抑制上游转录因子2的表达对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上游转录因子2（USF2）对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法 使用Lipofectamine?3000转染试剂将USF2 siRNA转染至BGC-823细胞（siRNA-USF2组）中,同时设空白对照组和阴性对照组（siRNA-NC组）。实时荧光定量PCR法检测转染后的BGC-823细胞中USF2mRNA的表达。Western blot实验检测转染后BGC-823细胞中USF2蛋白的表达。CCK-8和平板克隆实验检测每组BGC-823细胞的增殖能力和克隆形成能力。流式细胞术检测各组胃癌细胞的凋亡情况。Western blot实验检测各组BGC-823细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。结果 与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-USF2组细胞USF2 mRNA和蛋白表达显著降低（均P<0.05）。转染后72 h,siRNA-USF2组的吸光度值低于空白对照组（P<0.05）。与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-USF2组BGC-823细胞中的克隆数明显较少（P<0.05）。空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-USF2组胃癌BGC-823细胞的凋亡率差异具有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-USF2组BGC-823细胞中PCNA和Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加（P<0.05）。结论 抑制USF2表达能够抑制人胃癌细胞的增殖,诱导其凋亡。USF2抑制剂可能在胃癌治疗中具有重要价值。     

干涉Cul1蛋白对胃癌细胞增殖抑制机制的探讨

目的:应用siRNA干涉胃癌细胞中Cul1蛋白表达,观察Cul1蛋白沉默对胃癌细胞增殖的影响,并探计其相关机制.方法:将siRNA转染胃癌细胞BGC-823和SGC-7901,设空白对照组和干涉组,采用蛋白质印迹法检测胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中Cul1及PCNA蛋白表达差异.采用CCK8法检测胃癌细胞的增殖活性;流式细胞术(FCM)观察胃癌细胞周期变化.结果:利用siRNA干涉Cul1蛋白表达后,胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中Cul1表达水平明显降低,与空白对照组比较有统计学意义,P＜0.01;干涉Cul1蛋白后,其下游相关蛋白-增殖细胞核抗原PCNA表达也明显降低,与空白对照组比较有统计学意义,P＜0.01.CCK8法检测胃癌细胞增殖活性显著降低,与空白对照组比较,差异均具有统计学意义,P＜0.01.流式细胞术观察胃癌细胞周期变化,Cul1蛋白干涉后G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,BGC-823细胞增殖指数(PI)31.68±1.57,干涉Cul1蛋白后PI值为23.74±2.14;SGC-7901 PI值36.04士2.75,干涉Cul1蛋白后PI值为27.29±1.25;两组比较均具有统计学意义,P＜0.05.结论:利用siRNA干涉人胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中Cul1蛋白后,胃癌细胞增殖受到明显抑制,其机制可能是通过抑制其下游蛋白PCNA表达.     

沉默I2PP2A基因对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨siRNA沉默I2PP2A基因表达对人胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的影响及其可能的分子机制。方法 脂质体转染法将靶向I2PP2A的短发夹状RNA（short hairpin RNA, shRNA）转染BGC-823细胞;Real-time RT-PCR和Western blot观察转染后胃癌BGC-823细胞I2PP2A mRNA和蛋白表达的变化;WST-1法和Transwell小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化;最后采用蛋白质印迹分析法检测三组胃癌细胞中cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结果 转染I2PP2A siRNA后胃癌BGC-823细胞的I2PP2A mRNA及蛋白表达明显受抑制;I2PP2AmRNA和蛋白表达下调抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结论 I2PP2A表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1和MMP-9表达下调密切相关,I2PP2A可能成为胃癌治疗的新靶点之一。     

组蛋白去乙酰化酶在食管鳞癌中的表达及其表达下调对EC9706细胞生物特性的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase2,HDAC2)在食管鳞癌组织中的表达,并研究其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及分析其相关的分子机制。方法:采用免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中HDAC2蛋白的表达。将特异性针对HDAC2基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和对照siRNA分别转染食管鳞癌EC9706细胞,实验分3组:未处理组、对照siRNA组和HDAC2siRNA组。蛋白质印迹法检测各组EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达。CCK-8计数法检测转染前后细胞的增殖情况。FCM法检测细胞周期和细胞凋亡的变化。蛋白质印迹法检测与细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果:HDAC2蛋白在食管鳞癌组织中表达的阳性率为79.71%,显著高于癌旁不典型增生组织的51.11%和正常食管黏膜组织的23.19%,3者之间差异具有统计学意义(χ2=44.121,P=0.000);此外,HDAC2蛋白表达与患者的年龄和性别无关(P均>0.05),但是与组织学分级、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移均显著相关(P均<0.05)。HDAC2siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达,明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖,促使细胞周期静止在G0/G1期,并诱导细胞凋亡。蛋白质印迹法检测结果显示,HDAC2表达下调能明显提高p21和凋亡相关蛋白bax的表达量,同时降低细胞周期蛋白cyclin D1和bcl-2的表达量。结论:HDAC2可能在食管鳞癌的发生、发展中具有重要作用,其表达下调介导的食管鳞癌细胞增殖抑制、细胞周期静止以及细胞凋亡可能与p21、bax的表达升高和cyclin D1、bcl-2表达降低密切相关。     

RNA干扰人胃癌BGC-823细胞中DNA聚合酶β基因表达的初步研究

目的 研究RNA干扰DNA聚合酶β(polβ)基因对人胃癌BGC-823细胞生物学行为的影响.方法 针对DNA polβ基因序列构建小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,用脂质体介导转染人胃癌BGC-823细胞,G418筛选出稳定细胞株;采用荧光定量PCR和Western blot测定各组细胞的DNA polB mRNA和蛋白表达水平;用流式细胞术和裸鼠体内成瘤检测各组细胞的增殖情况.结果 成功构建了针对polβ基因的siRNA表达载体.转染pol β靶向siRNA的BGC-823细胞,其polβmRNA和蛋白表达水平均明显降低,且载体pRNAT-U6.l-sipoβ2(抑制程度83%)的沉默抑制作用强于载体pRNAT-U6.l-sipolβl(抑制程度56%);与无关siRNA对照组、空载体对照组和空白对照组相比,转染pRNAT-U6.1-sipellM的细胞G0/G1期比例显著升高,S期比例及细胞增殖速度显著下降(P<0.05);转染pRNAT-U6.l-sipolβ2的细胞C0/C1期比例显著降低,S期比例及细胞增殖率显著升高(P<0.05).结论 靶向DNA polβ的siRNA可以显著抑制polβ的表达;polβ的高表达和近乎完全抑制的超低水平表达都不利于维持细胞的生理状态;通过siRNA将BGC-823细胞中polβ表达沉默到合适的低水平,可能对肿瘤的生长起到抑制作用.     

光辉霉素对胃癌细胞周期、凋亡的影响及可能机制

目的 探讨光辉霉素（MTM）对胃癌细胞周期、凋亡的影响及可能的机制。方法 体外培养胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-28、AGS和正常胃黏膜GES-1细胞，采用实时荧光定量（QPCR） 和Western blotting检测SP1 mRNA和蛋白表达。0、25、50、100 nmol／L MTM处理BGC-823细胞24 h，QPCR和Western blotting检测SP1、p53、p21 mRNA和蛋白表达。流式细胞术检测50 nmol／L MTM处理BGC-823细胞周期和凋亡的变化。结果 QPCR检测胃癌BGC-823、 SGC-7901、MKN-28、AGS细胞系中SP1 mRNA表达量为6.12±0.15，5.42±0.24，3.33±0.21，3.01±0.12，均显著高于GES-1细胞（P＜0.05）；Western blotting检测SP1 蛋白表达与mRNA表达一致。0、25、50、100 nmol／L MTM处理BGC-823细胞，SP1 mRNA和蛋白表达逐渐降低， p53、p21 mRNA和蛋白表达逐渐升高。50 nmol／L MTM组SP1表达量最低（mRNA：0.48±0.12；蛋白：0.28±0.09）， p53表达量最高（mRNA：5.37±0.45；蛋白：1.29±0.20）；100 nmol／L MTM组p21表达量最高（mRNA：4.92±0.53；蛋白：0.86±0.15）；与0 nmol／L MTM组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。流式细胞术结果显示，50 nmol／L MTM组BGC-823细胞G0／G1比例为（63.71±2.14）％和凋亡率为（24.68±1.09）％，均明显高于0 nmol／L MTM组［（57.39±1.83）％和（9.23±0.75）％］，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 MTM通过降低SP1、上调p53、p21表达水平来增加胃癌细胞周期阻滞，诱导凋亡。     

靶向Bcl-xL基因siRNA在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的研究Bcl-xL基因特异性RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞株体外增殖能力和凋亡的影响。方法构建靶向Bcl-xL的小干扰RNA(siRNA)表达载体,转染PC-3细胞后,采用半定量RT-PCR和Western blot法检测转染前后Bcl-xL mRNA及蛋白表达水平的改变;采用噻唑兰(MTT)法检测细胞生长增殖情况;TUNEL试剂盒测定细胞的凋亡情况。结果靶向Bcl-xL的序列特异性的siRNA可以有效地抑制PC-3细胞Bcl-xL基因的表达。转染靶向Bcl-xL的siRNA表达质粒可以显著抑制PC-3细胞的增殖（P<0.001）,诱导细胞凋亡（P<0.001）。结论Bcl-xL基因特异性RNA干扰可以显著抑制前列腺癌PC-3细胞的体外增殖并诱导细胞凋亡。     

RNA干扰沉默Bmi-1基因对胃癌细胞BGC-823生长及顺铂敏感性作用的研究

目的:探讨Bmi-1基因对胃癌细胞BGC-823增殖、侵袭及顺铂耐药的作用及可能机制。方法:采用LipofectamineTM2000向胃癌细胞BGC-823随机转染成功构建靶向沉默Bmi-1表达的siRNA,分别利用Western Blot、CCK-8、Transwell小室等方法对转染Bmi-1 siRNA的BGC-823细胞的增殖、侵袭能力及顺铂耐药进行检测。结果:转染Bmi-1 siRNA后,BGC-823细胞的增殖、侵袭能力显著下降（P<0.05）,而且顺铂敏感性显著提高。结论:Bmi-1基因与胃癌BGC-823细胞系的增殖、侵袭及顺铂耐药相关,可能是胃癌治疗的靶点。     

siRNA干扰Chk1抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究

背景与目的：细胞周期检测点激酶1（checkpoint kinase1,Chk1）与肿瘤的关系及其在肿瘤发生、发展及治疗中的作用是目前研究的热点。为探索Chk1在人类肿瘤细胞中对生长增殖活性和细胞周期的调控作用,本研究旨在观察siRNA干扰Chk1基因对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响。方法：采用RNAi技术抑制BGC823细胞中Chk1表达,采用Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达情况,实验分为未转染组、脂质体组和Chk1siRNA转染组三组。然后采用MTT法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响。结果：Western blot检测结果显示,Chk1siRNA转染24h后,BGC823细胞中Chk1蛋白相对灰度值为0.11&#177;0.08,明显弱于未转染对照组的0.66&#177;0.21和脂质体转染组的0.70&#177;0.25（P〈0.05）,而未转染对照组和脂质体转染组之间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。转染Chk1siRNA的BGC823细胞其Chk1蛋白表达量下降了83.1%。MTT法检测结果显示,Chk1蛋白表达缺失可导致BGC823细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为48.1%（P〈0.05）。FCM法检测结果显示,Chk1基因沉默后细胞周期在G0/G1期发生停滞,未转染组24和48h后细胞在G0/G1期为48.3%和50.2%,转染Chk1siRNA组细胞在转染24和48h后G0/G1期增加至63.9%和66.1%,增殖指数（PI）由51.7%（24h）和49.8%（48h）减少至36.2%（24h）和34.4%（48h）。结论：Chk1siRNA转染可明显抑制人胃癌细胞增殖,且其抑制增殖作用与诱导G0/G1期阻滞有关。     

联合转染PTEN与PINCH siRNA对结直肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡影响的机制研究

目的:研究联合转染PTEN与PINCH siRNA对结直肠癌SW620细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:在结直肠癌SW620细胞中转染pcDNA-PTEN或/和si-PINCH,qRT-PCR检测PINCH和PTEN mRNA的表达,Western blot检测PINCH、PTEN、CDK1、MMP-2、Bcl-2和 Bax蛋白表达, MTT法、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭能力和凋亡率。结果:在结直肠癌SW620细胞中联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH后,PTEN的mRNA和蛋白表达量显著升高（P＜0.05）,PINCH的mRNA和蛋白表达量显著降低（P＜0.05）;转染pcDNA-PTEN或/和si-PINCH均可抑制SW620细胞增殖和侵袭并促进细胞凋亡,抑制SW620细胞内增殖蛋白CDK1、侵袭蛋白MMP-2和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡蛋白Bax的表达;联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH比单独转染pcDNA-PTEN或si-PINCH效果更显著。结论:联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH可抑制结直肠癌SW620细胞增殖和侵袭并促进细胞凋亡,且比单独转染效果更显著。     

蛇床子素对胃BGC-823细胞的体外放疗增敏作用的实验研究

目的:研究中药单体蛇床子素（Ost）对胃BGC-823细胞的体外放疗增敏作用。方法:采用MTT法检测单药及联合放疗对BGC-823细胞的作用;细胞克隆形成实验检测Ost对BGC-823细胞的放疗增敏作用;流式细胞术分析Ost及放疗对BGC-823细胞的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:Ost对BGC-823细胞具有增殖抑制作用;低细胞毒剂量的Ost（15 μg/ml）对BGC-823细胞具有放疗增敏作用,经单击多靶模型拟合后,Ost联合放疗组细胞存活曲线较单纯放疗组左移,D0、Dq值变小,放疗增敏比SER=1.64。结论:低细胞毒剂量的Ost（15 μg/ml）对BGC-823细胞具有放疗增敏作用,其机制可能与增加放疗诱导的细胞凋亡,引起放疗敏感时相G1期细胞阻滞,减少放疗相对抗拒时相S期细胞比例相关。     

VEGF基因沉默联合唑来膦酸抑制胃癌细胞增殖和迁移的机制

目的:探讨靶向抑制VEGF基因联合唑来膦酸对胃癌细胞增殖、迁移及STAT3信号通路的影响。方法:采用LipofectamineTM2000将si-VEGF转染至胃癌BGC-823细胞中,以RT-PCR和Western blot 检测其转染效果。转染后,加入不同浓度的唑来膦酸共同培养48 h,MTT法检测si-VEGF联合唑来膦酸对BGC-823细胞增殖的影响,并检测唑来膦酸的IC50;将细胞随机分为si-NC组（转染阴性对照）、si-NC＋唑来膦酸组（转染阴性对照后,给予唑来膦酸处理）、si-VEGF组（转染si-VEGF）和si-VEGF+唑来膦酸组（转染si-VEGF后,给予唑来膦酸处理）,Transwell小室实验检测细胞的侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中STAT3、p-STAT3和MMP-2蛋白的表达情况。结果:转染si-VEGF后成功下调BGC-823细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达,si-VEGF联合唑来膦酸对BGC-823 细胞增殖的抑制作用明显高于唑来膦酸单独作用,且唑来膦酸的IC50为62.94 μmol/L。与si-NC组相比,si-NC+唑来膦酸组、si-VEGF组和si-VEGF+唑来膦酸组的侵袭细胞数及迁移细胞数均明显减少,且p-STAT3和MMP-2蛋白表达明显降低,而STAT3表达差异不明显。其中,si-VEGF+唑来膦酸组的作用效果明显高于si-NC+唑来膦酸组或si-VEGF组。结论:靶向抑制VEGF基因联合唑来膦酸能够协调抑制胃癌细胞增殖和迁移,其作用机制可能与抑制STAT3信号通路有关。     

人参皂苷Rg3 通过PI3K/AKT 信号系统调控CaM 基因表达促进胃癌BGC-823 细胞的凋亡

[摘要] 目的：探讨人参皂甙Rg3 通过PI3K/AKT信号通路干扰CaM基因的表达及对胃癌BGC-823 细胞凋亡的影响。方法:胃癌BGC-823 细胞的培养与传代完成后,Western blotting 检测胰岛素样生长因子-1 (insulin-like growth factor-1,IGF-1)和/或Rg3分别作用胃癌BGC-823 细胞后p-AKT和CaM 蛋白表达水平,MTT法检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞增殖的影响,Transwell 法检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞侵袭的影响,流式细胞术检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞凋亡的影响。结果：随着IGF-1 作用时间延长,胃癌BGC-823 细胞中p-AKT蛋白和CaM蛋白的表达水平均明显提高（均P<0.05）;与空白对照组比较,Rg3 组明显抑制胃癌BGC-823 细胞增殖,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞增殖（均P<0.05）;与空白对照组比较,Rg3 组明显降低胃癌BGC-823 细胞侵袭,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞侵袭能力（均P<0.05）;流式细胞术检测显示,与空白对照组比较,Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞凋亡,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显抑制胃癌BGC-823 细胞凋亡（均P<0.05）。结论:人参皂甙Rg3 通过阻断PI3K/AKT信号通路来抑制CaM的表达,进而促进胃癌BGC-823细胞的凋亡。     

幽门螺杆菌上调Bcl-xL基因的表达促进胃癌BGC-823细胞的增殖

  目的  探讨幽门螺杆菌(H.pylori)对胃癌细胞BGC-823 Bcl-xL基因表达的影响。  方法  分别用东、西方型H.Pylori裂解液处理胃癌细胞,MTT法检测细胞增殖情况,荧光定量PCR法检测细胞Bcl-xL基因mRNA表达水平的变化;Bcl-xL短发夹RNA(short hairpin,shRNA)质粒沉默Bcl-xL基因,MTT法检测胃癌细胞增殖能力。  结果  H.pylori裂解液处理胃癌细胞24h后,与对照组相比,处理组均出现细胞的增殖(P均<0.01),并且东亚型处理组的增殖作用比西方型处理组更明显(P<0.01);Bcl-xL基因的mRNA表达水平也均出现上调(P均<0.01),东亚型处理组的上调水平比西方型处理组更明显(P<0.01);Bcl-xL shRNA质粒转染胃癌细胞BGC-823后,与对照组、Bcl-xL shRNA阴性对照组相比,细胞增殖受到抑制。  结论  H.pylori的生物活性物质通过上调Bcl-xL基因的表达促进胃癌细胞BGC-823的增殖,东亚型H.pylori的生物活性作用比西方型强。Bcl-xL shRNA质粒在一定程度上可抑制胃癌细胞BGC-823的增殖。      

TRPC3在胰腺癌细胞系中的表达及功能

目的:研究TRPC3在胰腺癌（pancreatic cancer,PC）细胞系中的表达及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR和Western blot检测正常和PC细胞系中TRPC3表达;采用Western blot检测GdCl3和TRPC3 siRNA干预PC细胞系后TRPC3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和PTEN蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖;DAPI染色法检测细胞形态学;Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡;钙成像法检测细胞内［Ca2+］ i。结果:PC细胞系中TRPC3 mRNA和蛋白表达明显高于正常胰腺上皮细胞HDPE6-C7;与溶剂和转染阴性对照细胞比较,GdCl3和转染TRPC3 siRNA的Panc1、A8184和T3M4细胞核固缩数量明显增加,Annexin V/PI双阳性凋亡细胞比例明显增多,T3M4细胞的静息［Ca2+］i、达峰［Ca2+］i和恢复相［Ca2+］i浓度明显降低;A8184和T3M4细胞的p-PI3K、p-AKT和PTEN蛋白表达明显降低。结论:TRPC3在PC细胞系中表达上调,且TRPC3通过调节细胞Ca2+介导的PI3K/AKT信号通路从而影响PC细胞增殖和凋亡。     

微小RNA-106 a靶向PTEN通路对胃癌细胞的增殖与凋亡的调控作用

目的 探讨微小RNA-106a(miR-106a)靶向磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)通路对胃癌细胞的增殖与凋亡的调控作用.方法 对数生长期的胃癌BGC-823细胞为三组:miR-106a组、对照组与空白组,分别转染miR-106a mimic、miR-NC与等体系的磷酸盐缓冲液.采用CCK法检测细胞增殖,流式细胞仪...     

miR-21沉默下调β-catenin表达对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-21沉默对食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其与β-catenin表达的关系。方法:通过脂质体转染法沉默食管癌Eca9706细胞株中的miR-21,采用荧光定量（RT-PCR）检测miR-21、β-catenin mRNA的相对表达水平;蛋白质印迹法（Western blot）检测β-catenin蛋白的相对表达水平。MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果:转染48 h后,与对照组和NC组相比,miR-21组Eca9706细胞中miR-21、β-catenin mRNA和β-catenin蛋白的相对表达水平均明显降低。MTT检测miR-21组细胞的光密度值（OD值）较对照组和NC组明显下降。与NC组和对照组相比,流式细胞仪检测miR-21组中细胞的凋亡率明显上升,G0/G1期细胞所占比例明显升高,S期细胞所占比例明显下降。结论:沉默miR-21能够通过下调β-catenin的表达来抑制食管癌Eca9706细胞增殖及诱导其凋亡。