一种简单安全提取凋亡细胞DNA的方法

Kerr等[1]于1972年首次提出了“细胞凋亡”的概念,在经过对细胞凋亡现象的长期观察和分析后又阐明细胞凋亡不同于细胞坏死（necrosis,是一种不引起机体炎症反应的细胞程序性死亡（programmedcelldeath,PCD）过程。并首先用电子显微镜观察到凋亡细胞核浓缩,密度增高,细胞膜、细胞器相对完整等形态特征。1980年Wyllie[2]等提取凋亡细胞的DNA作电泳分析,见到相差为180－22bp整数倍的DNA梯状条带,成为鉴定细胞凋亡的经典方法。尽管近期文献报道可应用流式细胞仪鉴定调亡细胞百分率及其它测定凋亡细胞DNA的方法,如原位TUNEL法、E…     

大鼠肝星状细胞分离纯化方法的改进

目的 研究肝损伤后细胞基质的沉积及纤维化形成机制,建立一种经济、简便、可靠的分离大鼠肝星状细胞(HSC)的方法.方法 用链霉蛋白酶和胶原酶灌流大鼠肝脏,Optiprep密度梯度离心分离HSC,并进行体外培养.结果 细胞得率为5.0×107/鼠,活率和纯度分别为98%、96%.结论 该方法简便、实用、稳定、可靠,为进一步研究HSC与肝纤维化的关系,尤其是细胞水平及分子生物学水平的研究奠定了基础.     

外周血单个核细胞分离方法探讨

目的 探讨外周血单个核细胞(PBMC)的不同分离方法对分离效果、贴壁能力以及淋巴细胞的增殖活性的影响。方法 取肝素抗凝血，分别用羟乙基淀粉(hydrixyethylstarch，HES)自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll密度梯度离心法三种方法分离单个核细胞，直接进行贴壁计数及多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer，CIK)培养。结果 HES自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficou密度梯度离心法分离的PBMC回收率分别为86．4％、86．0％、85．1％。结论 羟乙基淀粉离心沉淀法可有效地分离PBMC。     

细胞凋亡在肺纤维化疾病中的作用

细胞凋亡是一种广泛存在于细胞生物体内，对不需要的细胞和受损伤的细胞发生的由众多基因参与调控的细胞自主的有序性死亡过程。凋亡在多种组织器官的发生发育、细胞分化、和维持机体平衡状态中发挥重要作用，在组织损伤修复过程中，通过细胞凋亡机制不仅可以限制炎症反应的发展，而且可以防止炎症后纤维增生和瘢痕形成，最近的研究表明，肺纤维化疾病是以肺上皮细胞的过度凋亡，使之抑制成纤维细胞增殖的功能丧失而导致成纤维细胞过度增生，产生过多的胶原蛋白，从而发生肺纤维化。肺纤维化过程中细胞凋亡的作用及其调控机制的研究，能够为肺纤维化的发生机制提供新的认识及对肺纤维化的治疗提供新的策略。     

三氧化二砷诱导急性淋巴细胞性白血病细胞系凋亡

目的：了解三氧化二砷（As2O3）对急性淋巴细胞性白血病细胞系的可能作用。方法：以急性淋巴细胞性白血病细胞系MOLT－4为体外模型,在观察As2O3对细胞生长、活力及形态学影响的基础上,应用流式细胞仪检测细胞DNA含量分布,以评判细胞凋亡与否。结果：As2O3抑制MOLT－4细胞的生长呈浓度依赖性,1.0μmol／L,的As2O3诱导MOLT－4细胞凋亡。结论：As2O3能有效地诱导急性淋巴细胞性白血病细胞系调亡．并可能为As2O3在临床上治疗此类患者提供理论依据。     

一种从少量细胞中快速分离总RNA方法

一种从少量细胞中快速分离总ＲＮＡ方法王志宏，蒋明，闫春丽，刘继文，宋怡（白求恩医大一院肾内科，长春１３００３１）细胞总ＲＮＡ的分离和纯化是进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ滤膜杂交或斑点（Ｄｏｔ）杂交的必要步骤，目前多采用胍盐／热酚、胍／氯化铯等方法，操作复杂、费...     

多脏器功能障碍综合征与细胞凋亡

在 2 0年前 ,危重病患者的死亡均归咎于入院时的原发病。今天 ,由于监测技术、治疗措施和药物的进展 ,很难用原发病揭示其发病率和病死率。在 ICU,尽管采取各种措施对危重病患者积极地进行器官支持 ,但多数患者最终将死于进行性的多器官功能不全。现代理论认为 ,多脏器功能障碍     

介绍一种外周血单个核细胞RNA提取方法

分子生物学实验中RNA提取纯化影响因素较多 ,由于RNA核糖残基 2 / 和 3/ 位上的羟基存在 ,使其更易受自然界中广泛存在的RNA酶降解。目前常用的RNA提取方法有酸性酚 硫氰酸胍 氯仿提取法、oligo 纤维素层析法等[1] 。组织和细胞单相裂解液也有商品化供应 ,如Trizol、Isogen、RN     

柴胡有效成分提取分离方法的研究进展

<正>柴胡为伞形科柴胡属植物柴胡.或狭叶柴胡的根,始载于《神农本草经》,原名茈胡、地薰,列为上品,宋代《图经本草》始易其名为柴胡[1]。其味苦,性微寒。具和解表里、疏肝、升阳之功效,药理学研究证明柴胡具有解热、镇痛、镇静、抗炎、免疫增强、保肝利胆、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等作用,是     

一种获得高纯度睾丸支持细胞的分离方法

背景:研究证实睾丸支持细胞具有免疫抑制功能,可以被用于在睾丸以外的部位为移植细胞提供免疫豁免环境.最近的研究还表明支持细胞分泌的多种活性物质对其他细胞有促进作用.但至今其分离纯化方法还不完整,且细胞纯度不太理想.目的:探讨一种获取高纯度睾丸支持细胞的方法.方法:迅速分离出生后20 d雄性SD大鼠睾丸生精小管,采用酶消化法将细胞悬液接种于多聚赖氨酸包被的培养板内培养7 d后,采用Tris-HCL低渗缓冲液处理生精细胞和成纤维细胞,采用FasL免疫组织化学、Hoechst33342复染鉴定睾丸支持细胞的纯度.结果与结论:支持细胞贴壁性比较强,培养24 h后,大多数细胞开始贴壁,细胞形状呈圆形或椭圆形,培养液中漂浮着较多生精细胞.培养48 h后,胞质逐渐增多,折光性减弱.三四天后支持细胞胞质铺展,细胞间隙变小.4～6 d后胞质完全铺开,细胞相互连接,铺展成膜状单层.此时,质核比为(7～9):1,细胞为多边形,其形态和胞质面积不再改变;睾丸支持细胞的纯度为(95.64±2.76)%.结果证明该方法是一种相对简便易行且经济、稳定、有效的睾丸支持细胞分离方法.     

分离外周血单个核细胞的条件优化

目的比较不同抗凝剂、离心力及离心时间对葡聚糖-泛影葡胺(Ficoll)密度梯度离心法分离单个核细胞的影响,优化实验方案。方法取肝素、EDTA及2种抗凝剂混合后的3种不同抗凝血,采用Ficoll法进行分离,用血细胞分析仪进行分类和计数,计算回收率和纯度;同时对EDTA抗凝血进行不同离心力及离心时间的处理,优化分离效果。结果 EDTA组获得PBMC回收率为(51.32±50.21)%,纯度为(45.38±22.14)%;肝素组获得PBMC回收率为(24.52±19.10)%,纯度为(78.46±11.91)%;EDTA+肝素组获得PBMC回收率为(56.32±24.30)%,纯度为(80.27±12.44)%。经单因素方差分析,PBMC回收率方面,EDTA组与肝素组比较差异有统计学意义(P0.05),EDTA组回收率较高,而肝素+EDTA组与EDTA组回收率比较,差异无统计学意义(P0.05);PBMC纯度方面,EDTA组与肝素组比较差异有统计学意义(P0.05),肝素组PBMC纯度较高,而肝素+EDTA组与肝素组比较,纯度则差异无统计学意义(P0.05);PBMC存活率方面,肝素+EDTA组与肝素组、EDTA组比较,均差异无统计学意义(P0.05)。对EDTA抗凝血进行单个核细胞分离实验表明,在离心力为600×g(1 800r/min),离心时间为25min时分离效果最佳。结论肝素+EDTA组回收率、纯度与单种抗凝剂实验组相比,结果差异无统计学意义(P0.05),故在实验过程中可以混合两种抗凝全血进行细胞分离。EDTA抗凝血在离心力为600g(1 800r/min)、离心时间为25min时,分离单个核细胞效果最佳。     

非连续密度梯度离心法分离红细胞的影响因素分析

目的 分析非连续密度梯度分离法分离红细胞效果的影响因素,探讨各因素对分离结果的影响程度.方法 采用正交设计比较不同分离条件(离心力、离心时间、离心温度)的分离效果,应用多元线性回归统计方法分析不同个体参数(红细胞平均体积、细胞浓度、个体年龄)对分离效果的影响.结果 离心力、离心时间、标本红细胞平均体积、红细胞浓度、个体年龄都对分离结果有影响,其中红细胞平均体积起主导作用.结论 不同分离条件以及同一分离条件下不同标本,其分离效果均有差异,通过对影响因素的人为控制,可以得到相对稳定的分离效果.     

一种快速分离C2C12细胞核仁的方法研究

[目的]探讨一种快速分离核仁且能保持其完整结构与功能的方法.[方法]采用低渗裂解分离细胞核,密度梯度离心分离细胞核仁,电镜、免疫印迹检测核仁的纯度.[结果]电镜检测发现在放大2 000倍时C2C12肌源细胞核仁呈现为大小基本一致、形态较为规则的黑色阴影,放大25 000倍时可见单个网孔状的核仁,且核仁各组分清晰可见.免疫印迹检测发现核仁纯度较高,没有胞浆蛋白的污染.[结论]本研究建立了一种快速分离细胞核仁的方法.     

密度梯度离心法分离脐血单个核细胞方法的优化

目的 对密度梯度离心法分离脐血单个核细胞的方法进行优化,以提高该方法分离脐血单个核细胞的收率.方法 脐血40份,每份40 ml,分为常规组和优化组,每组20份.常规组脐血与NS1∶1混合稀释后,直接通过Ficoll分离液分离单个核细胞;优化组通过先将脐血洗涤一次,加入等量NS充分吹打混匀,200目筛网过滤,保持细胞悬液和Ficoll分离液1:1的体积比进行分离操作.对每份分离得到的脐血单个核细胞通过白细胞稀释液稀释后计数.结果 常规组分离后的白膜层有11份界面不清晰,同时均混有少量的红细胞.优化组分离后的白膜层有1份界面不清晰,仅有极少的红细胞混入.两种方法收集的脐血单个核细胞数比较,优化组多于常规组(P＜0.01).结论 通过对密度梯度离心法的步骤进行优化,可提高脐血单个核细胞的分离效果.     

细胞凋亡及细胞程序性坏死和细胞焦亡的研究进展

细胞死亡方式包括细胞凋亡、细胞程序性坏死和细胞焦亡.细胞凋亡属于非炎症性细胞死亡方式,形态学不涉及细胞质、细胞膜的破裂.细胞程序性坏死和细胞焦亡在形态学上可表现为细胞质、细胞膜破裂,释放一系列炎性因子,引起炎性反应,属于炎症性细胞死亡方式.三者在形态学及发生机制上有所区别,但在某些方面又存在着联系.在某些疾病的发生过程...     

利用细胞块检测少精子症精液增殖与凋亡的研究

目的探讨原因不明少精子症睾丸生精细胞增殖与凋亡的病理生理机制。方法39例原因不明少精子症患者留取精液,制备细胞块切片,采用免疫组化技术观察牛精细胞增殖细胞核抗原（PCNA）及P16的表达;采用原位3’羟基末端标记法（ISEL）观察生精细胞凋亡。15例正常精液作为对照。结果原因不明少精子症患者精液细胞块PC—NA增殖指数（16．6±7．1）％,明显低于对照组的（35．1±5．7）％,P〈0．001;P16蛋白表达阳性率（17．4±8．9）％,明显高于对照组的（6．2±2．1）％,P〈0．01;生精细胞凋亡指数（1．9±1．1）％,明显高于对照组的（0．3±0．1）％,P〈0．01,差别均有显著性意义。结论原因不明少精子症患者精子减少的主要原因之一是生精细胞增殖能力减少及凋亡增加造成增殖与凋亡平衡失调,此种失衡可能与P16蛋白的异常表达有关。精液细胞块监测生精细胞可以作为一种监测少精子症患者的非创伤性指标。     

两种分离人骨髓单个核细胞方法的比较

目的:探讨外周动脉性疾病患者自体骨髓移植治疗骨髓单个核细胞最佳的分离方法.方法:行自体骨髓移植外周动脉性疾病患者39例,分别采取羟乙基淀粉沉淀法和密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,观察骨髓丢失的单个核计数及CD34+细胞比率的差异.结果:羟乙基淀粉沉淀法得到的分离物的单个核细胞及CD34+细胞丢失率低于密度梯度离心法[羟乙基淀粉沉淀法为(55.08±6.00)%,(54.71±7.58)%;密度梯度离心法为(82.38±4.79)%,(73.30±3.68)%,P<0.01].结论:经比较,羟乙基淀粉沉淀法明显优于密度梯度离心法,在外周动脉性疾病患者自体骨髓移植治疗中建议使用羟乙基淀粉沉淀法分离骨髓单个核细胞.     

中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究现状及展望

1972年英国kerr、Wyllie和Currie首次提出细胞凋亡(apoptosis)的概念。之后,细胞凋亡便成为当前生命科学中的研究热点。随着多药耐药(MDR)的提出,给抗肿瘤药物临床应用提出难题,在世界范围内,抗癌药物的研究已逐渐转向天然动植物,我国传统的中医中药已越来越受到人们的青睐,中医中药治疗肿瘤已成为肿瘤治疗领域的一大特色。单味中药及其有效成分及复方制剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究,已成为近年来肿瘤研究的一个热点。现就中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究状况作一综述。1细胞凋亡细胞凋亡或称程序化细胞死亡(programmedcell death)是细胞在一定的…     

两种分离培养小鼠骨髓来源内皮祖细胞方法的比较

目的 比较密度梯度离心法及全骨髓培养法分离培养内皮祖细胞的差异。方法 取4周雄性近交系C57BL/6J小鼠骨髓,分别使用密度梯度离心法及全骨髓培养法培养,观察细胞贴壁情况和细胞形态,并行DiI acLDL及FITC UEA I双染、vWF、eNOS及细胞表面标志检测。结果 密度梯度离心法培养细胞可形成典型铺路石样改变及形成血管样结构;而全骨髓培养法贴壁细胞形态多样,较多呈长梭形铺展生长,部分细胞呈类圆形及纺锤形。比较两种方法培养细胞摄取DiI acLDL、结合FITC UEA I双阳性率以及vWF、eNOS及细胞表面标志表达阳性率,差别均有统计学意义（P〈005）。应用密度梯度离心法,随着培养时间延长,表达CD34、CD133及FLk 1细胞逐渐增多（P〈005）。结论 密度梯度离心法及全骨髓培养法在EGM 2MV培养体系下均可培养出内皮祖细胞,但密度梯度离心法较全骨髓培养法培养的内皮祖细胞纯度高。     

两种方法处理后精子形态的变化

目的研究上游法和密度梯度离心法（Percoll法）处理前后精子畸形率的改变。方法60例精液标本分别行上游法和密度梯度离心法优选,处理前后均行精子形态改良巴氏染色分析。结果上游法和密度梯度离心法都可以显著降低精子的畸形率,上游法以颈部和尾部畸形最为明显,其他畸形降低不显著;而密度梯度离心法处理后精子以大头和双头畸形降低较为显著,其他种类畸形精子率下降不显著。结论上游法和密度梯度离心法对改善精子畸形率的作用有限。