基因芯片与线性探针技术检测涂阳肺结核患者痰标本MTB耐药性的价值

目的 评价基因芯片技术与线性探针技术(GenoType MTBDRplus)快速检测MTB耐药性的临床应用价值。方法 选取西安市胸科医院2017年4月至2018年8月住院治疗的493例涂阳肺结核患者作为研究对象,收集其痰标本,痰标本量均不少于2ml。每例患者用同一份痰标本分别进行基因芯片检测、线性探针检测和BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960液体培养”),同时对培养阳性且鉴定为MTB的临床分离株进行MGIT 960液体药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。以MGIT 960液体药敏试验结果为参照标准,分析基因芯片技术及线性探针技术检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平和异烟肼耐药性的效能。结果 454例研究对象同时具有3种药敏试验检测结果。以MGIT 960液体药敏试验结果为参照标准,基因芯片法和线性探针法检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为89.0%(65/73)、96.1%(366/381)、0.82和90.4%(66/73)、96.1%(366/381)、0.83;检测涂阳肺结核患者痰标本MTB异烟肼耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为80.2%(93/116)、96.7%(327/338)、0.80和81.9%(95/116)、97.0%(328/338)、0.82。454例涂阳肺结核患者痰标本中,453例应用2种分子生物学检测方法检测MTB利福平耐药性结果相同,符合率为99.8%;445例应用2种分子生物学方法检测MTB异烟肼耐药性结果相同,符合率为98.0%。结论 基因芯片技术和线性探针技术(GenoType MTBDRplus)检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平和异烟肼耐药性与MGIT 960液体药敏试验具有较高的一致性,二者均可为临床提供快速、特异的耐药检测结果。     

三种实验室技术在涂阳患者中诊断肺结核及其耐药性的效能分析

目的 探讨BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和荧光PCR熔解曲线技术在涂阳肺结核患者中的检测效能和应用意义。方法 回顾性分析2016年10月至2018年2月沈阳市胸科医院收治的所有涂片阳性患者411例,经结核分枝杆菌抗原检测(MPB64检测)阳性并符合临床诊断标准,确诊肺结核患者392例,MPB64检测阴性且经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌感染患者19例,比较MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对涂阳肺结核患者的检测效能;以比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)为参考标准,分别比较三种方法对耐药表型和耐药基因的检测效能。结果 在临床确诊的392例涂阳肺结核患者中,MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对痰标本检测的敏感度分别为96.17%(377/392)、99.74%(391/392)和92.09%(361/392),特异度均为100.00%(19/19)。以比例法药敏试验为参考标准,GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对利福平(RFP)耐药检测的敏感度相同,均为94.44%(119/126);荧光PCR熔解曲线技术在异烟肼(INH)、左氧氟沙星(Lfx)和阿米卡星(Am)耐药检测上的敏感度分别为74.84%(116/155)、83.33%(75/90)、44.00%(22/50);MGIT 960培养对RFP、INH、Lfx和Am耐药检测的敏感度分别为96.03%(121/126)、98.06%(152/155)、100.00%(50/50)、96.67%(87/90)。结论 GeneXpert法简便、快捷、安全,能够快速诊断肺结核及检测RFP是否耐药。荧光PCR熔解曲线技术可检测4种药物耐药情况,检测时间短,临床快速诊断耐多药肺结核/广泛耐药结核病,对指导临床用药具有重要意义。MGIT 960培养与比例法药敏试验耐药检测的一致性极高,是目前快速诊断结核病及一线药耐药检测的常用方法,可以缩短表型药敏试验时间。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药基因的结果分析

目的 分析和探讨荧光PCR熔解曲线法对结核病的诊断和耐药检测的应用价值。方法 收集2015年9月至2016年12月新疆维吾尔自治区胸科医院的976例疑似结核病患者的痰标本,运用探针荧光PCR熔解曲线法来检测结核分枝杆菌及其对利福平、异烟肼的耐药突变情况。以BACTEC MGIT 960液体培养法及液体药敏试验检测结果为标准,评价探针荧光PCR熔解曲线法鉴定结核分枝杆菌及其耐药突变检测的敏感度、特异度、一致率、Kappa值等。结果 以MGIT 960液体培养结果为标准,荧光PCR熔解曲线法鉴定结核DNA的敏感度为85.44%(135/158),特异度为94.01%(769/818),Kappa值为0.75,诊断符合率为92.62%(904/976)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法对异烟肼耐药突变检测的敏感度为83.33%(20/24),特异度为94.59%(105/111),Kappa值为0.76,诊断符合率为92.59%(125/135);荧光PCR熔解曲线法对利福平耐药突变检测的敏感度为95.83%(23/24),特异度为95.50%(106/111),Kappa值为0.86,诊断符合率为95.56%(129/135)。结论 荧光PCR熔解曲线法检测速度快,对利福平和异烟肼耐药突变检测结果具有良好的敏感度和特异度,可用于临床上对结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药情况的快速筛查。     

荧光PCR探针熔解曲线技术检测涂阳患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的价值

目的 评估荧光PCR探针熔解曲线(MeltPro)技术检测涂阳患者痰标本中MTB耐药性的效能。方法 收集2016年9月至2018年8月西安市胸科医院500例痰涂片阳性患者的痰标本,分别进行痰涂片镜检、GeneXpert MTB /RIF检测、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养、表型药物敏感性试验(简称“药敏试验”),并应用MeltPro法检测痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼、二线注射类和氟喹诺酮类等抗结核药物的耐药性,并以表型药敏试验为标准,评价MeltPro法的检测效能。结果 以表型药敏试验结果为标准,MeltPro法检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为98.7%(76/77)和94.2%(343/364),检测对异烟肼耐药性的敏感度和特异度分别为82.3%(102/124)和96.2%(304/316),检测对阿米卡星耐药性的敏感度和特异度分别为8/9和99.5%(432/434),检测对卷曲霉素耐药性的敏感度和特异度分别为6/7和99.1%(432/436),检测对左氧氟沙星耐药性的敏感度和特异度分别为90.6%(48/53)和99.2%(386/389),检测对莫西沙星耐药性的敏感度和特异度分别为88.1%(37/42)和96.5%(386/400)。以表型药敏试验结果为标准,GeneXpert MTB/RIF检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为94.8%(73/77)和94.0%(342/364)。GeneXpert-MTB/RIF和MeltPro法与表型药敏试验结果一致性均较好(Kappa值分别为0.81和0.84),但MeltPro法检测效能与表型药敏试验检测结果的一致性更高。结论 MeltPro法检测涂阳患者痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼,以及二线注射类和氟喹诺酮类抗结核药物耐药性有较好的效能。     

Xpert MTB/RIF 检测系统对肺结核临床诊断病例的应用价值

目的 评价Xpert MTB/RIF检测系统对肺结核临床诊断病例的应用价值。方法 对296例肺结核临床诊断病例的同一痰标本分别进行BACTEC MGIT 960液体培养和Xpert MTB/RIF检测,以BACTEC MGIT 960液体培养病原学检测和药敏结果为金标准计算Xpert MTB/RIF检测系统的检验效能指标。结果 Xpert MTB/RIF检测系统与金标准存在的差异具有统计学意义 (P<0.005),其病原学诊断灵敏度为84.9%(118/139),特异度为97.5%(153/157),筛查利福平耐药的灵敏度为85.2%(23/27),特异度为100.0%(91/91),一致性检验发现两种方法在病原学诊断和利福平药敏筛检的kappa值分别为0.829和0.899。结论 Xpert MTB/RIF检测系统用于肺结核临床诊断病例的实验室诊断和利福平耐药的筛检都不同于BACTEC MGIT 960检测系统,Xpert MTB/RIF检测系统借助其较高的灵敏度和特异度、快速和操作方便的优势,值得在中国结核病实验室推广应用。     

新型胶颗粒芯片技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的 评估一种新型胶颗粒芯片技术[TruArray胶颗粒芯片(Gel element arrays),简称为“TruArray芯片”]用于痰标本中结核分枝杆菌及利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的检测效能。 方法 选取2016年8月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的149例疑似肺结核患者痰标本,分别进行涂片镜检、BACTEC MGIT 960快速液体培养系统(简称“MGIT 960”)、TruArray芯片和GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测,对液体培养阳性菌株进行测序菌种鉴定、MGIT 960药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和耐药相关基因测序,分析TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的检测效能。 结果 液体培养、GeneXpert和TruArray芯片对结核分枝杆菌的检出率分别为32.2%(48/149),53.7%(80/149)和57.0%(85/149),TruArray芯片和GeneXpert两种方法检出率差异无统计学意义(χ ²=0.34,P=0.560),但TruArray芯片检测阳性率高于液体培养(χ ²=18.59,P<0.01)。以MGIT 960试验结果为标准,TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.9%(47/48)和61.4%(62/101);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.5%(78/80)和88.4%(61/69)。以MGIT 960药敏试验结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为91.7%(11/12)和96.8%(30/31);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度为85.0%(17/20)和97.9%(47/48);以耐药基因测序结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为92.3%(12/13)和100.0%(30/30)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,TruArray芯片技术检测INH耐药的敏感度和特异度分别为78.6%(11/14)和93.8%(30/32);以耐药基因测序结果为判断标准,TruArray芯片检测INH耐药的敏感度和特异度分别为100.0%(11/11)和94.3%(33/35)。 结论 TruArray芯片检测技术快速、可靠,在结核病及耐多药结核病快速诊断方面具有非常好的应用前景。     

腺苷脱氨酶检测对结核性腹膜炎的诊断价值

目的 评价腹腔积液腺苷脱氨酶(ADA)检测对结核性腹膜炎(TBP)的诊断价值。方法 回顾性分析2016年1月至2018年12月陕西省结核病防治院和北京胸科医院收治的203例疑似TBP患者腹腔积液标本的实验室检测资料,纳入同时采用抗酸杆菌(AFB)涂片镜检(简称“AFB涂片”)、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和ADA检测的119例疑似TBP患者,其中确诊TBP患者73例、非TBP患者46例。以临床确诊TBP患者为参考标准,评价AFB涂片、MGIT 960培养、GeneXpert和ADA检测对TBP的诊断效能,并以ROC曲线分析ADA检测的最佳临界值和曲线下面积(AUC)。结果 在119例疑似TBP患者中,AFB涂片、MGIT 960培养、GeneXpert和ADA检测的敏感度分别为4.1% (3/73)、11.0% (8/73)、12.3% (9/73)和86.3% (63/73),特异度分别为100.0% (46/46)、100.0%(46/46)、100.0% (46/46)和84.8%(39/46),符合率分别为41.2% (49/119)、45.4% (54/119)、46.2% (55/119)和85.7% (102/119)。ROC曲线分析显示,当区分TBP与非TBP的ADA检测最佳临界值为31.45U/L时,AUC为0.836。结论 AFB涂片、MGIT 960培养、GeneXpert检测腹腔积液结核分枝杆菌敏感度均很低,而ADA检测在早期诊断TBP时有较高的敏感度和特异度,检测效能良好,可作为临床诊断TBP的参考。     

MTBDRplus 2.0技术对疑似肺结核和耐多药结核病患者的诊断价值

目的评价二代线性探针(GenoType MTBDRplus VER 2.0,简称"MTBDRplus 2.0")技术快速检测疑似肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及其对利福平和异烟肼耐药性的诊断价值。方法回顾性分析2018年1 12月就诊于西安市胸科医院的1065例疑似肺结核患者的实验室检测结果,剔除耐药不确定及痰标本污染者96例,最后纳入969例疑似患者作为研究对象。每例患者用同一份痰标本分别进行GeneXpert MTB/RIF(简称"GeneXpert")检测、MTBDRplus 2.0检测、BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")液体培养,对培养阳性且鉴定为MTB的菌株进行MGIT 960药物敏感性试验(简称"MGIT 960药敏试验"),以MGIT 960液体培养结果为参考标准,评价MTBDRplus 2.0技术检测痰标本中MTB的检测效能;以MGIT 960药敏试验结果为参考标准,评价MTBDRplus 2.0技术检测利福平和异烟肼耐药性的检测效能。结果969例疑似肺结核患者中.MGIT 960液体培养检测MTB阳性409例,阴性560例。以MGIT 960液体培养检测结果为参考标准,MTBDRplus 2.0和GeneXpert检测疑似肺结核患者痰标本MTB的敏感度、特异度、Kappa值分别为91.0%(372/409)、93.8%(525/560)、0.848和92.9%(380/409)、92.5%(518/560)、0.850。以MGIT 960药敏试验结果为参考标准,MTBDRplus 2.0和GeneXpert检测利福平耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为89.8%(53/59)、95.8%(295/308)、0.817和91.5%(54/59)、95.8%(295/308)、0.828;MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药性的敏感度、特异度和Kappa值分别为80.4%(82/102)、96.3%(260/270)和0.791。结论 MTBDRplus 2.0技术对检出疑似肺结核患者痰标本中的MTB,以及对利福平和异烟肼的耐药性均具有较好的检测效能。     

超声引导下获取标本行病理学与结核相关检测对结核性胸膜炎的诊断价值

目的 比较分析超声引导下胸膜穿刺获取的病理组织及胸腔积液标本在疑似结核性胸膜炎中的诊断价值。方法 搜集2016年1月至2018年5月在西安市胸科医院初次就诊的298例疑似结核性胸膜炎患者,其中临床确诊结核性胸膜炎患者112例,非结核性胸膜炎患者186例。所有患者均通过超声引导下胸膜穿刺获取病理组织和胸腔积液标本,对活检组织进行病理学切片检查(简称“病理检查”),胸腔积液分别进行结核分枝杆菌培养(浓缩集菌法,采用液体培养BACTEC MGIT 960操作系统,简称“MGIT 960培养”)、全自动医用PCR分析系统(GeneXpert MTB/RIF,简称“GeneXpert检测”)和抗酸杆菌染色涂片检查(简称“涂片检查”)。上述各种方法以临床确诊患者为参考标准,得出各自的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数,以评价各种检测方法诊断结核性胸膜炎的效能。结果 病理检查、MGIT 960培养、GeneXpert检测、涂片检查以临床确诊结果为参考标准的诊断敏感度分别为41.96%(47/112)、73.21%(82/112)、58.93%(66/112)和2.68%(3/112);特异度分别为99.46%(185/186)、100.00%(186/186)、100.00%(186/186)、100.00%(186/186);约登指数分别为0.41、0.73、0.59、0.02。结论 超声引导下胸膜穿刺获取标本采用各种技术与方法进行检测,结果证明胸腔积液标本采用浓缩集菌法进行MGIT 960培养相对其他检测技术与方法具有较好的敏感度、特异度,约登指数最高,具有良好的临床诊断结核性胸膜炎的价值。     

荧光PCR探针熔解曲线技术检测MTB耐药性的成本分析

目的 通过将荧光PCR探针熔解曲线技术(简称“熔解曲线技术”)与BACTEC MGIT 960技术(简称“MGIT 960”)对MTB耐药性检测的成本进行比较,评估熔解曲线技术在中国不同地区、不同层级结核病防治机构检测MTB耐药性的可行性。 方法 选择西安市胸科医院、新疆维吾尔自治区胸科医院、沈阳市胸科医院、南阳市第六人民医院、遵义医学院附属医院和杭州市红十字会医院6家结核病定点医院,按照高、中、低3种工作量收集3次MGIT 960和熔解曲线技术的成本数据,采用“要素法(包括管理费、建筑费、设备费、人员费、试剂费、耗材费)”计算每种方法的单位检测成本,计算不同检测方法检出每例患者的检测成本。 结果 使用MGIT 960、熔解曲线技术平均每例患者的检测成本分别为702.6(4215.8/6)和440.7(2644.3/6)元。当熔解曲线技术检测敏感度超过70%,在结核病人群MDR-TB患病率≤50%的情况下,使用熔解曲线技术进行耐药MTB检测的每例患者检测成本(熔解曲线技术检测敏感度为70.0%时,结核病患者MDR-TB的患病率在1.0%、5.0%、10.0%、15.0%、20.0%、30.0%、50.0%时,熔解曲线技术检出1例MDR-TB患者的平均成本分别为62957.1、12591.4、6295.7、4197.1、3147.9、2098.6、1259.1元;熔解曲线技术检测敏感度为80.0%时,上述患病率情况下平均成本分别为55087.5、11017.5、5508.8、3672.5、2754.3、1836.3、1101.8元)均低于MGIT 960(平均成本分别为70260.0、14052.0、7026.0、4684.0、3513.0、2342.0、1405.2元)。 结论 与MGIT 960相比,熔解曲线技术更具成本-效益,具备在中国不同地区、不同层级结核病防治机构检测MTB耐药性的价值。     

不同检测方法在结核性脑膜炎诊断中的应用价值

搜集陕西省结核病防治院2015年5月至2017年5月疑似结核性脑膜炎的住院患者519例,最终根据2010年国际结核性脑膜炎协作组制定的诊断标准,354例被诊断为结核性脑膜炎,其余165例排除结核性胸膜炎的诊断。评价BACTEC MGIT 960液体快速培养(简称“MGIT 960培养”)、RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT-TB技术)、聚合酶链式反应-荧光探针检测技术(简称“PCR技术”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)技术对结核性脑膜炎的诊断价值。MGIT 960培养、SAT-TB技术、PCR技术、GeneXpert技术检测结核性脑膜炎的敏感度及其95%CI值分别为23.7%(84/354;19.5%~28.4%)、7.6%(27/354;5.2%~10.7%)、12.4%(44/354;9.3%~16.2%)、39.5%(140/354;34.6%~44.7%),特异度分别为100.0%(165/165)、100.0%(165/165)、100.0%(165/165)、99.4%(164/165)。GeneXpert技术检测的敏感度明显高于MGIT 960培养、SAT-TB和PCR技术。     

常用实验室技术诊断结核性脑膜炎效能的比较研究

目的 对常用实验室技术诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的效能进行比较研究,以提高临床早期诊断TBM的水平。方法 采用BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)、改良抗酸染色(简称“MZN法”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert法”)、荧光探针法聚合酶链式反应(简称“PCR-荧光探针法”)和结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)等5种实验室检测技术对西安市胸科医院2017年1月至2018年4月期间收治的244例成年疑似结核性脑膜炎患者脑脊液进行检测。包括71例TBM组患者(确诊组36例,很有可能组23例,可能组12例)及33例非TBM组患者。评价上述5种实验室技术诊断TBM的效能,并探讨细菌学方法组(MGIT 960和MZN法)、分子生物学方法组(GeneXpert和PCR-荧光探针法)、免疫学方法组(T-SPOT.TB),以及上述5种技术联合诊断组(简称“联合诊断组”)在TBM早期诊断中的价值,并比较5种实验室技术之间、4种方法组之间诊断TBM敏感度的差异。结果 以临床诊断为标准,5种检测技术诊断TBM的特异度和阳性预测值均为100.0%;MGIT 960法、MZN法、GeneXpert 法、PCR-荧光探针法和T-SPOT.TB检测技术诊断TBM的敏感度分别为19.7%(14/71)、26.8%(19/71)、42.3%(30/71)、35.2%(25/71)、29.6%(21/71);GeneXpert法和PCR-荧光探针法的敏感度均高于MGIT 960法,差异均有统计学意义(χ ²=8.43,P=0.004;χ ²=4.28,P=0.039)。细菌学方法组、分子生物学方法组、免疫学方法组及联合诊断组的敏感度分别为31.0%(22/71)、50.7%(36/71)、29.6%(21/71)、73.2%(52/71);分子生物学方法组和联合诊断组的敏感度高于细菌学方法组,差异均有统计学意义(χ ²=5.71,P=0.017;χ ²=73.20,P=0.000)。 结论 在TBM的早期诊断中,GeneXpert法与PCR-荧光探针法的敏感度高于MGIT 960法;各实验方法联合检测有助于提高诊断TBM的敏感度,并且与细菌学方法组相比,分子生物学方法组以及联合诊断组的敏感度更高。     

CDG-3荧光探针检测结核分枝杆菌的初步研究

目的 探讨CDG-3荧光探针[β-内酰胺酶(BlaC)特异性绿色荧光探针]用于结核病诊断的潜在可能性。方法 为明确CDG-3荧光探针的特异性,选取结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)标准株H37Rv,牛和非洲分枝杆菌标准株,35种临床相对常见的不同非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)标准株和6种呼吸道感染病原菌标准株,与CDG-3荧光探针反应后进行检测;为初步了解CDG-3荧光探针临床应用效果,收集2016年1月至9月于北京胸科医院门诊就诊的200例疑似肺结核患者的痰标本分别进行金胺O荧光染色法、培养法(罗氏固体培养联合MGIT960液体培养,二者只要有一种结果为阳性即认为培养阳性)和CDG-3荧光探针检测,并对检测结果进行分析。结果 以H37Rv为标准,CDG-3荧光探针检测牛和非洲分枝杆菌标准株结果均为阳性。试验的35种NTM标准株中,CDG-3荧光探针检测结果阳性的菌株仅有3株,分别是堪萨斯分枝杆菌、玛尔摩分枝杆菌和草分枝杆菌;其余32株的检测结果为阴性。6种呼吸道感染病原菌中,5种检测结果为阴性,1种(诺卡菌)为阳性。在临床痰标本实验中,CDG-3荧光探针对痰MTB的阳性检出率为53.0%(106/200),高于金胺O荧光染色法(29.5%,59/200)与培养法(35.0%,70/200)的阳性率,差异有统计学意义(χ ²值分别为33.587、21.121,P值均为0.000)。以培养法结果为标准,CDG-3荧光探针检测的敏感度为84.3%(59/70),高于金胺O荧光染色法(70.0%,49/70);特异度为63.8%(83/130),低于金胺O荧光染色法(92.3%,120/130);以临床诊断为标准,CDG-3荧光探针检测的敏感度为64.4%(96/149),高于金胺O荧光染色法(39.6%,59/149)和培养法(44.3%,66/149);特异度为95%(19/20),低于金胺O荧光染色法(100%,20/20),高于培养法(90%,18/20)。 结论 CDG-3荧光探针对MTB的选择性较好,受NTM干扰较小,与呼吸道感染病原菌的反应还需进一步研究;CDG-3荧光探针技术具有快速、简便、检出效率高等优势,但特异度有待进一步提高。     

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术诊断艾滋病患者肺结核的临床应用评价

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)技术诊断艾滋病患者肺结核的应用价值。方法:回顾性分析2017年7月至2019年11月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的226例疑似肺结核的艾滋病患者的临床资料。分别进行痰涂片荧光染色显微镜下检查、BACTEC MGIT 960液体培养(或罗氏固体培养)和Xpert MTB/RIF检测,并分析在艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断MTB感染和利福平耐药的灵敏度和特异度。结果:226例疑似肺结核患者中,痰培养阳性94例(41.6%),其中MTB阳性51例(54.3%),非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria,NTM)阳性43例(45.7%)。以痰分枝杆菌培养阳性且结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原阳性为金标准,Xpert MTB/RIF技术诊断MTB的灵敏度为72.6%[95%可信区间(confidence interval,CI)66.7%~78.4%],特异度为97.1%(95%CI 95.0%~99.3%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阳性患者MTB的灵敏度为76.7%(95%CI 67.7%~85.8%),特异度为90.0%(95%CI 83.6%~96.5%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阴性患者MTB的灵敏度为50.0%(95%CI 41.8%~58.2%),特异度为99.3%(95%CI 97.9%~100.0%)。18例患者同时检测利福平表型和基因型耐药,以表型耐药为金标准,Xpert MTB/RIF技术检测利福平基因型耐药的灵敏度为75.0%,特异度为100.0%。结论:艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断肺结核的灵敏度和特异度均较高,且能快速区分MTB和NTM,具有较好的应用价值。     

Value of fluorescence PCR probe melting curve method in detecting resistance of Mycobacterium tuberculosis

搜集全部2017年9月至2019年8月西安市胸科医院确诊的结核病住院患者546例作为研究对象,评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的临床应用价值。收集患者痰标本,每份标本量均不少于2ml。经菌种鉴定,最终纳入531例(株)为研究对象。每例患者采用同一标本进行BACTEC MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称“MGIT 960药敏试验”)和熔解曲线法耐药基因检测,对MGIT 960药敏试验和熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性结果不一致者采用基因芯片法耐药基因检测对熔解曲线法结果进行验证。以MGIT 960药敏试验检测结果为参考标准,熔解曲线法检测肺结核患者痰标本MTB对链霉素耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为86.67% (39/45)、99.38% (483/486)、98.31% (522/531)和0.887;检测肺结核患者痰标本MTB对异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为69.23% (54/78)、98.68% (447/453)、94.35% (501/531)和0.751;检测肺结核患者痰标本MTB对利福平耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为87.50% (42/48)、96.89% (468/483)、96.05% (510/531)和0.778;检测肺结核患者痰标本MTB对乙胺丁醇耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为50.00% (9/18)、98.83% (507/513)、97.18% (516/531)和0.531。在熔解曲线法检测结果为耐药而MGIT 960药敏试验为敏感的30例患者中,熔解曲线法检测结果显示:对异烟肼耐药的6例均为katG 315位密码子突变;对利福平耐药的15例中,ropB 507-512、ropB 521-528、 ropB 529-533位密码子突变分别为3例、3例、9例;对链霉素耐药的3例均为rrs 513-517位点突变;对乙胺丁醇耐药的6例均为embB 306位密码子突变。基因芯片法耐药基因检测结果显示:对异烟肼耐药的6例中katG 315 (AGC→ACC)突变和katG 315 (AGC→AAC)突变各3例;对利福平耐药的15例中,ropB基因511位CTG→CCG突变、526位CAC→TAC突变和531位TCG→TGG突变各3例、3例、9例,与熔解曲线法检测结果一致。可见,荧光PCR探针熔解曲线法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇耐药性突变位点检测具有较好的检测效能,可用于临床上对一线抗结核药品耐药情况的快速筛查。     

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的价值

搜集全部2017年9月至2019年8月西安市胸科医院确诊的结核病住院患者546例作为研究对象,评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的临床应用价值。收集患者痰标本,每份标本量均不少于2ml。经菌种鉴定,最终纳入531例(株)为研究对象。每例患者采用同一标本进行BACTEC MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称“MGIT 960药敏试验”)和熔解曲线法耐药基因检测,对MGIT 960药敏试验和熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性结果不一致者采用基因芯片法耐药基因检测对熔解曲线法结果进行验证。以MGIT 960药敏试验检测结果为参考标准,熔解曲线法检测肺结核患者痰标本MTB对链霉素耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为86.67% (39/45)、99.38% (483/486)、98.31% (522/531)和0.887;检测肺结核患者痰标本MTB对异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为69.23% (54/78)、98.68% (447/453)、94.35% (501/531)和0.751;检测肺结核患者痰标本MTB对利福平耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为87.50% (42/48)、96.89% (468/483)、96.05% (510/531)和0.778;检测肺结核患者痰标本MTB对乙胺丁醇耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为50.00% (9/18)、98.83% (507/513)、97.18% (516/531)和0.531。在熔解曲线法检测结果为耐药而MGIT 960药敏试验为敏感的30例患者中,熔解曲线法检测结果显示:对异烟肼耐药的6例均为katG 315位密码子突变;对利福平耐药的15例中,ropB 507-512、ropB 521-528、 ropB 529-533位密码子突变分别为3例、3例、9例;对链霉素耐药的3例均为rrs 513-517位点突变;对乙胺丁醇耐药的6例均为embB 306位密码子突变。基因芯片法耐药基因检测结果显示:对异烟肼耐药的6例中katG 315 (AGC→ACC)突变和katG 315 (AGC→AAC)突变各3例;对利福平耐药的15例中,ropB基因511位CTG→CCG突变、526位CAC→TAC突变和531位TCG→TGG突变各3例、3例、9例,与熔解曲线法检测结果一致。可见,荧光PCR探针熔解曲线法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇耐药性突变位点检测具有较好的检测效能,可用于临床上对一线抗结核药品耐药情况的快速筛查。     

四种结核分枝杆菌检测方法临床诊断效能的评价

目的 评估痰涂片抗酸染色镜检(简称“涂片法”)、L-J培养基(Lowenstein-Jenden medium)固体培养(简称“L-J法”)、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)及GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert法”)等4种结核分枝杆菌检测方法检出结核病病原菌的能力。方法 搜集2018年1月1日至2018年12月31日北京结核病控制研究所451例疑似肺结核患者的痰标本,同时使用涂片法、L-J法、MGIT 960法及GeneXpert法进行检测。对上述4种方法的检测结果以临床诊断情况(总体分为“肺结核患者”与“非肺结核患者”)为参考标准,计算各种检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、一致率;同时计算4种方法联合检测结果的病原学阳性率(其中任何一种方法检测结果为阳性,即判断为联合检测结果为阳性)。结果 451例疑似肺结核患者中,临床最终诊断依据《WS 288—2017肺结核诊断》标准进行,诊断为肺结核患者227例(肺结核225例、肺结核并发结核性胸膜炎2例),非肺结核患者224例[非结核分枝杆菌(NTM)肺病11例,陈旧性肺结核6例,肺部阴影待查181例,胸腔积液3例,肺纤维化1例,肺炎3例,肺癌1例,密切接触者筛查18例]。以临床诊断结果为参考标准,涂片法、L-J法、GeneXpert法、MGIT 960法检测敏感度分别为22.5%(51/227)、32.2%(73/227)、37.9%(86/227)、43.2%(98/227),特异度分别为96.0%(215/224)、96.4%(216/224)、100.0%(224/224)、95.1%(213/224),一致率分别为59.0%(266/451)、64.1%(289/451)、68.7%(310/451)、69.0%(311/451)。涂片法和L-J法联合检测,以及涂片法、L-J法和GeneXpert法联合检测,4种方法联合检测的敏感度分别为34.8%(79/227)、43.6%(99/227)、49.8%(113/227),特异度分别为96.0%(215/224)、96.0%(215/224)、93.8%(210/224),一致率分别为65.2%(294/451)、69.6%(314/451)、71.6%(323/451)。结论 以临床诊断为参考标准,MGIT 960法检测的敏感度最高;GeneXpert法检测的特异度最高;4种方法联合检测能够显著提高诊断敏感度,与临床诊断的一致率也显著提高。     

胞内菌抗酸染色法检测体液标本结核分枝杆菌的应用价值

目的 探讨胞内菌抗酸染色法检测体液标本结核分枝杆菌的应用价值。方法 收集西安市胸科医院2013年4月至2015年4月共1236份疑似结核病患者的脑脊液(237份)、胸腹腔积液标本(999份)。通过白细胞胞内结核分枝杆菌抗酸染色(改良抗酸染色法,简称“胞内菌法”)、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960培养”),及聚合酶链反应荧光探针法(简称“PCR法”)对上述标本进行结核分枝杆菌检测。结果 在胸腹腔积液标本检测中,MGIT 960培养法的敏感度(18.52%,160/864)和阳性率(16.02%,160/999)最高;胞内菌检测法次之(分别为13.66%,118/864;11.81%,118/999),PCR法最低(分别为6.94%,60/864;6.01%,60/999);胞内菌法阳性率与MGIT 960培养法、PCR法比较差异均有统计学意义(χ ²分别为10.26、29.00,P值均<0.01)。在脑脊液标本检测中,胞内菌法检测的敏感度(22.15%,35/158)和阳性率(14.77%,35/237)最高,MGIT 960培养法次之(分别为12.03%,19/158;8.02%,19/237),PCR法最低(分别为3.16%,5/158;2.11%,5/237);胞内菌法阳性率与MGIT 960培养法、PCR法比较差异均有统计学意义( {\chi }_{960}^2 =5.36,P=0.020; {\chi }_{\mathrm{PCR}}^2 =23.36,P=0.020)。 结论 结核分枝杆菌胞内抗酸染色对体液标本中结核分枝杆菌的检验具有重要意义,是一种经济、简单,且达到预期阳性率的检验方法。