miR-106a负调控PTEN促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡

目的:研究miR-106a在骨肉瘤组织和MG-63细胞中的表达水平及其对MG-63细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:用荧光实时定量PCR法检测20对骨肉瘤和相邻正常组织及MG-63和成骨细胞hFOB 1.19中miR-106a的表达。用miR-106a mimics、miR-106a antagomir 及两者相应的对照物转染MG-63细胞,然后分别用CCK-8法检测四组细胞增殖活性和FCM法检测细胞凋亡率。miR-106a mimics和mimics control与野生型或突变型PTEN 3'-UTR 重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miR-106a是否与PTEN基因3'-UTR 结合。利用Western blot技术检测PTEN蛋白在上述四组转染MG-63细胞和骨肉瘤标本中的表达水平。结果:与相邻正常组织（1.19±0.15）相比,肿瘤组织miR-106a的表达水平（2.60±0.86）显著升高;同时,miR-106a在MG-63中的表达水平（2.60±0.92）明显高于hFOB 1.19（1.19±0.39）,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8和FCM检测结果显示,与mimics control组相比,miR-106a mimics组的增殖率明显增加,而细胞凋亡率下降;反之,miR-106a antagomir组与antagomir control组相比,增殖率前者低于后者,而凋亡率前者高于后者,上述差异均有统计学意义（P＜0.05）。荧光素酶报告实验显示,miR-106a mimics和wt PTEN 3'-UTR共转染组的荧光强度值明显低于mimics control和wt PTEN 3'-UTR组（P＜0.05）。Western blot发现,与对照组相比,miR-106a mimics组PTEN表达下调,而miR-106a antagomir表达上调;临床标本,肿瘤组织PTEN表达明显低于正常组织,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:miR-106a在骨肉瘤组织及细胞中过表达,并靶向负调控PTEN表达,促进骨肉瘤细胞增殖并抑制其凋亡,从而发挥促癌作用。因此,miR-106a可为骨肉瘤的诊治提供新的潜在分子靶点。     

miR-429对食管鳞癌细胞EC9706的影响及其分子机制探讨

目的:探讨miR-429对食管鳞癌细胞的影响及其靶向潜在的分子机制。方法:将miR-429 mimics、miR-429 mimics NC、miR-429 inhibitor和miR-429 inhibitor NC分别转染至食管鳞癌细胞EC9706,分别设为miR-429 mimics组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor组和miR-429 inhibitor NC组。利用实时荧光定量检测各组miR-429的表达情况,MTT法检测细胞增殖率,通过TargerScans Human7.1预测miR-429靶基因并利用荧光素酶活性检测对其进行验证,蛋白免疫印迹检测各组细胞中E盒锌指结合蛋白1（ZEB1）蛋白的表达情况。结果:空白对照组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor NC组之间miR-429相对表达量差异不明显（P＞0.05）。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著上调（P＜0.05）;与miR-429 inhibitor NC组相比,miR-429 inhibitor组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著下调（P＜0.05）。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组中EC9706细胞增殖率显著下降（P＜0.05）,miR-429 inhibitor NC组中EC9706细胞增殖率无显著差异（P＞0.05）,miR-429 inhibitor组中EC9706细胞增殖率显著增加（P＜0.05）。预测miR-429靶基因为ZEB1,荧光素酶活性检测证实ZEB1为miR-429靶基因。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著下调（P＜0.05）,miR-429 inhibitor NC组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量无显著差异（P＞0.05）,miR-429 inhibitor组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著上调（P＜0.05）。结论:miR-429可通过靶向ZEB1抑制食管鳞癌细胞增殖。     

微小RNA-148a-3p靶向调控MAP3K9表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-148a-3p（miR-148a-3p）对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9（MAP3K9）的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物（mimics组）和阴性对照（NC组），以未转染的MGC-803细胞为对照组；采用实时定量PCR（QPCR）检测各组miR-148a-3p水平以评价转染效率，MTT法检测各组细胞增殖能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况，分别采用QPCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3及MAP3K9 mRNA和蛋白水平，同时采用双荧光素酶报告实验验证miR-148a-3p与MAP3K9的靶向作用关系。结果 QPCR结果显示，对照组、NC组和mimics组的miR-148a-3p水平分别为1.021±0.123、1.087±0.196和2.854±0.368，与对照组和NC组比较，mimics组的miR-148a-3p水平升高（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞的增殖活力较其余两组减弱（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞凋亡率为（15.2±1.6）％，高于对照组的（3.5±0.9％）％和NC组的（4.5±1.1）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组和NC组比较，mimics组的MAP3K9和Bcl-2的mRNA和蛋白水平均下调，而Bax和caspase-3的mRNA和蛋白水平均上调（P＜0.05）；双荧光素酶报告实验证实MAP3K9是miR-148a-3p的直接作用靶点。结论 MiR-148a-3p可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡，可能通过靶向MAP3K9来发挥抑癌作用，调控miR-148a-3p／MAP3K9轴在胃癌防治中有一定应用前景。     

miR-21-5p通过靶向FGF18促进人鼻咽癌CNE1细胞增殖的机制研究

目的:探讨miR-21-5p通过靶向FGF18促进人鼻咽癌CNE1细胞增殖的具体机制。方法:Real-time quantitative PCR检测miR-21-5p、FGF18在人鼻咽癌组织及各鼻咽癌细胞系中的表达情况。对照组转染mimics/inhibitor NC,实验组转染miR-21-5p mimics/inhibitor/siFGF18。利用MTT、细胞克隆形成实验观察miR-21-5p及FGF18对CNE1细胞增殖活力的影响;Luciferase实验验证miR-21-5p和FGF18 3'-UTR的结合;Western blot检测FGF18、PI3K及Akt等的表达情况。结果:RT-PCR检测:人鼻咽癌组织及其细胞系中miR-21-5p及FGF18表达均显著增加（P＜0.05)。MTT及细胞克隆形成实验:CNE1细胞瞬转miR-21-5p inhibitor后活细胞数量明显减少,增殖能力显著下降（P＜0.05);而在miR-21-5p inhibitor+siFGF18组中,这种增殖抑制作用显著增强（P＜0.05）。Luciferase实验:miR-21-5p与FGF18 3'-UTR直接结合。Western blot检测:miR-21-5p inhibitor组FGF18、PI3K及Akt表达显著减少（P＜0.05）。结论:miR-21-5p靶向结合FGF18基因,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进人鼻咽癌组织及CNE1细胞的增殖。     

miR-203a-3p靶向AKT2增强骨肉瘤细胞的放射敏感性

目的:研究miR-203a-3p对骨肉瘤MG-63细胞凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制。方法:qRT-PCR检测AKT2 mRNA的表达水平及不同放射剂量（0、2、4、6、8 Gy)照射后MG-63细胞中miR-203a-3p的表达水平,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,流式细胞术测定MG-63细胞凋亡率,Western blot检测AKT2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-203a-3p和AKT2的调控关系。结果:随着放射剂量的增加,骨肉瘤细胞MG-63中miR-203a-3p的表达量被显著抑制（P＜0.05）;过表达miR-203a-3p可增加MG-63细胞的放射敏感性,促进MG-63细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-203a-3p靶向负调控AKT2的表达;抑制AKT2表达可增强骨肉瘤MG-63细胞的放射敏感性;过表达AKT2逆转了上调miR-203a-3p对MG-63细胞的放射增敏作用,抑制MG-63细胞凋亡。结论:miR-203a-3p通过靶向抑制AKT2表达增强骨肉瘤MG-63 细胞的放射敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。miR-203a-3p有望成为骨肉瘤临床放射增敏靶点。     

miR-3200-3p通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展的机制研究

目的:探讨miR-3200-3p能否通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展。方法:选择5株人结直肠癌细胞系,Real-time PCR检测miR-3200-3p、RNF111的表达,Western blot检测RNF111蛋白的表达;利用双荧光素酶实验验证miR-3200-3p与RNF111的靶向抑制;利用miR-3200-3p mimic/inhibitor或利用miR-3200-3p inhibitor与RNF111 siRNA共转染HCT116细胞,Real-time PCR检测miR-3200-3p表达,Western blot检测RNF111、p-SMAD2蛋白表达,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:五株人结直肠癌细胞中,HCT116细胞中miR-3200-3p相对高表达,RNF111相对低表达;miR-3200-3p mimic或inhibitor转染后,与各自NC组相比,可显著促进或抑制RNF111蛋白的表达,促进或抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,抑制或促进细胞凋亡（均P＜0.05）;与pmirGLO-MUT 3' UTR+mimics转染组相比,pmirGLO-WT 3' UTR+mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）;与miR-3200-3p NC组相比,miR-3200-3p inhibitor及miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组RNF111蛋白表达显著升高,p-SMAD2蛋白表达显著降低,细胞增殖、迁移及侵袭被显著抑制,细胞凋亡被显著促进（均P＜0.05）,与miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组相比,miR-3200-3p inhibitor+RNF111 siRNA组细胞RNF111、p-SMAD2蛋白表达、增殖、迁移、侵袭及凋亡被显著逆转（均P＜0.05）。结论:miR-3200-3p可通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。     

miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的  探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法  无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞, CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力; Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果  与NC组比较,miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调,miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05）,但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后,并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059,低于miR-21 mimics组的1.98±0.077,高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）;NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021,高于miR-21 mimics组的0.45±0.020,低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）;NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025,高于miR-21 mimics组的0.38±0.014,低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较, 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）;划痕实验和Transwell实验表明,3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。     

MALAT1靶向调控miR-205与骨肉瘤侵袭的实验研究

目的   探讨人肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）与miR-205的关系,揭示MALAT1促进骨肉瘤发生发展的分子机制。方法   实时荧光定量PCR（QPCR）法检测骨肉瘤组织、癌旁正常组织、人成骨细胞（hFOB）以及骨肉瘤MG63、Sao-2细胞株中MALAT1和miR-205的表达;生物信息学及荧光素酶实验观察MALAT1对miR-205的靶向调控;miR-205 mimics转染Sao-2和MG63细胞后QPCR检测MALAT1表达, si-MALAT1转染Sao-2和MG63细胞后QPCR检测miR-205表达;miR-205 mimics和si-MALAT1分别转染MG63细胞,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blotting检测MMP-2、MMP-9表达。结果   骨肉瘤组织、癌旁正常组织中MALAT1和miR-205表达量分别为4.7±0.6、2.6±0.08和2.2±0.09、3.7±0.3,差异有统计学意义（P＜0.05）;MG63、Sao-2细胞株中MALAT1和miR-205表达量分别为2.4±0.7、2.1±0.05和0.53±0.04、0.47±0.02,与hFOB中的0.9±0.01、0.82±0.04比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;生物信息学及荧光素酶检测显示MALAT1序列中存在miR-205的3个互补序列,且两者存在靶向调控作用;转染si-MALAT1的Sao-2和MG63细胞中miR-205的表达量分别为3.4±0.7、3.8±0.6,对照组为1.4±0.5、1.0±0.1,差异有统计学意义（P＜0.05）;转染miR-205 mimics的Sao-2、MG63细胞中MALAT1的表达量分别为0.51±0.05、0.42±0.03,而对照组为1.5±0.7、1.28±0.4,差异有统计学意义（P＜0.05）;Transwell实验结果 显示miR-205 mimics组MG63细胞侵袭数为（28.52±3.68）个,低于miR-205 mimics与pMALAT1共转染组的（42.63±5.67）个,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blotting结果 显示miR-205 mimics组MMP-2、MMP-9的表达量分别为0.41±0.02、0.49±0.04,显著低于miR-205与pMALAT1共转染组的0.73±0.01、0.80±0.05,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论   MALAT1与miR-205之间存在双向抑制关系,MALAT1通过抑制miR-205的表达促进骨肉瘤细胞的侵袭。     

miR-122通过靶向RUNX2诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA122（miR-122）对神经胶质瘤细胞凋亡的影响及可能分子机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常星形胶质细胞系HA1800和胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44、MO59K中miR-122的表达情况。双荧光素酶报告实验评价miR-122对RUNX2的靶向调控作用。向U251细胞转染miR-122 mimics（miR-122组）和阴性对照NC（NC组），流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。向U251细胞同时转染miR-122 mimics和siRUNX2（miR-122+siRUNX2组），流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U251、U87、SHG44、MO59K细胞系中miR-122表达水平分别为0.34±0.052、0.65±0.061、0.59±0.071和0.69±0.098，显著低于正常星形胶质细胞系HA1800的1.17±0.173，差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-122可抑制野生型RUNX2 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型RUNX2 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。miR-122组U251细胞凋亡率为（23.77±0.83）％，高于NC组的（6.17±0.12）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）；低于miR-122+siRUNX2组的（70.85±0.35）％（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示，miR-122组RUNX2蛋白表达量为0.57±0.048，低于NC组的1.21±0.19（P＜0.05）。与NC组比较，miR-122组Bax（3.47±0.077）、 cleaved caspase-3（4.38±0.121）表达均明显上调，而Bcl-2（0.39±0.104）明显下调（P＜0.05）。结论 miR-122可以通过靶向RUNX2促进线粒体凋亡通路的激活，促进神经胶质瘤细胞凋亡。     

miR-18a对胶质瘤细胞增殖和自噬的影响

目的:探讨miR-18a在神经胶质瘤细胞增殖和自噬中的作用。方法:采用瞬时转染的方法将miR-18a inhibitor及其阴性对照(negative control inhibitor,NC inhibitor)分别转染大鼠C6胶质瘤细胞;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-18a在C6胶质瘤细胞中的表达;CCK-8法检测转染miR-18a inhibitor后C6细胞的增殖活性;mCherry-EGFP-LC3B质粒瞬时转染各组细胞,以动态监测自噬通量;Western blot检测敲低miR-18a后C6细胞中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1的表达情况;RT-qPCR检测转染miR-18a抑制剂后C6细胞中自噬相关基因Beclin1和LC3B的相对表达水平。结果:RT-qPCR结果显示,与NC inhibitor组相比,miR-18a inhibitor组的miR-18a表达量显著降低（P＜0.05）。敲低miR-18a后显著抑制C6胶质瘤细胞的增殖（P＜0.05）。倒置荧光显微镜下观察到抑制miR-18a后可阻断自噬流,抑制自噬小体和溶酶体融合。抑制miR-18a可使胶质瘤细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1蛋白的相对表达量显著降低（P＜0.05）,p62蛋白的相对表达量明显升高（P＜0.05）。敲低miR-18a后能抑制胶质瘤细胞中的Beclin1和LC3B mRNA表达（P＜0.05）。结论:miR-18a下调可抑制胶质瘤细胞的增殖和自噬。     

miR-369靶向调节SOX4表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:观察微小RNA（miRNA,miR）-369通过调节SOX4对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响。方法:miR-369体外模拟物（mimics）转染,构建miR-369上调表达模型,以转染阴性对照链为对照组,CCK-8法和流式细胞技术分别检测细胞增殖率和凋亡率变化;Real-time PCR法检测SOX4 mRNA表达水平;双荧光素酶活检检测证实miR-369与SOX4相互作用关系;Western-blot法检测不同组间SOX4及Bcl-2家族相关蛋白表达水平变化。结果:miR-369 mimics转染后,MG-63细胞中miR-369表达水平较对照组明显提高(P=0.009);miR-369 mimic转染后24 h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组;流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率较对照组明显提高（P=0.031）;Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-369 mimic转染后,SOX4在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制;而Bcl-2家族相关蛋白表达水平发生明显变化。结论:miR-369表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡,这些作用与靶向下调SOX4表达有关。     

LncRNA DARS-AS1靶向miR-758-3p促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡

目的:探讨LncRNA DARS-AS1对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:qRT-PCR法检测骨肉瘤组织、瘤旁组织、人成骨细胞hFOB 1.19、人骨肉瘤细胞Saos2、U2OS、HOS中LncRNA DARS-AS1、miR-758-3p的表达量;对Saos2细胞进行转染,根据不同转染物分为si-NC组、si-LncRNA DARS-AS1组、miR-NC组、miR-758-3p组、si-LncRNA DARS-AS1+anti-miR-NC组、si-LncRNA DARS-AS1+anti-miR-758-3p组;MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;双荧光素酶报告实验检测LncRNA DARS-AS1与miR-758-3p的靶向调控关系。结果:与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中LncRNA DARS-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-758-3p的表达量降低(P<0.05);与hFOB 1.19细胞比较,Saos2、U2OS、HOS细胞中LncRNA DARS-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-758-3p的表达量降低(P&...     

lncRNA RHPN1-AS1靶向miR-485-5p调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及其分子机制

目的:探讨lncRNA RHPN1反义RNA1（RHPN1-AS1）靶向miR-485-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响和机制。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测20例骨肉瘤组织与其对应的癌旁组织、人正常成骨细胞hFOB1.19以及3种骨肉瘤细胞（U-2OS、SAOS-2、HOS）中RHPN1-AS1和miR-485-5p的表达水平。利用脂质体转染法将RHPN1-AS1小干扰RNA（si-RHPN1-AS1）、小干扰RNA阴性对照（si-NC）、miR-485-5p模拟物（miR-485-5p mimics）、miRNA阴性对照（miR-NC）分别转染U-2OS细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶14（MMP-14）蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RHPN1-AS1和miR-485-5p的靶向调控关系。结果:与癌旁组织比较,骨肉瘤组织中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与hFOB1.19细胞比较,3种骨肉瘤细胞中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-RHPN1-AS1组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表达水平显著降低,p21、p27和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）;与miR-NC组比较,miR-485-5p组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平显著降低,p21和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）。RHPN1-AS1靶向负性调控miR-485-5p表达。干扰miR-485-5p表达逆转了抑制lncRNA RHPN1-AS1表达对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:抑制RHPN1-AS1通过上调miR-485-5p抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。     

外泌体携带的miR-142-3p通过靶向COX-2抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭

目的:探讨骨肉瘤组织中miR-142-3p是否可以通过靶向COX-2来抑制肿瘤细胞增殖和侵袭能力,并且验证携带miR-142-3p的外泌体是否可以抑制骨肉瘤细胞生长。方法:检测骨肉瘤癌组织及癌旁组织中miR-142-3p和COX-2 mRNA的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-3p与COX-2 3' UTR的靶向关系。构建过表达miR-142-3p及COX-2细胞系,检测细胞的增殖及侵袭能力。用携带miR-142-3p的外泌体处理肿瘤细胞,检测细胞的增殖及侵袭能力。对携带miR-142-3p的外泌体进行体内抑瘤实验。结果:较癌旁组织而言,miR-142-3p在癌组织中显著低表达（P＜0.05）,而COX-2在癌组织中显著高表达（P＜0.05）,且COX-2是miR-142-3p的靶标。过表达miR-142-3p的细胞增殖及侵袭能力降低（P＜0.001）。体外增殖实验及小鼠体内移植瘤模型表明,携带miR-142-3p的外泌体可以在小鼠体内外抑制骨肉瘤细胞的增殖（P＜0.001）。结论:携带miR-142-3p的外泌体可通过抑制COX-2的表达来抑制骨肉瘤细胞的生长,因此,携带miR-142-3p的外泌体可能发展成为一种治疗骨肉瘤的潜在策略。     

利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究利多卡因对骨肉瘤细胞MG-63增殖、迁移和侵袭的影响,并探索其作用机制。方法:使用1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L浓度利多卡因处理MG-63细胞,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达,qRT-PCR检测长链非编码RNA TTN-AS1（TTN-AS1）和微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达,starBase软件结合双荧光素酶报告实验分析TTN-AS1与miR-524-5p的靶向关系。MG-63细胞中转染si-TTN-AS1、miR-524-5p或pcDNA-TTN-AS1（并进行10 mmol/L利多卡因处理）,观察细胞的增殖、迁移、侵袭。结果:不同浓度利多卡因明显提高细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,显著减少迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）,均呈剂量依赖性。TTN-AS1可靶向调控miR-524-5p表达。抑制TTN-AS1表达与miR-524-5p过表达显著增加MG-63细胞的增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。TTN-AS1过表达逆转了利多卡因对MG-63细胞增殖、迁移、侵袭和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用,以及对miR-524-5p、p21蛋白表达的促进作用。结论:利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭。     

骨肉瘤外泌体miR-21通过调控PI3K/AKT通路促进骨肉瘤细胞侵袭及血管生成北大核心

目的:探讨骨肉瘤外泌体miR-21对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响以及对血管生成的作用机制。方法:qRT-PCR法检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS、Saos-2和MG-63中miR-21的表达,并确定表达水平高的作为本研究细胞系。通过差速离心提取细胞外泌体,并采用透射电镜和Western blot鉴定该外泌体;通过免疫荧光染色检测外泌体能否进入人血管内皮细胞(human vascular endothelial cells,HUVEC)发挥作用;利用脂质体2000分别转染Control、miR-21-inhibitor以及miR-21-mimic,通过Transwell实验检测外泌体miR-21对U2OS细胞侵袭能力的影响,并进一步采用Western blot检测miR-21对血管相关蛋白VEGF、HIF-1α以及PI3K/AKT通路蛋白的影响。结果:人骨肉瘤细胞系Saos-2、MG-63和U2OS中miR-21均呈高表达。透射电镜观察到,外泌体呈圆形或椭圆形泡状结构,且其特征蛋白CD9、CD63和CD81蛋白在外泌体中较U2OS细胞中表达高。免疫荧光结果显示,U2OS外泌体能成功进入HUVEC细胞中发挥作用。Transwell实验结果表明,外泌体miR-21可以促进骨肉瘤细胞侵袭。Western blot结果表明,与Control组相比,miR-21-mimic组血管生成蛋白VEGF和HIF-1α表达水平显著上升,PI3K/AKT通路蛋白表达水平亦显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:U2OS外泌体miR-21可以促进骨肉瘤细胞侵袭和血管生成,其作用机制可能与miR-21进入细胞激活PI3K/AKT信号通路有关。