重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化闻药物联合应用的作用机理，研究结果表明，３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ），三尖杉酯碱（Ｈ），足叶乙甙（ＶＰ－１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异：ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－３均能增加ＶＰ－１６，ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用：ＧＭ－ＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞，３种ｒｈＨＧＦ均不     

维拉帕米联用阿霉素、长春新碱、足叶己甙体外净化白血病细胞

采用体外克隆形成培养技术研究维拉帕米（ＶＰＬ）联用阿霉素（ＡＤＭ）、长春新碱（ＶＣＲ）和足叶己甙（ＶＰ－１６）体外净化白血病细胞，结果显示：ＶＰＬ２．２μｍｏｌ／Ｌ能明显增加单一应用的不同浓度ＡＤＭ、ＶＣＲ或ＶＰ－１６对白血病细胞克隆形成单位（Ｌ－ＣＦＵ）的抑制作用，而不增加其对正常粒巨系克隆形成单位（ＧＭ－ＣＦＵ）的毒性。０．９２μｍｏｌ／ＬＡＤＭ、０．０２５０μｍｏｌ／ＬＶＣＲ及１．７０μｍｏｌ／ＬＶＰ－１６联合应用下，Ｌ－ＣＦＵ集落存活率为１１．６１％％，再联用２．２０μｍｏｌ／ＬＶＰＬ则为３．５２％；而相同条件下ＧＭ－ＣＦＵ集落存活率分别为３５．８１％及２６．０５％（与相应Ｌ－ＣＦＵ组相比，Ｐ＜０．０１），提示ＶＰＬ能明显增加上述化疗药物联合应用下的选择性体外净化白血病细胞作用。     

PDGF—B基因的膜型表达产物促进血管平滑肌细胞增殖和胶原合成

考察ＰＤＧＦ－Ｂ基因的膜型表达产物对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增生、胶原合成的影响。制备供转导人ＰＤＧＦ－Ｂ基因的重组逆转录病毒，感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，受染ＮＩＨ３Ｔ３细胞经筛选、扩增后，制备细胞膜上表达产物ＰＤＧＦ－ＢＢ以观察其对ＶＳＭＣｓ生长的影响，并以３Ｈ－ＰｒｏＬｉｎｅ掺入率评估该重组蛋白对ＶＳＭＣｓ胶原合成的影响。结果：重组逆转录病毒介导ＰＤＧＦ－Ｂ基因转移并表达出具有生物学活性的重组ＰＤＧＦ－ＢＢ，免疫荧光细胞化学染色证实其表达；该膜型重组蛋白可促进ＶＳＭＣｓ增殖和胶原合成。     

利用PCR技术构建GM—CSF／Fcγ2融合蛋白载体

目的：构建 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ／ Ｆｃγ２ 融合蛋白载体。方法：利用 Ｐ Ｃ Ｒ技术,将人 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ基因与人免疫球蛋白 Ｉｇ Ｇ２ 的 Ｆｃ 段基因联接,构建融合基因ｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ Ｈ Ｖ２;并将此片段定向克隆到真核表达质粒ｐ Ｒｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ２ 载体。结果：琼脂糖凝胶电泳结果显示 Ｐ Ｃ Ｒ扩增出了 １．３ ｋｂ 的融合基因片段;限制性内切酶图谱分析,成功地完成了 Ｇ Ｍ  Ｃ Ｓ Ｆ／ Ｆｃγ２ 融合蛋白载体的构建。结论：（１）经 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增技术由质粒 Ｐ Ｃ Ｄｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ和 Ｐ Ｓ Ｖ Ｖ Ｎ Ｐ Ｈ Ｖ２ 分别扩增到了所需的ｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段和 Ｉｇ Ｇ２ 从绞链区到 Ｃ Ｈ３ 的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 片段。（２）利用 Ｐ Ｃ Ｒ介导,扩增出了融合基因片段ｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ Ｈ Ｖ２。（３）构建了真核细胞表达载体ｐ Ｒｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ２／ｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ Ｈ Ｖ２ 。     

抗CD_3McAb和rhGM-CSF对再障患者CFU-GM生长的体外影响的研究

用ＣＦＵＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗ＣＤ３单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和重组人集落刺激因子（ｒｈＧＭＣＳＦ）对再生障碍性贫血（ＡＡ）患者骨髓ＣＦＵＧＭ体外生长进行研究。结果表明：１０μｇ／ｍｌ的抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和０．１μｇ／ｍｌ的ｒｈＧＭＣＳＦ均可增加ＡＡ患者ＣＦＵＧＭ的集落数（Ｐ＜０．０１）,抗ＣＤ３ＭｃＡｂ作用较ｒｈＧＭＣＳＦ显著（Ｐ＜０．０１）,且不同患者对抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和ｒｈＧＭＣＳＦ的敏感性不同。对ＡＡ患者,临床治疗时,应先行药敏试验,再根据其结果制定治疗方案     

化疗＋G—CSF与化疗＋G—CSF＋GM—CSF动员外周血干细胞效果？…

目的：比较化疗＋Ｇ－ＣＳＦ与化疗＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ二种动员方案动员外周血干细胞（ＰＢＳＣ）和造血重建的效果。方法：将３３例患者（急性白血病２３例，恶性淋巴瘤９例，乳腺癌１例）分为化疗＋Ｇ－ＣＳＦ与化疗＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳ组，化疗后ＷＢＣ最低时开始分别应用Ｇ－ＣＳＦ１５０μｇ皮下注射，２／ｄ及Ｇ－ＣＳＦ１５０μｇ，ＧＭ－ＣＳＦ１５０μｇ，皮入注射，上，下午各１次。动员３ｄ后行ＰＢＳＣ采集     

MEASUREMENT OF LIPOPOLYSA CCHARIDE（LPS）IN B．PERTUSSIS ANTIGEN PREPANATIONS BYASIL－VER─STAININGMETHODFOLLOWI

ＭＥＡＳＵＲＥＭＥＮＴＯＦＬＩＰＯＰＯＬＹＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥ（ＬＰＳ）ＩＮＢ．ＰＥＲＴＵＳＳＩＳＡＮＴ１ＩＧＥＮＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＳＢＹＡＳＩＬ－ＶＥＲ─ＳＴＡＩＮＩＮＧＭＥＴＨＯＤＦＯＬＬＯＷＩＮＧＳＤＳ─ＰＡＧＥＺｈａｎｇＪｉｎｇｙｉｎｇ，Ｗ...     

神经节苷脂GM_3诱导HL-60细胞分化后中性糖脂的变化

为了研究神经节苷脂ＧＭ３（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ，ＧＭ３）对人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞诱导分化后中性糖脂的影响，将神经节苷脂ＧＭ３加到ＨＬ６０细胞的ＤＭＥ／Ｆ１２培养液中，观察其对ＨＬ６０细胞的诱导分化作用及分化后细胞中性糖脂的变化。结果：细胞吞噬功能显著增强，非特异性酯酶活性升高，细胞形态也呈现与这种分化相一致的改变。神经节苷脂ＧＭ３诱导ＨＬ６０细胞分化后细胞中性糖脂各组分的百分含量发生了显著改变，ＣＤＨ、ＣＭＨ及ＣＱＨ显著增多，与分化前相比Ｐ＜００５；ＣＸＨ显著降低，与分化前相比Ｐ＜００５。结果提示：神经节苷脂ＧＭ３诱导ＨＬ６０细胞分化时改变了细胞中性糖脂的代谢     

维拉帕米联用阿霉素,长春新碱,足叶己甙体外净化白血病细胞

采用体外克隆形成培养技术研究维拉帕米（ＶＰＬ）联用阿霉素（ＡＤＭ），长春新碱（ＶＣＲ）和足叶己甙（ＶＰ－１６）体外净化白血病细胞，结果显示，ＶＰＬ２．２μｍｏｌ／Ｌ能明显增加单一应用的不同浓度ＡＤＭ，ＶＣＲ或ＶＰ－１６对白血病细胞克隆形成单位（Ｌ－ＣＦＵ）的抑制作用，而不增加其对正常粒巨系克隆形成单位（ＧＭ－ＣＦＵ）的毒性，０．９２μｍｏｌ／ＬＡＤＭ，０．０２５０μｍｏｌ／ＬＶＣＲ及１．７０μｍｏ     

胃癌耐药细胞株耐药谱的体外实验

观察胃癌细胞与抗肿瘤药作用后对不同药物耐的耐受情况，方法：胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１在体外分别与长春新碱（ＶＣＲ），５氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿霉素（ＡＤＭ）及氨甲喋呤（ＭＴＸ）作用，获得ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ，ＳＧＣ７９０１／５－Ｆｕ及ＳＧＣ７９０１／ＭＴＸ４个耐药细胞株。体外细胞毒性实验观察它们对ＶＣＲ，ＡＤＭ，５－Ｆｕ，ＭＴＸ，顺铂（ＣＤＤＰ）以及丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）的敏     

川芎嗪和异博定联合逆转HL60／HT细胞的多药耐药

目的：观察中药钙通道阻滞剂川芎嗪（ＴＭＰ）和异博定（ＶＰ）对白血病ＨＬ６０／ＨＴ耐药细胞系多药耐药（ＭＤＲ）的逆转。     

脐血血浆、rhGM-CSF增强急性髓性白血病细胞对Ara-C敏感性的研究

研究了脐血血浆（ＣＢＰ）、基因重组人粒－单细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）对２０例急性髓性白血病（ＡＭＬ）细胞体外对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）敏感性的影响。采用ＭＴＴ法测定Ａｒａ－Ｃ的细胞毒作用，发现，ＣＢＰ及ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可显著增强Ａｒａ－Ｃ对耐药ＡＭＬ细胞的毒性作用，与对照组相比，Ｐ＜０．０５；另采用台盼蓝拒染法测定细胞的存活能力，发现：ＣＢＰ虽然可增加耐药ＡＭＬ细胞的存活能力，但当Ａｒａ－Ｃ与ＣＢＰ或ｒｈＧＭ－ＣＳＦ合用时，ＡＭＬ活细胞总数反而下降，与对照组相比，Ｐ＜０．０５。由此认为：ＣＢＰ及ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可通过促进耐药ＡＭＬ细胞进入增殖周期，从而增强耐药ＡＭＬ细胞对Ａｒａ－Ｃ的敏感性，预示着ＣＢＰ、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ与Ａｒａ－Ｃ联合应用治疗耐药ＡＭＬ的潜在价值。     

异搏定联合抗肿瘤药物对人涎腺粘液表皮样癌高转移细胞生长抑制的增效效应

目的 :分析钙拮抗剂异搏定 (verapamil,Ver)联合应用阿霉素 (adriamycin ,ADM)柔红霉素 (daunorubicin ,DNR)、足叶乙甙 (etoposide,VP1 6 )、高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)和长春花碱 (vinblastineVBL)等抗肿瘤药物对人涎腺粘液表皮样癌高转移细胞 (Mc3)的增效效应 .方法 :采用细胞培养、细胞计数及MTT等方法观察各化疗药物对Mc3细胞的杀伤作用 ,根据药物剂量 -效应曲线、半抑制浓度 (IC50 )、抗肿瘤活性 (RAA)比较各化疗药物单独用药及分别联合非细胞毒性的Ver的抗肿瘤作用及联合用药合并指数 (CI50 ) .结果 :Ver剂量超过 32 0 0 0时 ,对Mc3细胞有生长抑制作用 ,其IC50为 3981 0 .72 ;DNR ,VBL ,VP1 6 ,ADM和HHT等药物单独用药对Mc3细胞均呈现具有一定量效关系的生长抑制作用 .低浓度的DNR ,VBL ,VP1 6 ,ADM和HHT与非细胞毒性剂量的Ver联合应用 ,各用药组均呈现极强的细胞毒性作用 ,CI50 分别 <0 .95 ,其所合用的剂量水平均有显著的协同作用 .结论 :非细胞毒性剂量的Ver明显增强了化疗药物的抗肿瘤活性 ,对人涎腺粘液表皮样癌高转移肿瘤细胞生长抑制有明显的增效效应 .     

三氧化二砷与化疗药物联合对急性非早幼粒细胞白血病体外细胞毒性的实验研究

目的:为三氧化二砷 (As2O3) 适应证的扩展提供实验依据.方法:应用MTT法,检测了As2O3分别与柔红霉素(DNR)、阿糖胞苷(Ara-C)、三尖杉酯碱(H)和长春新碱(VCR)联合对23例初治急性非早幼粒细胞白血病(ANPL)、16例难治复发ANPL原代细胞的细胞毒性.结果:①As2O3对初治及难治复发ANPL细胞具有明显的细胞毒性,1.0 μmol/L As2O3的细胞毒性分别为12.6%±7.7%和10.1%±6.2%,该毒性作用在两组间无统计学差异(P>0.05).②As2O3与Ara-C、H和VCR的细胞毒性无相关性(r分别为:0.279、0.276、0.204,P均>0.05),与DNR有相关性(r=0.432,P<0.05).③As2O3分别与DNR、Ara-C、H和VCR联用,对多数患者的细胞毒性呈协同及相加作用,当As2O3分别与DNR、VCR联用时,其细胞毒性明显大于单用化疗药物(P<0.05).结论:As2O3与Ara-C、H及VCR无交叉耐药性,与DNR有部分交叉耐药性;可与DNR、VCR等组成新的化疗方案,治疗初治及难治复发ANPL患者.     

腺病毒介导多基因对胆管癌细胞凋亡的诱 导和肝细胞毒性损害

目的：研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９ 凋亡的诱导作用和对正常肝细胞的作用。方法：应用ＴＵＮＥＬ细胞凋亡检测法和光镜观察,分析同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２ ４ 种目的基因的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｍ ｕｌｔｉｇｅｎｅｓ）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９ 和肝细胞系Ｌ０２的作用以及对大鼠肝脏的毒性损害。结果：Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ与化疗药物顺铂协同,能诱导３０％ 左右的ＱＢＣ９３９发生凋亡,并对肝细胞系Ｌ０２ 和大鼠肝细胞无明显毒性损害。结论：Ａｄ－ｍ ｕｌｔｉｇｅｎｅｓ能诱导胆管癌细胞ＱＢＣ９３９ 发生凋亡,且与化疗药物顺铂具有协同增强作用。初步分析对人肝细胞及大鼠肝脏无明显毒性损害,具有一定的临床应用前景。     

异搏定对白血病K562细胞耐药性的逆转作用

目的 :研究异搏定对 P-糖蛋白 (Pgp)介导的人类白血病 K 5 6 2细胞多药耐药作用。方法 :用台盼蓝拒染法检测药物敏感性及异搏定对细胞耐药性的影响 ,用免疫组织化学法检测 Pgp的表达 ,用流式细胞仪检测细胞内柔红霉素 (DNR)积聚。结果 :DNR诱导的耐药细胞 K5 6 2 / D对 DNR、长春新碱 (VCR)、高三尖杉脂碱 (HHT)、鬼臼乙叉甙 (VP16 )、米托恩醌 (MIT)交叉耐药。 DNR诱导了 K5 6 2 / D细胞的 Pgp过度表达。异搏定使 K 5 6 2 / D细胞内药物积聚增加 ,明显地逆转了 K5 6 2 / D细胞对 DNR、VCR、MIT、HHT、VP- 16的耐药性 ,而对敏感细胞 K5 6 2 / S的耐药性无影响。结论 :DNR诱导了 K5 6 2 / D细胞的 Pgp过度表达 ,异搏定通过抑制 Pgp功能逆转了 Pgp介导的K5 6 2 / D细胞的多药耐药性     

小鼠骨髓干细胞体外诱导成熟的树突状细胞对T细胞增殖的影响

目的：研究小鼠骨髓干细胞体外诱导分化的树突状细胞对T细胞增殖的影响,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤的治疗提供有效的实验方法。 方法：应用IL-4和GM-CSF培养小鼠骨髓细胞5~7 d,光镜下观察细胞形态学变化;培养至第5~6天,加入黑色素瘤（B16）冻融抗原继续培养1~2 d,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86,并与同种异体T细胞混合培养72 h,终止培养前16 h加入³H-TdR（18.5 kBq/孔）,γ-液体闪烁仪测定cpm值。 结果：用IL-4和GM-CSF培养3 d可见细胞形态发生改变,细胞形状不规则,培养5~6 d时,有刺状突起、拉长,为典型树突状细胞形态学特征;抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达,IL-4+GM-CSF+TNF-α组（61.68%、71.25%）及IL-4+GM-CSF+冻融抗原组（63.11%、76.88%）明显高于对照组（2.41%、3.88%）及单纯IL-4+GM-CSF培养组（21.86%、28.69%）（P<0.001）,IL-4+GM-CSF+TNF-α组与IL-4+GM-CSF+冻融抗原组比较,CD83和CD86表达差异无显著性;液闪仪检测结果显示,IL-4+GM-CSF+冻融抗原组刺激T细胞增殖的能力明显强于其他组,且差异具有显著性（P<0.001, P<0.05）。 结论：小鼠骨髓细胞体外培养成功地诱导扩增出足量树突状细胞,经肿瘤抗原刺激后绝大部分成熟,并能够刺激同种异体T细胞大量增殖,参与免疫应答。     

用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU-GM和HPP-CFC

利用大于 10kD组分的小鼠骨髓内皮细胞条件培养液 (mBMEC CM)作刺激物体外琼脂培养CFU GM ,与rmGM CSF合用培养HPP CFC获得成功。就培养CFU GM和HPP CFC而言 ,用细胞因子作刺激物与并用大于 10kD组分的mBMEC CM作刺激物相比较 ,以后者的CFU GM及HPP CFC产率最高     

成人急性白血病体外化疗药物细胞毒试验及其临床意义

对９６例成人急性白血病作体外细胞毒试验，发现急淋和急非淋白血病细胞对柔红霉素，长春新碱，氨甲喋呤，高三尖杉酯碱，阿糖胞苷及ＶＰ１６－２１３敏感性无统计学差异；临床常用化疗方案细胞杀伤率积分与骨髓原始细胞下降数和完全缓解率呈正相关，≥９分患者率明显高于〈９分者。     

The Com prehensive Evaluation on Four Indices of Drug Re-sistance in Acute Myeloid Leukem ia

Ｔｈｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｇｅ－ｎｏｕｓｌｅｕｋｅｍｉｃｃｅｌｌｓ（ＡＭＬ）ｉｓａｍａｉｎｃａｕｓｅｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔｆａｉｌｕｒｅ．Ｔｈｅａｆｆｅｃｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｋｉ－ｎｅｔｉｃｓｏｆａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒｄｒｕｇ，ａｂｉｌｉｔｙｏｆｄｒｕｇｄｉｆｆｕｓｉｏｎａｎｄｃａｐａｃｉｔｙｏｆｌｅｕｋｅｍｉｃｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ，ｅｔｃ．［１］．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｄｒｕｇｒｅ－…