HLA—DQAL启动子区多态性与胰岛素依赖型糖尿病发病的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物直接序列分析，鉴定早发及迟发胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者ＨＬＡ－ＤＱＡ１５′－上游启动子区（ＱＡＰ）的核苷酸序列。结果表明，早发ＩＤＤＭ的ＱＡＰ－９２ｂｐ位发生胞嘧啶被胸腺嘧啶取代（Ｃ→Ｔ－９２）；迟发糖尿病在－１４６ｂｐ位置发生胸腺嘧啶（Ｔ）被胞嘧啶（Ｃ）取代，即Ｔ→Ｃ－１４６。提示启动子区不同位置单个碱基取代，可能不同程度上改变其与ＤＮＡ结合蛋白的亲和力     

湖南汉族群体HLA—DQA1位点等位基因多态性分析

目的：分析湖南汉族群体ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因多态性。方法;应用ＰＣＲ／ＳＳＰ和银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ技术对６０名无血缘关系湖南汉族健康个体作ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因分型。结果：检出１０种ＨＬＡ－ＤＱＡ１等位基因。基因频率范围为０．０１６７～０．２２５４,ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０３０２,＊０５０１,＊０１０２常见等位基因,ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０１０１,＊０２０１,＊０４０１为少见等位基因。检出２６种基因型,     

胰岛素启动子因子1基因启动子区G3/G4多态性与鲁北地区糖尿病发病的关联研究

目的研究IPF1基因启动子区G3/G4多态性位点与鲁北地区汉族人群糖尿病的相关性。方法选择2型糖尿病96例、1型糖尿病36例及正常对照组100例作为研究对象,对IPF1基因启动子区G3/G4多态性位点进行PCR扩增,PCR产物纯化后,经ABI PRISM 3700 DNA全自动测序仪直接测序,然后进行基因分型,并通过相关分析,研究该位点与糖尿病的相关性。结果对照组与1型、2型糖尿病组的基因型频率和等位基因频率分布差异无统计学意义(χ2=8.566,P=0.073,χ2=5.944,P=0.051)。结论IPF1基因启动子区G3/G4多态性位点与中国汉族人群糖尿病无显著相关性,暂不能作为预测中国汉族人发生糖尿病危险性的遗传学标志。     

广东汉族人HLA－DQA基因多态性检测

广东汉族人ＨＬＡ－ＤＱＡ基因多态性检测周俊宜，罗超权，杨英浩，刘熙文（中山医科大学生物化学教研室；广州，５１００８９）关键词ＰＣＲ－ＳＳＯ，ＨＬＡ－ＤＱＡ，基因分型，基因多态性中图号０５２７．３；Ｄ９１９国外大量资料表明，ＨＬＡ各组等位基因的数量及其...     

TNF－α启动子区基因多态性与SARS易感性及症状关系研究

【目的】研究TNF-α基因多态性在严重急性呼吸道综合征（sever acute respiratory syndrome,SARS）发生中的作用。【方法】采用病例对照研究设计,采用PCR-SBT（PCR sequencing based typing）方法检测75例SARS康复人员、41例医护人员和92例健康人员的TNF-α基因启动子区多态性,分析TNF-α基因启动子区多态性与SARS-Cov易感性关系;在SARS康复病人中采用病例-病例对照研究设计,分析TNF-α基因多态性与SAPS症状的关系。进行TNF-α启动子区基因多态性检测,运用SPSS11．5进行统计结果分析。【结果】TNF-α启动子区基因多态性位点有-1031、-863、-857、-572、-308、-238、-204和-163,其中-572（A→C）和-204（T→C）为新发现多态性位点。在这些多态性位点中,-204位点的基因多态性在SAPS康复人员和健康人员中存在差别（χ^2=4．20,P=0．04）,突变基因型（CT）可能为SARS—Cov感染的保护基因型（OR=0．95,95％CI 0．90—0．99）,未见其他多态性位点在该三人群分布差别。-308位点G和A等位基因在SAPS康复人员和健康人员分布不一致,SARS人群的A等位基因显著高于对照人群（χ^2=8．96,P=0．003）。同时,未见,INF-α启动子区基因多态性与SARS临床症状之间关联。等位基因分析也未见差别。【结论】TNF-α启动子区-204位点的T→C改变可能减少SARS的发生风险,而-308位点A等位基因可能是SARS发生的风险之一。而TNF-α启动子区基因多态性与SARS的临床症状程度无关。     

胰岛素依赖型糖尿病起病年龄相关的HLA－DQA1遗传异质性

比较３组起病年龄不同的胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）病人（Ａ组≤１４岁，Ｂ组１５～３０岁，Ｃ组≥３１岁）其ＨＬＡ－ＤＱＡ１链５２位精氨酸（Ａｒｇ）与ＩＤＤＭ易感性之间的关系。结果显示，Ａ组ＨＬＡ－ＤＱＡ１链５２位Ａｒｇ（＋）等位基因频率为８７．５％，明显高于对照组（５３．９％，Ｐ＜０．０５，ＲＲ＝５．９８）及Ｂ组和Ｃ组（Ｐ＜０．０５）；Ａ组ＨＬＡ－ＤＱＡ１链５２Ａｒｇ（＋）／Ａｒｇ（＋）表现型的频率为７５％，明显高于Ｃ组（２３．１％，Ｐ＜０．０５）。本文提示：ＨＬＡ－ＤＱＡ１链５２位Ａｒｇ与ＩＤＤＭ易感性之间的关系存在着起病年龄相关的异质性，有必要进一步研究以阐明ＩＤＤＭ的免疫遗传学本质。     

中国汉族人HLA—DQA1启动子区核酸序列分析

本文报告汉族人HLA－DQAI启动子区（QAP）基因多态性。汉族人HLA－DQA1Xbox第-111位是腺苷酸（A）而不是鸟苷酸（G），-98位可是A或G；Ybox-71位为A；Sbox-131位为G；IDDM患者在Sbox5’上游和X、Ybox之间易发生单个核苷酸取代。并发现1例携带DR2－IDDM患者AAP的-157和-158位间发生CCA核苷酸插入突变。提示HLA－DQA1启动子区多态性可能在ID－DM的遗传易感性中起着重要作用。     

PCR－SSCP应用于HLA－DRB基因分型重现性的影响因素

本文探讨了ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法应用于ＨＬＡ－ＤＲＢ基因分型重现性的主要影响因素。结果表明，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ应用于ＨＬＡ－ＤＲＢ基因分型中受到的影响因素较多，如电泳温度、样品预处理、聚胶时间、ＴＢＥ缓冲液贮存时间及银染色过程等。在严格控制电泳温度、单链变性及银染色过程等实验条件下可保证实验的可靠性及重现性     

单链构象多态性分析研究HCV NS5A区基因变异

用逆转录、套式不对称聚合酶链反应（ＰＣＲ）制备单链ＤＮＡ，经凝胶电泳，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移后与地戈辛标记探针杂交。根据单链ＤＮＡ条带数目对５２例慢性肝病患者血清进行ＨＣＶ ＮＳ５Ａ区基因变异程度分析，结果９０％的慢迁肝、３５％的慢活肝、１６％的肝硬化与１０％的肝癌患者出现１条单链ＤＮＡ带，２０％的慢活肝、４２％的肝硬化、６０％的肝癌患者呈现多条单链ＤＮＡ带慢迁肝则未见多条单链ＤＮＡ带。临床参数分析     

乙酰胆碱酯酶基因启动子区多态性与散发性阿尔茨海默病的关系

目的:研究中国汉族人群中乙酰胆碱酯酶(AChE)基因启动子区多态性与散发性阿尔茨海默病(SAD)发病之间是否有关系.方法:随机选取10名SAD患者和10名正常对照者进行AChE基因启动子区测序.用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法、变性高效液相色谱法(DHPLC)或直接测序的方法对SAD患者和...     

血管紧张素原基因调控序列多态性与原发性高血压相关性分析

应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析及ＤＮＡ测序方法分析正常汉族人群和原发性高血压患者血管紧张素原基因多态性。比较３种不同ＳＳＣＰ带型在７３例原发性高血压患者组及７４例正常对照组中的分布频率，发现带型Ｃ在病例组中的比例（５／７３）高于对照组（１／７４）；ＤＮＡ序列分析表明３种不同带型是由于血管紧张素原基因５＇－调控区－２１６位，点存在Ｇ→Ａ的碱基变异所致，而带型Ｃ的个体为－２１６位，点Ａ／Ａ纯合子，提示该碱基变异可能与原发性高血压的发病相关。     

直接测序法与克隆测序法在单核苷酸多态性检测中的比较

目的:了解PCR产物直接测序法与克隆测序法在单核苷酸多态性(SNP)检测上的差别.方法:对2型糖尿病患者的载脂蛋白J外显子2基因及旁侧进行聚合酶链反应(PCR)扩增,分别对其产物进行直接测序和克隆测序.结果:在样本的检测中, PCR产物直接测序法所测序列与43～60 bp以后克隆测序相同;检出一个突变位点并与GenBank( DQ012938)发表序列一致.结论:PCR 产物直接测序法和克隆测序法都是检测SNP的有效方法,但前者不仅特异性强,敏感度高,而且比克隆测序方法更为快速简便,节省材料.     

APEX1单核苷酸多态性与肝癌易感性关系的研究

目的 探讨中国福建人群APEX1单核苷酸多态性(SNP)与肝细胞癌(HCC)易感性的关系. 方法 应用连接酶检测反应(LDR)及直接测序法检测APEX1 rs2307486、rs1130409及rs33956927 3个SNP位点,并进行连锁不平衡及单倍型分析,探讨3个SNP在福建HCC人群中的分布情况,并分析其与该人群HCC易感性的关系. 结果 相对于GG基因型,rs33956927位点的GA基因型增加了患HCC的风险(P=0.002),而rs2307486和rs1130409多态性与HCC易感性无关(P＞0.05). 结论 APEX1 rs33956927多态位点携带GA基因型人群可能对HCC更易感,APEX1 rs33956927多态性可作为筛查HCC好发的危险因素;rs2307486和rs1130409多态性与HCC的发生无关.     

Ⅰ型糖尿病合并肺癌患者HLA－DQA_1启动子的核苷酸序列

应用聚合酶链反应产物与序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ／ＳＳＯＰ）、ＰＣＲ产物单链构象分析（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直接测序等方法，鉴定１例Ⅰ型糖尿病合并肺癌患者ＨＬＡ－ＤＯＡ_１等位基因及ＤＱＡ_１启动子核苷酸序列。结果显示该患者携带ＨＬＡ－ＤＱＡ_１（０５０１）／ＤＱＡ_１（０３０１）等位基因；启动子区核苷酸序列第－１５５位为Ｇ／Ａ杂合型，且一１６１至一１６３ｂｐ发生ＣＡＡ碱基缺失突变。该突变可能影响顺式调控元件与反式因子的相互作用，并在转录水平调控ＨＬＡ－ＤＱＡ_１的表达。这种突变是否与肺癌发病相关，有待深入研究。     

D15S657的多态性与IDDM和LADA的相关性研究

目的 :研究D15S657的多态性与胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)和成人迟发型IDDM(LADA)的关系。方法 :应用PCR -PAGE结合产物直接测序的技术 ,在105名无亲缘关系的成都地区正常汉族人 ,48名IDDM患者以及22名LADA患者中 ,对IDDM易感位点IDDM3定位区域内的遗传标记D15S657的多态性进行分析。结果 :D15S657位点的等位基因A5的频率在IDDM组和LADA组中显著高于正常对照组 ,分别为0 1875∶0 0619 ,P=0 0011 ,Pc=0 008和0 2045∶0 0619 ,P=0 0055 ,Pc=0 0385。结论 :D15S657与中国人群的IDDM和LADA相关 ,IDDM与LADA发病具有相同的遗传因素     

抗HSV－糖蛋白（gp30）单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析

目的：获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白（ｇｐ３０）单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。方法：从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序列分析．结果：基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，含有维持抗体结构的半胱氨酸，序列内无终止码．结论：所克隆基因具备小鼠抗体重链可变区基因结构特征，与已确认的小鼠抗体ＶＨ基因有较高的同源性，隶属于Ｋａｂａｔ分类体系中的小鼠抗体重链（Ａ）亚组．     

ARLTS1基因在早发性卵巢癌中的突变分析

目的 探讨中国南方地区汉族妇女早发性卵巢癌与ADP核糖体化因子样肿瘤抑制基因1(ARLTS1)突变的关系.方法 采集早发性卵巢癌、晚发性卵巢癌患者及健康对照妇女的病理石蜡卵巢癌标本及新鲜血液标本,抽提DNA行ARLTS1基因的PCR扩增, 扩增产物进行高效液相色谱法分析(DHPLC),对杂合峰型的DNA样本测序以确定特异性的突变.结果 早发性卵巢癌组ARLTS1 Cys148Arg(T442C)基因突变所致的发病风险显著高于健康对照组(TC+CC vs TT, OR=3.93, 95% CI为1.50～10.32, P=0.0044; CC vs TT, OR=5.25, 95% CI为1.28～21.58, P=0.017).与晚发性卵巢癌组相比,ARLTS1 Cys148Arg基因突变也可显著增高早发性卵巢癌风险(TC+CC vs TT, OR=3.56, 95% CI为1.36～9.33, P=0.0085; CC vs TT, OR=4.0, 95% CI为1.04～15.38, P=0.038).与健康对照组相比,ARLTS1 Cys148Arg基因突变对晚发性卵巢癌的发病风险影响无明显差异(TC+CC vs TT, OR=1.11, 95%CI为0.46～2.66, P=0.82).ARLTS1 Ser99Ser (S99S)突变在早发性卵巢癌组、晚发性卵巢癌组和健康对照组间发生率均差异无统计学意义.结论 ARLTS1 Cys148Arg突变与早发性卵巢癌发生风险显著相关,提示ARLTS1基因突变可能是早发性卵巢癌发病相关的重要遗传学因素.     

人类豚鼠相关蛋白基因多态性与肥胖

目的探讨超重和肥胖与人类豚鼠相关蛋白(hAGRP)基因760G/A多态性的相关性。方法对135例超重和肥胖者及98例对照组提取DNA并检测hAGRP的基因型和等位基因,测定血清空腹血糖(FBS)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白A(apoA)及载脂蛋白B(apoB)等水平。结果超重和肥胖组G/G基因型及G等位基因频率较对照组增加(P<0.05),血清TC、TG和apoB水平高于对照组(P<0.05)。结论hAGRP基因的760G/A多态性与肥胖相关,且在成人肥胖发展过程中起作用。     

脑梗死患者PAI-1基因启动子区域4G/5G多态性与血浆活性关系的研究

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)基因启动子区域的4G/5G多态性在脑梗死(CI)发病中的作用,并分析PAI-1基因4G/5G多态性与PAI-1活性的关系。方法随机收集130例CI患者,100例健康人作对照。等位基因特异性引物PCR分析PAI-1多态性基因型(4G/4G、4G/5G和5G/5G)。底物发色法测定血浆PAI-1活性,酶法测定血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、血糖(Glu)。结果PAI-1基因型分布频率及4G和5G等位基因分布频率在CI组和健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);CI组的PAI-1活性与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);PAI-14G/5G基因型多态性与PAI-1活性水平有关,3种基因型PAI-1活性间差异有统计学意义(P<0.01)。结论PAI-1基因4G/5G多态性与其血浆活性水平相关;4G等位基因者PAI-1活性水平增高,导致机体纤溶活性降低,从而增加CI的发病风险;PAI-1活性水平在CI发生过程中起重要的作用。     

Alzheimer病与多发梗死性痴呆患者载脂蛋白E基因多态性的研究

目的探讨载脂蛋白E基因多态性与Alzheimer病（AD）、多发梗死性痴呆（MID）的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）技术对102例痴呆患者,76例健康人的apoE基因进行分型。结果AD组apoEε4明显升高,ε3明显降低,与对照组相比存在显著差异（P〈0.01）,MID组与对照组相比基因频率无明显差异。结论apoEε4是AD发病的一个危险因素,而其与MID的关系尚需进一步研究。