含量和凋亡的变化情况,免疫组化SP法检测COX-2的表达情况。结果 塞来昔布对CNE-2细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性。细胞周期各时相DNA 含量改变明显,G₀～G₁期细胞显著升高 (由最初47.03%升至最高79.20%),而S、G₂～_M期细胞明显下降;凋亡率显著增高。塞来昔布明显下调细胞中COX-2蛋白的表达。结论 塞来昔布对鼻咽癌CNE-2 细胞有明显的增殖抑制作用,并且呈时间和剂量依赖性,使细胞聚集在G₀/G₁期,其机制涉及COX-2依赖性途径。     

乳腺癌中cyclinD2 、CDK4 的表达及其临床意义

 目的 研究乳腺癌组织中细胞周期蛋白D2（cyclinD2）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependentkinase4,CDK4）的表达,探讨它们与p27^kip1蛋白表达、与临床病理指标的关系及其预后意义。方法 应用免疫组化SP法,检测96例乳腺癌、18例癌旁正常乳腺组织石蜡切片中cyclinD2、CDK4的表达,比较它们与p27 ^kip1蛋白表达、与临床病理学指标之间的关系。结果 ①96例乳腺癌组织中cyclinD2、CDK4和p27^kip1表达率分别为41.7％、54．2％和38．5％,与正常乳腺组织相比有显著性差异（P〈0．001）。②cyclinD2、CDK4的表达与乳腺癌的组织学分级,核分裂数有关（P〈0．001）,和局部复发有关（P〈0．05）,而与患者年龄、肿瘤大小、组织类型无关（P〉0．05）,CDK4的表达与乳腺癌的淋巴结转移,雌激素受体状态也有密切关系（P〈0．01）。③p27^kip1的表达缺失,与肿瘤大小、组织学分级,核分裂数,有无淋巴结转移以及局部复发均有关系（P〈0．05）,而且p27 ^kip1的表达与eyelinD2、CDK4的表达呈显著负相关（P〈0．叭）。结论 cyclinD2和CDK4的表达与乳腺癌的发生、发展有关,而p27 ^kip1的表达缺失和CDK4的异常表达与乳腺癌的侵袭、转移及复发有关,可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标。